CN113667633B - 一种精神分裂症发育异常的皮层类器官模型的构建方法 - Google Patents

一种精神分裂症发育异常的皮层类器官模型的构建方法 Download PDF

Info

Publication number
CN113667633B
CN113667633B CN202110867058.6A CN202110867058A CN113667633B CN 113667633 B CN113667633 B CN 113667633B CN 202110867058 A CN202110867058 A CN 202110867058A CN 113667633 B CN113667633 B CN 113667633B
Authority
CN
China
Prior art keywords
cortical
schizophrenia
organoid
model
pluripotent stem
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110867058.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113667633A (zh
Inventor
李涛
倪培艳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
West China Hospital of Sichuan University
Original Assignee
West China Hospital of Sichuan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by West China Hospital of Sichuan University filed Critical West China Hospital of Sichuan University
Priority to CN202110867058.6A priority Critical patent/CN113667633B/zh
Publication of CN113667633A publication Critical patent/CN113667633A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113667633B publication Critical patent/CN113667633B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0696—Artificially induced pluripotent stem cells, e.g. iPS
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
    • G01N33/5073—Stem cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2503/00—Use of cells in diagnostics
    • C12N2503/02—Drug screening
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2513/00—3D culture
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
    • C12N2533/90—Substrates of biological origin, e.g. extracellular matrix, decellularised tissue
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
    • G01N2500/10—Screening for compounds of potential therapeutic value involving cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明提供了一种精神分裂症发育异常的皮层类器官模型的构建方法，涉及模型构建领域。本发明采用细胞WD‑FES1构建了精神分裂症发育异常的皮层类器官模型，采用细胞XYY‑HC1构建正常人皮层类器官模型。本发明构建的皮层类器官模型克服了传统定向分化方法所得神经元类型单一且无任何空间结构的缺陷。以正常人皮层类器官模型作为对照研究模型，制备的精神分裂症皮层类器官模型可以作为精神分裂症神经发育异常研究的重要模型，对于精神分裂症神经发育异常生物学机制研究，尤其是为精神分裂症新型治疗药物开发提供了理想的研究模型。

