CN113662112A - 一种具有护眼功能的复合果蔬汁及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有护眼功能的复合果蔬汁的制备方法及产品，制备方法包括步骤：海带汁的制备；苹果汁的制备；褐藻多酚的制备；混合；均质；脱气；杀菌和冷却。细胞实验证明，海带中的褐藻多酚提取物能够修复UVB辐射引起的大鼠视网膜müller细胞受到的氧化损伤，从而抑制müller细胞凋亡。但是，仅由海带汁提供的褐藻多酚起到的护眼作用很小，外源性添加海带褐藻多酚提取物是一种有效提高护眼功能的方法，因此，本发明提供一种海带、苹果复合果蔬汁的制备方法，将海带和苹果有机结合，具有丰富的营养价值的同时也能对视力起到保护作用。
Description
技术领域
本发明涉天然复合果蔬汁领域，具体涉及一种具有护眼功能的复合果蔬汁及其制备方法。
背景技术
海带是一种营养价值极高的海洋性蔬菜，其保健功能已为人们熟知。海带含脂肪0.1％、粗纤维10％、蛋白质12％，除此以外还含有褐藻多酚和多糖等功能活性物质。苹果是蔷薇科苹果亚科苹果属植物，苹果自身营养价值很高，富含矿物质和维生素，含钙量丰富，且根据统计显示，2019年中国苹果的产量高达4242.54万吨，是加工果汁的良好原料。
脊椎动物视网膜由六种类型的神经元和müller胶质细胞组成。其中，müller细胞占脊椎动物各类视网膜细胞总数超过90％。Müller胶质细胞在成熟的脊椎动物视网膜中起着多种作用，例如，它们为异常光感受器迁移到视网膜下空间提供结构屏障，保护视网膜神经元免受损伤，并在急性损伤时充当神经祖细胞。
多酚类物质来源于植物的次生代谢，因具有多个酚基团而得名。陆地中常见的多酚化合物是没食子酸，但大型褐藻中的多酚类物质从简单的酚类化合物(如具有单一芳香结构的酚酸)到高度复杂的间苯三酚类化合物(称为褐藻多酚)，它们是由间苯三酚(1,3,5-三羟基苯)单元聚合而成。褐藻多酚具有非常广泛的生物活性，例如，抗氧化、抗炎、抗菌和抗癌等功能活性。其中最主要的是其抗氧化活性，褐藻多酚是天然的强抗氧化剂或自由基清除剂。它可以通过提高机体内源性的抗氧化酶活性或增加外源性抗氧化剂抵抗或者修复氧化损伤。
目前，已报道关于岩藻黄质的护眼功能，例如，岩藻黄素可显著抑制人体晶状体上皮细胞系SRA01/04的生长，表明岩藻黄素是安全有效的抗恶性细胞增生物，可用于制备眼植入产品和眼部治疗药品，用以预防或治疗眼部疾病。
现有技术不足：
(1)有关褐藻多酚护眼的研究目前没有报道；
(2)现有的海带复合果蔬汁饮料中的海带虽然能够提供一定量的褐藻多酚活性物质，但其含量极低，起到的护眼作用较弱，市面缺少添加外源性褐藻多酚以作为主要有效成分而加工成具有护眼作用的复合果蔬汁饮料。
发明内容
为了弥补上述不足，本发明提供一种具有护眼功能的复合果蔬汁的制备方法。除了提供一种海带、苹果复合果蔬汁饮料以外，又从海带中提取褐藻多酚并添加至饮料中作为有效护眼的活性成分，在实现褐藻多酚提取物的新用途的同时也开发出一款具有护眼功能的复合果汁饮料。
一种具有护眼功能的复合果蔬汁的制备方法，具体步骤如下：
S1、取40～50份苹果汁，30～45份海带汁，0.1～1.5份褐藻多酚干粉，5～10份白砂糖，1～3份蜂蜜，0.2～0.3份柠檬酸混合，搅拌均匀；
S2、将S1步骤所获得的混合料进行均质处理，得复合果汁；
S3、将所述复合果汁脱气灌装封口；
S4、把灌装封口的果汁放入60～80℃的热水中水浴加热12～14分钟后冷却至20～25℃即可。
优选的是，所述海带汁的制备方法包括：
(1)选料：选择肥厚无霉变的干海带，用作制备海带汁的原料；
(2)清洗、浸泡：用清水洗去表面泥沙等杂质，然后用水浸泡2～4小时，使其充分吸水膨胀；
(3)破碎、打浆：先将海带破碎，然后加入8～10倍于海带质量的饮用水将海带打成浆汁；
