CN113583944A - 激活Wnt/β-catenin信号通路在提高水牛体外胚胎生产效率中的应用 - Google Patents
激活Wnt/β-catenin信号通路在提高水牛体外胚胎生产效率中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113583944A CN113583944A CN202111080386.8A CN202111080386A CN113583944A CN 113583944 A CN113583944 A CN 113583944A CN 202111080386 A CN202111080386 A CN 202111080386A CN 113583944 A CN113583944 A CN 113583944A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- buffalo
- cumulus
- wnt
- vitro
- embryos
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims abstract description 46
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 title claims abstract description 27
- 102000015735 Beta-catenin Human genes 0.000 title claims abstract description 24
- 108060000903 Beta-catenin Proteins 0.000 title claims abstract description 24
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 45
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 44
- 230000035800 maturation Effects 0.000 claims abstract description 39
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims abstract description 25
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims abstract description 19
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 14
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 210000001771 cumulus cell Anatomy 0.000 claims description 24
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 claims description 19
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 claims description 19
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 claims description 19
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 13
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 10
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 claims description 9
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 claims description 9
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 claims description 9
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 claims description 8
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 claims description 8
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 claims description 8
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 claims description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 7
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 claims description 6
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 claims description 6
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 claims description 5
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 claims description 5
- 229930182833 estradiol Natural products 0.000 claims description 5
- 238000010009 beating Methods 0.000 claims description 4
