CN113645947A

CN113645947A - 抗老化化妆品组合物

Info

Publication number: CN113645947A
Application number: CN202080025440.6A
Authority: CN
Inventors: D·奥瑞儿; R·雷诺德; A·斯坎多勒拉
Original assignee: Givaudan SA
Current assignee: Givaudan SA
Priority date: 2019-03-29
Filing date: 2020-03-30
Publication date: 2021-11-12
Also published as: EP3946243A1; US20220160607A1; JP2022526371A; WO2020201185A1; BR112021017671A2; ZA202106611B; GB201904469D0; AU2020252137A1; KR20210145227A

Abstract

公开了包含甘露糖‑6‑磷酸和甘露糖的混合物的化妆品活性剂。

Description

抗老化化妆品组合物

本发明涉及可用于减少人皮肤上可见的老化迹象的活性成分和方法。更具体地，本发明涉及包含甘露糖-6-磷酸(mannose-6-phospate)和甘露糖的混合物的化妆品活性剂，并且涉及其用于减少皱纹和老人斑(age spot)以及用于构建胶原纤维的用途。

看起来有吸引力的期望自然植根于现代消费者。尽管吸引力的理想会随着时间的推移而经历变化，但人们普遍认为，我们的皮肤的状况和外观是有吸引力的外观的重要贡献者。

当今的消费者被提供了多种用于皮肤的护理的化妆品产品。通常，这些产品以霜剂(cream)和洗剂的形式存在，其含有用于增加皮肤水分的水和用于重新润滑皮肤的脂肪和脂质，且它们的作用在于对皮肤的最外层发挥作用。

提供可用于治疗皮肤老化原因并由此减少可见的老化迹象的有效化妆品制剂仍然是尚未得到满足的需求。

皮肤的结构框架被称作其胞外基质。这种内部框架包含交织网状(inter-meshed)聚合物的网状结构，诸如胶原和弹性蛋白，其内部含有皮肤细胞。它负责皮肤的机械性能，包括紧致度、强度、柔软度和弹性。皮肤老化的物理迹象为皮肤基质状况的反映。更具体地，基质越弱且越不规则，则皮肤倾向于具有更多的皱纹、粗糙度和下垂。

网状真皮是真皮的下层，被发现在乳头状真皮(papillary dermis)下，由致密的不规则结缔组织组成并且以紧密堆积(densely packed)的胶原纤维为特征。这些蛋白质纤维赋予真皮强度、延展性和弹性的特性。网状真皮内胶原纤维的取向产生称作朗格线(Langer’s line)的张力线，其对于伤口愈合和机械性能至关重要。

线粒体是独特的细胞器，其为细胞的动力发生器，将氧气和营养物质转化为三磷酸腺苷(ATP)，这是允许细胞代谢的化学能。线粒体能够独立于细胞核和细胞质合成蛋白质。它们通过支持基本的细胞功能(能量发电站、DNA保护、细胞繁殖信号传导、细胞凋亡激活、细胞电化学完整性的维持……)代表了人类进化中的重要因素。

线粒体活性的下降与正常细胞老化有关。随着老化和外部应激，真皮成纤维细胞的线粒体会受到一定损害，导致活性氧(ROS)的产生和在将氧气转化为能量的过程中产生的能量不足。因此，真皮成纤维细胞的基因表达模式将发生变化，导致胶原生成失调、炎症、破坏解毒途径(蛋白酶体)和氧化皮肤色素(脂褐素)，导致胞外基质(ECM)的结构破坏(disorganization)、皮肤过早老化和老人斑的出现。

由上述任何现象引起的ECM中胶原生成模式的变化将导致网状真皮的结构破坏、纤维堆积的变化以及皮肤机械性能的下降。可以使用原子力显微镜(AFM)评估胶原的复杂层次结构。该技术使用锋利的尖端扫描皮肤细胞或皮肤切片的表面，该尖端将在扫描过程中识别并跟踪支持物的突起(relief)。因此，该方法提供了有关所研究皮肤的生物力学特性和形貌(topography)的信息。

仍然需要提供可有效逆转或减少不期望的皮肤老化迹象(诸如老人斑或皱纹)的应用于皮肤的方法和化妆品活性剂。

从现有技术中已知，甘露糖-6-磷酸可对皮肤外观产生积极作用。例如，US 2012/0071425 A1描述了使用甘露糖-6-磷酸改善皮肤的宏观特性，诸如减少皮肤发红。

此外，还已知单糖(诸如甘露糖或鼠李糖)可以减少皮肤老化迹象(US 2010/0190727 A1)。

然而，本发明的发明人已经令人惊奇地发现，特定摩尔比的甘露糖-6-磷酸和甘露糖的混合物显示出对减少皮肤老化迹象的增强作用。

本发明提供了化妆品活性剂，其包含甘露糖-6-磷酸和甘露糖的混合物，其中甘露糖-6-磷酸与甘露糖的摩尔比为3:1-0.3:1。

在本申请中，这种特定比例的甘露糖-6-磷酸和甘露糖的混合物有时也称作“甘露糖-6-磷酸复合物”。因此，该术语旨在与“本发明的化妆品活性剂”或“甘露糖-6-磷酸和甘露糖的混合物”或其他类似术语具有相同的含义。

本发明的化妆品活性剂能够显著减少皮肤老化的迹象，诸如皱纹和老人斑。

本发明的化妆品活性剂可以包含D-甘露糖-6-磷酸、L-甘露糖-6-磷酸或其混合物。优选地，其包含D-甘露糖-6-磷酸。

同样，本发明的化妆品活性剂可以包含D-甘露糖、L-甘露糖或其混合物。优选地，其包含D-甘露糖。

在本申请上下文中，如果没有不同地说明，则术语“甘露糖-6-磷酸”和“甘露糖”旨在涵盖D-和L-形式，以及它们的混合物。

在本发明的化妆品活性剂中，甘露糖-6-磷酸可以任何化妆品上可接受的形式存在。例如，根据pH，甘露糖-6-磷酸可以以质子化形式或盐形式存在。适合的抗衡离子包括但不限于一价阳离子，诸如例如钠、钾或铵；二价阳离子，诸如例如铜、锌、钙、镁或锰；或三价阳离子，诸如例如铝；或其混合物。甘露糖-6-磷酸也可以与一种或多种氨基酸例如赖氨酸或精氨酸混合和/或与任何其他化妆品上可接受的带正电物质混合，并且可以与所述氨基酸和/或其他化妆品上可接受的带正电物质形成盐。优选地，甘露糖-6-磷酸作为钠盐、赖氨酸盐或精氨酸盐或作为二价阳离子的盐存在。