(4)保温浸提：加热煮沸后，加入0.06％～0.08％的冰醋酸于海带浆液中，然后在80～85℃下不断搅拌，浸提时间90分钟；
(5)离心分离：海带浸提液经离心机分离除去残渣；
(6)过滤：分离出的清液用100目的绢布过滤；
(7)脱腥：向提取的海带汁中添加质量分数为2％～4％的α-环状糊精和0.1％～0.3％的姜汁，搅拌均匀。
优选的是，所述苹果汁的制备方法包括：
(1)洗净，晾干：苹果用清水进行冲洗，然后晾干；
(2)去除籽核：将苹果剖开，挖出果肉；
(3)打浆、预煮：将果肉按料水比为1:2～4放入打浆机打浆，然后将浆液放入不锈钢锅中在70～80℃下预煮4～5分钟，分别加入0.1％～0.3％的柠檬酸和抗坏血酸，主要目的为了钝化果肉组织的酶活性，防止果汁褐变。
优选的是，所述褐藻多酚干粉的制备方法包括：
(1)海带干粉的制备：将干制的海带经清水清洗干净后，在50℃下干燥，经粉碎机粉碎，过20目筛得到海带干粉，真空密封并在-30℃下储存备用；
(2)褐藻多酚的提取：将海带干粉用50％～90％的乙醇水溶液浸提，海带干粉与乙醇水溶液的重量体积比为1:5～1:15，振荡浸提8小时，浸提温度为40～50℃，离心得到上清液，上清液除去溶剂，得到褐藻多酚干粉。
优选的是，所述将海带浸提液离心分离时离心机的转速为5000转/分钟。
优选的是，所述海带干粉与所述乙醇水溶液的质量体积比为1:5～1:15，在所述浸提开始时进行10～30分钟超声辅助浸提，超声功率为600W，超声频率为40KHz，摇床振荡频率为120rpm；浸提获得的上清液经50℃旋转蒸发除去乙醇，之后将产物装入Sep-Pak C18Plus柱(包含500mg吸附剂，3mL柱体积)中，先用甲醇活化，然后用水平衡，褐藻多酚化合物用甲醇洗脱，溶剂旋转蒸发直至完全干燥，得到褐藻多酚干粉。
一种根据本发明所述复合果蔬汁的制备方法制作的复合果蔬汁。
本发明的有益效果如下：
(1)本发明提供了一种具有护眼功能的海带、苹果复合果蔬汁的制备方法，褐藻多酚提取物对UVB引起的大鼠视网膜müller胶质细胞(RMC-1)的氧化损伤具有修复作用，在对细胞无毒性的浓度范围内，其提升细胞活力的效果可以达到20％左右，同时，对UVB诱导的细胞形态损伤有明显的修复作用，护眼效果明显，强化其护眼功能，消费者长期食用后可以达到缓解眼部疲劳、干涩，抗蓝光，预防近视等功效。
(2)在海带、苹果复合果蔬汁中海带含有的褐藻多酚基础上，添加了一定含量的外源性海带褐藻多酚提取物，提高褐藻多酚的含量，加强护眼效果。
(3)本发明方法在保留饮料加工工艺的基础上进行添加活性成分，工艺简单，易于工业化生产，产品具有很好的价格优势和市场前景。
附图说明
图1是不同浓度褐藻多酚对RMC-1细胞活力的影响柱状图。
图2是不同浓度褐藻多酚对RMC-1细胞形态的影响显微镜图(20倍镜)。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本发明的具体实施作进一步说明，但本发明的实施和保护不限于此。需指出的是，以下若有未特别详细说明之过程，均是本领域技术人员可参照现有技术实现或理解的。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，视为可以通过市售购买得到的常规产品。
实施例1
一种褐藻多酚的提取方法，包括以下步骤：
(1)海带干粉的制备：将干制的海带经清水清洗干净后，在50℃下干燥，经粉碎机粉碎，过20目筛得到海带干粉，真空密封并在-30℃下储存备用；
(2)将海带干粉用50％的乙醇水溶液浸提，海带干粉与乙醇水溶液的重量体积比为1:15，在浸提开始时超声辅助提取30分钟，超声功率为600W，超声频率为40KHz，浸提总时长为8小时，浸提温度为50℃，摇床振荡频率为120rpm，在4℃，5000rpm下离心10分钟得到上清液，上清液经过旋转蒸发除去乙醇，旋蒸蒸发温度为50℃，转速为100rpm，将剩余的水性混合物装入平衡的Sep-Pak C18 Plus柱中，褐藻多酚化合物用甲醇洗脱，溶剂旋转蒸发直至完全干燥，得到一种具有护眼功能的褐藻多酚干粉(褐藻多酚提取物)，干粉中褐藻多酚的含量为111.96mg没食子酸/g干燥提取物。