- 238000007664 blowing Methods 0.000 claims description 4
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 claims description 4
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 3
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 claims 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 claims 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 claims 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 claims 1
- 102000013814 Wnt Human genes 0.000 abstract description 67
- 230000037361 pathway Effects 0.000 abstract description 34
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 abstract description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 41
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 22
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 18
- 230000008777 canonical pathway Effects 0.000 description 14
- 229940121396 wnt pathway inhibitor Drugs 0.000 description 12
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 10
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 8
- 210000002503 granulosa cell Anatomy 0.000 description 8
- 238000011160 research Methods 0.000 description 8
- 241000894007 species Species 0.000 description 7
- 102100035683 Axin-2 Human genes 0.000 description 5
- 102100028914 Catenin beta-1 Human genes 0.000 description 5
- 101000874569 Homo sapiens Axin-2 Proteins 0.000 description 5
- 101000916173 Homo sapiens Catenin beta-1 Proteins 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 5
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 4
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 4
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 3
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 3
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 3
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 4-(4-fluorophenyl)oxane-4-carboxylic acid Chemical compound C=1C=C(F)C=CC=1C1(C(=O)O)CCOCC1 CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- LLSDKQJKOVVTOJ-UHFFFAOYSA-L calcium chloride dihydrate Chemical compound O.O.[Cl-].[Cl-].[Ca+2] LLSDKQJKOVVTOJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000009194 climbing Effects 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 108091008147 housekeeping proteins Proteins 0.000 description 2
- DHRRIBDTHFBPNG-UHFFFAOYSA-L magnesium dichloride hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[Cl-].[Cl-] DHRRIBDTHFBPNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229940005581 sodium lactate Drugs 0.000 description 2
- 235000011088 sodium lactate Nutrition 0.000 description 2