在本申请上下文中，如果没有不同地说明，则术语“甘露糖-6-磷酸”旨在涵盖甘露糖-6-磷酸的质子化形式和任何化妆品上可接受的盐及其混合物。

优选地，甘露糖-6-磷酸与甘露糖的摩尔比为2:1-1:1，更优选为1.9:1-1.1:1，特别是约1.5:1。

甘露糖-6-磷酸和甘露糖的混合物可以以纯的形式或与其他活性成分和/或赋形剂组合使用。

因此，在一个实施方案中，化妆品活性剂至少基本上由甘露糖-6-磷酸和甘露糖的混合物组成。

优选地，本发明的化妆品活性剂包含浓度为30-220mM，更优选浓度为60-170mM且最优选浓度为约120mM的甘露糖-6-磷酸。

特别地，本发明的化妆品活性剂可以包含0.5-6.0wt％的甘露糖-6-磷酸钠盐，更优选2.0-4.0wt％的甘露糖-6-磷酸钠盐，且最优选约3.0wt％的甘露糖-6-磷酸钠盐。可替换地，本发明的化妆品活性剂可以包含上述任意其它形式的相应量的甘露糖-6-磷酸。

优选地，本发明的化妆品活性剂包含0.5-5.0wt％的甘露糖，更优选0.8-3.0wt％的甘露糖，且最优选约1.5wt％的甘露糖。

在实施方案中，本发明的化妆品活性剂还包含甘油和/或磷酸钠。

可替换地或此外，本发明的化妆品活性剂还可以包含1,2-丙二醇和/或水。特别地，可以通过浓度至多为30％的1,2-丙二醇或通过水替代甘油。

在优选的实施方案中，本发明的化妆品活性剂还包含：

本发明的化妆品活性剂可以在适合于化妆品应用的任何pH下，例如在1.5-9.0的pH，更优选在3.0-6.5的pH，且最优选在4.5-6.0的pH，例如在约5的pH。

本发明的化妆品剂有利地用于化妆品组合物，特别是皮肤护理组合物。

因此，在另一个方面，本发明提供了化妆品组合物，且特别地提供了皮肤护理组合物，其包含上述化妆品活性剂和化妆品上可接受的赋形剂。

更具体地，本发明提供了抗老化皮肤护理组合物。

在另一个方面，本发明提供了减少皮肤中老化迹象的方法，其包含将本发明的化妆品活性剂或本发明的化妆品组合物应用于皮肤、特别是面部皮肤的步骤。

已经发现，通过将本发明的化妆品活性剂或本发明的化妆品组合物应用于皮肤，能够减少皱纹。

还已经发现，通过将本发明的化妆品活性剂或本发明的化妆品组合物应用于皮肤，能够减少老人斑。

进一步已经发现，通过将本发明的化妆品活性剂或本发明的化妆品组合物应用于皮肤，能够构建胶原纤维。

本发明的化妆品活性剂能够：

-重新编程(reprogram)老龄细胞中的线粒体能量代谢，

-促进皮肤基质重构(restructuring)，

-加强真皮表皮连接(dermo epithelial junction)(DEJ)，

-重组(reorganiza)类似于年轻皮肤的皮肤基质，

-显著减少可见的老人斑，

-明显减少鱼尾纹(crow’s feet wrinkle)，和

-减少颈部皱纹以重塑面部的Y-形。

这些作用已经通过体外、离体和临床研究得到证实，如下面的实施例中所述。

特别地，发现本发明的化妆品活性剂增加ATP合酶活性和柠檬酸合酶活性，其与细胞代谢和线粒体生物发生的重新激活相关(实施例3)。

同时，本发明的化妆品活性剂不促进蛋白质糖化，所述蛋白质糖化被涉及在与老化相关的疾病中(实施例4)。

进一步发现本发明的化妆品活性剂可刺激控制胞外基质组分、基质内聚力(cohesion)和成纤维细胞增殖的基因(实施例5)。这导致真皮重构的改善。

用本发明的化妆品活性剂处理还导致V型胶原、纤蛋白-1(Fibulin-1)和生腱蛋白-C表达增加(实施例6)。这些结果证实真皮结构和组构(organization)的显著改善。

这些结果得到离体研究证实，其证明了本发明的化妆品活性剂对真皮及其组构和重构的强烈影响(实施例7)。

年轻人真皮中的胶原纤维典型地是非常内聚的、组织良好的且平行的，而成熟的皮肤典型地显示出更粗糙和结构破坏的胶原纤维网状结构。用本发明的化妆品活性剂处理成熟皮肤导致胶原纤维组构得到显著改善并增加它们之间的内聚力(实施例8)。

皮肤中的蛋白质通过氧化、糖化和氨基甲酰化被修饰。这些修饰的蛋白质被蛋白酶体活性不断消除。然而，当皮肤老化时，蛋白酶体活性减慢，导致修饰的蛋白质的蓄积。作为结果，各种皮肤障碍可能出现，例如色素斑、老人斑和隐形斑(invisible spot)。现已发现本发明的化妆品活性剂能够刺激蛋白酶体活性(实施例9)。

UV辐照会增加表皮和真皮中氧化的蛋白质的量。有趣地是，本发明的化妆品活性剂不仅可以防止这种增加，而且甚至可以显著减少氧化蛋白质的量(实施例10)。

根据本发明的甘露糖-6-磷酸和甘露糖的混合物(也称作“甘露糖-6-磷酸复合物”)、甘露糖和甘露糖-6-磷酸关于它们对线粒体质量减少的作用的进一步体外比较显示在对线粒体质量减少的作用方面低于所述混合物，这表明该混合物对减少细胞老化迹象的协同生物学作用(实施例11)。

临床研究证实，本发明的化妆品活性剂能够显著减少可见斑的数量和大小(实施例13)。

此外，本发明的化妆品活性剂显著改善胶原密度和组构(实施例13)。

本发明的化妆品活性剂还导致鱼尾纹显著减少(实施例13)。

最后但并非最不重要的是，本发明的化妆品活性剂能够显著减少颈部皱纹(在体积和深度方面)(实施例14)。

本发明的化妆品活性剂的具体用途包括但不限于抗老化精华素(serum)或霜剂、用于减少深层皱纹的抗老化产品、用于面部再年轻化的强化处理、鼻唇抗皱纹产品、抗科技颈(teck-neck)产品、抗鱼尾纹产品、抗老人斑精华素、用于成熟皮肤的护肤品和皮肤学级化妆品(dermocosmetics)。

甘露糖-6-磷酸(M6P)为人体代谢物，其用于为细胞产生能量并驱动适当的功能。它是促进细胞中糖酵解(促进能量产生)的必要组分。

可以使用绿色化学从植物来源制备本发明的化妆品活性剂。

甘露糖-6-磷酸可以通过酶促磷酸化由甘露糖制备。适合的磷酸化条件描述于例如WO 2008/142155 A2中，其在这方面的内容通过引用并入本文。下面的实施例1详细描述了甘露糖-6-磷酸的可能合成。

