CN113576963B - 一种用于牛油果树提取物的提取方法及所得的提取物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种用于牛油果树提取物的提取方法，包括以下步骤：1)取牛油果树原料，干燥，粉碎，过筛，加正己烷浸泡，过滤，弃滤液，干燥；2)加提取液中进行超声提取，提取液为40～60wt％磷酸氢二钾水溶液和无水乙醇混合溶液；3)超声结束后，离心得上清液，浓缩，得浓缩物；4)浓缩物用大孔吸附树脂洗脱，先用水洗脱，收集水洗脱物，然后用体积浓度40～50％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱物；5)乙醇洗脱物浓缩后用葡聚糖凝胶洗脱，洗脱液为甲醇，得甲醇洗脱物；6)合并水洗脱物和甲醇洗脱物，干燥，得目标产物。本发明通过超声、大孔树脂、葡聚糖凝胶等手段的有机结合实现对牛油果树中具有良好保湿性和吸湿性成分的提取，该方法操作简便，成本较低，有利于产业化生产。

Description

一种用于牛油果树提取物的提取方法及所得的提取物
技术领域
本发明涉及植物提取物的分离、提取技术领域，具体涉及一种用于牛油果树提取物的提取方法及所得的提取物。
背景技术
牛油果(Butyrospermum parkii Kotschy)为山榄科牛油果属植物，又名油梨、酪梨，主要分布于非洲热带，中国广东、海南、福建、云南等地有引种栽培。其果实含丰富的维生素、脂肪和蛋白质，是一种营养价值很高的水果，除作生果食用外也可作菜肴和罐头。牛油果含油量高，可为皮肤补充脂质成分，具有保湿功效，因此，其广泛应用于护肤品等领域。在医药方面，有研究认为牛油果可减轻肝病，牛油果树提取物还可以辅助治疗皮炎等皮肤疾病(含马齿苋及牛油果树提取物的医学护肤品辅助治疗特应性皮炎的临床观察，杨雪源)。牛油果在食品、药品、化妆品等领域被广泛应用。
牛油果树提取物在护肤品、药品领域已经得到一定的应用，但是目前鲜见关于牛油果树提取物的提取方法，此外，由于牛油果果肉、果仁富含甘油酸、蛋白质等多种功效成分，因此牛油果树的提取方法中主要集中于对牛油果果肉、果仁功效物质的提取，而对于牛油果树树叶而言，其功效还没有被很好的发掘，因此，牛油果树树叶提取物及其提取方法至今没有得到很好的开发和应用。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种用于牛油果树提取物的提取方法及所得提取物。
本发明技术方案主要包括以下内容：
一种用于牛油果树提取物的提取方法，包括以下步骤：
(1)取牛油果树原料，干燥，粉碎，过筛，加正己烷浸泡，过滤，弃滤液，干燥；
(2)取步骤(1)所得物料，加提取液中进行超声提取，其中，提取液为40～60wt％磷酸氢二钾水溶液和无水乙醇混合溶液；
(3)步骤(2)超声结束后，离心，得上清液，将上清液浓缩，得浓缩物；
(4)步骤(3)所得浓缩物用大孔吸附树脂洗脱，先用水洗脱，收集水洗脱物，然后用体积浓度40～50％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱物；
(5)将步骤(4)所得乙醇洗脱物浓缩，浓缩物用葡聚糖凝胶洗脱，洗脱液为甲醇，得甲醇洗脱物；
(6)合并步骤(4)水洗脱物和步骤(5)甲醇洗脱物，干燥，得目标产物。
优选的，所述牛油果树原料为牛油果肉、果仁或牛油果树叶。
优选的，所述牛油果肉为成熟牛油果的果肉，所述牛油果树叶为至少3年生牛油果树的树叶。
优选的，所述大孔吸附树脂包括D101型和/或D4006型。
