CN113588750A - 一种同时测量血红蛋白与糖化血红蛋白的电化学测试卡及其制作方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医疗领域，具体提供一种同时测量血红蛋白与糖化血红蛋白的电化学测试卡，从下至上依次包括PET基片、电极层、油墨层、冲槽白胶层、亲水膜层和盖片层；电极层包括两组电极区和两个反应区，每组电极区均包括两根反应电极，一根满血触发电极，一根根识别电极和一根开机电极，每个反应区内均包括有反应药液；油墨层覆盖在电极层上方，油墨层位于开机电极的相对一端端部留有采样口，采样口分别与两组反应区连通，且油墨层漏出电极区和反应区；冲槽白胶层覆盖于电极层上方，并填充于采样口之间，将两个反应区隔离；亲水膜层覆盖于冲槽白胶层上方，且亲水膜层在采样口的上方留有排气孔；盖片层位于亲水膜层上方，并漏出排气孔。和现有技术相比，用血量少、能够快速便捷准确地测试出糖化血红蛋白、能够同时测试出血红蛋白和糖化血红蛋白。
Description
技术领域
本发明属于医疗领域，尤其涉及同时测量血红蛋白与糖化血红蛋白的电化学测试卡及其制备方法。
背景技术
血红蛋(Hb)白又称血色素，是红细胞的主要组成部分，能与氧结合，运输氧和二氧化碳，血红蛋白的增高降低能够更好地反映贫血的程度。血红蛋白检测一般是要去医院抽取静脉血来进行检测，这会增加检测的时间与成本，针对该现状，发明一种电化学测试卡，能够快速便捷地测试血红蛋白的含量。而糖化血红蛋白(HbA1c)是人体血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物，血糖和血红蛋白的结合生成糖化血红蛋白的过程是不可逆反应，并与血糖浓度成正比，且保持120天左右，所以可观测到120天之前的血糖浓度，反映患者仅 8-12周的血糖控制情况，且不受血糖波动、抽血时间、患者是否空腹、是否使用胰岛素等因素影响，因此美国糖尿病学会(ADA)推荐新发糖尿病患者必须测定HbA1c，并作为判断血糖控制效果的评价标准，在糖尿病病情监控中发挥着重要作用。与血红蛋白类似，检测糖化血红蛋白也要抽取静脉血，这增加了检测的时间和成本，基于该现状，需要发明一种电化学测试卡能够快速便捷地测试血红蛋白和糖化血红蛋白。
发明内容
本发明针对现有电化学方法测试血红蛋白，由于血液中的成分复杂，特别是血脂会造成检测干扰，导致检测结果不准确，提供了一种用血量少、能够快速便捷准确地测试出糖化血红蛋白、能够同时测试出血红蛋白和糖化血红蛋白的测试卡。
本发明提供的基础方案为：一种同时测量血红蛋白与糖化血红蛋白的电化学测试卡，从下至上依次包括PET基片、电极层、油墨层、冲槽白胶层、亲水膜层和盖片层；电极层包括两组电极区和两个反应区，每组电极区均包括两根反应电极，一根满血触发电极，一根根识别电极和一根开机电极，每个反应区内均包括有反应药液；油墨层覆盖在电极层上方，油墨层位于开机电极的相对一端端部留有采样口，采样口分别与两组反应区连通，且油墨层漏出电极区和反应区；冲槽白胶层覆盖于电极层上方，并填充于采样口之间，将两个反应区隔离；亲水膜层覆盖于冲槽白胶层上方，且亲水膜层在采样口的上方留有排气孔；盖片层位于亲水膜层上方，并漏出排气孔。