实施例2
本实施例对实施例1中制得的褐藻多酚提取物进行修复UVB引起的视网膜müller胶质细胞氧化损伤的实验研究。
实验用细胞株：将大鼠视网膜müller胶质细胞置于体积分数为10％的胎牛血清和1％的青链霉素混合液的DMEM培养基中常规培养(培养条件：37℃、CO2的体积分数为5％)。
褐藻多酚储液：称取实施例1中制得的褐藻多酚粉末溶于DMSO中，给药前用体积分数为10％的胎牛血清和1％的青链霉素混合液的DMEM培养基稀释至工作浓度(5、10、15μg/ml)，浓度以粉末质量定量。
实验步骤如下：
(1)通过UVB诱导RMC-1细胞氧化损伤，UVB辐射剂量为80mJ/cm2，褐藻多酚储液(5、10、15μg/ml)以及空白对照组(浓度为0μg/ml)，处理24小时。
(2)检测细胞存活率：
采用噻唑蓝(MTT)测定法，用于测量细胞代谢活性，细胞毒性，增殖和活力。将100μL RMC-1(1×105/mL)接种在的96孔微量滴定板上，然后在37℃的5％CO2培养箱培养24小时。UVB照射后，用不同浓度的褐藻多酚储液处理细胞另外24小时。然后将细胞与MTT(5mg/mL)孵育4小时以染色细胞。然后除去MTT溶液，加入150μL二甲基亚砜(DMSO)并充分摇匀。用酶标仪(Tecan Infinite，瑞士)测定570nm处的吸光度。计算结果，并根据等式表示为细胞存活率：
细胞活力(％)＝(样品吸光值/对照吸光值)×100
实验结果如图1所示。空白对照组是指未经任何处理的细胞。褐藻多酚提取物在5～15μg/ml浓度范围内无毒性，当褐藻多酚提取物浓度在5～15μg/ml时对UVB造成的细胞损伤有缓解作用，在15μg/ml时，效果达到最佳，细胞存活率从45.20±0.73％提高至64.85±1.61％。同时，根据图2细胞显微镜观察图可知，对照组RMC-1细胞一般呈树枝状，膜清晰，而UVB诱导的细胞呈圆形，细胞体积缩小，边界紊乱，表面不规则，经过褐藻多酚处理，表现出对形态学变化的保护作用，逐渐恢复正常的细胞形态。结果表明褐藻多酚提取物可以有效抑制RMC-1免受UVB诱导的细胞凋亡。
实施例3
一种具有护眼功能的复合果蔬汁，具体制作步骤如下：
S1、海带汁的制备方法：
(1)选料：选择肥厚无霉变的干海带，用作制备海带汁的原料；
(2)清洗、浸泡：用清水洗去表面泥沙等杂质，然后用水浸泡4小时，使其充分吸水膨胀；
(3)破碎、打浆：先将海带破碎，然后加入8倍于海带质量的饮用水将海带打成浆汁；
(4)保温浸提：加热煮沸后，加入0.06％的冰醋酸于海带浆液中，然后在80～85℃下不断搅拌，浸提时间90分钟；
(5)离心分离：海带浸提液经离心机分离除去残渣，离心机转速5000转/分钟；
(6)过滤：分离出的清液用100目的绢布过滤；
(7)脱腥：向提取的海带汁中添加质量分数为2％的α-环状糊精和0.1％的姜汁，搅拌均匀。
S2、苹果汁的制备方法：
(1)苹果的采集：购买新鲜成熟且无损伤的苹果；
(2)洗净，晾干：苹果用清水进行冲洗，然后晾干水；
(3)去除籽核：将苹果剖开，挖出果肉；
(4)打浆、预煮：将果肉按料水比为1:2放入打浆机打浆，然后将浆液放入不锈钢锅中在70℃下预煮4分钟，加入0.1％的柠檬酸和0.2％抗坏血酸，主要目的为了钝化果肉组织的酶活性，防止果汁褐变。
S3、混合：称取40份海带汁、50份苹果汁、7.5份白砂糖，2.3份蜂蜜，0.2份柠檬酸，混合调配，搅拌均匀。
S4、均质：将S3步骤所获得的混合料用高压均质机进行均质。
S5、脱气：均质后的复合果汁经真空脱气机脱气，灌装封口。