优选的，步骤(2)为：取步骤(1)所得物料，按料液比1g/20～30mL加至提取液中进行超声提取，其中，提取液为40～60wt％磷酸氢二钾水溶液和无水乙醇按体积比6～7:3～4混合的溶液，提取液用氢氧化钾调节pH为8～9，超声温度控制在30～60℃，超声时间20～30min，超声功率400～600W。
优选的，步骤(4)为：步骤(3)所得浓缩物用大孔吸附树脂洗脱，每5～10g浓缩物先用水洗脱3～4个柱体积，收集水洗脱物，然后用体积浓度40～50％乙醇溶液洗脱3～4个柱体积，收集乙醇洗脱物。
优选的，步骤(5)为：将步骤(4)所得乙醇洗脱物浓缩至原体积的30～50％，每5～10g浓缩物用葡聚糖凝胶Sephadex LH-20洗脱3～4柱体积，洗脱液为甲醇，以1个柱体积为1个流分，收集第3～7流分，合并第3～7流分，得甲醇洗脱物。
优选的，步骤(4)水洗脱物和步骤(5)甲醇洗脱物的质量比为1:1～2。
另一方面，本发明提供由上述提取方法所得的提取物。该提取物具有良好的吸湿性和保湿性，适用于产品的保湿剂，可应用于化妆品等领域。
本发明所取得的效果：
本发明提供了一种牛油果树提取物的提取方法，通过超声、大孔树脂、葡聚糖凝胶等手段的有机结合实现对牛油果树中具有良好保湿性和吸湿性成分的提取，该方法操作简便，成本较低，有利于产业化生产。
牛油果是富含脂类物质的食品，其油脂成分常被用于护肤品中，作为保湿剂使用，其保湿机理为油脂保湿，主要是利用油脂的封闭性减少水分的散失。牛油果树中还含有酚类、多糖等成分，酚类以游离形式存在，或与蛋白、多糖结合存在。本发明从牛油果树叶和果肉中提取得到大量具有良好保湿和吸湿性能的成分，实现对牛油果树的综合、全面的开发利用。
本发明产品保湿性能和吸湿性能优异，吸湿性优于透明质酸，保湿性也与透明质酸相当，可以作为透明质酸的替代品。
附图说明
图1和图2为实施例、对比例样品的吸湿率和保湿率测定结果统计图。
具体实施方式
为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。
实施例1
一种用于牛油果树提取物的提取方法，包括以下步骤：
(1)取成熟牛油果的果肉，置于60℃条件下烘至恒重，粉碎，过40目筛，加5倍质量的正己烷浸泡脱脂，50目筛过滤，弃滤液，干燥去除正己烷；
(2)取步骤(1)所得物料，按料液比1g/20mL加至提取液中进行超声提取，其中，提取液为60wt％磷酸氢二钾水溶液和无水乙醇按体积比7:3混合的溶液，提取液用氢氧化钾调节pH为8.3，超声温度控制在60℃，超声时间20min，超声功率600W，超声频率20kHz；
(3)步骤(2)超声结束后，4000rpm离心5min，得上清液，将上清液浓缩至原体积的40％，得浓缩物；
(4)将10g步骤(3)所得浓缩物用大孔吸附树脂D101洗脱，柱体积为500mL，径高比1:8，先用水洗脱4个柱体积，收集水洗脱物，然后用体积浓度50％乙醇溶液洗脱4个柱体积，收集乙醇洗脱物；
(5)将步骤(4)所得乙醇洗脱物浓缩至原体积的30％，将10g浓缩物用葡聚糖凝胶Sephadex LH-20洗脱4个柱体积，洗脱液为甲醇，柱体积为500mL，径高比1:10；以1个柱体积为1个流分，收集第3～7流分，合并第3～7流分，得甲醇洗脱物；
(6)将步骤(4)水洗脱物和步骤(5)甲醇洗脱物按质量比1:1混合，干燥去除水及甲醇，得目标产物。
实施例2：
一种用于牛油果树提取物的提取方法，包括以下步骤：
(1)取成熟牛油果的果肉，置于60℃条件下烘至恒重，粉碎，过40目筛，加5倍质量的正己烷浸泡脱脂，50目筛过滤，弃滤液，干燥去除正己烷；