Description

一种精神分裂症发育异常的皮层类器官模型的构建方法
技术领域
本发明涉及模型构建领域，具体涉及一种精神分裂症发育异常的皮层类器官模型的构建方法。
背景技术
精神分裂症(Schizophrenia,SCZ)是一类以思维、情感、意志行为等多方面损害为特征的慢性致残性脑病，其终生患病率约为1％，可严重影响患者的生活、工作、学习及社会功能。然而对精神分裂症的治疗主要针对症状进行控制和缓解，缺乏生物学基础。精神疾病的病理生理学基础不明是影响精神疾病临床客观诊断和精准治疗的根本原因，而理想研究模型的缺乏是精神疾病发病机制研究进展的主要瓶颈。
诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells，iPSCs)是由体细胞诱导分化而成的“多能细胞”。iPSCs在形态、基因表达、表观遗传修饰以及细胞自我更新等方面和胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)类似，具有分化为三种胚层的能力。iPSCs可定向诱导分化，构建多种实验模型，用于疾病研究以及药物筛选等。例如，多种神经系统疾病患者来源的iPSCs(包括老年性痴呆病、帕金森氏病、亨廷顿病、唐氏综合症等)相继被建立，并定向分化为特定的神经元/组织，在神经系统疾病生物学机制以及特异性新药的研究方面提供了帮助。
因此，iPSCs方法提供了一条定向诱导获得特定组织、器官的研究途径，也为定向诱导获得特定类型神经元和特定区域特定发育阶段的皮层类器官模型，揭示神经疾病、脑部疾病可能的发病机制以及开发潜在的治疗措施提供了很好的研究途径。
但是，由于神经和脑部的复杂性，制备特定类型神经元和特定区域特定发育阶段的皮层类器官模型是困难的。如何制备一种精神分裂症发育异常的皮层类器官模型需要进一步研究。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种精神分裂症发育异常的皮层类器官模型的构建方法。
本发明提供了一种构建精神分裂症发育异常的皮层类器官模型的诱导性多能干细胞，所述诱导性多能干细胞是由中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏的保藏编号为CCTCC NO：C2021146的细胞株WD-FES1(保藏地址：中国.武汉.武汉大学，保藏日期为2021年6月11日)。
本发明还提供了一种构建健康皮层类器官模型的诱导性多能干细胞，所述诱导性多能干细胞是由中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏的保藏编号为CCTCC NO：C2021145的细胞株XYY-HC1(保藏地址：中国.武汉.武汉大学，保藏日期为2021年6月11日)。
本发明还提供了前述的诱导性多能干细胞WD-FES1在构建精神分裂症发育异常的皮层类器官模型中的用途。
本发明还提供了前述的诱导性多能干细胞XYY-HC1在构建健康皮层类器官模型中的用途。
本发明还提供了一种皮层类器官模型的构建方法，它包括如下步骤：
通过3D悬浮培养方法，诱导前述的诱导性多能干细胞分化，即得；
前述的诱导性多能干细胞WD-FES1分化构建得到精神分裂症发育异常的皮层类器官模型；
前述的诱导性多能干细胞XYY-HC1分化构建得到健康皮层类器官模型。
进一步地，前述的构建方法包括如下步骤：
(1)将前述的诱导性多能干细胞诱导成拟胚体；
(2)将拟胚体培养形成RONAs；
(3)将RONAs培养形成皮层类器官前体；
(4)皮层类器官前体成熟为皮层类器官。
进一步地，
步骤(1)中，所述将前述的诱导性多能干细胞诱导成拟胚体的具体方法为：将前述的诱导性多能干细胞消化后转移到低贴壁的培养板中，培养7天形成拟胚体；
和/或，步骤(2)中，所述将拟胚体培养形成RONAs的具体方法为：将拟胚体转移到Matrigel包被的培养板中，使用含N2培养基培养，得到具有典型神经元特征的集落RONAs；
和/或，步骤(3)中，所述将RONAs培养形成皮层类器官前体的具体方法为：将RONAs消化为单细胞，使用
Figure BDA0003187665860000021
人皮层类器官基础培养液在低吸附培养板中培养，获得皮层类器官前体；
和/或，步骤(4)中，所述皮层类器官前体成熟为皮层类器官的具体方法为：使用
Figure BDA0003187665860000022
人皮层类器官基础培养液培养皮层类器官前体，每3-7天进行半量换液，直至分化成熟；
优选地，
步骤(1)中，所述消化使用含1mg/ml胶原酶的DMEM/F12培养基；
和/或，步骤(1)中，所述培养的培养基为Essential 8TM人iPSC培养基；
和/或，步骤(2)中，所述培养基为含N2的DMEM/F12培养基；
和/或，步骤(3)中，所述消化为1ml/cm2 Accutase在37℃消化5-10min。