酶促磷酸化典型地提供甘露糖-6-磷酸和甘露糖的混合物。根据反应时间和其他条件，转化率和由此的甘露糖-6-磷酸与甘露糖的比例可能会有所不同。因此，优选地，选择反应时间和条件，使得直接获得期望的甘露糖-6-磷酸与甘露糖的比例。可替换地，也能够通过添加或去除产物的一种或两种来调整该比例。

本发明的化妆品活性剂中甘露糖-6-磷酸与甘露糖的摩尔比为3:1-0.3:1，更优选2:1-1:1，最优选1.9:1-1.1:1，且特别地为约1.5:1。

本发明的化妆品活性剂中甘露糖-6-磷酸的浓度优选为30-220mM，更优选60-170mM，且最优选约120mM。

本发明的化妆品活性剂中甘露糖的浓度优选为0.5-5.0wt％，更优选0.8-3.0wt％，且最优选约1.5wt％。

已发现上述比例和浓度可为皮肤提供最佳的抗老化活性。

本发明的化妆品活性剂可以任选地进一步含有其他化妆品活性成分。在本发明中可以采用常用于制备用于人皮肤的化妆品制剂的任何化妆品活性成分。

本发明的化妆品活性剂可以任选地进一步含有溶剂、赋形剂和/或其他辅助剂。在本发明中可以采用常用于制备用于人皮肤的化妆品制剂的任何溶剂、赋形剂和/或其他辅助剂。

特别地，本发明的化妆品活性剂还可以包含甘油。甘油可以用作防腐剂。

可替换地或此外，本发明的化妆品活性剂还可以包含磷酸钠。例如，磷酸钠可以用作缓冲剂。

在第二个方面，特别是在本文概括的优选实施方案中，本发明提供了包含本发明的化妆品活性剂的化妆品组合物。

典型地，本发明的化妆品活性剂可以以在化妆品组合物中的约0.1-5.0wt％的浓度使用，更优选以约0.5-5.0wt％的浓度使用，例如以约3wt％的浓度使用。

更具体地，本发明提供了皮肤护理组合物，尤其是抗老化皮肤护理组合物。

本发明的化妆品组合物典型地还包含化妆品上可接受的赋形剂。

本发明的化妆品组合物、且特别是皮肤护理组合物可以含有一种或多种化妆品上可接受的赋形剂。在本发明中可以采用常用于制备用于人皮肤的化妆品制剂的任何赋形剂。适合的赋形剂包括但不限于可影响本发明的化妆品活性剂的感官特性、皮肤渗透性和生物利用度的成分。更具体地，它们包括液体，诸如水、油或表面活性剂，包括石油、动物、植物或合成来源的那些，诸如但不限于花生油、大豆油、矿物油、芝麻油、蓖麻油、聚山梨醇酯、山梨坦酯、醚硫酸盐(ether sulfate)、硫酸盐(sulfate)、甜菜碱、糖苷、麦芽糖苷、脂肪醇、壬苯醇醚、泊洛沙姆、聚氧乙烯、聚乙二醇、右旋糖、甘油、洋地黄皂苷等。

用于局部应用于皮肤的制剂可以采用任何物理形式。例如，化妆品组合物、且特别是皮肤护理组合物可以是脂质体组合物、混合脂质体、油质体、类脂质体(niosome)、醇质体(ethosome)、毫粒(milliparticle)、微粒(microparticle)、纳米粒和固体-脂质纳米粒、囊泡、胶束、表面活性剂的混合胶束、表面活性剂-磷脂混合胶束、毫球(millisphere)、微球和纳米球、脂质球、毫囊(millicapsule)、微囊和纳米囊以及微乳和纳米乳的形式，可以添加它们以实现本发明的化妆品活性剂本的更大渗透。

化妆品组合物且特别是皮肤护理组合物可以制成任何固体、液体或半固体形式，其可用于局部或通过经皮应用应用于皮肤上。因此，这些局部或经皮应用的制剂包括但不限于霜剂、多重乳剂，诸如但不限于水包油和/或水包有机硅(silicone)乳剂、油包水和/或有机硅包水乳剂、水/油/水或水/有机硅/水型乳剂，以及油/水/油或有机硅/水/有机硅型乳剂、微乳剂、乳剂和/或溶液、液晶、无水组合物、水性分散体、油、乳、香脂、泡沫、水性或油性洗剂、水性或油性凝胶、霜剂、水-醇溶液、水-乙二醇溶液、水凝胶、搽剂、浆液(sera)、肥皂、面膜、精华素、多糖膜、软膏、摩丝、润发油、糊剂、粉末、棒状物、笔状物和喷雾剂或气雾剂(喷雾剂)，包括驻留型(leave-on)和冲洗型(rinse-off)制剂。

为了实现本文所述的有益效果，本发明的化妆品活性剂或化妆品组合物有利地应用于皮肤，特别是面部皮肤。

在本申请的上下文中，术语“皮肤”特别是指人皮肤。

因此，本发明还提供了减少皮肤老化迹象的方法，其包含将本发明的化妆品活性剂或化妆品组合物应用于皮肤的步骤。特别地，该方法包含应用于面部皮肤。

本发明的化妆品活性剂和化妆品组合物的作用对于可见和暴露并且通常显示老化迹象诸如皱纹或老人斑的皮肤区域特别有利。这些包括但不限于面部、颈部、领口(neckline)、手和前臂。

本发明还涉及本发明的化妆品活性剂或化妆品组合物用于减少皮肤老化迹象的用途。

该用途特别地包括减少皱纹、减少老人斑和/或构建胶原纤维。

通过下列非限制性实施例进一步示例本发明：

实施例1: D-甘露糖-6-磷酸的制备

概述

甘露糖-6-磷酸通过甘露糖与缩合磷酸、特别是焦磷酸盐(pyrophosphate)且在来自福氏志贺氏菌(Shigella flexneri)的酸性磷酸酶存在下反应得到。然后通过去除过量的缩合磷酸和释放的磷酸盐来纯化甘露糖-6-磷酸，任选地随后去除残留的甘露糖。

来自福氏志贺氏菌的酸性磷酸酶

来自福氏志贺氏菌的酸性磷酸酶的基因(常用名PhoN-Sf)(UniProt登记号O50542)由DNA 2.0，即现在的ATUM(Newark,CA,USA)订购和合成。将基因克隆入pET-26b(+)，随后将表达载体转入大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)细胞。

使用自诱导培养基表达PhoN-Sf(B.G.Fox和P.G.Blommel,Curr Protoc ProteinSci 2009,doi:10.1002/à471140864.ps0523s56；reference71491,Novagen,Merck KGaA,Darmstadt,Germany)。通过离心收集细胞并弃去上清液。如下分离PhoN-Sf酶：使用PandaPlus 2000匀浆器(GEA Niro Soavi,Parma,Italy)裂解细胞，通过离心和超滤(GEHealthcare,MW截止值750kDa)去除细胞碎片，并且滤液中含有的酶按原样或浓缩(在30℃真空蒸发)后使用。