基础方案工作原理及有益效果：电极层的两组电极区和两个反应区，分别测试血红蛋白和糖化血红蛋白的含量，识别电极是让仪器识别测试卡的种类，通过识别电极与开机电极的短路情况来进行识别测试卡的种类，开机电极是由两根电极直接连接短路形成，仪器的测试卡插入口检测到两根电极是有导通形成电流时，仪器自动开机；冲槽白胶层粘贴于油墨层的一端，使两个反应区和吸血路径裸露，在采样口处由冲槽白胶将两个反应区隔离开，从而使两个反应区独立消除相互之间导通存在的干扰；亲水膜粘贴在冲槽白胶上，且亲水膜层在反应区底端上设有排气孔，从而由排气孔、反应区及亲水膜层构成虹吸池。双通道虹吸式结构存在两通道之间的互相导通而存在较大的干扰，基于这个问题，本发明利用冲槽白胶将两个通道隔离开来，这样就避免了两个通道之间的相互导通而存在的干扰。血样从采样口通过虹吸作用被吸入两个独立的反应区内，当血液充满反应区时，满血触发电极导通表明吸血量充足，如果反应区吸血量不足，则会提示吸血量不足，当两个反应区的吸血量足够时，将会检测到各自反应产生的电流，一个反应区是检测血红蛋白反应所产生的电流，另一个反应区是检测糖化血红蛋白反应所产生的电流，根据两个反应区所检测的电流大小即可得出血红蛋白和糖化血红蛋白的含量。
本发明的设计两个独立的反应区，一个是测量血红蛋白，一个通过差分和血红蛋白浓度来测试糖化血红蛋白的百分比含量，排除血红蛋白中+2价的铁元素的干扰。用血量少、能够快速便捷准确地测试出糖化血红蛋白、能够同时测试出血红蛋白和糖化血红蛋白。快速便捷，准确度高，且采血量少。
进一步，血红蛋白反应区内的反应药液中包含有：缓冲药液0.1mol/L且PH＝6.8的Tris 缓冲液占比、表面活性剂曲拉通x-100、含有胆酸基团的表面活性剂、氯化钠、电子介体铁氰化钾和成膜剂K90；糖化血红蛋白反应区的反应药液中包含有：缓冲溶液0.1mol/L且PH＝6.8的Tris缓冲液、表面活性剂曲拉通x-100、含有胆酸基团的表面活性剂、氯化钠、电子介体亚铁氰化钾、成膜剂、果糖基肽氧化酶和过氧化物酶K90。对于血红蛋白而言，表面活性剂曲拉通x-100是能够完全裂解红细胞从而使血红蛋白彻底释放，由于血液中的血脂会与表面活性剂结合，可能会导致曲拉通x-100不能完全裂解红细胞从而使测量结果出现偏差，因此，加入含有胆酸基团的表面活性剂，该表面活性剂的亲油性大于曲拉通x-100，因此血液中的血脂会优先与含有胆酸基团的表面活性剂结合，从而使曲拉通x-100充分地裂解红细胞，释放出来的血红蛋白上结合的有+2价的铁元素，+2价的铁元素会与铁氰化钾反应产生电流，根据检测到的反应电流来得出血红蛋白的浓度。对于糖化血红蛋白而言，在蛋白酶的作用下，切断糖化血红蛋白β链N端的糖化短肽，糖化短肽在果糖基肽氧化酶的作用下生成过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下与亚铁氰化钾反应产生电流，由于裂解红细胞释放的血红蛋白上存在+2价的铁元素，会造成检测到的电流值偏大，因此需要与血红蛋白检测到的电流做一个差分，排除血红蛋白中+2价铁元素的干扰，通过最终的差分电流和血红蛋白的浓度即可得出糖化血红蛋白的百分比含量。
进一步，电极区是由导电银浆、导电碳浆和绝缘油墨采用丝网印刷的方式印刷在PET片材上。所用的银电极和碳电极来制作测试卡，价格便宜，极大地降低了生产成本。
进一步，采样口端部设有用于外接采血管的柔性连接头。基于目前的测试卡均是将采血后的血样储存于采血管中再后拿去检测，而事先并无法获知测试卡需要多少的血样量，因此，在采血时仍然会依照预估采取常规血样量，则会导致采血量并未从根本上解决采血量大的问题，而本发明在采样口端部设置用于外接采血管的柔性连接头，在采血时，直接将采血管与测试卡连接，在采血时只需要查看测试卡的电极导通即可，从而避免过度采血样，从根本上解决采血量大的问题。