(2)取步骤(1)所得物料，按料液比1g/20mL加至提取液中进行超声提取，其中，提取液为40wt％磷酸氢二钾水溶液和无水乙醇按体积比6:4混合的溶液，提取液用氢氧化钾调节pH为8.5，超声温度控制在60℃，超声时间20min，超声功率600W，超声频率20kHz；
(3)步骤(2)超声结束后，4000rpm离心5min，得上清液，将上清液浓缩至原体积的40％，得浓缩物；
(4)将10g步骤(3)所得浓缩物用大孔吸附树脂D101洗脱，柱体积为500mL，径高比1:8，先用水洗脱4个柱体积，收集水洗脱物，然后用体积浓度50％乙醇溶液洗脱4个柱体积，收集乙醇洗脱物；
(5)将步骤(4)所得乙醇洗脱物浓缩至原体积的30％，将10g浓缩物用葡聚糖凝胶Sephadex LH-20洗脱4个柱体积，洗脱液为甲醇，柱体积为500mL，径高比1:10；以1个柱体积为1个流分，收集第3～7流分，合并第3～7流分，得甲醇洗脱物；
(6)将步骤(4)水洗脱物和步骤(5)甲醇洗脱物按质量比1:1混合，干燥去除水及甲醇，得目标产物。
实施例3
一种用于牛油果树提取物的提取方法，包括以下步骤：
(1)取成熟牛油果的果肉，置于60℃条件下烘至恒重，粉碎，过40目筛，加10倍质量的正己烷浸泡脱脂，50目筛过滤，弃滤液，干燥去除正己烷；
(2)取步骤(1)所得物料，按料液比1g/30mL加至提取液中进行超声提取，其中，提取液为50wt％磷酸氢二钾水溶液和无水乙醇按体积比7:3混合的溶液，提取液用氢氧化钾调节pH为9.0，超声温度控制在45℃，超声时间30min，超声功率40W，超声频率30kHz；
(3)步骤(2)超声结束后，4000rpm离心5min，得上清液，将上清液浓缩至原体积的50％，得浓缩物；
(4)将5g步骤(3)所得浓缩物用大孔吸附树脂D4006洗脱，柱体积为500mL，径高比1:8，先用水洗脱3个柱体积，收集水洗脱物，然后用体积浓度40％乙醇溶液洗脱3个柱体积，收集乙醇洗脱物；
(5)将步骤(4)所得乙醇洗脱物浓缩至原体积的50％，将5g浓缩物用葡聚糖凝胶Sephadex LH-20洗脱3个柱体积，洗脱液为甲醇，柱体积为500mL，径高比1:10；以1个柱体积为1个流分，收集第3～7流分，合并第3～7流分，得甲醇洗脱物；
(6)将步骤(4)水洗脱物和步骤(5)甲醇洗脱物按质量比1:1混合，干燥去除水及甲醇，得目标产物。
实施例4
一种用于牛油果树提取物的提取方法，包括以下步骤：
(1)取3年生牛油果树的树叶，置于60℃条件下烘至恒重，粉碎，过40目筛，加5倍质量的正己烷浸泡脱脂，50目筛过滤，弃滤液，干燥去除正己烷；
(2)取步骤(1)所得物料，按料液比1g/20mL加至提取液中进行超声提取，其中，提取液为60wt％磷酸氢二钾水溶液和无水乙醇按体积比7:3混合的溶液，提取液用氢氧化钾调节pH为8.3，超声温度控制在60℃，超声时间20min，超声功率600W，超声频率20kHz；
(3)步骤(2)超声结束后，4000rpm离心5min，得上清液，将上清液浓缩至原体积的40％，得浓缩物；
(4)将10g步骤(3)所得浓缩物用大孔吸附树脂D101洗脱，柱体积为500mL，径高比1:8，先用水洗脱4个柱体积，收集水洗脱物，然后用体积浓度50％乙醇溶液洗脱4个柱体积，收集乙醇洗脱物；
(5)将步骤(4)所得乙醇洗脱物浓缩至原体积的30％，将10g浓缩物用葡聚糖凝胶Sephadex LH-20洗脱4个柱体积，洗脱液为甲醇，柱体积为500mL，径高比1:10；以1个柱体积为1个流分，收集第3～7流分，合并第3～7流分，得甲醇洗脱物；
(6)将步骤(4)水洗脱物和步骤(5)甲醇洗脱物按质量比1:1混合，干燥去除水及甲醇，得目标产物。