通过测量经由对硝基苯酚的释放的4-硝基苯基磷酸酯(p-NPP)的脱磷酸化以分光光度法测定PhoN-Sf酶活性。反应介质含有104mM柠檬酸钠缓冲液pH 4.80、5.8mM氯化镁、0.11mM氯化锌、1.15mM p-NPP、适当稀释的酶(活性范围为0.1-0.8U/mL)。将该混合物在30℃下和在定期时间间隔温育，将100μL反应介质与200μL 0.5N NaOH混合(反应淬灭)。然后将250μL体积引入96-孔微孔板的孔中，并在405nm处测量吸光度。

一个磷酸酶活性单位(U)相当于在测定条件下每分钟释放1微摩尔p-NP的酶的量。

甘露糖-6-磷酸合成

如下进行酶反应：

-D-甘露糖,0.15或0.225M，

-焦磷酸二钠，pH 4.15:分别为0.33或0.50M，

-PhoN-Sf酶:0.20U/mL，

-氯化镁和氯化锌盐:分别为0.50和0.1mM，

-温度:30℃；适度搅拌，

-期限:分别为22和28小时。

纯化和定量

当决定停止反应时，用方便选择的酸将反应介质的pH调节至2.0。通过依次添加镁盐和铵盐以达到接近9.5的pH来去除残留的焦磷酸二钠和释放的磷酸盐。通过过滤除去形成的含有焦磷酸盐、磷酸盐、镁和铵的沉淀。使用阳离子交换树脂除去镁和铵，且最终使用浓氢氧化钠调节溶液的pH，得到pH值4.0-7.0的D-甘露糖-6-磷酸钠盐。

D-甘露糖-6-磷酸和D-甘露糖的含量使用来自Libios(Pontcharra sur Turdine,France)的K-MANGL酶试剂盒测量。完整的试剂盒标明了D-甘露糖-6-磷酸和D-甘露糖的量，而改良的试剂盒(其中去除了ATP)仅允许测量D-甘露糖-6-磷酸的浓度；两值之差得到D-甘露糖的浓度。

上述方法提供了约1.5:1摩尔比的D-甘露糖-6-磷酸和D-甘露糖的混合物。

任选地，可以使用阴离子交换树脂分离D-甘露糖和D-甘露糖-6-磷酸。

用于下述研究的化妆品活性剂含有105.05mmol/kg的D-甘露糖-6-磷酸钠盐和87.42mmol/kg的D-甘露糖。其具有4.78的pH。

实施例2:包含甘露糖-6-磷酸的皮肤护理组合物

对于下述临床研究(实施例12和13)，制备以下组合物：

这相当于实施例4中举出的测试组合物2。

实施例3:线粒体能量代谢

细胞模型

根据制造商的建议，将正常人表皮角质形成细胞NHEK(成人单一供体，参考号C-12003，PromoCell)在角质形成细胞生长培养基2(PromoCell,参考号C-20011)中培养。

-批号415Z005.2(乳腺,单一供体，女性，白种人，26岁)＝>“年轻”

-批号409Z012.1(乳腺,单一供体，女性，白种人，51岁)＝>“成熟”

测试化合物和处理

通过将根据实施例1得到的D-甘露糖-6-磷酸和D-甘露糖的混合物以0.5％和0.1％(v/v)在角质形成细胞生长培养基2(KGM2；培养基)中稀释来制备测试组合物1。

将细胞在接种后的当天处理并与0.1％或0.5％的测试组合物1一起温育72h。未处理的条件，即在没有活性成分的情况下温育72h用作基础参比物。注意到在早期细胞传代时，年轻的供体细胞比成熟的供体细胞生长得更快。

ATP合酶活性

将细胞以150’000个细胞/孔(年轻供体)或180’000个细胞/孔(成熟供体)接种在6-孔板中。处理后，通过胰蛋白酶消化(trypsination)收获细胞，在Kova载玻片上计数并保持在4℃直至测量。对于每次运行，将400'000个细胞透化并在96-孔板中的具有0.5mM ATP、0.5mM NADH、9UI PK/LDH(丙酮酸激酶/乳酸脱氢酶)、2mM PEP(磷酸烯醇式丙酮酸)和10μM的抗霉素A的Tris缓冲液(pH 8)中温育。通过荧光分光光度计(Tecan Infinite 200；在340nm进行)实时测量活性。结果以对未处理细胞(100％活性)和寡霉素A(1μM；0％活性)校准后的ATP合酶活性百分比表示。

柠檬酸合酶活性

将细胞以40’000个细胞/孔接种在24-孔板中。处理后，通过胰蛋白酶消化收获细胞，在Kova载玻片上计数并保持在4℃直至测量。然后将30’000个细胞透化并在96-孔半面积微孔板中的具有150μM5,5'-二硫代-双2-硝基苯甲酸、300μM乙酰辅酶A和1mM草酰乙酸的10mM Tris(pH 8)中温育。通过荧光分光光度计(Tecan Infinite 200；在415nm进行)实时测量酶活性。结果以对未处理细胞(100％活性)校准后的柠檬酸合酶活性百分比表示。

计算

首先对每个简化版(simplicate)进行计算，并根据每个简化版中的抑制百分比计算平均值。

有效浓度50和20：通过在Graphpad Prism4中使用非线性回归各自进行一式三份计算。参照阳性和阴性对照计算EC50和EC20。

ATP合酶活性百分比:

％活性＝100x(斜率_寡霉素–斜率_样品)/(斜率_寡霉素–斜率_未处理)

其中斜率：曲线的斜率(光密度随时间的变化)

柠檬酸合酶活性的百分比:

％活性＝100x(ΔOD_背景–ΔOD_产物)/(ΔOD_背景–ΔOD_未处理)

其中ΔOD:光密度随时间的变化

结果

发现测试组合物1在每个供体中以0.1％和0.5％温育72h后显著增加ATP合酶活性。结果如图1中所示。在成熟供体中的功效更明显，证明了对受损条件下细胞代谢再活化的影响。实际上，这种作用比成熟供体未经处理的情况显著高2.9倍。

还发现测试组合物1经由柠檬酸合酶增加线粒体生物发生。结果如图2中所示。在年轻和成熟供体中作用相同，从而显示了在0.1％和0.5％温育72h后的柠檬酸合酶活性增加。这些结果证明本发明的化妆品活性剂能够重新激活线粒体生物发生。