进一步，电极层的纵向侧部还设有样品预留区，且样品预留区与电极区之间用冲槽白胶层隔离。在采血的同时为了血样的留样，同时在测试卡的侧部设样品预留区，即解决采血的同时，既满足测试卡所需要的血样量，同时满足留样的血样量需求，而且预留血样量的采血量与测试卡所需血样量同时来自于采样口，采血时间一致，采血量也基本相同，也可以避免血样留样过多的问题，避免过度采血。
进一步，样品预留区包括有样品预留管，样品预留管的一端设有与采样口连通的预留通道，样品预留管的另一端设有负压吸头。样品预留区的采样，可以是冲槽白胶形成的空腔，也可以是是样品预留管或者预留槽，本发明采用样品预留管，利于保存，样品预留管与采样口之间用冲槽白胶形成的通道构成预留通道，用于输送血样，样品预留管还可预配有密封塞，用于留样血样保存，负压吸头是为了样品预留管更顺畅的吸取血样。
进一步，柔性连接头端部设有无菌包膜包裹连接头外围。为了保证采样口清洁无菌，设有无菌包膜包裹，使用时再即时打开即可使用。
进一步，样品预留区与电极区之间设有撕裂线。使用时可与测试卡一体使用，使用完成后，可用撕裂线撕下另行保存。
本发明的另一基础方案：同时测量血红蛋白与糖化血红蛋白的电化学测试卡制备方法，包括以下步骤，
(1)取PET基片，将导电银浆、导电碳浆和绝缘油墨印刷到PET基板上，电极包括两组电极区，每组电极区均包括两根反应电极，一根满血触发电极，一根根识别电极和一根开机电极；两组电极区的反应电极和满血触发电极分别在两个独立的反应区内，形成两个反应区，得电极层；
(2)将绝缘油墨覆盖在电极上面，露出反应区和电极引脚，得油墨层；
(3)将反应区进行亲水处理，以温度为50℃，时间为4min进行烘干；
(4)配制两组反应药液：
血红蛋白反应区的反应药液包括，缓冲药液0.1mol/L且PH＝6.8的Tris缓冲液，表面活性剂曲拉通x-100，含有胆酸基团的表面活性剂，氯化钠，电子介体铁氰化钾，成膜剂K90 按照比例配制而成；
糖化血红蛋白反应区的反应药液包括，缓冲溶液按照0.1mol/L且PH＝6.8的Tris缓冲液，表面活性剂曲拉通x-100，含有胆酸基团的表面活性剂，氯化钠，电子介体亚铁氰化钾，成膜剂K90按照比例配制好后，再加入果糖基肽氧化酶和过氧化物酶；
将配制好的两个反应区的反应药液点到两个反应区，点样完成后放进烘道内进行烘干，烘干温度为50℃，时间为20-25min；
(5)烘干完成后，贴上一层冲槽白胶层，然后再贴上一层亲水膜，最后贴上盖片，获得测试卡。
进一步，血红蛋白反应区的反应药液中的缓冲药液按照0.1mol/L且PH＝6.8的Tris缓冲液占比80％，表面活性剂曲拉通x-100占比8％，含有胆酸基团的表面活性剂占比4％，氯化钠占比1％，电子介体铁氰化钾占比5％，成膜剂K90占比2％；
糖化血红蛋白反应区的反应药液，缓冲溶液按照0.1mol/L且PH＝6.8的Tris缓冲液占比80％，表面活性剂曲拉通x-100占比8％，含有胆酸基团的表面活性剂占比4％，氯化钠占比 1％，电子介体亚铁氰化钾占比5％，成膜剂K90占比2％。
附图说明
图1为本发明一种同时测量血红蛋白与糖化血红蛋白的电化学测试卡实施例一的示意图；
图2为本发明一种同时测量血红蛋白与糖化血红蛋白的电化学测试卡实施例一的断面图；
