CN113632841A - 一种具有改善便秘功效的复合酸奶、其制备方法及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种复合酸奶、其制备方法及应用。所述复合酸奶由特定重量份配比的生牛乳、格氏乳杆菌、嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、副干酪乳杆菌、短双歧杆菌、乳双歧杆菌、长双歧杆菌、菊粉、低聚果糖、低聚半乳糖、聚葡萄糖、低聚异麦芽糖和低聚木糖制成，其能有效缓解便秘，具有相当高的安全性，还具有较高的感官评价。

Description

一种具有改善便秘功效的复合酸奶、其制备方法及应用
技术领域
本发明涉及食品加工技术领域，具体涉及一种具有改善便秘功效的复合酸奶、其制备方法及应用。
背景技术
功能性便秘是一种病因多样的胃肠道疾病，在儿童和成人中越来越常见，成人患病率约为14%；它不仅带来了巨大的医疗负担，而且增加了结/直肠癌的风险。在严重情况下，它可以诱发心脑血管疾病，严重影响了患者的生活质量。目前，功能性便秘按病理机制可分为三种类型：正常传输型便秘、慢传输型便秘（slow transit constipation，STC）和排位障碍型便秘，其中慢传输型便秘的发病率最高，约占功能性便秘的45.5%，其特点是结肠动力减弱，肠道内容物吸收缓慢。
目前，治疗慢传输性便秘的方法主要是药物治疗。因此，选择安全有效的治疗药物对长期便秘患者尤为重要。渗透性泻药、刺激性泻药和大便软化剂在临床治疗中应用广泛，且具有一定的临床疗效。但不良事件也经常发生，如腹痛、腹胀、腹泻、肠神经损伤、结肠黑变和药物依赖等。约47%的患者对此类治疗不满意，主要是治疗效果不理想、症状反应不一致、安全性、不良味道、以及成本高等原因。因此，功能性便秘的治疗仍然具有挑战性，已成为临床医生亟待解决的问题。
据报道，便秘与成人肠道菌群失调有关，包括结肠菌群的微生物丰度变化。先前的研究表明，便秘患者的双歧杆菌、乳酸杆菌、类杆菌和普雷沃菌的数量减少。然而，关于功能性便秘是否可以通过益生菌和益生元来改变肠道微生物菌群进而改善功能性便秘，目前尚无明确报道。
益生菌是一种活的微生物，当给予足够的量时，会给宿主带来健康益处。例如，许多益生菌可以增加乳酸和短链脂肪酸的产生，进而改善结肠蠕动，缩短整个肠道转运时间（Gut transit time, GTT）。
发明内容
发明目的
本发明的目的在于提供一种具有改善便秘功效的复合酸奶、其制备方法及应用。该复合酸奶含有特定配比的一系列益生菌或益生元，它们相辅相成，共同发挥作用，能够有效缓解功能性便秘症状，使肠道的微生态环境保持平衡，提高免疫力，保持人体健康。
解决方案
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
第一方面，本发明提供了一种复合酸奶，其由以下重量份配比的原料制成：
生牛乳90-100份，格氏乳杆菌(0.8-1.2)×108 CFU/100份生牛乳，嗜热链球菌(4-6)×107 CFU/100份生牛乳，保加利亚乳杆菌(1-3)×107 CFU/100份生牛乳，嗜酸乳杆菌(0.8-1.2)×107 CFU/100份生牛乳，植物乳杆菌(0.8-1.2)×107 CFU/100份生牛乳，副干酪乳杆菌(7-9)×105 CFU/100份生牛乳，短双歧杆菌(6-8)×106 CFU/100份生牛乳，乳双歧杆菌(6-8)×105 CFU/100份生牛乳，长双歧杆菌(2-4)×105 CFU/100份生牛乳，菊粉5-6份，低聚果糖0.9-1份，低聚半乳糖0.08-1份，聚葡萄糖0.08-1份，低聚异麦芽糖0.07-0.09份和低聚木糖0.07-0.09份。
在一种优选的实施方案中，所述复合酸奶由以下重量份配比的原料制成：