实施例4:晚期糖基化终产物(AGE)生产

皮肤外植体的处理

来自45岁供体的皮肤外植体用补充有抗生素(青霉素100U/mL和链霉素100μg/mL)和5％胎牛血清的DMEM培养基在37℃/5％CO₂下稳定4小时。

对于实施例4，测试组合物2通过将根据实施例1得到的D-甘露糖-6-磷酸和D-甘露糖的混合物在乳液中以4％(v/v)稀释来制备。测试组合物2相当于实施例2中所述的化妆品组合物。

将外植体用测试组合物2处理48小时。为了比较，将外植体用安慰剂组合物处理，所述安慰剂组合物含有除D-甘露糖-6-磷酸和D-甘露糖的混合物之外的所有物质。然后将每个条件下的三个外植体(在T0未处理，用测试组合物2处理和用安慰剂组合物处理)在切割前立即冷冻在液氮中保存。

AGE的免疫染色

使冷冻的皮肤外植体在用低温恒温器切割之前包括在Tissue-

中。切片具有10μM厚度。在干燥之前将载玻片储存在-20℃，然后用丙酮固定。

封闭特异性位点；将针对AGE的一抗在室温下温育，此时使二抗与Alexa型荧光染料偶联。用DAPI(Roche)标记细胞核，DAPI是一种对DNA特异性的荧光标记物。每次温育后，将切片洗涤3次。

最终，将载玻片用封固剂封固，并在荧光显微镜(Olympus CK40)下观察，该显微镜具有适用于不同荧光染料的过滤器。图像用x40透镜制作。

荧光定量

使用ImageJ软件进行荧光定量。在没有DAPI的所有图像上测量切片总面积的荧光。进行夏皮罗-威尔克检验(Shapiro Wilk test)，其允许使用学生检验(student test)比较条件。

结果

发现测试组合物2在局部应用2天后不诱导皮肤外植体中AGE的增加。因此，本发明的化妆品活性剂在皮肤外植体中不促进蛋白质糖化(其被涉及在老化相关的疾病中)。

实施例5:皮肤基质重构:转录组学分析

将来自28岁供体的正常人真皮成纤维细胞NHDF以每孔300’000个细胞接种在6-孔板的DMEM(Dulbecco改良Eagle培养基)培养基中，其补充有10％的FCS(胎牛血清)。培养48h后，用PBS冲洗NHDF两次，并在刺激前在不含FCS的DMEM培养基中静置过夜。

对于实施例5，通过将根据实施例1得到的D-甘露糖-6-磷酸和D-甘露糖的混合物在DMEM培养基(Dulbecco改良Eagle培养基)中以4％(v/v)稀释来制备测试组合物3，所述培养基中补充有10％的FCS(胎牛血清)。

在不含FCS的DMEM培养基中用测试组合物3刺激细胞6h。刺激6h后，通过苯酚-氯仿萃取提取总RNA。控制RNA质量并进行逆转录以得到cDNA。RT-qPCR在特定的板上进行，旨在研究NHDF真皮生物学中涉及的不同基因的转录组学表达，每孔10ng cDNA。

用成纤维细胞得到的基因表达结果根据POLR2A(RNA聚合酶II，亚单位A)和PES1(pescadillo核糖体生物发生因子1(pescadillo ribosomal biogenesis factor 1))管家基因校准。结果在对未处理条件进行数据校准后表示。

结果

转录组学分析通过RT-qPCR在真皮板上进行，其中95个靶基因被涉及在胞外基质、重塑、抗氧化酶和应激防御、神经营养因子途径、细胞增殖、DNA修复和干细胞标记中。结果以与用作阴性对照的未处理的条件相比表示，并用最稳定的管家基因(POLR2A和PES1)的平均值校准。

结果证明，通过上调CTGF、CYR61和TGFB1，对真皮重构和重塑有很强的作用。实际上，这三个基因编码涉及在组织重塑调节、胶原合成调节和成纤维细胞增殖刺激中的蛋白质。

更准确地，测试组合物3上调了涉及在胞外基质组成中的不同基因的RNA表达，诸如CTGF(+80％***)和CYR61(+84％***)。CTGF(结缔组织生长因子)是胶原合成的调节剂，且其上调证实了胞外基质结构的改善。CYR61(富含半胱氨酸的血管生成诱导物61)编码胞外基质组分，其有助于并刺激皮肤成纤维细胞迁移，从而促进真皮再生和重建。

TGFB1(转化生长因子β1)RNA表达的上调(+18％**)证明真皮重构也由于成纤维细胞增殖的增加而发生。

总之，本发明的化妆品活性剂通过刺激控制胞外基质组分、基质内聚力和成纤维细胞增殖的基因显示出真皮水平的生物活性。这导致真皮重构的改善。

实施例6:皮肤基质重构：免疫组织化学测定

使用

皮肤外植体，其为包埋入固体滋养基质中的人正常皮肤活检组织。表皮表面维持与空气接触以允许局部应用。供体为59岁的具有白种人皮肤的女性，她接受了腹部整形手术。

对于实施例6、7、8和9，通过将根据实施例1得到的D-甘露糖-6-磷酸和D-甘露糖的混合物在PBS(磷酸缓冲盐水)中以4％(v/v)稀释来制备测试组合物4。

使测试组合物4通过局部应用与

接触，在7天期间每天去除和更新。将结果与未处理的皮肤外植体进行比较。

将皮肤外植体固定在福尔马林中并包埋在石蜡中。关注的生物标志物–V型胶原、纤蛋白-1和生腱蛋白-C–通过免疫荧光检测。通过荧光显微法(DM5000B-LeicaMicrosystems)分析生物标志物的表达；每个生物标志物获取10张图像。

通过软件成像(Image J)对每张图片的荧光进行量化。

划定关注的区域，且总荧光强度相对于关注的总面积计算。将这些值与对照进行比较以表达激活或抑制作用。使用学生检验对每个数据进行统计学分析(p<0.05*,p<0.005**和p<0.0005***)。

结果

V型胶原是一种纤维性胶原。它是与I型胶原纤维相关的真皮基质的次要组分。使用4％的测试组合物4，V型胶原表达增加了+17％(p值<0.001)。

纤蛋白-1为胞外基质的组分。其牵涉在真皮-表皮连接(DEJ)中，但表达水平极低。测试组合物4使纤蛋白-1的表达增加+13％(p值<0.01)。

生腱蛋白-C为涉及在真皮-表皮连接的细胞内聚中的基质蛋白，并且位于基底层。4％的测试组合物4使生腱蛋白-C的表达增加+51％(p值<0.001)，允许保持真皮-表皮连接的内聚力。

这些结果强烈证实，本发明的化妆品活性剂通过过表达在真皮结构和组构中发挥作用的关键蛋白质显著地改善真皮组构。

实施例7:皮肤基质重构:离体形态学分析

对于实施例6、7、8和9，通过将根据实施例1得到的D-甘露糖-6-磷酸和D-甘露糖的混合物在PBS(磷酸盐缓冲盐水)中以4％(v/v)稀释来制备测试组合物4。

对来自用于免疫组织化学染色的59岁相同供体的皮肤外植体进行免疫组织化学测定，在与实施例6中所述相同的条件下进行处理。

进行5μm切片。将获得的薄片用Masson三色染色法染色。Masson三色染色法可以检测组织薄片中的胶原纤维和肌组织。

苏木精(Hematoxyline)将细胞核染成紫色，而丽春红品红(fuchsine ponceau)将肌纤维、红细胞、细胞质和弹性纤维染成粉红色；Vert Lumière特异性地染色胶原纤维。.