S6、杀菌、冷却：把灌装封口的果汁放入80℃的热水中水浴加热12分钟后冷却至20℃即可。
实施例4
一种具有护眼功能的复合果蔬汁，具体制作步骤如下：
S1、海带汁的制备方法：
(1)选料：选择肥厚无霉变的干海带，用作制备海带汁的原料；
(2)清洗、浸泡：用清水洗去表面泥沙等杂质，然后用水浸泡4小时，使其充分吸水膨胀；
(3)破碎、打浆：先将海带破碎，然后加入8倍于海带质量的饮用水将海带打成浆汁；
(4)保温浸提：加热煮沸后，加入0.06％的冰醋酸于海带浆液中，然后在80～85℃下不断搅拌，浸提时间90分钟；
(5)离心分离：海带浸提液经离心机分离除去残渣，离心机转速5000转/分钟；
(6)过滤：分离出的清液用100目的绢布过滤；
(7)脱腥：向提取的海带汁中添加质量分数为2％的α-环状糊精和0.1％的姜汁，搅拌均匀。
S2、苹果汁的制备方法：
(1)苹果的采集：购买新鲜成熟且无损伤的苹果；
(2)洗净，晾干：苹果用清水进行冲洗，然后晾干水；
(3)去除籽核：将苹果剖开，挖出果肉；
(4)打浆、预煮：将果肉按料水比为1:2放入打浆机打浆，然后将浆液放入不锈钢锅中在70℃下预煮4分钟，加入0.2％的柠檬酸和0.1％的抗坏血酸，主要目的为了钝化果肉组织的酶活性，防止果汁褐变。
S3、混合：称取40份海带汁、50份苹果汁并与0.5份实施例1制得的褐藻多酚、7份白砂糖，2.3份蜂蜜，0.2份柠檬酸，混合调配，搅拌均匀。
S4、均质：将S3步骤所获得的混合料用高压均质机进行均质。
S5、脱气：均质后的复合果汁经真空脱气机脱气，灌装封口。
S6、杀菌、冷却：把灌装封口的果汁放入80℃的热水中水浴加热12分钟后冷却至20℃即可。
实施例5
一种具有护眼功能的复合果蔬汁，具体制作步骤如下：
S1、海带汁的制备方法：
(1)选料：选择肥厚无霉变的干海带，用作制备海带汁的原料；
(2)清洗、浸泡：用清水洗去表面泥沙等杂质，然后用水浸泡4小时，使其充分吸水膨胀；
(3)破碎、打浆：先将海带破碎，然后加入9倍于海带质量的饮用水将海带打成浆汁；
(4)保温浸提：加热煮沸后，加入0.07％的冰醋酸于海带浆液中，然后在80～85℃下不断搅拌，浸提时间90分钟；
(5)离心分离：海带浸提液经离心机分离除去残渣，离心机转速5000转/分钟；
(6)过滤：分离出的清液用100目的绢布过滤；
(7)脱腥：向提取的海带汁中添加质量分数为3％的α-环状糊精和0.2％的姜汁，搅拌均匀。
S2、苹果汁的制备方法：
(1)苹果的采集：购买新鲜成熟且无损伤的苹果；
(2)洗净，晾干：苹果用清水进行冲洗，然后晾干水；
(3)去除籽核：将苹果剖开，挖出果肉；
(4)打浆、预煮：将果肉按料水比为1:3放入打浆机打浆，然后将浆液放入不锈钢锅中在75℃下条件下预煮4分钟，加入0.2％的柠檬酸和0.2％的抗坏血酸，主要目的为了钝化果肉组织的酶活性，防止果汁褐变。
S3、混合：称取45份海带汁、45份苹果汁并与1份实施例1制得的褐藻多酚和6份白砂糖、2.8份蜂蜜，0.2份柠檬酸混合调配，搅拌均匀。
S4、均质：将S3步骤所获得的混合料利用高压均质机进行均质。
S5、脱气：均质后的复合果汁经真空脱气机脱气，灌装封口。
S6、杀菌、冷却：把灌装封口的果汁放入80℃的热水中水浴加热14分钟后冷却至25℃即可。
实施例6
一种具有护眼功能的复合果蔬汁，具体制作步骤如下：
S1、海带汁的制备方法：
(1)选料：选择肥厚无霉变的干海带，用作制备海带汁的原料；
(2)清洗、浸泡：用清水洗去表面泥沙等杂质，然后用水浸泡4小时，使其充分吸水膨胀；
(3)破碎、打浆：先将海带破碎，然后加入10倍于海带质量的饮用水将海带打成浆汁；
(4)保温浸提：加热煮沸后，加入0.07％的冰醋酸于海带浆液中，然后在80～85℃下不断搅拌，浸提时间90分钟；
(5)离心分离：海带浸提液经离心机分离除去残渣，离心机转速5000转/分钟；
(6)过滤：分离出的清液用100目的绢布过滤；