生牛乳95份，格氏乳杆菌1×108 CFU/100份生牛乳，嗜热链球菌5×107 CFU/100份生牛乳，保加利亚乳杆菌2×107 CFU/100份生牛乳，嗜酸乳杆菌1×107 CFU/100份生牛乳，植物乳杆菌1×107 CFU/100份生牛乳，副干酪乳杆菌8×105 CFU/100份生牛乳，短双歧杆菌7×106 CFU/100份生牛乳，乳双歧杆菌7×105 CFU/100份生牛乳，长双歧杆菌3×105 CFU/100份生牛乳，菊粉5.5份，低聚果糖0.95 份，低聚半乳糖0.09份，聚葡萄糖0.09份，低聚异麦芽糖0.08份和低聚木糖0.08 份。
在上述复合酸奶的优选具体实施方案中，所述格氏乳杆菌为母乳源格氏乳杆菌（Lactobacillus gasseri），其保藏编号为CGMCC No.19749，于2020年4月27日保藏至位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其黏附能力极强，在耐酸耐胆盐、抑制细菌等方面具有优势。
在上述复合酸奶的优选具体实施方案中，所述植物乳杆菌为母乳源植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum），其保藏编号为CGMCC No.19748，于2020年4月27日保藏至位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；该母乳源植物乳杆菌对肠道细胞的粘附率≥140%，该乳杆菌粘附在上皮细胞是其发挥其益生功能的主要基础，粘附的乳杆菌可以在肠道内存在并且可以抵制致病菌的入侵，产生抗菌肽等代谢产物帮助有效的杀死致病菌，达到避免肠道受致病菌的侵染等功能；该母乳源植物乳杆菌对8种常见致病菌（单增李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌、蜡状芽孢杆菌、大肠埃希氏菌、宋氏志贺氏菌、伤寒沙门氏菌、阪崎肠杆菌、肠炎沙门氏菌）具有抑制作用，抑菌圈直径≥20mm；该母乳源植物乳杆菌尤其对大肠埃希氏菌具有更好的抑制作用，抑菌圈直径≥28.5mm；该所述母乳源植物乳杆菌在pH2.5条件下存活3h后存活率≥107%，存活6h后存活率≥115%；该母乳源植物乳杆菌在0.3%胆盐条件下存活1h后存活率≥225%。
在上述复合酸奶的优选具体实施方案中，所述嗜酸乳杆菌为嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus），其保藏编号为CGMCC No. 1084，于2004年1月6日保藏至位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其在耐酸耐胆盐、抑制细菌等方面具有优势。
在上述复合酸奶的优选具体实施方案中，所述长双歧杆菌为长双歧杆菌（Bifidobacterium longum），其保藏编号为CGMCC No. 1085，于2004年1月6日保藏至位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其在耐酸耐胆盐、抑制细菌等方面具有优势。
第二方面，本发明提供了如第一方面所述的复合酸奶的制备方法，其包括下述步骤：
（1）按所述重量份配比，将菊粉、低聚果糖、低聚半乳糖、聚葡萄糖、低聚异麦芽糖、低聚木糖进行干混；
（2）按所述重量份配比，将步骤（1）所得干混料与生牛乳混合；
（3）按所述重量份配比，向步骤（2）所得混合物中加入低聚半乳糖和低聚木糖，进行混合；
（4）将步骤（3）所得混合物进行预热、均质、杀菌、冷却；
（5）按所述重量份配比，在步骤（4）所得混合物中接种格氏乳杆菌和复合菌种，所述复合菌种即为嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、副干酪乳杆菌、短双歧杆菌、乳双歧杆菌、长双歧杆菌的混合物；
（6）将步骤（5）所得混合物进行发酵、冷却、待装、灌装、冷藏及后成熟，即得。
在所述制备方法的具体实施方案中，所述菊粉、低聚果糖、低聚半乳糖、聚葡萄糖、低聚异麦芽糖、低聚木糖为粉末状，所述低聚半乳糖、低聚木糖为液体状。
