CN113637682B

CN113637682B - OsMYB26或其突变体在提高植物干旱胁迫耐受性中的应用

Info

Publication number: CN113637682B
Application number: CN202110896582.6A
Authority: CN
Inventors: 宋士勇; 申俊; 陈颖; 张亮; 杨丽佳; 王涣宇
Original assignee: Zhejiang University ZJU
Current assignee: Zhejiang University ZJU
Priority date: 2021-04-29
Filing date: 2021-08-05
Publication date: 2023-06-09
Anticipated expiration: 2041-08-05
Also published as: CN113637682A

Abstract

本发明涉及植物生物技术领域，尤其是涉及OsMYB26或其突变体在提高植物干旱胁迫耐受性中的应用。本发明提供了OsMYB26或其突变体在提高植物干旱胁迫耐受性中的应用，并给出OsMYB26或其突变体含有的具体核苷酸序列，以及包含所述OsMYB26突变体的生物材料，并且给出了明确的应用所述OsMYB26或其突变体和生物材料提高植物干旱胁迫耐受性的方法，为改良干旱地区植物种植现状提供了可行的、适宜推广的技术方案，具有显著的经济效益。

Description

OsMYB26或其突变体在提高植物干旱胁迫耐受性中的应用

技术领域

本发明涉及植物生物技术领域，尤其是涉及OsMYB26或其突变体在提高植物干旱胁迫耐受性中的应用。

背景技术

水稻作为我国重要的粮食作物，约占我国粮食作物播种面积的1/3以及粮食总产量的40％，为世界近一半的人口提供能量。与其他作物相比，水稻的需水量较大，约占我国农业用水量的80％。而我国水资源匮乏，年平均降水量比全球平均水平低20％，且水资源的空间分布及其不平衡(金瑞兰等，2015)。随着水资源的匮乏和全球极端天气的频繁出现，干旱已经成为水稻减产的主要因素。截止2010年，我国约65％的稻田已经受到了干旱的影响，这严重制约着我国水稻的产量，对粮食安全和可持续性发展产生威胁(王英等，2018)。因此深入开展水稻耐旱能力的分子研究，对节约水资源和水稻的可持续生产具有重要的理论和应用价值。

植物的一生不可避免将会受到各种生物和非生物胁迫，作为固着生长的生物，植物不能通过移动来逃避逆境来适应多变的环境，为此植物进化出了一系列适应逆境的机制，在这个过程中转录因子就是不可缺少的一员。目前已知的参与干旱胁迫响应的转录因子有ZFP类、bZIP类、AP2类、MYB/MYC类和NAC类等。MYB转录因子是植物中最大的转录家族之一，最早的植物MYB转录因子由Martin等人在玉米的糊粉粒中发现，后来发现MYB转录因子普遍存在在植物中(Marhamati et al.,1997)。根据其结构的不同，可将MYB家族分为4R-MYB、3R-MYB、1R-MYB和R2R3-MYB(Dubos et al.,2021)。目前已经发现有多个MYB转录因子参与植物对非生物胁迫的响应。拟南芥中MYB2、MYB15和MYB96在干旱条件下通过激活脱水应答基因(RD22)作为正调控因子发挥作用(Abe et al.,2003；Seo et al.,2009)；Xiong等(2014)发现过表达OsMYB48-1能够增强植株对干旱和盐胁迫的耐受性，且过表达植株中OsNCED4、OsPP2C68、RAB21、OsLEA3、RAB16C和RAB16D等与ABA相关基因的表达均显著上调。同样地过表达OsMYB2、OsMYB3R-2和OsMYB4能够分别增强转基因水稻、拟南芥、苹果植株对干旱的耐受力。但这些研究大多通过异源转化其他物种，同时上述基因多对应多种胁迫，无法直接用于提高植物干旱胁迫耐受性。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种能够直接用于提高植物干旱胁迫耐受性的基因或其突变体，以及提供一种简单易行，适宜推广的采用该基因或其突变体提高植物干旱胁迫耐受性的方法。

为了解决上述技术问题，实现上述目的，本发明提供了以下技术方案：

第一方面，本发明了提供了OsMYB26或其突变体在提高植物干旱胁迫耐受性中的应用，所述OsMYB26或其突变体具有(a)～(c)任一项所示的核苷酸序列：

(a)如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；

(b)将SEQ ID No.1所示的核苷酸序列过一个或几个碱基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的突变体；

