CN113686829B - 一种检测细胞rna表达的方法 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了一种检测细胞RNA表达的方法，根据双分子荧光互补原理，在荧光分子N端与C端融合表达不同的RNA结合蛋白或结构域，两个外源表达的RNA适配子通过碱基互补配对原则与待检测RNA结合，而外源表达的两RNA含有RNA结合蛋白结合序列，当两融合表达不同的RNA结合蛋白与它们结合时会发出荧光。

Description

一种检测细胞RNA表达的方法
技术领域
本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种检测细胞RNA表达的方法。
背景技术
RNA直接调节大量细胞过程，观测RNA可为研究人员带来许多新的认识。存在于特殊细胞以及这些细胞特殊位点中的RNA可以揭示潜藏在差别背后的机制。需要强有力的方法来荧光标记和跟踪活细胞中的RNA。
RNA成像也可以解答基因表达谱研究提出的一些问题。曾经科学家们追踪过一些转录物开展进一步的研究。RNA原位杂交可以显示基因如何在整个细胞群中表达，在同一个细胞中哪一对转录物一起增高和下降，一种转录物是否定位在特异的细胞类型中或是像树突这样的特殊区室内。原位杂交还可以证实RNA干扰研究中一种转录物是否确实受到了抑制。
诸如荧光原位杂交（FISH）法、酶促共价标记法的RNA可视化方法，需要将细胞固定，而不适用于活细胞成像。经过修饰的RNA可与融合了荧光蛋白的特定RNA结合蛋白（例如MCP，PCP，λN或Cas）相结合，从而实现在活细胞中对目的RNA进行标记成像，这一方法甚至可实现单分子水平的RNA检测。但是，未结合的荧光蛋白分子可在整个细胞中扩散，并产生较高背景的荧光。此外，将过大的蛋白捆缚在RNA上，是否会影响RNA的定位，稳定性和行为仍有待商榷。
双分子荧光互补技术本质上是一种蛋白质片段互补技术，是指将荧光蛋白多肽链在某些不保守的氨基酸处切开，形成不发荧光的 N-和 C-末端2 个多肽片段。将这 2 个荧光蛋白片段分别连接到 1 对能发生相互作用的目标蛋白上，在细胞内共表达或体外混合这 2 个融合蛋白时，由于目标蛋白质的相互作用，荧光蛋白的 2 个片段在空间上互相靠近互补，重新构建成完整的具有活性的荧光蛋白分子，从而产生荧光。
发明内容
解决的技术问题：
针对现有技术的不足，本申请解决了目前存在的需要将细胞固定，而不适用于活细胞成像等难题；结合双分子荧光互补技术与RNA结合蛋白-荧光分子两技术的技术优势，旨在提供一种信噪比低的检测细胞内RNA分子的方法，本方法具有高效、简单、经济、准确的优点。
技术方案：
为实现上述目的，本申请通过以下技术方案予以实现：
一种检测细胞RNA表达的方法，根据双分子荧光互补原理，在荧光分子N端与C端融合表达不同的RNA结合蛋白或结构域，两个外源表达的RNA适配子通过碱基互补配对原则与待检测RNA结合，而外源表达的两RNA含有RNA结合蛋白结合序列，当两融合表达不同的RNA结合蛋白与它们结合时会发出荧光。
进一步的，所述RNA结合蛋白与荧光分子N端与C端的融合蛋白之间有一段柔性肽序列，所述柔性肽序列为SEQ ID NO.1中的GGGGS和SEQ ID NO.2中的GGGGS。
进一步的，所述的RNA结合蛋白/结构域与荧光分子N端或C端的融合蛋白，构建真核表达载体，通过病毒或质粒直接转染细胞表达。
进一步的，所述两RNA适配子序列为SEQ ID NO.3 与SEQ ID NO.4，所述SEQ IDNO.3 与SEQ ID NO.4分别含有不同的RNA结合蛋白结合序列，其中SEQ ID NO.3中RNA结合蛋白结合序列为：GGCTGGTATGGGCGCAGCGTCAATGACGCTGACGGTACAGGCCAGCC，SEQ ID NO.4中RNA结合蛋白结合序列为：TAAGGAGTTTATATGGAAACCCTTAA；所述SEQ ID NO.3 与SEQ IDNO.4还含有与靶标RNA结合的序列，其中SEQ ID NO.3 中与靶标RNA结合的序列为：ATGCCGCCCATGCAGGAACTG，SEQ ID NO.4中与靶标RNA结合的序列为：TTACACATGTAGTTGTAGTGGA，两RNA适配子与靶标RNA结合的位置尽可能的靠近，与靶标RNA结合的序列可根据不同的检测目的，选择不同的序列。
进一步的，所述检测细胞RNA表达的方法除可检测RNA，也可以检测单链的DNA。
进一步的，所述检测细胞RNA表达的方法除了在体表达所述融合蛋白和RNA适配子外，还可以通过体外的方式表达。
进一步的，所述表达的蛋白质序列如SEQ ID NO.1与SEQ ID NO.2所示，为了更高效得到有活性蛋白，运用软件对翻译该蛋白的密码子进行全面优化使其适合于真核细胞中表达，并构建到真核表达载体或病毒载体上进行细胞内表达。
进一步的，所述方法是根据荧光显微镜下所观察到的荧光分子的信号强度代表所检测RNA的表达量，而荧光分子所在的位置代表所检测RNA的细胞定位。
有益效果：
本申请提供了一种检测细胞RNA表达的方法，与现有技术相比，具备以下有益效果：
1、结合双分子荧光互补技术与RNA结合蛋白-荧光分子两技术的技术优势，旨在提供一种信噪比低的检测细胞内RNA分子的方法，本方法具有高效、简单、经济、准确的优点。