用

DFC 280实现染色分析，并拍摄了几张代表薄片的照片。

定性分析免疫染色图片以描述不同皮肤分隔部分(compartment)的状态。

结果

发现用测试组合物4处理的皮肤外植体显示出与未处理对照相似的表皮形态。

在真皮水平，对于胶原纤维和弹性纤维，乳头状真皮显示出与对照样品相同的形态，而网状真皮证明与未处理的条件相比，使用测试组合物4的密度增加。

这些观察结果表明，本发明的化妆品活性剂对真皮及其组构和重构有很强的影响：网状真皮的密度增加36％，真皮-表皮连接更清晰，且表皮更具内聚力。

实施例8:皮肤基质重构：胶原纤维组构(AFM和SAXS分析)

在来源于两个不同供体的每个腹部整形术时制备平均直径为12mm(±1mm)的人皮肤外植体：

-年轻供体:30岁白种人女性

-成熟供体:65岁白种人女性

使外植体在37℃、潮湿的5％-CO₂气氛中在BEM培养基(BIO-EC外植体培养基)中保持存活。

测试组合物4基于每个外植体2μl(2mg/cm²)局部应用，并使用小抹刀涂展。

对于成熟供体，将测试组合物4在D0、D1、D2、D3、D5、D6和D7应用。

为了比较，将来自年轻和老年供体的对照外植体培养8天，除了培养基更新外，没有特殊处理。

年轻供体在D1、D4和D6时且成熟供体在D2、D3和D6时对培养基进行一半更新(1mL)。

在D0，采集来自T0批次的外植体并且冷冻在-80℃下。

在D8，采集所有批次中的一个外植体并以与T0相同的方式处理。

使用Leica CM 3050低温恒温器将冷冻样品切成20-μm-厚的切片，且然后固定在Novitom提供的盖玻片上，其置于

+硅烷化载玻片上。

样品在处理后冷冻固定。使20μm厚的冷切冰冻切片沉积在载玻片上并储存在-80℃。在观察前24小时将它们恢复到室温。

用配备有Nanoscope V(Bruker)控制器的Bruker Multimode 8显微镜在轻敲(tapping)模式下观察切片，其中尖端具有大约10nm的曲率半径(相当于组件的分辨率)。以1Hz的扫描速率获取512*512像素图像。

三个系列的3*3μm2图像是在不同点获取，相距100μm和以上，而不是在深层真皮中。待观察区域的条件为，它们相对平坦，不存在可能损坏AFM的尖端或杆(lever)的明显凹凸不平。

然后用Gwyddion软件处理图像。

为了证实，对相同样品进行SAXS分析。

在观察前8小时将冷冻固定的样品恢复至室温。

SAXS数据采集:

-光束线ID02(ESRF,France)

-X射线光束能量:12.46keV

-模式7/8多束

-样品上的光束尺寸:150(h)x 100(v)μm2

-距离样品检测器:4m

-2D检测器

-每个图案的时间暴露:1秒

-T＝22℃,RH 40％

每个样品在不同位置收集了至少20个衍射图案。

数据由ESRF开发的SAXSutilities软件处理。本报告中提供的衍射图(profile)通过2D衍射信号的360°角积分和减去来自云母载体(mica support)的平均衍射信号得到。

结果

原子力显微镜(AFM)显示年轻供体和成熟供体之间真皮中的胶原组构存在很大差异。实际上，年轻供体的胶原纤维非常有内聚力、组织良好且平行，而成熟供体具有粗糙得多且结构破坏的胶原纤维网状结构。

用测试组合物4处理成熟皮肤8天导致胶原纤维的组构改善和它们之间的内聚力增加(图3)。

使用小角度X-射线散射(SAXS)测量，胶原纤维组构的质量可以与量化数据相关联。实际上，胶原纤维网状结构的内聚力和组构越好，则在SAXS测量中观察到的峰值就越强和越窄。

SAXS轮廓证实了年轻供体和成熟供体之间的巨大差异：与年轻供体相比，成熟供体的胶原纤维组构和内聚力较低。这些结果证实存在与年龄相关的胶原纤维结构破坏。

用测试组合物4处理成熟皮肤外植体8天导致SAXS轮廓的强烈改善，显示出比年轻皮肤更好的组构(图4)。

因此，SAXS测量允许确认通过AFM研究获得的观察结果。因此，本发明的化妆品活性剂通过重组胶原纤维对基质重构产生强烈影响：它改善胶原纤维的内聚力，组构真皮的效果优于成熟皮肤中观察到的未处理的多达4.8倍，并且优于未处理的年轻皮肤的多达2.1倍。

实施例9:蛋白酶体活性

皮肤外植体处理

使用

皮肤外植体，这是一种包埋入固体滋养基质中的人正常皮肤的活检组织。将表皮表面维持与空气接触以允许局部应用。供体为一名59岁的具有白种人皮肤的女性，她接受了腹部整形手术。

通过局部应用使测试组合物4与

接触，在7天期间每天去除和更新。将结果与未经处理的皮肤外植体进行比较。

蛋白质提取

在分析时，使用适用于皮肤外植体样品的OxiProteomics标准蛋白质提取方法提取和制备样品用于分析。生成内部阳性对照并包括在分析(C+)中。

通过Bradford方法定量提取的蛋白质并分成等量用于分析。

羰基评分分析

提取和溶解后，样品中的蛋白质通过Bradford方法使用校准的BSA作为标准品进行定量(Bradford M.Anal.Biochem.,72,248(1976)。在595nm处一式三份测量吸光度并插入BSA标准曲线中用于蛋白质浓度测定。

用荧光探针标记羰基化蛋白质后，将蛋白质在4-20％梯度SDS-PAGE上解析。将蛋白质固定在凝胶上，并且通过荧光扫描证实羰基化蛋白质。用SyproRuby后染色(post-stain)总蛋白质。

使用Image J分析软件(NIH,USA)进行蛋白质带的光密度分析。

从每个样品中得到羰基化和总蛋白质的密度直方图和泳道轮廓图。

羰基化蛋白质信号通过每个样品的总蛋白质信号校准以得到羰基评分。

结果

结果证明了活性成分在三个供体中防止蛋白质受到氧化损伤的能力，如通过羰基评分降低所观察到的。羰基评分与蛋白酶体活性直接成比例。因此，本发明的化妆品活性剂可使蛋白酶体活性显著改善20％。