实施例5
一种用于牛油果树提取物的提取方法，包括以下步骤：
(1)取3年生牛油果树的树叶，置于60℃条件下烘至恒重，粉碎，过40目筛，加5倍质量的正己烷浸泡脱脂，50目筛过滤，弃滤液，干燥去除正己烷；
(2)取步骤(1)所得物料，按料液比1g/20mL加至提取液中进行超声提取，其中，提取液为60wt％磷酸氢二钾水溶液和无水乙醇按体积比7:3混合的溶液，提取液用氢氧化钾调节pH为8.3，超声温度控制在60℃，超声时间20min，超声功率600W，超声频率20kHz；
(3)步骤(2)超声结束后，4000rpm离心5min，得上清液，将上清液浓缩至原体积的40％，得浓缩物；
(4)将10g步骤(3)所得浓缩物用大孔吸附树脂D101洗脱，柱体积为500mL，径高比1:8，先用水洗脱4个柱体积，收集水洗脱物，然后用体积浓度50％乙醇溶液洗脱4个柱体积，收集乙醇洗脱物；
(5)将步骤(4)所得乙醇洗脱物浓缩至原体积的30％，将10g浓缩物用葡聚糖凝胶Sephadex LH-20洗脱4个柱体积，洗脱液为甲醇，柱体积为500mL，径高比1:10；以1个柱体积为1个流分，收集第3～7流分，合并第3～7流分，得甲醇洗脱物；
(6)将步骤(4)水洗脱物和步骤(5)甲醇洗脱物按质量比1:2混合，干燥去除水及甲醇，得目标产物。
对比例1
一种用于牛油果树提取物的提取方法，包括以下步骤：
(1)取成熟牛油果的果肉，置于60℃条件下烘至恒重，粉碎，过40目筛，加5倍质量的正己烷浸泡脱脂，50目筛过滤，弃滤液，干燥去除正己烷；
(2)取步骤(1)所得物料，按料液比1g/20mL加至提取液中进行超声提取，其中，提取液为60wt％磷酸氢二钾水溶液，提取液用氢氧化钾调节pH为8.5，超声温度控制在60℃，超声时间20min，超声功率600W，超声频率20kHz；
(3)步骤(2)超声结束后，4000rpm离心5min，得上清液，将上清液浓缩至原体积的40％，得浓缩物；
(4)将10g步骤(3)所得浓缩物用大孔吸附树脂D101洗脱，柱体积为500mL，径高比1:8，先用水洗脱4个柱体积，收集水洗脱物，然后用体积浓度50％乙醇溶液洗脱4个柱体积，收集乙醇洗脱物；
(5)将步骤(4)所得乙醇洗脱物浓缩至原体积的30％，将10g浓缩物用葡聚糖凝胶Sephadex LH-20洗脱4个柱体积，洗脱液为甲醇，柱体积为500mL，径高比1:10；以1个柱体积为1个流分，收集第3～7流分，合并第3～7流分，得甲醇洗脱物；
(6)将步骤(4)水洗脱物和步骤(5)甲醇洗脱物按质量比1:1混合，干燥去除水及甲醇，得目标产物。
对比例2
一种用于牛油果树提取物的提取方法，包括以下步骤：
(1)取成熟牛油果的果肉，置于60℃条件下烘至恒重，粉碎，过40目筛，加5倍质量的正己烷浸泡脱脂，50目筛过滤，弃滤液，干燥去除正己烷；
(2)取步骤(1)所得物料，按料液比1g/20mL加至提取液中进行超声提取，其中，提取液为无水乙醇，提取液用氢氧化钾调节pH为8.3，超声温度控制在60℃，超声时间20min，超声功率600W，超声频率20kHz；
(3)步骤(2)超声结束后，4000rpm离心5min，得上清液，将上清液浓缩至原体积的40％，得浓缩物；
(4)每10g步骤(3)所得浓缩物用大孔吸附树脂D101洗脱，柱体积为500mL，径高比1:8，先用水洗脱4个柱体积，收集水洗脱物，然后用体积浓度50％乙醇溶液洗脱4个柱体积，收集乙醇洗脱物；
(5)将步骤(4)所得乙醇洗脱物浓缩至原体积的30％，每10g浓缩物用葡聚糖凝胶Sephadex LH-20洗脱4个柱体积，洗脱液为甲醇，柱体积为500mL，柱的径高比1:10；以1个柱体积为1个流分，收集第3～7流分，合并第3～7流分，得甲醇洗脱物；