进一步地，步骤(4)中，所述分化成熟为分化90天。
本发明还提供了一种皮层类器官模型，它是由前述的诱导性多能干细胞WD-FES1按照前述的构建方法构建而成的精神分裂症发育异常的皮层类器官模型；
和/或，它是由前述的诱导性多能干细胞XYY-HC1按照前述的构建方法构建而成的健康皮层类器官模型。
本发明还提供了前述的皮层类器官模型在筛选治疗精神分裂症的药物中的用途。
本发明还提供了一种筛选治疗精神分裂症的药物的方法，它包括如下步骤：
(1)将前述的诱导性多能干细胞WD-FES1按照前述的构建方法，构建精神分裂症发育异常的皮层类器官模型；将前述的诱导性多能干细胞XYY-HC1按照前述的构建方法，构建健康皮层类器官模型；
(2)将候选药物分别施用于上述模型；
(3)用上述模型评价潜在的治疗精神分裂症的药物。
本申请通过非整合(无痕)重编程的episomal质粒电转方法(无外源质粒序列残留，相对安全，致瘤性小)，制备了1例首发(首次患病未用药，可以排除药物对基因组表观遗传等影响)精神分裂症患者和1例正常对照青少年儿童(精神分裂症多起病于青少年阶段，此阶段也是神经发育的重要阶段)的特定iPSCs样本(正常对照的iPSCs样本为XYY-HC1，由中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏编号为CCTCC NO：C2021145；精神分裂症患者的iPSCs样本为WD-FES1，由中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏编号为CCTCC NO：C2021146)。
本申请利用前述特定的iPSCs细胞株，通过3D悬浮培养方法，将iPSCs定向诱导成了能够模拟大脑发育时间进程和空间结构的皮层类器官的模型。这种模型包含兴奋性神经元、抑制性神经元和多种神经支持细胞，并且在不同发育时期展示出一定的空间结构，克服了传统定向分化方法所得神经元类型单一且无任何空间结构的缺陷，能够反映不同神经细胞之间的相互作用和影响。
即本发明采用特定人诱导多能干细胞WD-FES1和XYY-HC1，分别构建了模拟大脑发育时间进程和空间结构的皮层类器官模型，克服了定向分化为神经元方法所得神经元类型单一/有限的缺陷，可以反映多种神经细胞(除神经元以外还有星型胶质细胞等多种支持细胞)的功能。与以正常对照来源的人诱导性多能干细胞XYY-HC1制备的皮层类器官模型相比，精神分裂症患者来源的WD-FES1制备的精神分裂症皮层类器官在发育早期存在显著的腔室结构缺陷，随着发育进程的推荐这些缺陷持续存在，且在神经细胞类型比例等方面存在发育异常。该模型可以作为精神分裂症神经发育异常研究的重要模型，对于精神分裂症神经发育异常生物学机制研究，尤其是精神分裂症新型治疗药物开发提供了理想的研究模型。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1为皮层类器官的制备方法。
图2为精神分裂症患者来源iPSCs分化得到结构缺陷和兴奋性神经元/抑制性神经元比例失衡的皮层类器官：A为D30(表第30天)，B为D60(表第60天)，C为D90(表第90天)；标尺＝500μm。
具体实施方式
本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。
本申请通过非整合(无痕)重编程的episomal质粒电转方法(无外源质粒序列残留，相对安全，致瘤性小)，制备了1例首发(首次患病未用药，可以排除药物对基因组表观遗传等影响)精神分裂症患者和1例正常对照青少年儿童(精神分裂症多起病于青少年阶段，此阶段也是神经发育的重要阶段)的特定iPSCs样本。将这两个iPSCs样本进行了保藏。
正常对照的iPSCs样本为人诱导性多能干细胞XYY-HC1，由中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，保藏日期为2021年6月11日，保藏编号为CCTCC NO：C2021145。
精神分裂症患者的iPSCs样本为人诱导性多能干细胞WD-FES1，由中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，保藏日期为2021年6月11日，保藏编号为CCTCC NO：C2021146。
实施例1、精神分裂症患者来源iPSCs分化得到结构缺陷和兴奋/抑制失衡的皮层类器官模型
如图1所示，皮层类器官模型的构建过程参考Xu等人的制备方法(Xu et al.,Cultured networks of excitatory projection neurons and inhibitoryinterneurons for studying human cortical neurotoxicity,2016,ScienceTranslational Medicine,8(333):333ra48)。