2、由于只有当两片段的荧光分子足够靠近时才会发出荧光，与传统技术，提高信噪比，适用研究培养细胞和动物体内RNA定位，定量等应用。
3、该方法按照流行的分子生物学方法进行，所需要的试剂和仪器均为常用，无需特殊购买。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的说明，以下所述，仅是对本发明的较佳实施例而已，并非对本发明做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本发明方案内容，依据本发明的技术实质对以下实施例所做的任何简单修改或等同变化，均落在本发明的保护范围内。
实施例1：
检测细胞RNA表达的方法，根据双分子荧光互补原理，在荧光分子N端与C端融合表达不同的RNA结合蛋白或结构域，两个外源表达的RNA适配子通过碱基互补配对原则与待检测RNA结合，而外源表达的两RNA含有RNA结合蛋白结合序列，当两融合表达不同的RNA结合蛋白与它们结合时会发出荧光。
所述RNA结合蛋白与荧光分子N端与C端的融合蛋白之间有一段柔性肽序列，所述柔性肽序列为SEQ ID NO.1中的GGGGS和SEQ ID NO.2中的GGGGS。
所述的RNA结合蛋白/结构域与荧光分子N端或C端的融合蛋白，构建真核表达载体，通过病毒或质粒直接转染细胞表达。
所述两RNA适配子序列为SEQ ID NO.3 与SEQ ID NO.4，所述SEQ ID NO.3 与SEQID NO.4分别含有不同的RNA结合蛋白结合序列，其中SEQ ID NO.3中RNA结合蛋白结合序列为：GGCTGGTATGGGCGCAGCGTCAATGACGCTGACGGTACAGGCCAGCC，SEQ ID NO.4中RNA结合蛋白结合序列为：TAAGGAGTTTATATGGAAACCCTTAA；所述SEQ ID NO.3 与SEQ ID NO.4还含有与靶标RNA结合的序列，其中SEQ ID NO.3 中与靶标RNA结合的序列为：ATGCCGCCCATGCAGGAACTG，SEQ ID NO.4中与靶标RNA结合的序列为：TTACACATGTAGTTGTAGTGGA，两RNA适配子与靶标RNA结合的位置尽可能的靠近，与靶标RNA结合的序列可根据不同的检测目的，选择不同的序列。
所述检测细胞RNA表达的方法除了在体表达所述融合蛋白和RNA适配子外，还可以通过体外的方式表达。
检测培养细胞P53的表达，具体包括如下步骤：
第一步，所述表达的蛋白质序列如SEQ ID NO.1与SEQ ID NO.2所示，为了更高效得到有活性蛋白，运用软件对翻译该蛋白的密码子进行全面优化使其适合于真核细胞中表达，并构建到真核表达载体；
第二步，在第一步所构建的载体上进一步把表达SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4 RNA序列通过酶连接方法构建到由H1或U6表达RNA的启动子后面；SEQ ID NO.1 中MQKNGIKVNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLLEFVTAAGITLGMDELYK是GFP蛋白的C未端，IDKTIVLSVGEATRTLTEIQSTADRQIFEEKVGPLVGRLRLTASLRQNGAKTAYRVNLKLDQADVVDCSTSVCGELPKVRYTQVWSHDVTIVANSTEASRKSLYDLTKSLVATSQVEDLVVNLVPLGR是细菌PP7cp蛋白序列，可以与SEQ ID NO.4中的TAAGGAGTTTATATGGAAACCCTTAA结合。SEQ ID NO.2中MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLKFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDDGNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADK是GFP蛋白的N未端，KPFQCRICMRNFSTRQARRNHRRRHRRGQRQ是ZnRev蛋白序列，可以与SEQ ID NO.3中的GGCTGGTATGGGCGCAGCGTCAATGACGCTGACGGTACAGGCCAGCC结合。
第三步，通过包装成病毒或直接用转染试剂把上面所构建的载体转入细胞。
第四步，通过检测荧光强度及分布，间接反应所检测RNA的表达。
最后说明的是，以上实施方式仅用以说明本发明的技术方案而非限制，本领域普通技术人员对本发明的技术方案所做的其他修改或者等同替换，只要不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
序列表
<110> 徐州医科大学
<120> 一种检测细胞RNA表达的方法
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)
<400> 1
Met Gln Lys Asn Gly Ile Lys Val Asn Phe Lys Ile Arg His Asn Ile
1 5 10 15
Glu Asp Gly Ser Val Gln Leu Ala Asp His Tyr Gln Gln Asn Thr Pro
20 25 30