实施例10：氧化的蛋白质生产

皮肤外植体的处理和UV辐照

将来自45岁供体的皮肤外植体用补充有抗生素(青霉素100U/mL和链霉素100μg/mL)和5％胎牛血清的DMEM培养基在37℃/5％CO₂下稳定4小时。

将外植体预处理24小时，用UVA(8J/cm²)和UVB(0.2J/cm²)辐照，然后用配制的活性成分、安慰剂或阳性对照再次处理24小时。然后在切割前立即在液氮中冷冻每个条件下的三个外植体用于保存。

氧化的蛋白质的免疫染色

冷冻的皮肤外植体在用低温恒温器切割之前包括在

中。切片具有10μM的厚度。在干燥之前将载玻片储存在-20℃，然后用丙酮固定。

将切片用DNPH(2,4-二硝基苯肼)处理，DNPH与氧化的蛋白质上的羰基发生相互作用。

封闭特异性位点；针对DNP(二硝基苯基)的一抗和与alexa型荧光染料偶联的二抗用于羰基化蛋白质的免疫染色。将细胞核用DAPI(Roche)标记，这是一种对DNA具有特异性的荧光标记物。每次温育后，将切片洗涤3次。

荧光定量

使用ImageJ软件进行荧光定量。在没有DAPI的所有图像上测量切片总面积的荧光。进行夏皮罗-威尔克检验，其允许使用学生检验来比较条件。

结果

UV辐照会增加表皮和真皮中氧化的蛋白质的量。

用安慰剂处理进一步促进了这种升高：与辐照对照相比，氧化的蛋白质增加35％。

有意义地，将活性成分添加到安慰剂中不仅阻止了这种增加，而且与辐照对照(UV)相比，氧化的蛋白质的量甚至显著减少了19％。因此，当皮肤受到UV辐照时，与安慰剂相比，在活性成分存在下，氧化的蛋白质的量显著减少40％。(图5)

这些结果证实本发明的化妆品活性剂导致氧化的蛋白质显著减少。

实施例11:对线粒体质量的影响

材料和方法

本实施例中使用的甘露糖-6-磷酸复合物具有如下组成：1g水溶液含有0.11097mmol甘露糖-6磷酸(由于是一钠形式，31.307mg,分子量:282.12g/mol)和0.07030mmol甘露糖(12.663mg,分子量:180.16g/mol)。

正常人真皮成纤维细胞分离自来源于17岁女性乳房缩小手术的皮肤活检组织。将每孔10'000个细胞用补充有10％FCS(胎牛血清,Biowest)和1％抗生素(Sigma Aldrich)的DMEM(Dulbecco改良Eagle培养基,Gibco)接种在黑色96-孔板中，并在37℃在含有5％CO₂的潮湿气氛中在温育箱中培养72小时。然后将细胞用PBS(磷酸缓冲盐水)冲洗2次，然后在同一温育箱中用不含FCS的DMEM培养基温育过夜。第二天，将细胞用(i)20mM甘露糖，(ii)20mM甘露糖-6-磷酸或(iii)上述20mM甘露糖-6-磷酸复合物(n＝3)在胰岛素(100nM)存在下处理。处理1小时和48小时后，将MitoTracker^TMGreen FM(ThermoFisher)直接添加到每个孔中，最终浓度为200nM，然后将平板在黑暗中在温育箱中温育15分钟。然后用PBS冲洗细胞2次，每孔填充200μl PBS。MitoTracker^TMGreen FM的荧光强度使用酶标仪(激发波长：488nm/发射波长：525nm)测量。

结果

在本研究中，使用MitoTracker^TMGreen FM发射的荧光强度测定细胞中的线粒体质量。

不受理论束缚，推定在细胞饥饿(cell starvation)期间，形成了高度融合的线粒体网状结构，这启示线粒体质量增加。如果线粒体自噬过程没有被激活以消除蓄积在细胞中的老化和改变的线粒体，则线粒体质量也可以增加。认为这种蓄积会导致细胞中的氧化应激，从长远来看，会导致细胞死亡。因此，线粒体自噬是细胞生理学的重要现象，更特别地，维持线粒体自噬/线粒体生物发生平衡对于将细胞维持在最佳条件是必不可少的。

在本实施例中，用各自为20mM的(i)甘露糖、(ii)甘露糖-6-磷酸和(iii)甘露糖-6-磷酸复合物处理1小时后，MitoTracker^TMGreen FM特异性信号显著减少，分别观察到-51％、-53％和-79％(图6)。处理48小时后，还可以分别观察到各自为20mM的(i)甘露糖、(ii)甘露糖-6-磷酸和(iii)甘露糖-6-磷酸复合物的信号显著减少-37％、-60％和-82％(图7)。

这些结果显示细胞中线粒体质量显著降低，这启示每种活性成分重新激活了线粒体自噬。因此，防止了细胞中来自老化和改变的线粒体的氧化应激，并使细胞维持在最佳条件下。

更令人惊讶地，发现甘露糖-6-磷酸复合物明显更有效：分别相对于单独的甘露糖和甘露糖-6-磷酸，1小时后为2.5倍和2.4倍，且48小时后为3.6倍和2.3倍，因此显示出甘露糖-6-磷酸复合物对降低线粒体质量的协同生物学效应。

实施例12:用于临床研究的化妆品组合物

在以下实施例13和14中所述的临床研究中，分别使用以下活性成分和安慰剂的化妆品组合物(INCI配方；还参见实施例2):

活性成分:水/水、鲸蜡醇、甘油硬脂酸酯、PEG-75硬脂酸酯、鲸蜡醇聚醚-20、硬脂醇聚醚-20、新戊酸异癸酯、甘露糖-磷酸钠、甘露糖、苯氧乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸乙酯、聚二甲基硅氧烷、香料、水杨酸苄酯、芳樟醇、D-苧烯

安慰剂:水/水、鲸蜡醇、甘油硬脂酸酯、PEG-75硬脂酸酯、鲸蜡醇聚醚-20、硬脂醇聚醚-20、新戊酸异癸酯、苯氧乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸乙酯、聚二甲基硅氧烷、香料、水杨酸苄酯、芳樟醇、D-苧烯

实施例13: 对面部区域的抗老化研究(临床研究)

组描述

对22名志愿者(年龄50-70岁，平均年龄：59±4.9岁)进行双盲和安慰剂对照临床研究。志愿者必须在面部上存在鱼尾纹和鼻唇皱纹和老人斑。

志愿者在他们的面部上每天应用两次美容霜剂，持续28(D28)和56(D56)天：将活性成分应用在一个半边面部(semiface)上，而将安慰剂应用在另一个半边面部上(实施例12)。使用SIAscope分析胶原密度，并通过VISIA分析来分析老化迹象，诸如皱纹和老人斑。