(1)将人诱导性多能干细胞WD-FES1诱导成拟胚体：使用含1mg/ml胶原酶的DMEM/F12培养基，将iPSC(WD-FES1)消化5-10分钟，将分离的iPSC克隆转移到低贴壁的培养板中，使用人iPSC的培养基(不含FGF2，定义为KoSR培养基)培养两天，然后在培养基中加入50ng/ml Noggin和10mM SB431542，到第七天形成拟胚体。
(2)将拟胚体转移到Matrigel包被的培养板中形成RONAs：将拟胚体转移到Matrigel包被的培养板中，使用DMEM/F12培养基(含1％N2，100mM非必需氨基酸MEM，1mMGlutaMAX和2mg/ml肝素)培养。第7-12天每隔一天更换培养基，12天后每天更换培养基。N2补充剂使悬浮的拟胚体在培养板中形成附着的拟胚体，在第8-9天时，附着的拟胚体分解形成具有典型神经元特征的集落，即RONAs。
(3)形成皮层类器官前体：手动分离RONAs，使用Neurobasal培养基(含有2％无VitA的B27和1mM GlutaMAX)培养1天，RONAs分解为单细胞并贴壁于层粘连蛋白/聚-D-赖氨酸包被的培养板上，在Neurobasal/B27神经分化培养基(含有20ng/ml BDNF，20ng/ml GDNF和0.5mM cAMP)中培养十天后进行消化。消化时先用PBS洗一遍，0.1mL/cm2 Accutase在37℃消化5-10min；加入消化液3倍体积的
Figure BDA0003187665860000051
人神经前体细胞培养液终止消化，轻轻吹打细胞，使其脱离细胞底板呈单细胞悬液状态，转移至离心管中，300g离心3min；弃上清，用适量人3D大脑皮层类器官培养液(
Figure BDA0003187665860000052
人皮层类器官基础培养液)重悬细胞，进行活细胞计数。根据需要的类器官大小，在超低附96孔细胞培养板中每孔接种0.1-2.0×104个细胞，培养获得皮层类器官前体(时间记为D0，第0天)。
(4)皮层类器官分化：皮层类器官前体使用
Figure BDA0003187665860000053
人皮层类器官基础培养液(Neurobasal培养基中含1％N2和2％B27，添加20ng/ml BDNF和20ng/ml GDNF)进行后续培养，每3-7天进行半量换液，根据培养液颜色变化或实验需求调整换液频率或培养板规格，直至分化成熟至D90(第90天)。即得精神分裂症结构缺陷和兴奋性神经元/抑制性神经元比例失衡的皮层类器官模型。
按照实施例1所述方法，将人诱导性多能干细胞WD-FES1替换为人诱导性多能干细胞XYY-HC1，制备得到正常人皮层类器官模型，作为对照模型。
两种干细胞分化成人皮层类器官模型的结果如图2所示。在3D分化早期D30阶段(如图2A)，正常对照来源的iPSCs(XYY-HC1)制备的皮层类器官表现出典型的以神经前体细胞SOX2+为核心的室下SVZ区结构；而精神分裂症患者来源的iPSCs(WD-FES1)制备的皮层类器官无室下SVZ区结构。随着皮层类器官逐渐发育成熟至D60和D90(如图2B-C)，正常对照组典型的室下SVZ区结构逐渐减少，而该结构在精神分裂症患者组始终没有出现。
可见，本发明精神分裂症患者来源的iPSCs制备的皮层类器官存在持续的结构缺陷。
同时，与正常对照来源的iPSCs制备的皮层类器官相比，在3D分化早期的D30阶段(如图2A)，精神分裂症患者来源的iPSCs制备的皮层类器官兴奋性神经元比例存在明显降低，如深层皮层的TBR1+/CTIP2+/SATB2+兴奋性神经元和表层皮层的兴奋性神经元Reelin+/CUX1+/BRN2+，以及呈现点状分布的vGlut1+、Synapsin+和PSD95+；与此同时，抑制性中间神经元比例显著升高，如SST+/GABA+和VGAT+/MAP2+。随着皮层类器官逐渐发育成熟至D60和D90(如图2B-C)，兴奋性神经元比例降低及抑制性神经元比例升高的失衡现象仍然存在。这些均说明精神分裂症患者来源的iPSCs制备的皮层类器官存在持续的兴奋性神经元/抑制性神经元失衡。
可见，本发明采用神分裂症患者来源的iPSCs(WD-FES1)制备的皮层类器官可作为精神分裂症神经发育异常研究的模型。
综上，本发明采用特定人诱导多能干细胞WD-FES1和XYY-HC1，分别构建了模拟大脑发育时间进程和空间结构的皮层类器官模型，克服了定向分化为神经元方法所得神经元类型单一/有限的缺陷，可以反映多种神经细胞(除神经元以外还有星型胶质细胞等多种支持细胞)的功能。与以正常对照来源的人诱导性多能干细胞XYY-HC1制备的皮层类器官模型相比，精神分裂症患者来源的WD-FES1制备的精神分裂症皮层类器官在发育早期存在显著的腔室结构缺陷，随着发育进程的推荐这些缺陷持续存在，且在神经细胞类型比例等方面存在发育异常。该模型可以作为精神分裂症神经发育异常研究的重要模型，对于精神分裂症神经发育异常生物学机制研究，尤其是精神分裂症新型治疗药物开发提供了理想的研究模型。