图3为本发明一种同时测量血红蛋白与糖化血红蛋白的电化学测试卡实施例一的血红蛋白的标准曲线图。
图4为本发明一种同时测量血红蛋白与糖化血红蛋白的电化学测试卡实施例一的糖化血红蛋白的标准曲线图。
图5为本发明一种同时测量血红蛋白与糖化血红蛋白的电化学测试卡实施例二的示意图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式进一步详细说明：
说明书附图中的附图标记包括：满血触发电极1、反应电极2、反应区3、油墨层4、采样口5、识别电极6、基片7、冲槽白胶层8、排气孔9、亲水膜层10、盖片层11、开机电极 12、撕裂线13、样品预留管14、负压吸头15、柔性连接头16。
实施例一：如附图1、图2所示：本实施例一种同时测量血红蛋白与糖化血红蛋白的电化学测试卡，从下至上依次包括PET基片7、电极层、油墨层4、冲槽白胶层8、亲水膜层 10和盖片层11；电极层包括两组电极区和两个反应区3，电极区是由导电银浆、导电碳浆和绝缘油墨采用丝网印刷的方式印刷在PET片材上，每组电极区均包括两根反应电极2，一根满血触发电极1，一根根识别电极6和一根开机电极12，两个反应区3分别为血红蛋白反应区和糖化血红蛋白反应区，每个反应区3内均包括有反应药液，血红蛋白反应区的反应药液中的缓冲药液0.1mol/L且PH＝6.8的Tris缓冲液占比80％，表面活性剂曲拉通x-100占比 8％，含有胆酸基团的表面活性剂占比4％，氯化钠占比1％，电子介体铁氰化钾占比5％，成膜剂K90占比2％；糖化血红蛋白反应区的反应药液，缓冲溶液按照0.1mol/L且PH＝6.8的Tris缓冲液占比80％，表面活性剂曲拉通x-100占比8％，含有胆酸基团的表面活性剂占比4％，氯化钠占比1％，电子介体亚铁氰化钾占比5％，成膜剂K90占比2％，糖化血红蛋白反应区的反应药液还含有蛋白酶，0.4U果糖基肽氧化酶和0.3U过氧化物酶；油墨层4覆盖在电极层上方，油墨层4位于开机电极12的相对一端端部留有采样口5，采样口5分别与两个反应区3 连通，且油墨层4漏出电极区和反应区3；冲槽白胶层8覆盖于电极层上方，并填充于采样口5之间，将两个反应区3隔离；亲水膜层10覆盖于冲槽白胶层8上方，且亲水膜层10在采样口5的上方留有排气孔9；盖片层11位于亲水膜层10上方，并漏出排气孔9。
制备方法为：(1)取PET基片7，将导电银浆、导电碳浆和绝缘油墨印刷到PET基板上，电极包括两组电极区，每组电极区均包括两根反应电极2，一根满血触发电极1，一根根识别电极6和一根开机电极12；两组电极区的反应电极2和满血触发电极1分别在两个独立的反应区3内，形成两个反应区3，得电极层；两组反应电极2和两根满血触发电极1分别在两个独立的反应区内，分别测试血红蛋白和糖化血红蛋白的含量，识别电极6是让仪器识别测试卡的种类，通过识别电极6与开机电极12的短路情况来进行识别测试卡的种类，开机电极12是由两根电极直接连接短路形成，仪器的测试卡插入口检测到两根电极是有导通形成电流时，仪器自动开机；
(2)将绝缘油墨覆盖在电极上面，露出反应区3和电极引脚，得油墨层4；
(3)配制含有聚乙烯醇的处理液，用处理液将反应区3进行亲水处理，以温度为50℃，时间为4min进行烘干；
(4)配制两组反应药液：血红蛋白反应区的反应药液中的缓冲药液按照0.1mol/L且 PH＝6.8的Tris缓冲液占比80％，表面活性剂曲拉通x-100占比8％，含有胆酸基团的表面活性剂占比4％，氯化钠占比1％，电子介体铁氰化钾占比5％，成膜剂K90占比2％，按照比例配制而成；