Ile Gly Asp Gly Pro Val Leu Leu Pro Asp Asn His Tyr Leu Ser Thr
35 40 45
Gln Ser Ala Leu Ser Lys Asp Pro Asn Glu Lys Arg Asp His Met Val
50 55 60
Leu Leu Glu Phe Val Thr Ala Ala Gly Ile Thr Leu Gly Met Asp Glu
65 70 75 80
Leu Tyr Lys Gly Gly Gly Gly Ser Ile Asp Lys Thr Ile Val Leu Ser
85 90 95
Val Gly Glu Ala Thr Arg Thr Leu Thr Glu Ile Gln Ser Thr Ala Asp
100 105 110
Arg Gln Ile Phe Glu Glu Lys Val Gly Pro Leu Val Gly Arg Leu Arg
115 120 125
Leu Thr Ala Ser Leu Arg Gln Asn Gly Ala Lys Thr Ala Tyr Arg Val
130 135 140
Asn Leu Lys Leu Asp Gln Ala Asp Val Val Asp Cys Ser Thr Ser Val
145 150 155 160
Cys Gly Glu Leu Pro Lys Val Arg Tyr Thr Gln Val Trp Ser His Asp
165 170 175
Val Thr Ile Val Ala Asn Ser Thr Glu Ala Ser Arg Lys Ser Leu Tyr
180 185 190
Asp Leu Thr Lys Ser Leu Val Ala Thr Ser Gln Val Glu Asp Leu Val
195 200 205
Val Asn Leu Val Pro Leu Gly Arg
210 215
<210> 2
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)
<400> 2
Met Val Ser Lys Gly Glu Glu Leu Phe Thr Gly Val Val Pro Ile Leu
1 5 10 15
Val Glu Leu Asp Gly Asp Val Asn Gly His Lys Phe Ser Val Ser Gly
20 25 30
Glu Gly Glu Gly Asp Ala Thr Tyr Gly Lys Leu Thr Leu Lys Phe Ile
35 40 45
Cys Thr Thr Gly Lys Leu Pro Val Pro Trp Pro Thr Leu Val Thr Thr
50 55 60
Leu Thr Tyr Gly Val Gln Cys Phe Ser Arg Tyr Pro Asp His Met Lys
65 70 75 80
Gln His Asp Phe Phe Lys Ser Ala Met Pro Glu Gly Tyr Val Gln Glu
85 90 95
Arg Thr Ile Phe Phe Lys Asp Asp Gly Asn Tyr Lys Thr Arg Ala Glu
100 105 110
Val Lys Phe Glu Gly Asp Thr Leu Val Asn Arg Ile Glu Leu Lys Gly
115 120 125
Ile Asp Phe Lys Glu Asp Gly Asn Ile Leu Gly His Lys Leu Glu Tyr
130 135 140
Asn Tyr Asn Ser His Asn Val Tyr Ile Met Ala Asp Lys Gly Gly Gly
145 150 155 160
Gly Ser Lys Pro Phe Gln Cys Arg Ile Cys Met Arg Asn Phe Ser Thr
165 170 175
Arg Gln Ala Arg Arg Asn His Arg Arg Arg His Arg Arg Gly Gln Arg
180 185 190
Gln
<210> 3
<211> 68
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)
<400> 3
atgccgccca tgcaggaact gggctggtat gggcgcagcg tcaatgacgc tgacggtaca 60
ggccagcc 68
<210> 4
<211> 48
<212> DNA/RNA
<213> 人工序列(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)
<400> 4
taaggagttt atatggaaac ccttaattac acatgtagtt gtagtgga 48

Claims (6)