(c)与SEQ IDNo.1所示核苷酸序列具有88％以上相似度，且功能相同的突变体。

目前已见报道的与植物抗旱能力有关的OsMYB基因包括OsMYB2、OsMYB4、OsMYB48和OsMYB-R1，而如图1～4所示，本发明提供的OsMYB26基因编码的蛋白质与上述四个基因编码蛋白质的同源性分别为29.52％，30.94％，20.51％，14.33％，其中图1为OsMYB2基因编码蛋白与OsMYB26基因编码的蛋白的氨基酸序列对比结果，图2为OsMYB4基因编码蛋白与OsMYB26基因编码的蛋白的氨基酸序列对比结果，图3为OsMYB48基因编码蛋白与OsMYB26基因编码的蛋白的氨基酸序列对比结果，图4为OsMYB-R1基因编码蛋白与OsMYB26基因编码的蛋白的氨基酸序列对比结果。由图1～图4可以看出，本发明提供的OsMYB26基因(核苷酸序列如SEQ ID No.1所示)编码的蛋白与目前已见报道的基因编码的蛋白同源性极低，本发明发明人无意间发现OsMYB26基因编码的蛋白质同样具有提高植物干旱胁迫耐受性的作用，并且为了进一步提高其促进植物干旱胁迫耐受性作用，分别通过点突变的基因编辑方式提供了OsMYB26基因的四种突变体，其核苷酸序列分别具有如SEQ ID No.2～SEQ ID No.5所示的核苷酸序列。

结合第一方面，本发明的可选实施方式中，所述OsMYB26突变体的核苷酸序列为SEQ ID No.2～SEQ ID No.5任一项所示的核苷酸序列。

在可选实施方式中，所述植物包括水稻。

第二方面，本发明提供了包含第一方面所述OsMYB26突变体的生物材料，所述生物材料包括(a)～(c)中任一项：

(a)表达盒；

(b)重组载体；

(c)重组原核细胞。

在可选实施方式中，所述重组载体选用质粒pCAMBIA1300作为载体。

在可选实施方式中，所述重组原核细胞选用农杆菌作为宿主细胞。

在可选实施方式中，所述重组原核细胞选用EHA105为宿主细胞。

第三方面，本发明提供了一种提高植物干旱胁迫耐受性的方法，采用第二方面所述生物材料转染植物组织，经筛选得到表达OsMYB26突变体编辑的蛋白质的植物。

在可选实施方式中，所述OsMYB26或其突变体编辑的蛋白质具有如SEQ ID No.6～SEQ ID No.10任一项所示的氨基酸序列。

在可选实施方式中，所述植物包括水稻。

本发明提供了OsMYB26或其突变体在提高植物干旱胁迫耐受性中的应用，并给出OsMYB26或其突变体含有的具体核苷酸序列，以及包含所述OsMYB26突变体的生物材料，并且给出了明确的应用所述OsMYB26或其突变体和生物材料提高植物干旱胁迫耐受性的方法，为改良干旱地区植物种植现状提供了可行的、适宜推广的技术方案，具有显著的经济效益。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为OsMYB2基因编码蛋白与OsMYB26基因编码的蛋白的氨基酸序列对比结果；

图2为OsMYB4基因编码蛋白与OsMYB26基因编码的蛋白的氨基酸序列对比结果；

图3为OsMYB48基因编码蛋白与OsMYB26基因编码的蛋白的氨基酸序列对比结果；

图4为OsMYB-R1基因编码蛋白与OsMYB26基因编码的蛋白的氨基酸序列对比结果；

图5为OsMYB26基因四个突变体突变位点示意图；

图6为OsMYB26基因在野生型和转基因株系中的表达情况；

图7为Osmyb26突变体增强水稻的抗旱能力及存活率分析结果；

图8为OsMYB26超表达植株呈现干旱敏感表型及存活率分析结果。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。通常在此处附图中描述和示出的本发明实施例的组件可以以各种不同的配置来布置和设计。