糖化血红蛋白反应区的反应药液，缓冲溶液按照0.1mol/L且PH＝6.8的Tris缓冲液占比80％，表面活性剂曲拉通x-100占比8％，含有胆酸基团的表面活性剂占比4％，氯化钠占比 1％，电子介体亚铁氰化钾占比5％，成膜剂K90占比2％，按照比例配制好后，再加入0.4U果糖基肽氧化酶和0.4U过氧化物酶；将配制好的两组反应药液分别点到两个反应区3，点样量为1.5uL，点样完成后放进烘道内烘干，烘干温度为50℃，时间为20-25min；
(5)烘干完成后，贴上一层冲槽白胶层8，然后再贴上一层亲水膜，最后贴上盖片，冲槽白胶层8材料为索威斯WH234343型双面胶，亲水膜经过单面亲水处理，使用3M 9901P型号，盖片的材料为合成纸，获得测试卡。
本发明通过设计两个独立的反应区3，对于血红蛋白反应区而言，表面活性剂曲拉通 x-100是能够完全裂解红细胞从而使血红蛋白彻底释放，由于血液中的血脂会与表面活性剂结合，可能会导致曲拉通x-100不能完全裂解红细胞从而使测量结果出现偏差，因此，加入含有胆酸基团的表面活性剂，该表面活性剂的亲油性大于曲拉通x-100，因此血液中的血脂会优先与含有胆酸基团的表面活性剂结合，从而使曲拉通x-100充分地裂解红细胞，释放出来的血红蛋白上结合的有+2价的铁元素，+2价的铁元素会与铁氰化钾反应产生电流，根据检测到的反应电流来得出血红蛋白的浓度。
对于糖化血红蛋白而言，在蛋白酶的作用下，切断糖化血红蛋白β链N端的糖化短肽，糖化短肽在果糖基肽氧化酶的作用下生成过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下与亚铁氰化钾反应产生电流，由于裂解红细胞释放的血红蛋白上存在+2价的铁元素，会造成检测到的电流值偏大，因此需要与血红蛋白检测到的电流做一个差分，排除血红蛋白中+2价铁元素的干扰，通过最终的差分电流和血红蛋白的浓度即可得出糖化血红蛋白的百分比含量；
增加满血电极，当血液吸入反应区3充满反应区3时会导致满血触发电极1导通才开始进行检测，如果血液未吸满，则不会使满血触发电极1导通，则会提示血液未吸满，这样可完全避免在测试过程中因为血液未吸满且未察觉的情况下被不准确的测试结果所误导的风险。
本发明所用的银电极和碳电极来制作测试卡，且所用的试剂大部分都是稳定且价格便宜的，极大地降低了生产成本。
使用时，将血样从采样口5加入即可，加入后血样会由于虹吸作用吸入反应区3，当血样充满反应区3后导致满血触发电极1导通，开始检测，若血样未吸满，则不检测。
实验：
选取有梯度的5个浓度的血液样本，分别用血细胞分析仪测试出血红蛋白的浓度，选本发明实施例一的测试卡，每个样本重复测10次，血红蛋白对应的电流值如下。
测试的数据如表1所示：
表1
通过数据我们可以看出，血红蛋白所对应的电流值重复性(CV)好，血红蛋白的标准曲线如图3所示：从曲线图可以得知，血红蛋白浓度与对应的电流值线性拟合度较好，能够达到0.9963，该曲线就为这批血红蛋白测试卡的标准曲线，测试的反应电流会根据该曲线换算成血红蛋白浓度。
同理：糖化血红蛋白测试的电流值如表2所示：
表2
从数据可以看出，电流值的重复性较好，其标准曲线如图4所示：化血红蛋白的电流值与浓度值的线性拟合度好，能达到0.997，通过检测到的电流通过该标准曲线可得糖化血红蛋白得浓度，在根据检测得到得血红蛋白得浓度，即可得到糖化血红蛋白得百分比含量。