1.一种检测细胞RNA表达的方法，其特征在于，根据双分子荧光互补原理，在荧光分子N端与C端融合表达不同的RNA结合蛋白或结构域，两个外源表达的RNA适配子通过碱基互补配对原则与待检测RNA结合，而外源表达的两RNA含有RNA结合蛋白结合序列，当两融合表达不同的RNA结合蛋白与它们结合时会发出荧光；所述RNA结合蛋白与荧光分子N端与C端的融合蛋白之间有一段柔性肽序列，所述柔性肽序列为SEQ ID NO.1中的GGGGS和SEQ ID NO.2中的GGGGS；所述两RNA适配子序列为SEQ ID NO.3 与SEQ ID NO.4，所述SEQ ID NO.3 与SEQ ID NO.4分别含有不同的RNA结合蛋白结合序列，其中SEQ ID NO.3中RNA结合蛋白结合序列为：GGCTGGTATGGGCGCAGCGTCAATGACGCTGACGGTACAGGCCAGCC，SEQ ID NO.4中RNA结合蛋白结合序列为：TAAGGAGTTTATATGGAAACCCTTAA；所述SEQ ID NO.3 与SEQ ID NO.4还含有与靶标RNA结合的序列，其中SEQ ID NO.3 中与靶标RNA结合的序列为：ATGCCGCCCATGCAGGAACTG，SEQ ID NO.4中与靶标RNA结合的序列为：TTACACATGTAGTTGTAGTGGA，两RNA适配子与靶标RNA结合的位置尽可能的靠近，与靶标RNA结合的序列可根据不同的检测目的，选择不同的序列。
2.根据权利要求1所述检测细胞RNA表达的方法，其特征在于：所述的RNA结合蛋白/结构域与荧光分子N端或C端的融合蛋白，构建真核表达载体，通过病毒或质粒直接转染细胞表达。
3.根据权利要求1所述检测细胞RNA表达的方法，其特征在于：所述检测细胞RNA表达的方法除可检测RNA，也可以检测单链的DNA。
4.根据权利要求1所述检测细胞RNA表达的方法，其特征在于：所述检测细胞RNA表达的方法除了在体表达所述融合蛋白和RNA适配子外，还可以通过体外的方式表达。
5.根据权利要求1所述检测细胞RNA表达的方法，其特征在于：所述表达的蛋白质序列如SEQ ID NO.1与SEQ ID NO.2所示，为了更高效得到有活性蛋白，运用软件对翻译该蛋白的密码子进行全面优化使其适合于真核细胞中表达，并构建到真核表达载体或病毒载体上进行细胞内表达。
6.根据权利要求1所述检测细胞RNA表达的方法，其特征在于：所述方法是根据荧光显微镜下所观察到的荧光分子的信号强度代表所检测RNA的表达量，而荧光分子所在的位置代表所检测RNA的细胞定位。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105624178A (zh) * 2014-10-31 2016-06-01 中国科学院武汉病毒研究所 一种基于荧光蛋白iRFP的双分子荧光片段互补系统及应用
CN108486107A (zh) * 2018-03-01 2018-09-04 北京大学 基于双分子荧光互补的新型信使rna和环状rna标记方法
CN108519484A (zh) * 2018-03-01 2018-09-11 北京大学 利用自连接标签的双分子荧光互补技术成像和追踪活细胞内的蛋白质相互作用
CN112210017A (zh) * 2020-10-12 2021-01-12 中国药科大学 一组焦亡执行者融合蛋白和基于荧光素酶片段互补分析技术的焦亡活性检测方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100949310B1 (ko) * 2007-11-21 2010-03-23 한국과학기술연구원 세포 영상 기법을 이용한 ｈｂｖ 캡시드 단백질과 표면단백질 간 상호작용 측정 방법과 이를 이용한 ｈｂｖ 증식억제물질의 검색방법
CN101863983B (zh) * 2010-05-25 2013-01-23 北京大学 基于绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白的双荧光共定位系统

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105624178A (zh) * 2014-10-31 2016-06-01 中国科学院武汉病毒研究所 一种基于荧光蛋白iRFP的双分子荧光片段互补系统及应用
CN108486107A (zh) * 2018-03-01 2018-09-04 北京大学 基于双分子荧光互补的新型信使rna和环状rna标记方法
CN108519484A (zh) * 2018-03-01 2018-09-11 北京大学 利用自连接标签的双分子荧光互补技术成像和追踪活细胞内的蛋白质相互作用
CN112210017A (zh) * 2020-10-12 2021-01-12 中国药科大学 一组焦亡执行者融合蛋白和基于荧光素酶片段互补分析技术的焦亡活性检测方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
An improved bimolecular fluorescence complementation assay with a high signal-to-noise ratio;Yutaka Kodama等;《BIOTECHNIQUES》;20101130;第49卷(第5期);第793-805页 *

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