因此，以下对在附图中提供的本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

应注意到：相似的标号和字母在下面的附图中表示类似项，因此，一旦某一项在一个附图中被定义，则在随后的附图中不需要对其进行进一步定义和解释。

下面结合附图，对本发明的一些实施方式作详细说明。在不冲突的情况下，下述的实施例及实施例中的特征可以相互组合。

实施例1克隆OsMYB26基因核苷酸序列

使用Omega公司的植物提取试剂盒从水稻中提取RNA。而后以1μg的RNA做模板，按照cDNA合成试剂盒(Yeasen)操作说明合成第一链cDNA。根据(http://rice.plantbiology.msu.edu/expression.shtml)网站得到OsMYB26的完整ORF，设计特异引物：5’端引物为ATGGGGCACCACTCCTGCTGCAAC(SEQ ID No.11)；3’端引物为TCAGGGAATCCAGTGAGGTTGC(SEQ ID No.12)。PCR反应体系：2×PhantaMax MasterMix 25μL，正/反向引物10μM各1μL，模板(cDNA)5μL，灭菌水补齐至50μL，反应程序如下：95℃预变性3min，95℃变性30s，Tm退火30s，72℃延伸2kb/min，35～40cycles，72℃延伸5min。最终扩增得到OsMYB26的924bp(含终止密码子)全长cDNA序列(如SEQ ID No.1所示)，编码308个氨基酸(如SEQ ID No.6所示)。

实施例2OsMYB26基因突变体的构建

基于CRISPR-Cas9技术，构建两种OsMYB26基因突变体的载体pCAMBIA1300-CAS9-Os-OsMYB26：

2.1选取OsMYB26基因CDS序列的39～58位(GAGGGGCCTGTGGTCACCAGAGG，如SEQ IDNo.13所示，其中下划线部分为符合NGG的PAM序列)序列为靶位点1(命名为Cas9-1)，合成sgRNA-1，核苷酸序列为GAGGGGCCTGTGGTCACCAG(如SEQ ID No.14所示)，用BbsI酶切基因编辑载体psgR-CAS9-Os，先将引物退火，退火反应体系包括，10μL正向引物F：TGTGTGAGGGGCCTGTGGTCACCAG(如SEQ ID No.15所示)，10μL反向引物R：AAACCTGGTGACCACAGGCCCCTCA(如SEQ ID No.16所示)和80μM10x T4 buffer，反应体系混匀后，95℃退火10min，再与酶切后的载体psgR-CAS9-Os进行连接，连接体系包括2μL退火产物，2μL回收酶切载体，0.5μL 10x T4 buffer和0.5μL T4 ligase室温连接15min，并将连接产物转化入大肠杆菌感受态DH5α，转化程序如下：将5μL连接产物加入感受态大肠杆菌中，冰上30min，42℃热激45s，冰上2min，加入400μL无抗LB，37℃保温1h，5000rpm离心1min，吸掉大部分上清，留100μL液体吸打，涂在LB平板(50mg/L Kan)培养，第二天挑选单克隆进行PCR鉴定，PCR体系包括：5μL2x GreenTaqMix，10μM的正(M13F)/反(sg-R)向引物各0.2μL，模板(单菌落)1μL，灭菌水补齐至10μL，PCR反应程序如下：95℃预变性7min，95℃变性25s，56℃退火25s，72℃延伸25s，34cycles，72℃延伸5min，1.5％agrose电泳，目的条带为386bp，核苷酸序列如SEQ ID No.17所示。

2.2选取OsMYB26基因上的GCTGCTGGAGCTCCGTCCCCAGG序列，(如SEQ ID No.18所示)为靶位点2(命名为Cas9-2)，合成sgRNA-2(GCTGCTGGAGCTCCGTCCCC，如SEQ ID No.19所示)，而后采用与实施例2.1相同的方法构建OsMYB26基因突变体及超表达载体，退火反应体系所用到的引物包括，正向引物F：TGTGTGCTGCTGGAGCTCCGTCCCC(如SEQ ID No.20所示)，反向引物R：AAACGGGGACGGAGCTCCAGCAGCCA(如SEQ ID No.21所示)。其余连接方法与实施例2.1相同，最终扩增得到的条带序列为386bp，如SEQ ID No.22所示。

实施例3OsMYB26基因突变体的获得和鉴定

以水稻(日本晴)愈伤组织为实验材料。将实施例2得到的OsMYB26的基因突变体载体通过冻融法转化农杆菌EHA105。挑取农杆菌(含有OsMYB26基因突变体载体)单克隆于2mLRif+Spe的LB液体培养基中28℃200rpm小摇过夜，再取1mL菌液到10mL抗性LB中培养5h，4000rpm室温离心10min，弃上清，用50mLAAM-As重悬液重悬菌体；将一定大小的水稻愈伤组织挑出，放入农杆菌悬浮液中浸染30min，在培养基上预先垫一层浸有AAM的无菌滤纸，用勺子将愈伤平铺在培养基上，28℃暗培养2天。2天后用无菌水冲洗愈伤直至清洗液澄清，再用含500mg/L的Cef无菌水震荡30min，将清洗后的愈伤平铺在无菌滤纸上晾干2h，然后转移到筛选培养基上筛选两周左右。将新生长的的抗性愈伤转移到含50mg/L潮霉素的分化培养基上培养。2～3周后将变绿的水稻愈伤转移到生根培养基上诱导生根。对于突变体阳性植株，需要提取T0代植株的gDNA，PCR鉴定并测序。