选取同一批测试卡，在选取3个不同浓度的血红蛋白和糖化血红蛋白的血液标本进行测试，测试结果如表3所示：
表3
从数据中我们可以看出，所测得的数据与大型生化分析仪所测出来的结果相比准确度高。
实施例二：
如图1、图2和图5所示，在实施例一的基础之上，采样口5端部设有用于外接采血针的柔性连接头16，柔性连接头16采用硅胶连接头，硅胶连接头的端部用无菌包膜包裹连接头外围；电极层的纵向侧部还有样品预留区，且样品预留区与电极区之间用冲槽白胶层8隔离；样品预留区与电极区之间设有撕裂线13，撕裂线13为压线，并在压线上间断打孔后形成；样品预留区包括有样品预留管14，样品预留管14为塑料管，塑料管的一端与采样口5 连通，并形成预留通道；塑料管的另一端设有负压吸头15。
在使用时，撕开无菌包膜，将硅胶连接头与采血针连接，当医务人员用采血针采血时，血样则由采血针进入硅胶连接头，进入采样口5，并进入反应区3和样品预留区，血样充满反应区3后满血触发电极1导通，进行测试，同时，医务人员按压样品预留管14端部的负压吸头15，血样进入样品预留区的样品预留管14，检测和取样结束后，停止采血，并密封样品预留管14的端部，并从撕裂线13撕开样品预留区作为预留样品。
实施例三：
为了避免测试卡受潮的缺陷，在测试卡的外表面，包括四周、上表面和下表面均包裹一层干燥纸，干燥纸采用无尘纸嵌设吸水树脂制成，或者也可采用无尘纸嵌设氯化钙颗粒，当然，也可采用其他的吸水干燥颗粒。
以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体结构及特性等常识在此未作过多描述，所属领域普通技术人员知晓申请日或者优先权日之前发明所属技术领域所有的普通技术知识，能够获知该领域中所有的现有技术，并且具有应用该日期之前常规实验手段的能力，所属领域普通技术人员可以在本申请给出的启示下，结合自身能力完善并实施本方案，一些典型的公知结构或者公知方法不应当成为所属领域普通技术人员实施本申请的障碍。
本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。
Claims (10)
1.一种同时测量血红蛋白与糖化血红蛋白的电化学测试卡，其特征在于：从下至上依次包括PET基片、电极层、油墨层、冲槽白胶层、亲水膜层和盖片层；电极层包括两组电极区和两个反应区，每组电极区均包括两根反应电极，一根满血触发电极，一根根识别电极和一根开机电极，两个反应区分别为血红蛋白反应区和糖化血红蛋白反应区，每个反应区内均包括有反应药液；油墨层覆盖在电极层上方，油墨层位于开机电极的相对一端端部留有采样口，采样口分别与两组反应区连通，且油墨层漏出电极区和反应区；冲槽白胶层覆盖于电极层上方，并填充于采样口之间，将两个反应区隔离；亲水膜层覆盖于冲槽白胶层上方，且亲水膜层在采样口的上方留有排气孔；盖片层位于亲水膜层上方，并漏出排气孔。
2.根据权利要求1所述的同时测量血红蛋白与糖化血红蛋白的电化学测试卡，其特征在于：所述血红蛋白反应区内的反应药液中包含有：缓冲药液0.1mol/L且PH＝6.8的Tris缓冲液占比、表面活性剂曲拉通x-100、含有胆酸基团的表面活性剂、氯化钠、电子介体铁氰化钾和成膜剂K90；糖化血红蛋白反应区的反应药液中包含有：缓冲溶液0.1mol/L且PH＝6.8的Tris缓冲液、表面活性剂曲拉通x-100、含有胆酸基团的表面活性剂、氯化钠、电子介体亚铁氰化钾、成膜剂、果糖基肽氧化酶和过氧化物酶K90。