在所述制备方法的优选实施方案中，步骤（4）具体为：将步骤（3）所得混合物预热至60～65℃，在100-200bar的条件下均质，在95±2℃的条件下进行杀菌并保持5min，冷却至43±2℃。
在所述制备方法的优选实施方案中，步骤（6）所述发酵的条件为：于42±2℃进行发酵，发酵酸度≥70°T（pH＜4 .60）时终止发酵。
第三方面，本发明提供了如第一方面所述的复合酸奶在制备食品、保健品或药品中的应用。
在所述应用的一种可能的实现方式中，所述药品为具有改善便秘功效的药品；优选地，所述药品为具有改善功能性便秘功效的药品。
有益效果
本发明提供的酸奶采用复合配方，除包含传统乳酸菌（保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌）外，还以特定的量添加多种特定的益生菌和益生元；所述益生菌和益生元相辅相成，共同发挥作用，使肠道的微生态环境保持平衡，改善便秘和腹泻，提高免疫力，保持人体健康。
本发明提供的酸奶能有效缓解便秘（特别是功能性便秘），包括显著改善BSFS、PAC-QOL、排便持续时间、粪便量、排便费力和不尽感的症状等参数，并且具有相当高的安全性，还具有较高的感官评价。
附图说明
一个或多个实施例通过与之对应的附图中的图片进行示例性说明，这些示例性说明并不构成对实施例的限定。在这里专用的词“示例性”意为“用作例子、实施例或说明性”。这里作为“示例性”所说明的任何实施例不必解释为优于或好于其它实施例。
图1是本发明实施例1的复合酸奶的感官评价情况，如测试例1所测得的。
图2是本发明测试例2的实验流程示意图。
图3是本发明实施例1的复合酸奶对于便秘小鼠的改善效果评估，如测试例2所测得的；其中，(A)显示不同组别的粪便颗粒数，(B)显示不同组别的粪便含水量，(C)显示不同组别小肠推进率，(D)显示不同组别小肠推进率实验的组织解剖图；统计学分析通过Wilcoxon rank-sum检验进行，*p < 0.05; **p < 0.01; ***p < 0.001.；C：健康对照组，M：小鼠便秘模型组，Y：喂食本发明酸奶的便秘小鼠组，ABX：抗生素处理的便秘小鼠组，ABX+Y：喂食本发明酸奶的抗生素处理的便秘小鼠组。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。
另外，为了更好的说明本发明，在下文的具体实施方式中给出了众多的具体细节。本领域技术人员应当理解，没有某些具体细节，本发明同样可以实施。在一些实施例中，对于本领域技术人员熟知的原料、元件、方法、手段等未作详细描述，以便于凸显本发明的主旨。
以下实施例中，所用的嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、副干酪乳杆菌、短双歧杆菌、乳双歧杆菌均为市售产品。格氏乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、长双歧杆菌为三元自有菌种，并且在申请日之前均已保藏至中国普通微生物菌种保藏管理中心，其中：
格氏乳杆菌为母乳源格氏乳杆菌（Lactobacillus gasseri），其保藏编号为CGMCCNo.19749，于2020年4月27日保藏至位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；
植物乳杆菌为母乳源植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum），其保藏编号为CGMCC No.19748，于2020年4月27日保藏至位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；
嗜酸乳杆菌为嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus），其保藏编号为CGMCCNo. 1084，于2004年1月6日保藏至位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；
长双歧杆菌为长双歧杆菌（Bifidobacterium longum），其保藏编号为CGMCC No.1085，于2004年1月6日保藏至位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
实施例1：根据本发明复合酸奶的配制
一种具有改善便秘功效的益生菌和益生元复合酸奶，由下述重量份配比的原料制得：
生牛乳95份，
格氏乳杆菌1×108CFU/100份生牛乳，
嗜热链球菌5×107CFU/100份生牛乳，
保加利亚乳杆菌2×107CFU/100份生牛乳，
嗜酸乳杆菌1×107CFU/100份生牛乳，
植物乳杆菌1×107CFU/100份生牛乳，
副干酪乳杆菌8×105CFU/100份生牛乳，
短双歧杆菌7×106CFU/100份生牛乳，
乳双歧杆菌7×105CFU/100份生牛乳，
长双歧杆菌3×105CFU/100份生牛乳，以及
菊粉5.5份、低聚果糖0.95 份、低聚半乳糖0.09份、聚葡萄糖0.09份、低聚异麦芽糖0.08份、低聚木糖0.08 份。
采用上述原料，通过下述步骤制备调节肠道的酸奶：
将生牛乳验收，过滤；
按上述重量份配比，将菊粉、低聚果糖、聚葡萄糖、低聚异麦芽糖（菊粉、低聚果糖、聚葡萄糖、低聚异麦芽糖均为粉末状）进行干混, 缓慢倒入混料器中与生牛乳进行充分的混合，随后将低聚半乳糖和低聚木糖（低聚半乳糖、低聚木糖均为液体）倒入混料器与生牛乳进行充分的混合；
将所得混合原料预热至55-70℃，在100-200bar的条件下均质，在95±2℃的条件下进行杀菌并保持5min，冷却至43±2℃；
按上述重量份配比，接种格氏乳杆菌和复合菌种，所述复合菌种即为嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、副干酪乳杆菌、短双歧杆菌、乳双歧杆菌、长双歧杆菌的混合物；
于40±2℃进行发酵，发酵酸度≥70°T（pH＜4.60）时终止发酵；
冷却、待装、灌装、冷藏及后成熟，即得具有改善便秘功效作用的酸奶。冷却、待装、灌装、冷藏及后成熟的条件按照现有技术进行即可。
比较例1：其他组成的复合酸奶的配制
一种益生菌和益生元复合酸奶，由下述重量份配比的原料制得：
生牛乳95份
格氏乳杆菌1×108CFU/100 份生牛乳
嗜热链球菌5×107CFU/100 份生牛乳
保加利亚乳杆菌5×107CFU/100 份生牛乳
嗜酸乳杆菌1×107CFU/100 份生牛乳
植物乳杆菌5×107CFU/100 份生牛乳
副干酪乳杆菌5×106CFU/100 份生牛乳
短双歧杆菌5×107CFU/100 份生牛乳
乳双歧杆菌4×106CFU/100 份生牛乳
长双歧杆菌1×106CFU/100 份生牛乳，以及
菊粉6份、低聚果糖0.95 份、低聚半乳糖0.09份、聚葡萄糖0.09份、低聚异麦芽糖0.08份、低聚木糖0.08 份。
采用上述原料，通过下述步骤制备调节肠道的酸奶：
将生牛乳验收，过滤；
按上述重量份配比，将菊粉、低聚果糖、聚葡萄糖、低聚异麦芽糖（菊粉、低聚果糖、聚葡萄糖、低聚异麦芽糖均为粉末状）进行干混, 缓慢倒入混料器中与生牛乳进行充分的混合，随后将低聚半乳糖和低聚木糖（低聚半乳糖、低聚木糖均为液体）倒入混料器与生牛乳进行充分的混合；
将所得混合原料预热至55-70℃，在100-200bar的条件下均质，在95±2℃的条件下进行杀菌并保持5min，冷却至43±2℃；
按上述重量份配比，接种格氏乳杆菌和复合菌种，所述复合菌种即为嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、副干酪乳杆菌、短双歧杆菌、乳双歧杆菌、长双歧杆菌的混合物；
于40±2℃进行发酵，发酵酸度≥70°T（pH＜4.60）时终止发酵；
冷却、待装、灌装、冷藏及后成熟，即得具有改善便秘功效作用的酸奶。冷却、待装、灌装、冷藏及后成熟的条件按照现有技术进行即可。