Osmyb26突变体的鉴定：提取T0代转基因植株叶片作为模板，设计特异正向引物F(CATGCATGCAGTTGGCGTAT，如SEQ ID No.23所示)和反向引物R(CAACCCTGCATGCCATCAAC，如SEQ ID No.24所示)进行PCR扩增，筛选得到T0代阳性转基因植株(阳性植株PCR扩增产物大小为496bp)，筛选发生突变的株系。T0代自花授粉得到T1代，T1代自花授粉得到T2代。对T2代植株再次进行筛选，筛选出不含载体且纯合突变的独立株系，最终得到了四个突变体，分别命名为Osmyb26-1，Osmyb26-2，Osmyb26-3和Osmyb26-4，其中靶位点1处发生了两种突变，Osmyb26-1在此位置发生了1个碱基的增添(+A)，突变后核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，Osmyb26-2在同样位置也发生了1个碱基的增添(+T)，突变后核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，突变体Osmyb26-1和Osmyb26-2的核苷酸序列变化导致编码蛋白相应位置后移码突变；靶位点2处发生了两种突变，Osmyb26-3在此位置发生了1个碱基的增添(+A)，突变后核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，Osmyb26-4在同样位置发生了1个碱基的缺失(-C)，突变后核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，共计四个突变体，如图5所示。

对比例1OsMYB26过表达载体的构建

本实施例构建了OsMYB26基因过表达载体Ubi:OsMYB26-4HA，具体步骤包括，先将实施例1中扩增得到的全长的不含终止密码子的目的基因PCR产物(921bp)，按照Omega胶回收试剂盒操作进行纯化。将所需载体Ubi-XX-4HA提取质粒并用HindIII进行酶切，电泳检测后纯化，用同源重组的方法进行连接，反应体系如下：线性化载体2μL，插入片段3μL，5×Cell buffer4μL，Exnase II 2μL，灭菌水补齐至20μL；反应条件：37℃，30min。连接产物转化大肠杆菌感受态E.coli DH5α，涂在LB平板(50mg/LKan)培养，37℃过夜倒置培养形成单菌落。第二天挑取单菌落进行PCR鉴定，反应程序如下：95℃预变性3min，95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸2kb/min，35cycles，72℃延伸5min，挑取大小正确的单克隆送测。

对比例2OsMYB26超表达植株的获得和鉴定

以水稻(日本晴)愈伤组织为实验材料。将实施例3得到的植物表达载体通过冻融法转化农杆菌EHA105。挑取农杆菌(含有OsMYB26超表达载体)单克隆侵染水稻愈伤组织28℃暗培养2天，然后转移到筛选培养基上筛选两周左右。将新生长的的抗性愈伤转移到含50mg/L潮霉素的分化培养基上培养。2～3周后将变绿的水稻愈伤转移到生根培养基上诱导生根。最后通过qRT-PCR检测目的基因在野生型和转基因植株中的表达情况，初步筛选过表达阳性植株，最终我们得到了30株植株，命名为#1～#30。

OsMYB26超表达植株的鉴定：取14d的野生型和转基因水稻无菌苗进行RNA提取，以1μg的RNA做模板，按照cDNA合成试剂盒(Yeasen)操作说明合成第一链cDNA。以OsMYB26基因cDNA设计特异定量PCR引物(正向引物F为ATCAACTACCTGAGGCCTGACCTG，如SEQ ID No.25所示，反向引物R为TTGGCAATCTGAGCCCACCTGTTG，如SEQ ID No.26所示)，通过qRT-PCR检测OsMYB26基因在野生型和转基因株系中的表达情况，，结果发现我们获得的30株转基因植株均过表达，并随机从中挑选了四株#1、#5、#16、#28作为示例。如图6所示，横坐标代表挑选出来的转基因株系#1、#5、#16、#28，纵坐标代表分别上调了12倍、8倍、24倍和39倍，证明构建的过表达载体均能在植株中促进OsMYB26基因表达，并接下来用这四株转基因植株进行耐旱性分析。