Claims (4)

1. 一种诱导性多能干细胞在构建精神分裂症发育异常的皮层类器官模型中的用途；所述诱导性多能干细胞是由中国典型培养物保藏中心保藏的保藏编号为CCTCC NO：C2021146的细胞株WD-FES1；
所述皮层类器官模型的构建方法包括如下步骤：
(1) 将诱导性多能干细胞诱导成拟胚体；
(2) 将拟胚体培养形成RONAs；
(3) 将RONAs培养形成皮层类器官前体；
(4) 皮层类器官前体成熟为皮层类器官。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：
步骤(1)中，所述将诱导性多能干细胞诱导成拟胚体的具体方法为：将诱导性多能干细胞消化后转移到低贴壁的培养板中，培养7天形成拟胚体；
和/或，步骤(2)中，所述将拟胚体培养形成RONAs的具体方法为：将拟胚体转移到Matrigel包被的培养板中，使用含N2培养基培养，得到具有典型神经元特征的集落RONAs；
和/或，步骤(3)中，所述将RONAs培养形成皮层类器官前体的具体方法为：将RONAs消化为单细胞，使用HopCell®人皮层类器官基础培养液在低吸附培养板中培养，获得皮层类器官前体；
和/或，步骤(4)中，所述皮层类器官前体成熟为皮层类器官的具体方法为：使用HopCell®人皮层类器官基础培养液培养皮层类器官前体，每3-7天进行半量换液，直至分化成熟。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：
步骤(1)中，所述消化使用含1mg/ml胶原酶的DMEM/F12培养基；
和/或，步骤(1)中，所述培养的培养基为Essential 8™ 人iPSC培养基；
和/或，步骤(2)中，所述培养基为含N2的DMEM/F12培养基；
和/或，步骤(3)中，所述消化为1 ml/cm2 Accutase在37℃消化5-10 min。
4.一种筛选治疗精神分裂症的药物的方法，其特征在于：它包括如下步骤：
1）将诱导性多能干细胞构建成精神分裂症发育异常的皮层类器官模型；
2）将候选药物分别施用于上述模型；
3）用上述模型评价潜在的治疗精神分裂症的药物；
步骤1）中，所述诱导性多能干细胞是由中国典型培养物保藏中心保藏的保藏编号为CCTCC NO：C2021146的细胞株WD-FES1；所述构建精神分裂症发育异常的皮层类器官模型的方法包括如下步骤：
(1) 将诱导性多能干细胞诱导成拟胚体；
(2) 将拟胚体培养形成RONAs；
(3) 将RONAs培养形成皮层类器官前体；
(4) 皮层类器官前体成熟为皮层类器官。
CN202110867058.6A 2021-07-29 2021-07-29 一种精神分裂症发育异常的皮层类器官模型的构建方法 Active CN113667633B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110867058.6A CN113667633B (zh) 2021-07-29 2021-07-29 一种精神分裂症发育异常的皮层类器官模型的构建方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110867058.6A CN113667633B (zh) 2021-07-29 2021-07-29 一种精神分裂症发育异常的皮层类器官模型的构建方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113667633A CN113667633A (zh) 2021-11-19
CN113667633B true CN113667633B (zh) 2022-05-24