比较例2：其他组成的复合酸奶的配制
一种益生菌和益生元复合酸奶，由下述重量份配比的原料制得：
生牛乳95份，
格氏乳杆菌1×107CFU/100 份生牛乳，
嗜热链球菌1×107CFU/100 份生牛乳，
保加利亚乳杆菌1×107CFU/100 份生牛乳，
嗜酸乳杆菌1×107CFU/100 份生牛乳，
植物乳杆菌1×107CFU/100 份生牛乳，
副干酪乳杆菌8×105CFU/100 份生牛乳，
短双歧杆菌5×106CFU/100 份生牛乳，
乳双歧杆菌1×105CFU/100 份生牛乳，
长双歧杆菌1×106CFU/100 份生牛乳，以及
菊粉3份、低聚果糖0.95 份、低聚半乳糖0.09份、聚葡萄糖0.09份、低聚异麦芽糖0.08份、低聚木糖0.08 份。
采用上述原料，通过下述步骤制备调节肠道的酸奶：
将生牛乳验收，过滤；
按上述重量份配比，将菊粉、低聚果糖、聚葡萄糖、低聚异麦芽糖（菊粉、低聚果糖、聚葡萄糖、低聚异麦芽糖均为粉末状）进行干混, 缓慢倒入混料器中与生牛乳进行充分的混合，随后将低聚半乳糖和低聚木糖（低聚半乳糖、低聚木糖均为液体）倒入混料器与生牛乳进行充分的混合；
将所得混合原料预热至55-70℃，在100-200bar的条件下均质，在95±2℃的条件下进行杀菌并保持5min，冷却至43±2℃；
按上述重量份配比，接种格氏乳杆菌和复合菌种，所述复合菌种即为嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、副干酪乳杆菌、短双歧杆菌、乳双歧杆菌、长双歧杆菌的混合物；
于40±2℃进行发酵，发酵酸度≥70°T（pH＜4.60）时终止发酵；
冷却、待装、灌装、冷藏及后成熟，即得具有改善便秘功效作用的酸奶。冷却、待装、灌装、冷藏及后成熟的条件按照现有技术进行即可。
比较例3：其他组成的复合酸奶的配制
一种复合酸奶，由下述重量份的原料制得：
生牛乳90份，格氏乳杆菌1×108 CFU/100份生牛乳，嗜热链球菌1×1010 CFU/100份生牛乳，保加利亚乳杆菌1×1010 CFU/100份生牛乳，嗜酸乳杆菌1×108 CFU/100份生牛乳，植物乳杆菌1×108 CFU/100份生牛乳，副干酪乳杆菌1×107 CFU/100份生牛乳，短双歧杆菌3×106 CFU/100份生牛乳，乳双歧杆菌3×106 CFU/100份生牛乳，长双歧杆菌1×106CFU/100份生牛乳，菊粉2份，低聚果糖2份，低聚半乳糖0.8份，聚葡萄糖0.5份，低聚异麦芽糖0.3份，低聚木糖0.4份，甜菊糖苷0.003份，罗汉果甜苷0.003份。
采用上述原料，通过下述步骤制备所述酸奶：
将生牛乳验收，过滤；
按上述重量份配比，将菊粉、低聚果糖、聚葡萄糖、低聚异麦芽糖（菊粉、低聚果糖、聚葡萄糖、低聚异麦芽糖均为粉末状）进行干混，缓慢倒入混料器中与生牛乳进行充分的混合，随后将低聚半乳糖和低聚木糖（低聚半乳糖、低聚木糖均为液体）倒入混料器与生牛乳进行充分的混合；
将所得混合原料预热至60～65℃，在100-200bar的条件下均质，在95±2℃的条件下进行杀菌并保持5min，冷却至43±2℃；
按上述重量份配比，接种格氏乳杆菌和复合菌种，所述复合菌种即为嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、副干酪乳杆菌、短双歧杆菌、乳双歧杆菌、长双歧杆菌的混合物；
于42±2℃进行发酵，发酵酸度≥70°T(pH＜4 .60)时终止发酵；
冷却、待装、灌装、冷藏及后成熟，即得具有调节肠道微生态作用的酸奶。冷却、待装、灌装、冷藏及后成熟的条件按照现有技术进行即可。
测试例1：本发明复合酸奶的感官评价
对于实施例1以及比较例1-3所制备的酸奶进行感官评价，由20名本所实验室人员组成评定小组，具体评价指标为组织状态、滋味气味、色泽、粘稠度、酸甜比，评价标准如下：
组织状态（1-10分，分数越高组织状态爽滑细腻度越好）；
口感滋味（1-10分，分数越高整体风味越好）；
色泽（1-10分，分数越高乳白色则及光泽越好）；
粘稠度（1分太稀 5分合适 10分太稠）；
酸甜比（1分太甜 5分合适 10分太酸）。
结果如图1所示，图1显示：组织状态、口感滋味、粘稠度：实施例1优于比较例1和比较例2，与比较例3相当，说明实施例1组织状态更细腻、均匀，整体风味更好；实施例1与比较例1、比较例2、比较例3酸奶色泽相当，具有与添加成分相符的色泽；实施例1与比较例2、比较例3酸甜比相当，优于比较例1；评定小组整体更倾向于实施例1。
测试例2：本发明复合酸奶对于小鼠便秘模型的便秘改善功效
在这项研究中，选用SPF(北京)生物技术有限公司提供的雌性BALB/c小鼠（7周龄）小鼠为实验对象，实验前，使小鼠适应环境条件一周；采用盐酸洛哌丁胺建立小鼠便秘模型，盐酸洛哌丁胺是一种抑制肠道内源性乙酰胆碱释放的激动剂，可抑制肠道水分分泌和结肠蠕动。
为了评价本发明的益生菌和益生元复合酸奶对便秘的影响，发明人进行了如下实验分组：
C：健康对照组，M：小鼠便秘模型组，Y：喂食本发明酸奶（实施例1所制备）的便秘小鼠组，ABX：抗生素处理的便秘小鼠组，ABX+Y：喂食本发明酸奶（实施例1所制备）的抗生素处理的便秘小鼠组。
各实验组的处理方法及实验流程如图2所示。
本实验所用的一般性方法
小鼠便秘模型的诱导：按10mg/kg体重，以盐酸洛哌丁胺给小鼠灌胃，每天一次，持续一周，诱发小鼠便秘；一周后，小鼠出现便秘，其特点是粪球数量和粪水含量显著减少。
本发明酸奶的处理：按200ml/kg体重，以实施例1所制备的本发明酸奶每天口服灌胃小鼠，为期一周。
抗生素处理以产生假无菌小鼠：在动物饮用水中提供广谱抗生素（氨苄西林，1 g/L；硫酸新霉素，1 g/L；甲硝唑，1 g/L；万古霉素，0.5 g/L），每三天更换一次抗生素；通过抗生素治疗4周后产生假无菌小鼠。
鉴于上述，本实施例各实验组的处理方法如下：
健康对照组（C）：健康小鼠常规饲养，并在与下述施用本发明酸奶的同时，给予与所施用的本发明酸奶相同体积的无菌水。
小鼠便秘模型组（M）：按10 mg/kg体重，以盐酸洛哌丁胺给小鼠灌胃，每天一次，持续一周，诱发小鼠便秘；一周后，小鼠出现便秘，其特点是粪球数量和粪水含量显著减少。并且，在与下述施用本发明酸奶的同时，给予与所施用的本发明酸奶相同体积的无菌水。
喂食本发明酸奶的便秘小鼠组（Y）：对于按上述方法制备的便秘模型小鼠，按200ml/kg体重，以实施例1所制备的本发明酸奶每天口服灌胃小鼠，为期一周。
抗生素处理的便秘小鼠组（ABX）：在动物饮用水中提供广谱抗生素（氨苄西林，1g/L；硫酸新霉素，1 g/L；甲硝唑，1 g/L；万古霉素，0.5 g/L），每三天更换一次抗生素；通过抗生素治疗4周后产生假无菌小鼠；然后，按10 mg/kg体重，以盐酸洛哌丁胺给小鼠灌胃，每天一次，持续一周，诱发小鼠便秘。并且，在与下述施用本发明酸奶的同时，给予与所施用的本发明酸奶相同体积的无菌水。
喂食本发明酸奶的抗生素处理的便秘小鼠组（ABX+Y）：对于按上述方法制备的抗生素处理的便秘小鼠，按200 ml/kg体重，以实施例1所制备的本发明酸奶每天口服灌胃小鼠，为期一周。
实验结果如图3所示，图3显示：用本发明的复合酸奶灌胃7天后，粪便参数和肠道动力都得到显著改善。
具体地，与便秘模型小鼠相比，进食酸奶的便秘小鼠粪便数量显著增加（图3A）；此外，便秘小鼠的粪便含水量在食用酸奶后恢复到对照组水平（图3B）。
实验结束后，采用颈椎脱位法安乐死小鼠，测定肠道转运率。结果显示：与小鼠便秘模型组相比，本发明复合酸奶处理组小鼠的肠道转运率恢复至对照组水平（图3C-D）。在摄入抗生素的小鼠中也发现了类似的功能。
以上结果表明，本发明的复合酸奶可以显著改善小鼠便秘，即使对于在抗生素处理所致假无菌小鼠中由盐酸洛哌丁胺引起的便秘，本发明的复合酸奶也有明显的缓解便秘的作用；表现为：便秘小鼠的所有三个参数均得到明显缓解（图3A-D）。
测试例3：临床试验证实，本发明复合酸奶能够缓解便秘症状
研究内容