(7)脱腥：向提取的海带汁中添加质量分数为3％的α-环状糊精和0.2％的姜汁，搅拌均匀。
S2、苹果汁的制备方法：
(1)苹果的采集：购买新鲜成熟且无损伤的苹果；
(2)洗净，晾干：苹果用清水进行冲洗，然后晾干水；
(3)去除籽核：将苹果剖开，挖出果肉；
(4)打浆、预煮：将果肉按料水比为1:2放入打浆机打浆，然后将浆液放入不锈钢锅中在70℃下预煮4分钟，加入0.1％的柠檬酸和0.1％的抗坏血酸，主要目的为了钝化果肉组织的酶活性，防止果汁褐变。
S3、混合：称取42份海带汁、48份苹果汁并与1.2份实施例1制得的褐藻多酚、6.3份白砂糖，2.2份蜂蜜，0.3份柠檬酸，混合调配，搅拌均匀。
S4、均质：将S3步骤所获得的混合料利用高压均质机进行均质。
S5、脱气：均质后的复合果汁经真空脱气机脱气，灌装封口。
S6、杀菌、冷却：把灌装封口的果汁放入80℃的热水中水浴加热14分钟后冷却至25℃即可。
以上实施例仅为本发明较优的实施方式，仅用于解释本发明，而非限制本发明，本领域技术人员在未脱离本发明精神实质下所作的改变、替换、修饰等均应属于本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种具有护眼功能的复合果蔬汁的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
S1、取40～50份苹果汁，30～45份海带汁，0.1～1.5份褐藻多酚干粉，5～10份白砂糖，1～3份蜂蜜，0.2～0.3份柠檬酸混合，搅拌均匀；
S2、将S1步骤所获得的混合料进行均质处理，得复合果汁；
S3、将所述复合果汁脱气灌装封口；
S4、把灌装封口的果汁放入60～80℃的热水中水浴加热12～14分钟后冷却至20～25℃即可。
2.根据权利要求1所述的具有护眼功能的复合果蔬汁的制备方法，其特征在于，所述海带汁的制备方法包括：将海带破碎，然后加入8～10倍于海带质量的水将海带打成浆汁；煮沸浆汁后，加入0.06％～0.08％的冰醋酸，然后在80～85℃条件下不断搅拌，浸提90分钟；将海带浸提液离心分离，取清液用100目的绢布过滤；再添加质量分数为2％～4％的α-环状糊精和0.1％～0.3％的姜汁，搅拌均匀后得所述海带汁。
3.根据权利要求1所述的具有护眼功能的复合果蔬汁的制备方法，其特征在于，所述苹果汁的制备方法包括：苹果洗净、晾干，取出果肉；将果肉与清水按料液比为1:2～4打浆，然后将浆液在70～80℃下预煮4～5分钟，分别加入0.1％～0.3％的柠檬酸和抗坏血酸，得苹果汁。
4.根据权利要求1所述的具有护眼功能的复合果蔬汁的制备方法，其特征在于，所述褐藻多酚干粉的制备方法包括：将干海带清洗干净后，在50℃下干燥，粉碎后过20目筛得到海带干粉，真空密封并在-30℃下储存；将海带干粉用50％～90％的乙醇水溶液振荡浸提处理8h，浸提温度为40～50℃，浸提后离心得到上清液，旋蒸上清液除去溶剂，得到褐藻多酚干粉。
5.根据权利要求2所述的具有护眼功能的复合果蔬汁的制备方法，其特征在于，所述将海带浸提液离心分离时离心机的转速为5000转/分钟。
6.根据权利要求4所述的具有护眼功能的复合果蔬汁的制备方法，其特征在于，所述海带干粉与所述乙醇水溶液的质量体积比为1:5～1:15，在所述浸提开始时进行10～30分钟超声辅助浸提，超声功率为600W，超声频率为40KHz，摇床振荡频率为120rpm；浸提获得的所述上清液经50℃旋转蒸发除去乙醇，之后将产物装入Sep-Pak C18 Plus柱中，先用甲醇活化，然后用水平衡，褐藻多酚化合物用甲醇洗脱，溶剂旋转蒸发直至完全干燥，得到所述褐藻多酚干粉。
7.一种根据权利要求1～6中任一项权利要求所述的复合果蔬汁的制备方法制作的复合果蔬汁。
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