实验例1突变体和过表达植株的耐旱性分析

将野生型(日本晴)，四种突变体Osmyb26突变体和Ubi:OsMYB26种子在37℃黑暗浸种萌发后，每种植株分别种植于营养土中，然后放置于同一个塑料盆中培养以保证供水一致。待植株生长4周左右，进行干旱处理10～14天(根据叶片卷曲及萎蔫程度而定)后复水，观察表型并统计存活率。结果表明，所有的Osmyb26突变体均表现出耐旱表型，存活率统计实验表明野生型存活率平均为27％，而突变体的存活率均高达70％以上(图7)；而超表达植株均表现出干旱敏感的表型，且存活率与OsMYB26转录本的上调水平负相关(图8)。这些结果表明OsMYB26负调控水稻的耐旱性。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

序列表

<110> 浙江大学

<120> OsMYB26或其突变体在提高植物干旱胁迫耐受性中的应用

<150> 2021104723936

<151> 2021-04-29

<160> 26

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 924

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

atggggcacc actcctgctg caacaagcag aaggtcagga ggggcctgtg gtcaccagag 60

gaagacgaga agctcgtcaa gtacatctcc acgcacggcc atggctgctg gagctccgtc 120

cccaggctag ccgggttgca gagatgtggc aagagctgca ggctgaggtg gatcaactac 180

ctgaggcctg acctgaagag gggaagcttc tcgcagcagg aggagtccct catcattgag 240

ctccacaggg tgctgggcaa caggtgggct cagattgcca agcacctacc tggtagaaca 300

gacaatgagg tcaagaactt ctggaactcc accatcaaga agaagctcat ctcccaggcc 360

gtgggtagtc tgcacccttc ctctgcagat ttgtactaca acattctgga cggagcagga 420

cagagcatcg cagctgcgtc actgaacgcg gtggagaatg cagctcacgg tgtcactcaa 480

tcgccgccgt cttccgtgta caactccgcg gcatgggcca gcttcagctc ccaccagcca 540

atctttctcc ccggccacgg cgtccacggc tgcggcggcg gcgaccttca gtacgccgcc 600

gccgtcgacg gggagttcat caggctgtgc cgagcagcgg aggcgtacca gctggagaac 660

ggcgccgctg gcatcgtcgg gggtcagtgc aagccaagtg atcatctctt ggctccagag 720

ggcgtcgtgg cccggagttg cctcccggcg tttgtcgaac agaagggcgg cggcggcggc 780

gctttcttgg ccgatccggc catgggtccg gtgatggact tcatggacgc catcctgggg 840

tcgtcgacga cgtcggcggc cagtgcttca tccgtcgaca gcttctcggc gaacaccgcc 900

atgcaacctc actggattcc ctga 924

<210> 2

<211> 925

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

atggggcacc actcctgctg caacaagcag aaggtcagga ggggcctgtg gtcaaccaga 60

ggaagacgag aagctcgtca agtacatctc cacgcacggc catggctgct ggagctccgt 120

ccccaggcta gccgggttgc agagatgtgg caagagctgc aggctgaggt ggatcaacta 180

cctgaggcct gacctgaaga ggggaagctt ctcgcagcag gaggagtccc tcatcattga 240

gctccacagg gtgctgggca acaggtgggc tcagattgcc aagcacctac ctggtagaac 300

agacaatgag gtcaagaact tctggaactc caccatcaag aagaagctca tctcccaggc 360

cgtgggtagt ctgcaccctt cctctgcaga tttgtactac aacattctgg acggagcagg 420

acagagcatc gcagctgcgt cactgaacgc ggtggagaat gcagctcacg gtgtcactca 480

atcgccgccg tcttccgtgt acaactccgc ggcatgggcc agcttcagct cccaccagcc 540

aatctttctc cccggccacg gcgtccacgg ctgcggcggc ggcgaccttc agtacgccgc 600

cgccgtcgac ggggagttca tcaggctgtg ccgagcagcg gaggcgtacc agctggagaa 660

cggcgccgct ggcatcgtcg ggggtcagtg caagccaagt gatcatctct tggctccaga 720

gggcgtcgtg gcccggagtt gcctcccggc gtttgtcgaa cagaagggcg gcggcggcgg 780

cgctttcttg gccgatccgg ccatgggtcc ggtgatggac ttcatggacg ccatcctggg 840

gtcgtcgacg acgtcggcgg ccagtgcttc atccgtcgac agcttctcgg cgaacaccgc 900

catgcaacct cactggattc cctga 925

<210> 3

<211> 925

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

atggggcacc actcctgctg caacaagcag aaggtcagga ggggcctgtg gtcatccaga 60