通过自身对照试验，进行本发明的益生元和益生菌复合酸奶对于功能性慢传输型便秘患者疗效的临床试验，确定其相对于普通酸奶的有效性，对受试者生活质量的有效改变；对所有菌群数据进行宏基因组测序分析，观察有益菌株的定植情况以及整个菌群变化；进行血清的免疫组学和代谢组学分析，重点分析在功能性慢传输型便秘改善的受试者中，免疫因子的变化以及代谢产物的变化；进行菌群与代谢组学/免疫组学的关联分析，并进行宏基因组测序，更加深入的进行机理探究，确定功能菌株，效应分子和产生基因，以及本发明的益生元和益生菌复合酸奶的作用机理。
研究对象
纳入标准：
（1）参照罗马Ⅳ标准，需要排除肠道及全身器质性因素、药物及其他原因导致的便秘并符合以下标准[15]：必须符合下列2个或2个以上的症状：①至少25%的时间排便感到费力；②至少25%的时间排便为块状便或硬便；③至少25%的时间排便有不尽感； ④至少25%的时间排便有肛门直肠梗阻或阻塞感；⑤至少25%的时间排便需要手法辅助（如用手指协助排便、盆底）⑥每周自发性排便少于3次；
（2）不使用泻药时很少出现稀便；
（3）不符合IBS-C的诊断标准。
（4）年龄在18-60岁之间，上述症状出现至少6个月，且近3个月症状符合以上诊断标准。
（5）入组前2周未用过明确可引起便秘的药物，未使用促动力药物、微生态制剂、渗透性等便秘的药物，未服用抗生素等药物。
（6）患者本人及家属知情同意，自愿参加临床试验研究，依从性较好，自愿签订知情同意书者。
排除标准：
（1）不符合上述诊断标准者，依从性差，未签订自愿参加试验研究的知情同意书者。
（2）有严重的心脑肝肾功能障碍、尿毒症昏迷、酮症酸中毒、低血糖、贫血、营养不良、造血系统及身免疫系统疾病、感染性疾病、神经系统疾患等患者。
（3）患者符合阿片引起的便秘的诊断标准，就不应该诊断为功能性便秘，但临床医生要注意功能性便秘和阿片引起的便秘二者可重叠，筛查病例时要排除。
（4）肠道内有肿瘤等器质性病变、以及炎症、手术引发的肠腔狭窄或梗阻粘连等患者应排除。
（5）妊娠期及哺乳期等特殊人群。
研究方法与效果评估
本研究中，受试者每天食用1瓶实施例1所制酸奶(200g)，持续4周。我们收集了受试者在接受酸奶干预前后的安全指数、疗效指数、粪便和血清数据。安全性指标用于监测本研究中受试者生理生化功能的稳定性，包括血常规检查、肝八项检查、肾三项检查、尿常规检查、粪常规检查、心肌酶谱、空腹血糖检查。采用疗效指标观察参与者的便秘症状及便秘对参与者生活质量的影响，随着研究的进行，包括Bristol粪便形式量表（BSFS）、便秘症状患者评估（PAC-SYM）和便秘生活质量患者评估量表（PAC-QOL）。本试验总时间为4周。该研究经河南省人民医院伦理委员会批准，所有参与者均已充分了解研究程序，并签署知情同意书参与研究。
我们招募了86名被诊断为便秘的志愿者，临床参数详见下表。便秘患者每日服用实施例1所制备的本发明的益生元和益生菌复合酸奶，每天1瓶（200克/瓶），持续4周，我们首先证实了复合益生元益生菌的安全性，在服用过程中没有不良反应的报告。此外，患者的几种便秘症状及便秘对生活质量的影响均得到改善（见以下表1）。
表1显示：与干预前相比，采用本发明的复合酸奶干预后，患者的BSFS、PAC-QOL、排便频率、排便时间、粪便量、排便费力和无休止症状等评分均显著下降。
表1 队列试验临床指标
Figure 829231DEST_PATH_IMAGE001
BSFS: Bristol排便评分表; PAC-QOL:便秘患者生活质量评分表; PAC-SYM: 患者便秘症状评分表; GGT:谷氨酰转肽酶；ALT:丙氨酸转氨酶；FPG：空腹血浆葡萄糖。统计检验使用Wilcoxon rank-sum检验。差异水平表示*p < 0.05；**p < 0.01；***p < 0.001。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (10)

1.一种复合酸奶，其由以下重量份配比的原料制成：