3.根据权利要求1所述的同时测量血红蛋白与糖化血红蛋白的电化学测试卡，其特征在于：所述电极区是由导电银浆、导电碳浆和绝缘油墨采用丝网印刷的方式印刷在PET片材上。
4.根据权利要求1所述的同时测量血红蛋白与糖化血红蛋白的电化学测试卡，其特征在于：所述的采样口端部设有用于外接采血针的柔性连接头。
5.根据权利要求1所述的同时测量血红蛋白与糖化血红蛋白的电化学测试卡，其特征在于：所述电极层的纵向侧部还设有样品预留区，且样品预留区与电极区之间用冲槽白胶层隔离。
6.根据权利要求5所述的同时测量血红蛋白与糖化血红蛋白的电化学测试卡，其特征在于：所述的样品预留区包括有样品预留管，样品预留管的一端设有与采样口连通的预留通道，样品预留管的另一端设有负压吸头。
7.根据权利要求4所述的同时测量血红蛋白与糖化血红蛋白的电化学测试卡，其特征在于：所述的柔性连接头端部设有无菌包膜包裹连接头外围。
8.根据权利要求6所述的同时测量血红蛋白与糖化血红蛋白的电化学测试卡，其特征在于：所述的样品预留区与电极区之间设有撕裂线。
9.根据权利要求3所述的同时测量血红蛋白与糖化血红蛋白的电化学测试卡的制备方法，其特征在于：包括以下步骤，
(1)取PET基片，将导电银浆、导电碳浆和绝缘油墨印刷到PET基板上，电极包括两组电极区，每组电极区均包括两根反应电极，一根满血触发电极，一根根识别电极和一根开机电极；两组电极区的反应电极和满血触发电极分别在两个独立的反应区内，形成两个反应区，得电极层；
(2)将绝缘油墨覆盖在电极上面，露出反应区和电极引脚，得油墨层；
(3)将反应区进行亲水处理，以温度为50℃，时间为4min进行烘干；
(4)配制两组反应药液：
血红蛋白反应区的反应药液包括，缓冲药液0.1mol/L且PH＝6.8的Tris缓冲液，表面活性剂曲拉通x-100，含有胆酸基团的表面活性剂，氯化钠，电子介体铁氰化钾，成膜剂K90按照比例配制而成；
糖化血红蛋白反应区的反应药液包括，缓冲溶液按照0.1mol/L且PH＝6.8的Tris缓冲液，表面活性剂曲拉通x-100，含有胆酸基团的表面活性剂，氯化钠，电子介体亚铁氰化钾，成膜剂K90按照比例配制好后，再加入果糖基肽氧化酶和过氧化物酶；
将配制好的两个反应区的反应药液点到两个反应区，点样完成后放进烘道内进行烘干，烘干温度为50℃，时间为20-25min；
(5)烘干完成后，贴上一层冲槽白胶层，然后再贴上一层亲水膜，最后贴上盖片，获得测试卡。
10.根据权利要求9所述的同时测量血红蛋白与糖化血红蛋白的电化学测试卡的制备方法，其特征在于：所述血红蛋白反应区的反应药液中的缓冲药液按照0.1mol/L且PH＝6.8的Tris缓冲液占比80％，表面活性剂曲拉通x-100占比8％，含有胆酸基团的表面活性剂占比4％，氯化钠占比1％，电子介体铁氰化钾占比5％，成膜剂K90占比2％；
糖化血红蛋白反应区的反应药液，缓冲溶为0.1mol/L且PH＝6.8的Tris缓冲液占比80％，表面活性剂曲拉通x-100占比8％，含有胆酸基团的表面活性剂占比4％，氯化钠占比1％，电子介体亚铁氰化钾占比5％，成膜剂K90占比2％。
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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