VISIA CR分析

使用来自

成像系统的Visia CR

在D28和D56拍摄面部的数码照片，并重新定位在D0。重新定位的控制直接在数据处理屏幕上完成，每次获取时均使用图像的叠加可视化。VISIA允许使用不同类型的照明和快速捕捉图像拍摄照片。在多光谱成像和分析下拍摄的一系列照片可以捕捉影响皮肤外观的视觉信息。

通过SIAscope的胶原分析

SIAscopy为一种皮内分光光度分析方法，其能够可视化皮肤中发色团的分布：皮肤下至多2mm的黑素、血红蛋白和胶原。

使用连接至Siametrics软件的SIAscope便携式扫描装置。

置于与皮肤接触的SIAscope光照皮肤。一些光从表面反射和散射。其余部分被传输到皮肤的顶层。不同部分的入射光在进入真皮之前被表皮中的黑素吸收，在真皮中它们被血管中的血红蛋白吸收。当光与胶原相互作用导致部分光被反射回表面时，真皮中也会发生散射。通过解释由SIAscope接收回的波长组合，Siametrics能够生成SIAscans；这些通过参考皮肤光学的内置专有数学模型生成。

老人斑分析结果

在老化过程中，会观察到不同类型的斑。本研究侧重于可见斑。可见斑包括在皮肤中发现的所有小的可见斑。可见斑是由于与老化相关的细胞衰老和解毒系统障碍所致。

在应用28天和56天后分析可见斑的数量。28天后观察到可见斑数量相对于D0和安慰剂显著减少2.1倍(*p<0.05)。活性成分的功效在56天后维持不变，其中与安慰剂相比，可见斑的数量显著减少(-1.9％,*p<0.05)。

考虑到总斑面积，28天后观察到相同的趋势，其中与D0(-5.6％,*p<0.05)和安慰剂(-2.3％,*p<0.05)相比，可见斑的总面积显著减小。

胶原密度和结构测量的结果

在应用的D28和D58后，使用SIAscope测量胶原密度和组构。

28天后，观察到胶原密度相对于D0和安慰剂显著改善。与安慰剂相比，活性成分导致胶原组构显著增加3.8倍(p<0.05*)。

56天后，获得了类似的结果，其中与D0和安慰剂相比，胶原密度显著改善。活性成分对胶原组构的改善相比于安慰剂多2.2倍(p<0.05*)。

这些临床结果证实对胶原密度和组构的积极影响。

鱼尾纹分析结果

专注于鱼尾纹，发现在治疗的D28后，活性成分与安慰剂相比导致轻度改善(-4.6％相对于-3.0％)。应用56天后，这种效果增加，正如与安慰剂相比-11.5％的显著降低所显示的(*p<0.05)。

实施例14：颈部区域上的抗老化研究(临床研究)

组描述

对39名志愿者(年龄从45至75岁，平均年龄：56±6.2岁)进行双盲和安慰剂对照的临床研究。志愿者必须在颈部区域上存在皱纹。

志愿者每天两次在整个面部和颈部应用含有4％活性成分的化妆品霜剂或安慰剂霜剂(实施例12)，持续28(D28)和56(D56)天。使用

分析通过皱纹的体积和数量来分析颈部皱纹。

通过

的颈部皱纹分析

系统可在不接触皮肤的情况下测量化妆品产品的有效性。对于本研究，使用具有250个传感器的

系统以便测量皱纹的深度、长度和数量。基于使用与立体测量相关的光的条纹投影单元，

系统提供高分辨率3D扫描。将志愿者固定在VisioTOP-500工作台上，以便在不同测量时间之间进行准确和稳定的定位和重新定位。

自我评估

此外，在D56向每位志愿者提供了自我评估问卷。志愿者被问及他们对所用产品的感受。

结果

使用来自

的3D重建分析颈部皱纹体积。

应用28天后，与D0相比，用活性剂观察到-25.9％的显著减少，而用安慰剂处理没有展示出显著效果。

应用56天后，效果得以维持，其中对于活性成分的皱纹体积显著减少-26.3％。此外，安慰剂没有表现出显著效果。

此外，应用28天和56天后，还分析了颈部皱纹深度。

28天后，与D0相比，观察到颈部皱纹深度显著减少-11.4％，而安慰剂相比于D0仅导致-3.20％的减少。

56天后，活性物质的功效维持，其中相比于D0显著下降-10.2％，而安慰剂没有表现出显著效果。

这些结果表明，本发明的化妆品活性成分能够在体积和深度方面显著减少颈部皱纹。

应用56天后进行的自我评估分析揭示出：

-84％的志愿者在研究结束时对活性成分的功效深信不疑(安慰剂为60％)，并且

-74％的志愿者认为应用活性成分后他们的皮肤更紧致(安慰剂为45％)。

Claims

1.化妆品活性剂，包含甘露糖-6-磷酸和甘露糖的混合物，其中甘露糖-6-磷酸与甘露糖的摩尔比为3:1-0.3:1。

2.根据权利要求1的化妆品活性剂，其中甘露糖-6-磷酸与甘露糖的摩尔比为2:1-1:1，更优选1.9:1-1.1:1，特别是约1.5:1。

3.根据权利要求1或2的化妆品活性剂，其中该化妆品活性剂至少基本上由甘露糖-6-磷酸和甘露糖的混合物组成。

4.根据权利要求1-3中任一项的化妆品活性剂，包含浓度为30-220mM，更优选浓度为60-170mM且最优选浓度为约120mM的甘露糖-6-磷酸。

5.根据权利要求1-4中任一项的化妆品活性剂，包含0.5-5.0wt％的甘露糖，更优选0.8-3.0wt％的甘露糖，且最优选约1.5wt％的甘露糖。

6.根据权利要求1-5中任一项的化妆品活性剂，还包含甘油和/或磷酸钠。

7.根据权利要求1-6中任一项的化妆品活性剂，包含：

2.0-4.0wt％甘露糖-6-磷酸钠盐 0.8-3.0wt％甘露糖至多0.2wt％磷酸钠 50wt％甘油 qsp 100wt％水

8.化妆品组合物，包含根据权利要求1-7中任一项的化妆品活性剂和化妆品上可接受的赋形剂。

9.根据权利要求8的皮肤护理组合物，特别是抗老化皮肤护理组合物。

10.减少皮肤老化迹象的方法，包含将根据权利要求1-7中任一项的化妆品活性剂或根据权利要求8或9的化妆品组合物应用于皮肤、特别是面部皮肤的步骤。

11.根据权利要求10的方法，其中皱纹减少。

12.根据权利要求10或11的方法，其中老人斑减少。

13.根据权利要求10-12中任一项的方法，其中构建胶原纤维。