ggaagacgag aagctcgtca agtacatctc cacgcacggc catggctgct ggagctccgt 120

ccccaggcta gccgggttgc agagatgtgg caagagctgc aggctgaggt ggatcaacta 180

cctgaggcct gacctgaaga ggggaagctt ctcgcagcag gaggagtccc tcatcattga 240

gctccacagg gtgctgggca acaggtgggc tcagattgcc aagcacctac ctggtagaac 300

agacaatgag gtcaagaact tctggaactc caccatcaag aagaagctca tctcccaggc 360

cgtgggtagt ctgcaccctt cctctgcaga tttgtactac aacattctgg acggagcagg 420

acagagcatc gcagctgcgt cactgaacgc ggtggagaat gcagctcacg gtgtcactca 480

atcgccgccg tcttccgtgt acaactccgc ggcatgggcc agcttcagct cccaccagcc 540

aatctttctc cccggccacg gcgtccacgg ctgcggcggc ggcgaccttc agtacgccgc 600

cgccgtcgac ggggagttca tcaggctgtg ccgagcagcg gaggcgtacc agctggagaa 660

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<210> 4

<211> 925

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

atggggcacc actcctgctg caacaagcag aaggtcagga ggggcctgtg gtcaccagag 60

gaagacgaga agctcgtcaa gtacatctcc acgcacggcc atggctgctg gagctccgtc 120

acccaggcta gccgggttgc agagatgtgg caagagctgc aggctgaggt ggatcaacta 180

cctgaggcct gacctgaaga ggggaagctt ctcgcagcag gaggagtccc tcatcattga 240

gctccacagg gtgctgggca acaggtgggc tcagattgcc aagcacctac ctggtagaac 300

agacaatgag gtcaagaact tctggaactc caccatcaag aagaagctca tctcccaggc 360

cgtgggtagt ctgcaccctt cctctgcaga tttgtactac aacattctgg acggagcagg 420

acagagcatc gcagctgcgt cactgaacgc ggtggagaat gcagctcacg gtgtcactca 480

atcgccgccg tcttccgtgt acaactccgc ggcatgggcc agcttcagct cccaccagcc 540

aatctttctc cccggccacg gcgtccacgg ctgcggcggc ggcgaccttc agtacgccgc 600

cgccgtcgac ggggagttca tcaggctgtg ccgagcagcg gaggcgtacc agctggagaa 660

cggcgccgct ggcatcgtcg ggggtcagtg caagccaagt gatcatctct tggctccaga 720

gggcgtcgtg gcccggagtt gcctcccggc gtttgtcgaa cagaagggcg gcggcggcgg 780

cgctttcttg gccgatccgg ccatgggtcc ggtgatggac ttcatggacg ccatcctggg 840

gtcgtcgacg acgtcggcgg ccagtgcttc atccgtcgac agcttctcgg cgaacaccgc 900

catgcaacct cactggattc cctga 925

<210> 5

<211> 923

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

atggggcacc actcctgctg caacaagcag aaggtcagga ggggcctgtg gtcaccagag 60

gaagacgaga agctcgtcaa gtacatctcc acgcacggcc atggctgctg gagctccgtc 120

ccaggctagc cgggttgcag agatgtggca agagctgcag gctgaggtgg atcaactacc 180

tgaggcctga cctgaagagg ggaagcttct cgcagcagga ggagtccctc atcattgagc 240

tccacagggt gctgggcaac aggtgggctc agattgccaa gcacctacct ggtagaacag 300

acaatgaggt caagaacttc tggaactcca ccatcaagaa gaagctcatc tcccaggccg 360

tgggtagtct gcacccttcc tctgcagatt tgtactacaa cattctggac ggagcaggac 420

agagcatcgc agctgcgtca ctgaacgcgg tggagaatgc agctcacggt gtcactcaat 480

cgccgccgtc ttccgtgtac aactccgcgg catgggccag cttcagctcc caccagccaa 540

tctttctccc cggccacggc gtccacggct gcggcggcgg cgaccttcag tacgccgccg 600

ccgtcgacgg ggagttcatc aggctgtgcc gagcagcgga ggcgtaccag ctggagaacg 660

gcgccgctgg catcgtcggg ggtcagtgca agccaagtga tcatctcttg gctccagagg 720

gcgtcgtggc ccggagttgc ctcccggcgt ttgtcgaaca gaagggcggc ggcggcggcg 780

ctttcttggc cgatccggcc atgggtccgg tgatggactt catggacgcc atcctggggt 840