- 239000001540 sodium lactate Substances 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- 101150096411 AXIN2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283725 Bos Species 0.000 description 1
- 101150037241 CTNNB1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100035932 Cocaine- and amphetamine-regulated transcript protein Human genes 0.000 description 1
- 101150108602 DVL1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100039799 Frizzled-6 Human genes 0.000 description 1
- 101000715592 Homo sapiens Cocaine- and amphetamine-regulated transcript protein Proteins 0.000 description 1
- 101000885673 Homo sapiens Frizzled-6 Proteins 0.000 description 1
- 101000867413 Homo sapiens Segment polarity protein dishevelled homolog DVL-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100032758 Segment polarity protein dishevelled homolog DVL-1 Human genes 0.000 description 1
- 230000004156 Wnt signaling pathway Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 229940064549 bovine heparin sodium Drugs 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000002596 lutein cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008182 oocyte development Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000004065 semiconductor Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0608—Germ cells
- C12N5/0609—Oocytes, oogonia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0603—Embryonic cells ; Embryoid bodies
- C12N5/0604—Whole embryos; Culture medium therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/05—Inorganic components
- C12N2500/10—Metals; Metal chelators
- C12N2500/12—Light metals, i.e. alkali, alkaline earth, Be, Al, Mg
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/30—Organic components
- C12N2500/32—Amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/11—Epidermal growth factor [EGF]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/30—Hormones
- C12N2501/31—Pituitary sex hormones, e.g. follicle-stimulating hormone [FSH], luteinising hormone [LH]; Chorionic gonadotropins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/30—Hormones
- C12N2501/38—Hormones with nuclear receptors
- C12N2501/39—Steroid hormones
- C12N2501/392—Sexual steroids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/40—Regulators of development
- C12N2501/415—Wnt; Frizzeled
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及水牛体外胚胎生产技术领域，特别涉及激活Wnt/β‑catenin信号通路在提高水牛体外胚胎生产效率中的应用，本发明针对水牛的Wnt/β‑catenin信号通路进行研究，最终发现，Wnt通路的抑制剂会降低水牛卵母细胞的成熟率，而Wnt通路的激活剂能提高水牛卵母细胞的成熟率。为此，申请人通过在水牛卵母细胞成熟液中添加Wnt通路激活剂氯化锂(LiCl)来实现提高水牛卵母细胞的成熟率、水牛胚胎分裂率和水牛胚胎囊胚率的目的，从而对水牛体外胚胎生产效率起到了良好的促进作用。
Description
【技术领域】
本发明涉及水牛体外胚胎生产技术领域，特别涉及激活Wnt/β-catenin信号通路在提高水牛体外胚胎生产效率中的应用。
【背景技术】
繁殖效率低下是目前水牛产业化发展的瓶颈，而利用体外胚胎生产这类繁殖新技术可以一定程度上提高水牛良种胚胎供应能力，本领域技术人员的长期研究发现，不同物种之间的体外胚胎发育能力不同，同为牛属，但水牛卵母细胞的体外发育潜能仍远低于黄牛。经研究，水牛卵母细胞的体外成熟率约为50-65％，而黄牛卵母细胞的体外成熟率约为80-90％；水牛卵母细胞的体外囊胚率约为18-25％，而黄牛卵母细胞的体外囊胚率约为30-45％。正是由于水牛的体外胚胎生产效率低，限制了水牛体外繁殖在水牛产业化的推广应用。
申请人一直致力于提高水牛胚胎的体外发育能力，现有技术中报道Wnt/β-catenin信号家族成员是卵巢功能调控的重要因素，Wnt通路影响雌激素的生成并调控卵泡刺激素(FSH)的作用，然而对小鼠的研究却表明其卵母细胞的成熟并不依赖Wnt通路，在鼠体内过表达β-catenin还会阻断卵母细胞的减数分裂成熟；而在某些猪物种中，研究发现WNT/β-catenin特异性抑制剂FH535可以促进猪卵母细胞的成熟；而在申请人的后期研究中发现，在水牛物种中并不存在上述效果。因此，由于Wnt通路连锁基因的相对复杂，WNT/β-catenin通路在不同物种之间的差异巨大。为此，有必要针对Wnt通路对水牛卵母细胞发育潜能的影响进行研究，找出一种适合水牛物种体外胚胎发育的方法，提高水牛的体外繁殖率。
【发明内容】
鉴于上述内容，有必要针对Wnt通路对水牛卵母细胞发育潜能的影响进行研究，找出一种适合水牛物种体外胚胎发育的方法，提高水牛的体外繁殖效率。
为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：
激活Wnt/β-catenin信号通路在提高水牛体外胚胎生产效率中的应用，在体外环境下，通过添加Wnt/β-catenin信号通路的激活剂来激活Wnt/β-catenin信号通路从而促进水牛卵母细胞的成熟和之后的胚胎发育效率。
进一步的，所述激活Wnt/β-catenin信号通路的激活剂为氯化锂。
本发明还包括一种提高水牛外胚胎的生产效率的方法，所述方法为：
(1)获取水牛卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte-complexes，COCs)；
(2)将步骤(1)获取的复合体放入成熟培养液中进行体外成熟培养；所述成熟培养液中应用了所述激活Wnt/β-catenin信号通路的激活剂；
(3)成熟培养24h后取水牛卵丘-卵母细胞复合体(COCs)转入覆盖石蜡油的IVM液微滴内，培养22-24h；
(4)将步骤(3)成熟的水牛卵丘-卵母细胞复合体(COCs)转入体外受精(IVF)液微滴中，与水牛精子共同孵育22-24h，完成体外受精；
(5)将步骤(4)受精后的水牛卵丘-卵母细胞复合体(COCs)用胚胎培养液清洗3次后，用卵丘细胞单层液替代胚胎培养液对清洗后的受精卵进行胚胎培养，即得水牛的体外胚胎。
进一步的，所述步骤(2)的成熟培养液其组分由如下成分组成：体积百分比为10％的胎牛血清(FBS)、5ng/mL的卵泡刺激素(FSH)、10ng/mL的黄体生成素(LH)、0.2mM的丙酮酸钠、1μg/mL的雌二醇(E2)、50μM半胱氨酸、25ng/mL的表皮生长因子(EGF)、10μM的氯化锂(LiCl)；余量为TCMl99培养液。
进一步的，所述步骤(5)的卵丘细胞单层制备方法为：将屠宰场获得的水牛卵丘-卵母细胞复合体(COCs)成熟培养24h后，取2-3个卵丘细胞扩展良好的水牛卵丘-卵母细胞复合体(COCs)，转入覆盖石蜡油的40μL胚胎培养液微滴内，用100μL枪头吹打使卵丘细胞均匀分布于微滴内，培养2-4天，使卵丘细胞在微滴内生长到100％汇集，得到胚胎培养用的卵丘细胞单层。
本发明具有如下有益效果：
1、本发明针对水牛的Wnt/β-catenin信号通路进行研究，最终发现，Wnt通路的抑制剂会降低水牛卵母细胞的成熟率，而Wnt通路的激活剂能提高水牛卵母细胞的成熟率，且上述差异达到极显著水平，为此，申请人针对该原理，通过在水牛卵母细胞成熟液中添加Wnt通路激活剂氯化锂(LiCl)来实现提高水牛卵母细胞成熟率的效果，从而达到提高水牛的体外胚胎生产效率的目的。经过检测，成熟液中添加Wnt通路激活剂氯化锂(LiCl)后，水牛卵母细胞的成熟率达到90.01±9.33％；水牛胚胎分裂率达到65.22±7.45％；水牛胚胎囊胚率达到47.38±3.75％；均显著高于未添加激活剂的对照组，对水牛体外胚胎生产效率起到了良好的促进作用。
【附图说明】
图1为Wnt经典通路抑制剂(IWR-1)对基础的和FSH诱发的颗粒细胞E2生成和增殖的影响图；其中，A为：Wnt经典通路抑制剂(IWR-1)对基础和FSH诱发的颗粒细胞E2生成能力的影响；B为：Wnt经典通路抑制剂(IWR-1)对基础和FSH诱发的颗粒细胞增殖能力的影响。
图2为Wnt经典通路抑制剂(IWR-1)对FSH靶基因mRNA表达的影响图；其中，A为：1μM的Wnt通路抑制剂(IWR-1)对CYP19A1在mRNA表达水平的影响；B为：1μM的Wnt通路抑制剂(IWR-1)对CCND2在mRNA表达水平的影响；C为：1μM的Wnt通路抑制剂(IWR-1)对CARTPT在mRNA表达水平的影响。
图3为Wnt经典通路抑制剂对Wnt通路活性的影响图；其中，A为：Wnt通路抑制剂(IWR-1)对Wnt通路成员AXIN2蛋白表达量的影响；B为：Wnt通路抑制剂(IWR-1)对Wnt通路成员CTNNB1蛋白表达量的影响；C为：不同条件下IWR-1处理后AXIN2和CTNNB1蛋白及看家蛋白ACTIN的蛋白免疫印迹图。
图4为Wnt经典通路抑制剂(IWR-1)对水牛卵母细胞成熟效果的影响图；
图5为Wnt经典通路抑制剂(IWR-1)对水牛卵母细胞内Wnt通路成员表达的影响图；
图6为Wnt通路激活剂(LiCl)对水牛卵母细胞成熟率的影响图；
图7为Wnt通路激活剂(LiCl)对水牛胚胎分裂率的影响图；
图8为Wnt通路激活剂(LiCl)对水牛胚胎囊胚率的影响图。
【具体实施方式】
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。
实施例1：
本实施例为Wnt/β-catenin信号家族成员对水牛卵巢功能的影响研究：
根据前人的研究经验，目前现有技术中有报道：Wnt/β-catenin信号家族成员是卵巢功能调控的重要因素，Wnt通路影响雌激素的生成并调控FSH的作用。在牛优势卵泡选择期，Wnt通路的CTNNB1基因、AXIN2基因和DVL1基因的表达都受到短暂调控，证明Wnt通路调节FSH诱导的雌二醇生成，参与卵泡发生。有研究表明LH处理牛黄体细胞也会引起CTNNB1升高，下调Wnt信号通路成分表达，增加孕酮含量。我们之前的研究也报道了优势化早期，最大卵泡中的DVL1和FZD6的mRNA表达水平高于，而AXIN2低于次大卵泡，为此，申请人利用Wnt的抑制剂处理水牛颗粒细胞，研究抑制剂对相关基因和雌激素的影响，具体结果参见图1-图3：
图1为Wnt经典通路抑制剂(IWR-1)对基础的和FSH诱发的颗粒细胞E2生成和增殖的影响图；；
图中A为：Wnt经典通路抑制剂(IWR-1)对基础和FSH诱发的颗粒细胞E2生成能力的影响；
B为：Wnt经典通路抑制剂(IWR-1)对基础和FSH诱发的颗粒细胞增殖能力的影响。
图2为Wnt经典通路抑制剂(IWR-1)对FSH靶基因mRNA表达的影响图；
图中A为：1μM的Wnt通路抑制剂(IWR-1)对CYP19A1在mRNA表达水平的影响；
B为：1μM的Wnt通路抑制剂(IWR-1)对CCND2在mRNA表达水平的影响；
C为：1μM的Wnt通路抑制剂(IWR-1)对CARTPT的mRNA表达水平的影响。图3为Wnt经典通路抑制剂对Wnt通路活性的影响图；
图中A为：Wnt通路抑制剂(IWR-1)对Wnt通路成员AXIN2蛋白表达量的影响；
B为：Wnt通路抑制剂(IWR-1)对Wnt通路成员CTNNB1蛋白表达量的影响；
C为：不同条件下IWR-1处理后AXIN2和CTNNB1蛋白及看家蛋白ACTIN的蛋白免疫印迹图。
以上的研究说明Wnt通路通过调控颗粒细胞的功能参与了水牛卵泡优势化。而与此同时，文献报道在体外培养条件下牛卵母细胞和卵丘细胞的β-catenin含量都会升高，体外阻断Wnt通路可以阻断卵母细胞从GV期发育到MII期，说明Wnt信号通路是牛卵母细胞成熟所必需的。Wnt通路的作用在物种间却有很大差异。因此我们进一步研究了Wnt通路对水牛卵母细胞发育潜能的影响。
当添加1μM的Wnt通路抑制剂(IWR-1)后，对水牛卵母细胞的影响如图4-图5所示：
其中，图4为Wnt经典通路抑制剂(IWR-1)对水牛卵母细胞成熟效果的影响图；
从图4中可见，对照(Control组)的水牛卵母细胞成熟率显著高于抑制剂(IWR-1)组，其中，对照(Control组)的成熟率为59.46±10.42％；抑制剂(IWR-1)组的成熟率为19.69±7.97％。
而图5为Wnt经典通路抑制剂(IWR-1)对水牛卵母细胞内Wnt通路成员表达的影响图；
从图中可见，抑制剂(IWR-1)组添加后，显著降低了其中的Wnt通路成员的mRNA表达水平，且差异显著(p<0.01)。
而这与现有技术《WNT信号通路对猪卵母细胞体外成熟的影响》一文中记录的“WNT/β-catenin特异性抑制剂FH535可以促进猪卵母细胞的成熟及提高其早期胚胎发育的能力”(该文摘要部分)的结论相反，由此，更加推定，不同物种之间Wnt通路对卵母细胞发育的影响是不一样的。
而根据Wnt通路抑制剂(IWR-1)对水牛卵母细胞成熟效果有抑制作用，由此我们推断Wnt通路的激活剂可以促进水牛卵母细胞的成熟率，从而提高卵母细胞受精后的发育潜能，继而提高水牛体外胚胎的生产效率。
实施例2：
根据实施例1的研究发现：Wnt经典通路抑制剂(IWR-1)对水牛卵母细胞的成熟率有降低作用，为此，为了提高水牛卵母细胞的成熟率从而提高水牛体外胚胎的生产效率，申请人采用Wnt通路激活剂---LiCl(氯化锂)来促进水牛卵母细胞成熟，提高水牛的体外胚胎生产效率，具体的步骤如下：
1、卵母细胞的获取：
将屠宰场卵巢或活体采卵获得的水牛卵丘-卵母细胞复合体(COCs)按照一下标准分级：A级：卵胞质均匀且包裹4层以上卵丘细胞；B级：卵胞质均匀且包裹3-4层卵丘细胞；C级：卵胞质均匀且包裹1-2层卵丘细胞；D级：裸卵；E级：卵丘细胞扩散成网状。挑选A-C级的COCs进行体外成熟培养。
2、成熟培养液的准备：
常规的对照组成熟培养液为(Control组)：体积百分比为10％的胎牛血清(FBS)、5ng/mL的卵泡刺激素(FSH)、10ng/mL的黄体生成素(LH)、0.2mM的丙酮酸钠、1μg/mL的雌二醇(E2)、50μM半胱氨酸、25ng/mL的表皮生长因子(EGF)；余量为TCMl99培养液。
LiCl组成熟培养液为(LiCl组)：体积百分比为10％的胎牛血清(FBS)、5ng/mL的卵泡刺激素(FSH)、10ng/mL的黄体生成素(LH)、0.2mM的丙酮酸钠、1μg/mL的雌二醇(E2)、50μM半胱氨酸、25ng/mL的表皮生长因子(EGF)、10μM的氯化锂(LiCl)；余量为TCMl99缓冲液。
3、卵母细胞的成熟：
每10-20个COCs转入覆盖石蜡油的40μL的成熟卵培养液(IVM液)微滴内，在38.5℃、5％CO2、饱和湿度的条件下培养22-24h。
4、体外受精：
将0.25mL的细管冻精解冻后在爬高液中培养30min，取上清夜260g离心5min，而后用受精液(IVF液)离心洗涤一次，然后加入40μL含卵母细胞的受精液(IVF液)滴中，调整精子浓度约为1×106个/mL，精卵共同孵育22-24h；
上述步骤中，爬高液由如下成分组成：质量百分数为0.3％的牛血清蛋白(BSA)，余量为改良的台式液(Tyrode’s液)：其中，台式液(Tyrode’s液)由如下成分组成：113.8NaCl+3.2mM KCI+0.3mM NaH2PO4.H2O+0.5mM MgCl2.6H2O+2mM CaCl2.2H2O+25mM NaHCO3+2mM丙酮酸钠+1.5mM赖氨酸+5mM Hepes+1.4％(v/v)乳酸钠)；
受精液(IVF液)由如下成分组成：60μg/mL肝素钠、质量百分数为0.3％的牛血清蛋白(BSA)，余量为改良的台式液(Tyrode’s液)：其中，台式液(Tyrode’s液)由如下成分组成：113.8NaCl+3.2mM KCI+0.3mM NaH2PO4.H2O+0.5mM MgCl2.6H2O+2mM CaCl2.2H2O+25mMNaHCO3+2mM丙酮酸钠+1.5mM赖氨酸+5mM Hepes+1.4％(v/v)乳酸钠)。
5、卵丘细胞单层液的准备：
将屠宰场获得的水牛卵丘-卵母细胞复合体(COCs)成熟培养24h后，取2-3个扩展良好的水牛卵丘-卵母细胞复合体(COCs)，转入覆盖石蜡油的40μL胚胎培养液微滴内，用100μL枪头吹打使卵丘细胞均匀分布于微滴内，培养2-4天，使卵丘细胞在微滴内生长到100％汇集，用作胚胎培养用卵丘细胞单层液。
其中，上述的胚胎培养液由如下成分组成：体积百分比为10％的胎牛血清(FBS)；余量为TCM199培养液。
6、体外胚胎培养：
将步骤4受精后的受精卵用胚胎培养液清洗3次后，用步骤5的卵丘细胞单层液替代胚胎培养液对清洗后的受精卵进行胚胎培养，在38.5℃、5％CO2、饱和湿度的条件下培养，即得水牛的体外胚胎；培养过程中，受精后48h记录分裂率，6-8天记录囊胚率。
上述培养得到的结果如图6-图8所示：
图6为Wnt通路激活剂(LiCl)对水牛卵母细胞成熟率的影响图：
从图中可见，成熟液添加LiCl后卵母细胞成熟率达到90.01±9.33％；显著高于未添加LiCl的Control组(59.59±10.42％)(p<0.01)；
图7为Wnt通路激活剂(LiCl)对水牛胚胎分裂率的影响图：
从图中可见，添加LiCl成熟的卵母细胞受精后分裂率达到65.22±7.45％；显著高于未添加LiCl的Control组(48.78±6.92％)(p<0.01)；
图8为Wnt通路激活剂(LiCl)对水牛胚胎囊胚率的影响图：
从图中可见，添加LiCl成熟的卵母细胞受精后培养的囊胚率达到47.38±3.75％；显著高于未添加LiCl的Control组(27.07±3.60％)(p<0.01)。
综上所述，本申请的Wnt通路激活剂LiCl能有效提高水牛卵母细胞的成熟率、水牛胚胎的分裂率和水牛胚胎的囊胚率，有效提高了水牛体外胚胎生产效率。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (5)
1.激活Wnt/β-catenin信号通路在提高水牛体外胚胎生产效率中的应用，其特征在于，在体外环境下，通过添加Wnt/β-catenin信号通路的激活剂来激活Wnt/β-catenin信号通路从而促进水牛卵母细胞的成熟并提高之后的胚胎发育效率。
2.根据权利要求1所述激活Wnt/β-catenin信号通路在提高水牛体外胚胎生产效率中的应用，其特征在于，所述激活Wnt/β-catenin信号通路的激活剂为氯化锂。
3.一种提高水牛外胚胎的生产效率的方法，其特征在于，所述方法为：
(1)获取水牛卵丘-卵母细胞复合体；
(2)将步骤(1)获取的复合体放入成熟培养液中进行体外成熟培养；所述成熟培养液中应用了如权利要求1或2任意一项所述激活Wnt/β-catenin信号通路的激活剂；
(3)取水牛卵丘-卵母细胞复合体转入覆盖石蜡油的IVM液微滴内，培养22-24h；
(4)将步骤(3)成熟的水牛卵丘-卵母细胞复合体转入体外受精(IVF)液微滴中，与水牛精子共同孵育22-24h，完成体外受精；
(5)将步骤(4)受精后的水牛卵丘-卵母细胞复合体吹打去除卵丘细胞后，用胚胎培养液清洗3次，转入含卵丘细胞单层的胚胎培养液微滴进行胚胎培养，即得水牛体外生产胚胎。
4.根据权利要求3所述的一种提高水牛外胚胎的生产效率的方法，其特征在于，所述步骤(2)的成熟培养液其组分由如下成分组成：体积百分比为10％的胎牛血清、5ng/mL的卵泡刺激素、10ng/mL的黄体生成素、0.2mM的丙酮酸钠、1μg/mL的雌二醇、50μM半胱氨酸、25ng/mL的表皮生长因子、10μM的氯化锂；余量为TCMl99培养液。
5.根据权利要求3所述的一种提高水牛外胚胎的生产效率的方法，其特征在于，所述步骤(5)的卵丘细胞单层制备方法为：将屠宰场获得的水牛卵丘-卵母细胞复合体成熟培养24h后，取2-3个卵丘细胞扩展良好的水牛卵丘-卵母细胞复合体，转入覆盖石蜡油的40μL胚胎培养液微滴内，用100μL枪头吹打使卵丘细胞均匀分布于微滴内，培养2-4天，使卵丘细胞在微滴内生长到100％汇集，得到胚胎培养用的卵丘细胞单层。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111080386.8A CN113583944B (zh) | 2021-09-15 | 2021-09-15 | 激活Wnt/β-catenin信号通路在提高水牛体外胚胎生产效率中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111080386.8A CN113583944B (zh) | 2021-09-15 | 2021-09-15 | 激活Wnt/β-catenin信号通路在提高水牛体外胚胎生产效率中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113583944A true CN113583944A (zh) | 2021-11-02 |
| CN113583944B CN113583944B (zh) | 2023-07-21 |
Family
ID=78241875
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111080386.8A Active CN113583944B (zh) | 2021-09-15 | 2021-09-15 | 激活Wnt/β-catenin信号通路在提高水牛体外胚胎生产效率中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113583944B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116445396A (zh) * | 2023-04-07 | 2023-07-18 | 中国农业大学 | 一种wnt2用于提高体外受精胚胎发育效率和质量的新用途 |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007062198A1 (en) * | 2005-11-21 | 2007-05-31 | Advanced Cell Technology, Inc. | Methods to accelerate the isolation of novel cell strains from pluripotent stem cells and cells obtained thereby |
| CN102140435A (zh) * | 2010-11-22 | 2011-08-03 | 广西大学 | 一种提高水牛体外胚胎生产效率的方法 |
| WO2013090787A1 (en) * | 2011-12-14 | 2013-06-20 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Stimulation of ovarian follicle development and oocyte maturation |
| CN104312971A (zh) * | 2014-11-04 | 2015-01-28 | 广西大学 | 促进水牛卵母细胞体外成熟的方法 |
| CN105132361A (zh) * | 2015-07-29 | 2015-12-09 | 广西壮族自治区水牛研究所 | 一种提高水牛活体采卵胚胎生产效率的方法 |
| CN106535630A (zh) * | 2014-04-28 | 2017-03-22 | 重组股份有限公司 | 猪中的多重基因编辑 |
| CN110438068A (zh) * | 2019-08-02 | 2019-11-12 | 广西壮族自治区水牛研究所 | 一种提高河流型水牛体外受精胚胎发育率的方法 |
| CN113174366A (zh) * | 2021-03-29 | 2021-07-27 | 广西壮族自治区畜牧研究所 | 含有丁苯羟酸的猪卵母细胞体外成熟体系及应用 |
-
2021
- 2021-09-15 CN CN202111080386.8A patent/CN113583944B/zh active Active
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007062198A1 (en) * | 2005-11-21 | 2007-05-31 | Advanced Cell Technology, Inc. | Methods to accelerate the isolation of novel cell strains from pluripotent stem cells and cells obtained thereby |
| CN102140435A (zh) * | 2010-11-22 | 2011-08-03 | 广西大学 | 一种提高水牛体外胚胎生产效率的方法 |
| WO2013090787A1 (en) * | 2011-12-14 | 2013-06-20 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Stimulation of ovarian follicle development and oocyte maturation |
| CN106535630A (zh) * | 2014-04-28 | 2017-03-22 | 重组股份有限公司 | 猪中的多重基因编辑 |
| CN104312971A (zh) * | 2014-11-04 | 2015-01-28 | 广西大学 | 促进水牛卵母细胞体外成熟的方法 |
| CN105132361A (zh) * | 2015-07-29 | 2015-12-09 | 广西壮族自治区水牛研究所 | 一种提高水牛活体采卵胚胎生产效率的方法 |
| CN110438068A (zh) * | 2019-08-02 | 2019-11-12 | 广西壮族自治区水牛研究所 | 一种提高河流型水牛体外受精胚胎发育率的方法 |
| CN113174366A (zh) * | 2021-03-29 | 2021-07-27 | 广西壮族自治区畜牧研究所 | 含有丁苯羟酸的猪卵母细胞体外成熟体系及应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ARMANDO ARROYO: "Luteinizing Hormone Action in Human Oocyte Maturation and Quality: Signaling Pathways, Regulation, and Clinical Impact", 《REPROD SCI》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116445396A (zh) * | 2023-04-07 | 2023-07-18 | 中国农业大学 | 一种wnt2用于提高体外受精胚胎发育效率和质量的新用途 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113583944B (zh) | 2023-07-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU650616B2 (en) | Derivation of pluripotential embryonic cell lines from domestic animals | |
| Izquierdo et al. | Effect of culture media on embryo development from prepubertal goat IVM-IVF oocytes | |
| Kautz et al. | Expression of genes involved in the embryo–maternal interaction in the early-pregnant canine uterus | |
| US6107543A (en) | Culture of totipotent embryonic inner cells mass cells and production of bovine animals | |
| Abe et al. | Bovine oviductal epithelial cells: their cell culture and applications in studies for reproductive biology | |
| CN113583944A (zh) | 激活Wnt/β-catenin信号通路在提高水牛体外胚胎生产效率中的应用 | |
| Hasler et al. | In vitro fertilization | |
| Zhang et al. | Research progress and application prospects of stable porcine pluripotent stem cells | |
| Saenz-de-Juano et al. | Effect of different culture systems on mRNA expression in developing rabbit embryos | |
| Kim et al. | The use of embryonic stem cell derived bioactive material as a new protein supplement for the in vitro culture of bovine embryos | |
| WO2021258423A1 (zh) | 一种无血清的牛卵母细胞体外成熟培养液及卵母细胞培养方法 | |
| Yoshioka et al. | Effects of activin A and follistatin on developmental kinetics of bovine embryos: cinematographic analysis in a chemically defined medium | |
| Sugimura et al. | Interspecies somatic cell nucleus transfer with porcine oocytes as recipients: A novel bioassay system for assessing the competence of canine somatic cells to develop into embryos | |
| KR102469369B1 (ko) | 인터루킨 (Interleukin, IL)-7을 포함하는 포유동물 수정란의 체외배양용 배지 조성물 | |
| CN116761894A (zh) | 胚胎孪生化方法 | |
| Contramaestre et al. | Secretion of stem cell factor and granulocyte–macrophage colony-stimulating factor by mouse embryos in culture: influence of group culture | |
| WO2021227225A1 (zh) | 一种提高牛体外受精胚和克隆胚的发育质量的培养液 | |
| RU2823596C1 (ru) | Способ получения in vitro эмбрионов крупного рогатого скота | |
| KR20080077738A (ko) | 돼지 미성숙란의 체외배양 방법 | |
| JP3771500B2 (ja) | 無血清培地−無フィーダー細胞系を用いた哺乳動物胚由来未分化細胞の培養及び細胞株樹立方法 | |
| Bhuiyan et al. | Effects of fructose supplementation in chemically defined protein-free medium on development of bovine in vitro fertilized embryos | |
| CN117412668A (zh) | 家畜体外育种系统和方法 | |
| CN114908041B (zh) | 用于小鼠卵母细胞体外成熟的培养系统及方法 | |
| US20040082062A1 (en) | Method and medium for in vitro culture of human embryos | |
| MOHSHINA et al. | EFFECTS OF DIFFERENT CO-CULTURE ON BOVINE IN VITRO EMBRYO PRODUCTION: AN OVERVIEW |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract | ||
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Application publication date: 20211102 Assignee: Cenxi Qiliao Agricultural Development Co.,Ltd. Assignor: GUANGXI ZHUANG AUTONOMOUS REGION BUFFALO INSTITUTE Contract record no.: X2023980045747 Denomination of invention: Activate Wnt/ b- Application of Catenin signaling pathway in improving the efficiency of in vitro embryo production in water buffalo Granted publication date: 20230721 License type: Common License Record date: 20231106 |