生牛乳90-100份，格氏乳杆菌(0.8-1.2)×108 CFU/100份生牛乳，嗜热链球菌(4-6)×107 CFU/100份生牛乳，保加利亚乳杆菌(1-3)×107 CFU/100份生牛乳，嗜酸乳杆菌(0.8-1.2)×107 CFU/100份生牛乳，植物乳杆菌(0.8-1.2)×107 CFU/100份生牛乳，副干酪乳杆菌(7-9)×105 CFU/100份生牛乳，短双歧杆菌(6-8)×106 CFU/100份生牛乳，乳双歧杆菌(6-8)×105 CFU/100份生牛乳，长双歧杆菌(2-4)×105 CFU/100份生牛乳，菊粉5-6份，低聚果糖0.9-1份，低聚半乳糖0.08-1份，聚葡萄糖0.08-1份，低聚异麦芽糖0.07-0.09份和低聚木糖0.07-0.09份。
2.根据权利要求1所述的复合酸奶，其由以下重量份配比的原料制成：
生牛乳95份，格氏乳杆菌1×108 CFU/100份生牛乳，嗜热链球菌5×107 CFU/100份生牛乳，保加利亚乳杆菌2×107 CFU/100份生牛乳，嗜酸乳杆菌1×107 CFU/100份生牛乳，植物乳杆菌1×107 CFU/100份生牛乳，副干酪乳杆菌8×105 CFU/100份生牛乳，短双歧杆菌7×106 CFU/100份生牛乳，乳双歧杆菌7×105 CFU/100份生牛乳，长双歧杆菌3×105 CFU/100份生牛乳，菊粉5.5份，低聚果糖0.95 份，低聚半乳糖0.09份，聚葡萄糖0.09份，低聚异麦芽糖0.08份和低聚木糖0.08 份。
3.根据权利要求1或2所述的复合酸奶，其中，所述格氏乳杆菌为母乳源格氏乳杆菌（Lactobacillus gasseri），其保藏编号为CGMCC No.19749。
4.根据权利要求1或2所述的复合酸奶，其中，所述植物乳杆菌为母乳源植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum），其保藏编号为CGMCC No.19748。
5.根据权利要求1或2所述的复合酸奶，其中，所述嗜酸乳杆菌为嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus），其保藏编号为CGMCC No. 1084。
6.根据权利要求1或2所述的复合酸奶，其中，所述长双歧杆菌为长双歧杆菌（Bifidobacterium longum），其保藏编号为CGMCC No. 1085。
7.根据权利要求1-6任一项所述的复合酸奶的制备方法，其包括下述步骤：
（1）按所述重量份配比，将菊粉、低聚果糖、低聚半乳糖、聚葡萄糖、低聚异麦芽糖、低聚木糖进行干混；
（2）按所述重量份配比，将步骤（1）所得干混料与生牛乳混合；
（3）按所述重量份配比，向步骤（2）所得混合物中加入低聚半乳糖和低聚木糖，进行混合；
（4）将步骤（3）所得混合物进行预热、均质、杀菌、冷却；
（5）按所述重量份配比，在步骤（4）所得混合物中接种格氏乳杆菌和复合菌种，所述复合菌种即为嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、副干酪乳杆菌、短双歧杆菌、乳双歧杆菌、长双歧杆菌的混合物；
（6）将步骤（5）所得混合物进行发酵、冷却、待装、灌装、冷藏及后成熟，即得。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其中，步骤（4）具体为：将步骤（3）所得混合物预热至60～65℃，在100-200bar的条件下均质，在95±2℃的条件下进行杀菌并保持5min，冷却至43±2℃。
9.根据权利要求7或8所述的制备方法，其中，步骤（6）所述发酵的条件为：于42±2℃进行发酵，发酵酸度≥70°T，pH＜4 .60时终止发酵。
10.根据权利要求1-6任一项所述的复合酸奶在制备食品、保健品或药品中的应用，其中，所述药品为具有改善便秘功效的药品。
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