cgtcgacgac gtcggcggcc agtgcttcat ccgtcgacag cttctcggcg aacaccgcca 900

tgcaacctca ctggattccc tga 923

<210> 6

<211> 307

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

Met Gly His His Ser Cys Cys Asn Lys Gln Lys Val Arg Arg Gly Leu

1 5 10 15

Trp Ser Pro Glu Glu Asp Glu Lys Leu Val Lys Tyr Ile Ser Thr His

20 25 30

Gly His Gly Cys Trp Ser Ser Val Pro Arg Leu Ala Gly Leu Gln Arg

35 40 45

Cys Gly Lys Ser Cys Arg Leu Arg Trp Ile Asn Tyr Leu Arg Pro Asp

50 55 60

Leu Lys Arg Gly Ser Phe Ser Gln Gln Glu Glu Ser Leu Ile Ile Glu

65 70 75 80

Leu His Arg Val Leu Gly Asn Arg Trp Ala Gln Ile Ala Lys His Leu

85 90 95

Pro Gly Arg Thr Asp Asn Glu Val Lys Asn Phe Trp Asn Ser Thr Ile

100 105 110

Lys Lys Lys Leu Ile Ser Gln Ala Val Gly Ser Leu His Pro Ser Ser

115 120 125

Ala Asp Leu Tyr Tyr Asn Ile Leu Asp Gly Ala Gly Gln Ser Ile Ala

130 135 140

Ala Ala Ser Leu Asn Ala Val Glu Asn Ala Ala His Gly Val Thr Gln

145 150 155 160

Ser Pro Pro Ser Ser Val Tyr Asn Ser Ala Ala Trp Ala Ser Phe Ser

165 170 175

Ser His Gln Pro Ile Phe Leu Pro Gly His Gly Val His Gly Cys Gly

180 185 190

Gly Gly Asp Leu Gln Tyr Ala Ala Ala Val Asp Gly Glu Phe Ile Arg

195 200 205

Leu Cys Arg Ala Ala Glu Ala Tyr Gln Leu Glu Asn Gly Ala Ala Gly

210 215 220

Ile Val Gly Gly Gln Cys Lys Pro Ser Asp His Leu Leu Ala Pro Glu

225 230 235 240

Gly Val Val Ala Arg Ser Cys Leu Pro Ala Phe Val Glu Gln Lys Gly

245 250 255

Gly Gly Gly Gly Ala Phe Leu Ala Asp Pro Ala Met Gly Pro Val Met

260 265 270

Asp Phe Met Asp Ala Ile Leu Gly Ser Ser Thr Thr Ser Ala Ala Ser

275 280 285

Ala Ser Ser Val Asp Ser Phe Ser Ala Asn Thr Ala Met Gln Pro His

290 295 300

Trp Ile Pro

305

<210> 7

<211> 63

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

Met Gly His His Ser Cys Cys Asn Lys Gln Lys Val Arg Arg Gly Leu

1 5 10 15

Trp Ser Thr Arg Gly Arg Arg Glu Ala Arg Gln Val His Leu His Ala

20 25 30

Arg Pro Trp Leu Leu Glu Leu Arg Pro Gln Ala Ser Arg Val Ala Glu

35 40 45

Met Trp Gln Glu Leu Gln Ala Glu Val Asp Gln Leu Pro Glu Ala

50 55 60

<210> 8

<211> 63

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

Met Gly His His Ser Cys Cys Asn Lys Gln Lys Val Arg Arg Gly Leu

1 5 10 15

Trp Ser Ser Arg Gly Arg Arg Glu Ala Arg Gln Val His Leu His Ala

20 25 30

Arg Pro Trp Leu Leu Glu Leu Arg Pro Gln Ala Ser Arg Val Ala Glu

35 40 45

Met Trp Gln Glu Leu Gln Ala Glu Val Asp Gln Leu Pro Glu Ala

50 55 60

<210> 9

<211> 63

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

Met Gly His His Ser Cys Cys Asn Lys Gln Lys Val Arg Arg Gly Leu

1 5 10 15

Trp Ser Pro Glu Glu Asp Glu Lys Leu Val Lys Tyr Ile Ser Thr His

20 25 30

Gly His Gly Cys Trp Ser Ser Val Thr Gln Ala Ser Arg Val Ala Glu

35 40 45

Met Trp Gln Glu Leu Gln Ala Glu Val Asp Gln Leu Pro Glu Ala

50 55 60

<210> 10

<211> 42

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

Met Gly His His Ser Cys Cys Asn Lys Gln Lys Val Arg Arg Gly Leu

1 5 10 15

Trp Ser Pro Glu Glu Asp Glu Lys Leu Val Lys Tyr Ile Ser Thr His

20 25 30