Family

ID=78540763

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110867058.6A Active CN113667633B (zh) 2021-07-29 2021-07-29 一种精神分裂症发育异常的皮层类器官模型的构建方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113667633B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115381853A (zh) * 2022-07-22 2022-11-25 四川大学华西医院 碳化钼在制备治疗纤维肌痛综合征和/或抑郁症的药物中的用途

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101134946B (zh) * 2007-08-03 2011-12-21 陆洪光 一种黑色素瘤体外模型的制作方法
US11369577B2 (en) * 2014-11-26 2022-06-28 IEO—Istituto Europeo di Oncologia S.r.l. Reprogramming-based models of neurodevelopmental disorders and uses thereof
CN109136185B (zh) * 2017-06-28 2021-09-21 中国科学院生物物理研究所 一种类脑器官器的制备方法和应用
CN111269833A (zh) * 2018-12-05 2020-06-12 中国科学院大连化学物理研究所 一种基于器官芯片的人胰岛类器官模型构建方法
CN109880791B (zh) * 2019-02-20 2023-02-03 南通大学附属医院 一种肝纤维化类器官模型的体外构建方法
CN110904223A (zh) * 2019-12-31 2020-03-24 张弛 精神分裂症小鼠模型前额皮层circRNA测序分析试剂盒

Also Published As

Publication number Publication date
CN113667633A (zh) 2021-11-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Suzuki et al. Is this a brain which I see before me? Modeling human neural development with pluripotent stem cells
Srikanth et al. Stem cells on the brain: modeling neurodevelopmental and neurodegenerative diseases using human induced pluripotent stem cells
US20220106563A1 (en) Microglia-sufficient brain organoids
Su et al. Direct conversion of fibroblasts into neural progenitor-like cells by forced growth into 3D spheres on low attachment surfaces
CN109136185B (zh) 一种类脑器官器的制备方法和应用
Brawner et al. Generating CNS organoids from human induced pluripotent stem cells for modeling neurological disorders
Guy et al. Human neural organoids: Models for developmental neurobiology and disease
Ji et al. Differentiation of retinal ganglion cells from induced pluripotent stem cells: a review
CN105392881A (zh) 体细胞基于小分子转化为神经嵴细胞
CN109294991A (zh) 神经干细胞诱导分化培养基及神经干细胞诱导分化的方法
CN113667633B (zh) 一种精神分裂症发育异常的皮层类器官模型的构建方法
Wang et al. Quick commitment and efficient reprogramming route of direct induction of retinal ganglion cell-like neurons
WO2019200383A1 (en) Reagents and methods for autism and comorbidities thereof
Eldred et al. Human retinal model systems: Strengths, weaknesses, and future directions
WO2020227084A2 (en) Reagents and methods for alzheimer's disease and comorbidities thereof
Limone et al. Pluripotent stem cell strategies for rebuilding the human brain
CN112608878B (zh) 一种体外耳蜗微器官功能单元及其三维构建方法和应用
Viczian Advances in retinal stem cell biology
Weed et al. Strategies for retinal cell generation from human pluripotent stem cells
CN110302398A (zh) 一种含有Atoh7和/或Pou4f的组合物、其制备方法及医药用途
Shi et al. The enhancement of neural stem cell survival and growth by coculturing with expanded sertoli cells in vitro
Kang et al. Application of human stem cell derived retinal organoids in the exploration of the mechanisms of early retinal development
Lyu et al. MiR-210-5p promotes the differentiation of human induced pluripotent stem cells into dopaminergic neural precursors by targeting SMAD4 and SUFU and treats parkinsonian rats
Sridhar et al. Human pluripotent stem cells as in vitro models for retinal development and disease
CN109722419B (zh) 一种利用微量神经组织获取和培养少突胶质前体细胞的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant