CN113577395B - 一种水凝胶人造血管及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种水凝胶人造血管及其制备方法，所述人造血管为双层结构，内层为两性离子水凝胶，外层为聚N‑丙烯酰基甘氨酰胺(PNAGA)水凝胶；所述两性离子水凝胶的两性离子选自甲基丙烯酰乙基磺基甜菜碱、2‑甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱、甲基丙烯酰乙基羧酸甜菜碱、甲基丙烯酰乙基三氟丙基羧酸甜菜碱中的一种或几种。本发明的技术方案可有效解决人造血管在使用过程中的血液相容性、顺应性、生物相容性和机械性能等问题，有望在血管外科领域得到广泛应用。

Description

一种水凝胶人造血管及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种人造血管的技术领域，更具体的说是涉及一种水凝胶人造血管及其制备方法。

背景技术

世界卫生组织最新统计显示，心血管疾病是全球发病率与死亡率最高的疾病之一，因心血管疾病死亡人数约占死亡构成比的30％左右，严重威胁人类健康。我国心血管疾病发展趋势更为严峻，据《中国心血管病报告2019》显示，我国现有心血管疾病患者约2.9亿人，并呈快速增长趋势。血管移植和血管重建修复是心血管疾病的主要或辅助治疗手段。另外，终末期肾病患者需要动静脉造瘘进行透析治疗。虽然自体血管是受损血管的理想替代品，但是不仅来源有限，而且存在二次创伤和并发症的危害。因此，如何制得符合临床要求的人造血管一直是国际上的研究热点。

为更好地治疗血管疾病，改进人造血管的物理性能、化学性能及生物相容性，各国科学家们对人工血管的材料和制备方法进行了大量的研究与改进。人造血管已经历持续的研究和发展，目前常用的人造血管材料包括涤纶、聚四氟乙烯、聚氨酯和天然桑蚕丝等。

涤纶力学性能优秀、化学性能稳定、组织相容性优越、血液相容性差。植入涤纶人工血管后，血液可以快速地流入血管壁的微孔中，形成一层凝血层，这有利于平滑肌细胞和内皮细胞的覆盖和生长，但凝血不可分解，难以被机体完全消化、吸收。因此，涤纶人工血管被广泛应用于大血管的置换手术，而小口径的涤纶人工血管存在术后短期内易形成血栓及内皮化效果不佳等问题。此外，涤纶人工血管的网眼孔径较大，为预防手术过程中血液渗出过多，涤纶人工血管还需提前进行预凝处理。

聚四氟乙烯材料过去在中、小口径人工血管中使用较为广泛。聚四氟乙烯人工血管具有良好的生物相容性和抗血栓形成能力，但血管质地较硬，顺应性较差，不易于手术缝合，植入后血管通畅性较低，尤其是口径小于6mm的小口径聚四氟乙烯人工血管，其术后血管通畅性更低。当前，对膨体聚四氟乙烯人工血管进行表面改性以提高其抗凝性能，是其研究的重点。

聚氨酯材料具有优秀的抗疲劳性、弹性和顺应性，用其制造的人工血管本身也具有更好的生物相容性和抗血栓形成能力，且经动物试验发现，与聚四氟乙烯人工血管相比，聚氨酯人工血管植入后能在较短的时间内观察到人工血管的内皮化，新生内膜的厚度也更厚。但是，聚氨酯材料在体内依然存在炎症反应诱导的降解和钙化，影响其长期使用的稳定性。

天然桑蚕丝人工血管使用经特殊处理的天然桑蚕丝为原料，是经针织技术制成的一种筒状结构物，并经过了保护处理以防血液外漏。天然桑蚕丝人工血管口径可低至1mm，不易生成血栓，且天然的蛋白质结构具有极好的组织相容性和生物安全性，但由于制备的天然桑蚕丝网状结构不够稳定，易导致血管吸瘪，保形性差，且强度较低，这限制了天然桑蚕丝人工血管的临床应用。

总之，目前已商业化的人造血管，依然存在各种各样的问题。理想的人造血管，应具备以下特点：具备有良好的血液和组织相容性；与健康天然血管相近似的力学性能；不易形成血栓，长期保持通畅；具有与天然血管类似的自愈合能力，避免吻合针孔渗血和穿刺渗血；不易发生退行性改变，性能稳定；耐受血管内压力，不易形成动脉瘤；受压后不易变形或扭折成角；不引起异物反应或排斥反应；足够的牵拉强度，不易撕裂；能选择不同的口径和长度。

因此，结合上述问题，迫切需要突破人造血管的关键技术，提供一种具有良好的血液和组织相容性、力学性能和长期体内稳定性等性质的人造血管，满足临床上对不同口径和性能的人造血管的要求，是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种水凝胶人造血管及其制备方法。本发明利用两性离子水凝胶制成人造血管的内层，使人造血管的管腔具有超亲水性，以及比天然血管内皮表面更佳的超润滑性，使人造血管具有超强的抗蛋白粘附能力，力求达到血液成分零粘附，从而避免人造血管壁血栓的形成。其对于小口径血管尤为重要，小口径人工血管血流慢，即使是少量的纤维蛋白原在人工血管表面黏附都可能导致血小板聚集和血栓形成。利用氢键交联的大强度PNAGA水凝胶作为人造血管的外层，使人造血管具有很好的顺应性、机械性能和缝合强度，在使用过程中不易变形或扭折成角，针穿刺后不渗血；另外，其微孔的尺寸小于细胞尺寸，能够避免炎症细胞的浸润，降低炎症反应，避免组织成纤维细胞和平滑肌细胞等的浸润，避免增生和狭窄，使人造血管具有良好的组织相容性。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种水凝胶人造血管，所述人造血管为双层结构，内层为两性离子水凝胶，外层为PNAGA水凝胶；所述两性离子水凝胶的两性离子选自甲基丙烯酰乙基磺基甜菜碱、2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱、甲基丙烯酰乙基羧酸甜菜碱、甲基丙烯酰乙基三氟丙基羧酸甜菜碱中的一种或几种。

优选的，所述内层还包括交联剂，所述交联剂选自N,N-亚甲基双丙烯酰胺、N,N-双(丙烯酰)胱胺、乙二醇二甲基丙烯酸酯、双甲基丙烯酰乙基羧酸甜菜碱中的一种或几种。

通过采用上述优选方案，本发明的有益效果在于：

两性离子水凝胶内层，是由甲基丙烯酰乙基磺基甜菜碱(SBMA)，2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱(PBMA)，甲基丙烯酰乙基羧酸甜菜碱(CBMA)，甲基丙烯酰乙基三氟丙基羧酸甜菜碱(CBF3MA)中的一种或几种成分经化学交联获得，几种成分均具有良好的血液相容性，具有卓越的抗蛋白吸附性能，可以确保抗血栓性能。

优选的，所述内层中，两性离子的质量百分比浓度为5％-80％，交联剂的质量百分比浓度为0.5％-5％。

优选的，所述内层的厚度为100-500μm，平均孔径为5-50μm。

通过采用上述优选方案，本发明的有益效果在于：

能够仿生天然血管内皮层，为人造血管提供足够的血液相容性。

优选的，所述外层中的PNAGA的质量百分比浓度为20％-50％。

通过采用上述优选方案，本发明的有益效果在于：

大强度PNAGA水凝胶外层，是由N-丙烯酰基甘氨酰胺单体水溶液经自由基聚合制备，由于多重氢键交联，使人造血管具有很好的顺应性和机械性能，在使用过程中不易变形或扭折成角，且针穿刺后不易渗血。

优选的，所述外层的厚度为200-700μm，平均孔径为0.1-10μm。

通过采用上述优选方案，本发明的有益效果在于：

人造血管外层的厚度为200-700μm，可以确保人造血管的弹性。平均孔径为0.1-10μm，能够避免炎症细胞的浸润，降低炎症反应，能够避免组织成纤维细胞和平滑肌细胞等的浸润，避免增生和狭窄。

优选的，所述人造血管的内径为2-46mm，所述人造血管的壁厚为300-1200μm。

通过采用上述优选方案，本发明的有益效果在于：

人造血管的内径为2-46mm，为人体内常用的人造血管直径。管壁厚度为300-1200μm，厚度大于200μm，确保人造血管的强度，使其在体内使用时，不会由于受压而破损，避免对患者造成二次伤害；人造血管的内径为2-46mm，为人体内常用的人造血管直径。管壁厚度为300-1200μm，厚度大于200μm，确保人造血管的强度，使其在体内使用时，不会由于受压而破损，避免对患者造成二次伤害；厚度小于1400μm，在确保基本性能的情况下不使血管壁过厚，由于人造血管在体内是异物，过厚的管壁会对患者造成不适感，不利与人体内血管的吻合，且过厚的管壁会影响血管的顺应性。

一种水凝胶人造血管的制备方法，具体步骤如下：

S1，在氩气保护条件下，在模具中注入两性离子单体、交联剂和自由基聚合引发剂过硫酸铵的水分散液，设置温度50-70℃，无氧条件下聚合4-8h，得到两性离子水凝胶的内层；

S2，在氩气保护条件下，采用模具套管，在步骤S1中得到的内层外部，注入PNAGA和自由基聚合引发剂过硫酸铵的水分散液，设置温度50-70℃，无氧条件下聚合4-8h，得到双层结构的水凝胶人造血管。

优选的，所述制备方法通过控制制备两性离子水凝胶内层模具的轴径控制人造血管的内径，通过控制轴径与套管之间的内径差，控制两性离子水凝内层的厚度；通过控制两性离子水凝内层与第二步中套管之间的内径差，控制水凝胶人造血管外层的厚度，双层结构水凝胶人造血管的厚度即为内层和外层厚度之和；双层结构水凝胶人造血管的外径即为第二步中套管的内径。

通过采用上述技术特征，本发明的有益效果在于：

本发明制备的水凝胶人造血管通过双层结构的功能发挥，可有效解决人造血管在使用过程中的血液相容性、顺应性、生物相容性和机械性能等问题，有望在血管外科领域得到广泛应用。本方法操作工艺简单，可重复性好，经济效益高，具有良好的应用前景。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面对实施例描述中所需附图作简单介绍，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。

图1为本发明水凝胶人造血管的制备模具图；

图2为本发明实施例3的水凝胶人造血管截面结构示意图(图2a)，加工模具示意图(图2b)；

图3为本发明实施例3的水凝胶人造血管截面的扫描电子显微镜图；

图4为本发明实施例3的水凝胶人造血管牵拉强度测试曲线；

图5为本发明实施例3-6的水凝胶人造血管和天然血管的爆破压测试；

图6为本发明实施例5的水凝胶人造血管和天然血管的顺应性测试；

图7为本发明实施例3、实施例5的水凝胶人造血管和天然血管的相容性测试，溶血率图(图7a)，凝血酶原时间图(图7b)，活化部分凝血活酶时间图(图7c)；

图8为本发明实施例5的水凝胶人造血管的组织相容性评价。

具体实施方式

下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1：

如图2所示，本发明实施例1公开了一种水凝胶人造血管及其制备方法，采用的技术方案如下：

一种水凝胶人造血管的制备方法，具体步骤如下：

S1，在氩气保护条件下，在模具中注入两性离子单体、交联剂和自由基聚合引发剂过硫酸铵的水分散液，设置温度60℃，无氧条件下聚合6 h，得到两性离子水凝胶的内层；

S2，在氩气保护条件下，采用模具套管，在步骤S1中得到的内层外部，注入PNAGA和自由基聚合引发剂过硫酸铵的水分散液，设置温度60℃，无氧条件下聚合6h，得到双层结构的水凝胶人造血管。

一种水凝胶人造血管，成品参数：内径2-46 mm；壁厚300-1200μm。

如图1所示，如式1，通过控制制备两性离子水凝胶内层模具的轴径控制人造血管的内径；如式2，通过控制轴径与步骤S1中套管之间的内径差，控制两性离子水凝内层的厚度；如式3，通过控制两性离子水凝内层与步骤S2中套管之间的内径差，控制水凝胶人造血管外层的厚度；如式4，双层结构水凝胶人造血管的厚度即为内层和外层厚度之和；如式5，双层结构水凝胶人造血管的外径即为步骤S2中套管的内径。

人造血管内径＝φ1 式1

人造血管内层厚度＝φ2-φ1 式2

人造血管外层厚度＝φ3-φ2 式3

人造血管厚度＝φ3-φ1 式4

人造血管外径＝φ5 式5

实施例2：

本发明实施例2公开了一种水凝胶人造血管，采用的技术方案如下：

一种人造血管，为双层水凝胶空心圆管结构，其中，内层为两性离子水凝胶，两性离子甲基丙烯酰乙基羧酸甜菜碱(CBMA)的质量百分比浓度为5％，交联剂N,N-亚甲基双丙烯酰胺(MBA)的质量百分比浓度为1％，内径为3 mm，内层厚度为100μm；外层为聚N-丙烯酰基甘氨酰胺(PNAGA)水凝胶，外层PNAGA的质量百分比浓度为20％，厚度为200μm；人造血管的壁厚为300μm。

实施例3：

本发明实施例3公开了一种水凝胶人造血管，采用的技术方案如下：

一种人造血管，为双层水凝胶空心圆管结构，其中，内层为两性离子水凝胶，两性离子甲基丙烯酰乙基磺基甜菜碱(SBMA)的质量百分比浓度为50％，交联剂N,N-双(丙烯酰)胱胺(MSBA)的质量百分比浓度为3％，内径为3mm，内层厚度为300μm；外层为聚N-丙烯酰基甘氨酰胺(PNAGA)水凝胶，外层PNAGA的质量百分比浓度为20％，厚度为300μm；人造血管的壁厚为600μm。

实施例4：

本发明实施例4公开了一种水凝胶人造血管，采用的技术方案如下：

一种人造血管，为双层水凝胶空心圆管结构，其中，内层为两性离子水凝胶，两性离子2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱(PBMA)的质量百分比浓度为20％，交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯(EBA)的质量百分比浓度为2％，内径为10mm，内层厚度为300μm；外层为聚N-丙烯酰基甘氨酰胺(PNAGA)水凝胶，外层PNAGA的质量百分比浓度为30％，厚度为400μm；人造血管的壁厚为700μm。

实施例5：

本发明实施例5公开了一种水凝胶人造血管，采用的技术方案如下：

一种人造血管，为双层水凝胶空心圆管结构，其中，内层为两性离子水凝胶，两性离子甲基丙烯酰乙基三氟丙基羧酸甜菜碱(CBF3MA)的质量百分比浓度为60％，交联剂双甲基丙烯酰乙基羧酸甜菜碱(CBBA)的质量百分比浓度为0.5％，内径为30mm，内层厚度为400μm；外层为聚N-丙烯酰基甘氨酰胺(PNAGA)水凝胶，外层PNAGA的质量百分比浓度为40％，厚度为600μm；人造血管的壁厚为1000μm。

实施例6：

本发明实施例6公开了一种水凝胶人造血管，采用的技术方案如下：

一种人造血管，为双层水凝胶空心圆管结构，其中，内层为两性离子水凝胶，两性离子甲基丙烯酰乙基羧酸甜菜碱(CBMA)的质量百分比浓度为80％，交联剂双甲基丙烯酰乙基羧酸甜菜碱(CBBA)的质量百分比浓度为5％，内径为40mm，内层厚度为200μm；外层为聚N-丙烯酰基甘氨酰胺(PNAGA)水凝胶，外层PNAGA的质量百分比浓度为45％，厚度为1000μm；人造血管的壁厚为1200μm。

实施例7：

本发明实施例7公开了一种水凝胶人造血管，采用的技术方案如下：

一种人造血管，为双层水凝胶空心圆管结构，其中，内层为两性离子水凝胶，两性离子甲基丙烯酰乙基三氟丙基羧酸甜菜碱(CBF3MA)的质量百分比浓度为60％，交联剂N,N-亚甲基双丙烯酰胺(MBA)的质量百分比浓度为3％，内径为46mm，内层厚度为200μm；外层为聚N-丙烯酰基甘氨酰胺(PNAGA)水凝胶，外层PNAGA的质量百分比浓度为50％，厚度为1000μm；人造血管的壁厚为1200μm。

实施例8：

利用扫描电子显微镜(SEM,S-4800,Hitachi)，对实施例3中人造血管截面的微观形貌进行评价。具体的，将人工血管在液氮中迅速冷冻，在冷冻干燥机中冷冻干燥完全后获取截面，采用SEM观察断面的结构形态。如图3所示，人造血管界面表现为明显的双层结构，并且，内层的孔径约为20μm，外层的孔径约为2μm，质地均匀。

实施例9

实施例3中人造血管牵拉强度测试。通过人工血管的缝线牵拉强度测试，评价人工血管吻合口的耐缝合强度和吻合口断裂强度。沿轴向截取一段长度约为20mm的样本，使用6-0尼龙缝线在距伸直样本一端2mm处插入，穿过血管壁缝合成一个半环。调整环的方向使缝线与待测血管轴向分别成0°、45°或90°，以150mm/min的速率拉伸缝线，记录将缝线从血管假体中拉出，或导致血管假体壁损坏的拉力大小。如图4所示，实施例3中人造血管的牵拉强度为252gf，能够满足血管吻合的要求。

实施例10

实施例3，实施例4，实施例5和实施例6中人造血管爆破压测试。通过爆破压测试，评价人工血管的耐压能力。将待测的人工血管，一端封住以防止漏水，然后将待测血管样本管腔注满蒸馏水促使其达到有效长度，另一端装备有连续增压装置和压力传感器。当所有测试条件完备，以一定的速度(kPa/s)连续增压，当血管样本破裂时，记录此时瞬间压力即为血管样本爆破压。如图5所示，实施例3，4，5，6中人造血管爆破压为1600mmHg，能够耐受血液压力，满足人造血管的需要。

实施例11

实施例5中人造血管顺应性测试。取一定规格的人造血管，一端用与其内径相匹配的塞子封闭，并将其用0.46N的力拉紧，另一端连接连续增压装置和压力传感器。人造血管样本里面装满蒸馏水并用连续增压装置增压，记录传感器显示压力为6.65Kpa和26.6Kpa时的外直径。内径和壁厚可按上述方法在自然状态下测得。如图6所示，实施例5中人造血管顺应性约为5％，与天然血管具有良好的匹配性。

实施例12

实施例3和实施例5中人造血管血液相容性测试。

①溶血率测试：通过溶血率测试，评价人造血管血细胞(主要是红细胞)的破坏程度。将待测人造血管装入试管内，加0.9％NaCl溶液10mL；阳性对照采用蒸馏水，阴性对照为0.9％的NaCl溶液。采用新鲜ACD抗凝兔血(血:3.8％柠檬酸钠＝4:1)，全部试管放入37℃水浴中预温30min，各加稀释新鲜抗凝兔血0.2mL(兔血:生理盐水＝4:5)，继续37℃水浴中保温1h，离心5min(2500r/min)，取上清液,在分光光度计545nm处测取各管吸光度值。溶血率＝(样品吸光度-阳性对照吸光度)/(阴性对照吸光度-阳性对照吸光度)。若溶血率<5％，则说明人造血管符合医用材料的溶血率要求。如图7a所示，实施例3和实施例5中人造血管的溶血率低于1％，符合医用材料的溶血率要求。

②凝血酶原时间：利用凝血酶原时间试验，评价人造血管对凝血酶原因子的激活所致的凝血时间的影响。将材料涂于玻璃管内壁，玻璃试管、硅化玻璃试管为对照。采用Quick氏法，试材管内加入富血小板血浆(Platelet-rich-plasma,PRP)，再加入0.1mL兔脑浸提液，置于37℃水浴2min；加入已预温37℃的0.025mol/L CaCl2溶液0.1mL，同时计时，立即摇动数次，浸入水浴；5～8s从水浴移出试管，连续倾斜，至出现凝块，为凝固时间。各试验管和对照管，均取3次以上的平均值。如图7b所示，实施例3和实施例5中人造血管的凝血酶原时间与天然血管相比，没有显著性差异，表明人造血管对凝血酶原因子的激活所致的凝血时间没有明显影响。

③活化部分凝血活酶时间：通过活化部分凝血活酶时间试验，评价人造血管对内源性凝血因子的激活程度，从而评价其对凝血时间的影响。将人造血管剪成0.5cm×0.5cm的小条置于小烧杯底部的中心，在37℃恒温5min后，向薄膜中心注入0.25mL柠檬酸钠抗凝兔血，恒温5min后，向血液中注入0.02mL CaCl2水溶液(0.2mol/L)，开始记时，摇晃小烧杯1min，使CaCl2与血混和均匀，盖好烧杯再恒温5min，取出烧杯，向烧杯中加入50mL蒸馏水，摇晃小烧杯10min，取上清液，用分光光度计测量血水在540nm处的吸光度。以含0.25mL全血的50mL蒸馏水作为对照，其相对吸光度作为100％。其抗凝血性能＝(Is/Iw)×100％。式中，Is为血液和CaCl2的混和液与样品接触设定时间后血液的相对吸光度；Iw为血液与一定量的蒸馏水混和后的相对吸光度。如图7c所示，实施例3和实施例5中人造血管的活化部分凝血活酶时间与天然血管相比，没有显著性差异，表明人造血管对内源性凝血因子的激活没有明显影响。

实施例13

实施例5中人造血管组织相容性测试。在无菌操作条件下，将灭菌后的实施例5中的人造血管植入小鼠(6周龄，雄性)背部皮下组织处，尼龙4-0无菌带针缝合线缝合手术切口，苦味酸溶液擦拭包埋位置附近进行标记。体内埋植8周后，材料和周围组织一起取出，浸泡在4％的多聚甲醛溶液中进行固定，然后石蜡包埋、切片，最后用苏木精-伊红(H&E)染色和MASSON三色染色法进行染色、拍照、观察、组织学分析。如图8所示，实施例5中人造血管皮下埋植8周后，没有对接触组织造成明显的炎症反应，具有良好的组织相容性。

本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。

对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (3)

1.一种水凝胶人造血管，其特征在于，所述人造血管为双层结构，内层为两性离子水凝胶，外层为PNAGA水凝胶；所述两性离子水凝胶的两性离子选自甲基丙烯酰乙基磺基甜菜碱、2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱、甲基丙烯酰乙基羧酸甜菜碱、甲基丙烯酰乙基三氟丙基羧酸甜菜碱中的一种或几种；

其中，所述内层还包括交联剂，所述交联剂选自N,N-亚甲基双丙烯酰胺、N,N-双(丙烯酰)胱胺、乙二醇二甲基丙烯酸酯、双甲基丙烯酰乙基羧酸甜菜碱中的一种或几种；

所述内层中，两性离子的质量百分比浓度为5％-80％，交联剂的质量百分比浓度为0.5％-5％；所述内层的厚度为100-500μm，平均孔径为5-50μm；所述外层中的PNAGA的质量百分比浓度为20％-50％；所述外层的厚度为200-700μm，平均孔径为0.1-10μm。

2.根据权利要求1所述的一种水凝胶人造血管，其特征在于，所述人造血管的内径为2-46mm，所述人造血管的壁厚为300-1200μm。

3.根据权利要求1-2任一项所述的水凝胶人造血管的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

S1，在氩气保护条件下，在模具中注入两性离子单体、交联剂和自由基聚合引发剂过硫酸铵的水分散液，设置温度50-70℃，无氧条件下聚合4-8h，得到两性离子水凝胶的内层；

S2，在氩气保护条件下，采用模具套管，在步骤S1中得到的内层外部，注入PNAGA和自由基聚合引发剂过硫酸铵的水分散液，设置温度50-70℃，无氧条件下聚合4-8h，得到双层结构的水凝胶人造血管。

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