Gly His Gly Cys Trp Ser Ser Val Pro Gly

35 40

<210> 11

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

atggggcacc actcctgctg caac 24

<210> 12

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

tcagggaatc cagtgaggtt gc 22

<210> 13

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 13

gaggggcctg tggtcaccag agg 23

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 14

gaggggcctg tggtcaccag 20

<210> 15

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 15

tgtgtgaggg gcctgtggtc accag 25

<210> 16

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 16

aaacctggtg accacaggcc cctca 25

<210> 17

<211> 386

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 17

ctggctgtat ttggtggttg tgtagggaga tggggagaag aaaagcccga ttctcttcgc 60

tgtgatgggc tggatgcatg cgggggagcg ggaggcccaa gtacgtgcac ggtgagcggc 120

ccacagggcg agtgtgagcg cgagaggcgg gaggaacagt ttagtaccac attgcccagc 180

taactcgaac gcgaccaact tataaacccg cgcgctgtcg cttgtgtgga ggggcctgtg 240

gtcaccaggt tttagagcta gaaatagcaa gttaaaataa ggctagtccg ttatcaactt 300

gaaaaagtgg caccgagtcg gtgctttttt gttttagagc tagaaatagc aagttaaaat 360

aaggctagtc cgtagcgcgt gcgcca 386

<210> 18

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 18

gctgctggag ctccgtcccc 20

<210> 19

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 19

gctgctggag ctccgtcccc 20

<210> 20

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 20

tgtgtgctgc tggagctccg tcccc 25

<210> 21

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 21

aaacggggac ggagctccag cagcca 26

<210> 22

<211> 386

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 22

ctggctgtat ttggtggttg tgtagggaga tggggagaag aaaagcccga ttctcttcgc 60

tgtgatgggc tggatgcatg cgggggagcg ggaggcccaa gtacgtgcac ggtgagcggc 120

ccacagggcg agtgtgagcg cgagaggcgg gaggaacagt ttagtaccac attgcccagc 180

taactcgaac gcgaccaact tataaacccg cgcgctgtcg cttgtgtggc tgctggagct 240

ccgtccccgt tttagagcta gaaatagcaa gttaaaataa ggctagtccg ttatcaactt 300

gaaaaagtgg caccgagtcg gtgctttttt gttttagagc tagaaatagc aagttaaaat 360

aaggctagtc cgtagcgcgt gcgcca 386

<210> 23

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 23

catgcatgca gttggcgtat 20

<210> 24

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 24

caaccctgca tgccatcaac 20

<210> 25

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 25

atcaactacc tgaggcctga cctg 24

<210> 26

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 26

ttggcaatct gagcccacct gttg 24

Claims

1. OsMYB26突变体在提高植物干旱胁迫耐受性中的应用，所述OsMYB26突变体的核苷酸序列为SEQ ID No.2~SEQ ID No.5任一项所示的核苷酸序列，所述植物为水稻。

2.包含权利要求1所述OsMYB26突变体的生物材料，其特征在于，所述生物材料包括（a）~（c）中任一项：

（a）表达盒；

（b）重组载体；

（c）重组原核细胞。

3.根据权利要求2所述的生物材料，其特征在于，所述重组载体选用质粒pCAMBIA1300作为载体。

4.根据权利要求2所述的生物材料，其特征在于，所述重组原核细胞选用农杆菌作为宿主细胞。

5.根据权利要求2所述的生物材料，其特征在于，所述重组原核细胞选用EHA105为宿主细胞。

6.一种提高植物干旱胁迫耐受性的方法，其特征在于，采用权利要求2~5任一项所述生物材料转染植物组织，经筛选得到表达OsMYB26突变体编辑的蛋白质的植物，所述植物为水稻。

7. 根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述OsMYB26突变体编辑的蛋白质具有如SEQ ID No.7~SEQ ID No.10任一项所示的氨基酸序列。