(6)将步骤(4)水洗脱物和步骤(5)甲醇洗脱物按质量比1:1混合，干燥去除水及甲醇，得目标产物。
对比例3
一种用于牛油果树提取物的提取方法，包括以下步骤：
(1)取成熟牛油果的果肉，置于60℃条件下烘至恒重，粉碎，过40目筛，加5倍质量的正己烷浸泡脱脂，50目筛过滤，弃滤液，干燥去除正己烷；
(2)取步骤(1)所得物料，按料液比1g/20mL加至提取液中进行超声提取，其中，提取液为60wt％磷酸氢二钾水溶液和无水乙醇按体积比7:3混合的溶液，提取液用氢氧化钾调节pH为8.4，超声温度控制在60℃，超声时间20min，超声功率600W，超声频率20kHz；
(3)步骤(2)超声结束后，4000rpm离心5min，得上清液，将上清液浓缩至原体积的40％，得浓缩物；
(4)每10g步骤(3)所得浓缩物用大孔吸附树脂D101洗脱，柱体积为500mL，径高比1:8，先用水洗脱4个柱体积，收集水洗脱物，然后用体积浓度50％乙醇溶液洗脱4个柱体积，收集乙醇洗脱物；
(5)将步骤(4)所得乙醇洗脱物浓缩至原体积的30％，每10g浓缩物用葡聚糖凝胶Sephadex LH-20洗脱4柱体积，洗脱液为70％乙醇水溶液，柱体积为500mL，径高比1:10；以1个柱体积为1个流分，收集第3～7流分，合并第3～7流分，得乙醇洗脱物；
(6)将步骤(4)水洗脱物和步骤(5)乙醇洗脱物按质量比1：1混合，干燥去除水及乙醇，得目标产物。
对比例4
一种用于牛油果树提取物的提取方法，包括以下步骤：
(1)取成熟牛油果的果肉，置于60℃条件下烘至恒重，粉碎，过40目筛，加5倍质量的正己烷浸泡脱脂，50目筛过滤，弃滤液，干燥去除正己烷；
(2)取步骤(1)所得物料，按料液比1g/20mL加至提取液中进行超声提取，其中，提取液为60wt％磷酸氢二钾水溶液和无水乙醇按体积比7:3混合的溶液，提取液用氢氧化钾调节pH为8.3，超声温度控制在60℃，超声时间20min，超声功率600W，超声频率20kHz；
(3)步骤(2)超声结束后，4000rpm离心5min，得上清液，将上清液浓缩至原体积的40％，得浓缩物；
(4)每10g步骤(3)所得浓缩物用大孔吸附树脂D101洗脱，柱体积为500mL，径高比1:8，先用水洗脱4个柱体积，收集水洗脱物，然后用体积浓度50％乙醇溶液洗脱4个柱体积，收集乙醇洗脱物；
(5)将步骤(4)水洗脱物和乙醇洗脱物按质量比1:1混合，干燥去除水及乙醇，得目标产物。
试验例：保湿、吸湿性能检测
1.吸湿率测定
准确称取0.5g样品均匀置于直径25mm的扁形称量瓶中，放入相对湿度81％的干燥器(内置硫酸铵饱和溶液)内，并于25℃条件下进行吸湿实验，以透明质酸为对照。在第4、6、8、10、12和24h将扁形称量瓶取出称重，根据以下公式计算吸湿率：
吸湿率(％)＝(mn-m0)/m0×100
式中：m0为样品初始质量，mn为放置n小时后的样品质量。
2.保湿率测定
称取0.5g样品放入直径为25mm的称量瓶中，加入样品质量20％的去离子水，轻晃称量瓶约1min，然后将其放入底部装有200g干硅胶的干燥器内，并于25℃条件下进行实验，以透明质酸为对照。在第4、6、8、10、12和24h将称量瓶取出称重，按公式计算保湿率；
保湿率(％)＝mn/m0×100％
式中：m0为样品初始含水质量，mn为放置n小时后的样品含水质量
3.结果与分析
结果见图1和图2
结果显示，实施例的吸湿率和保湿率均明显优于对比例，与透明质酸相比，实施例的吸湿率明显较好，24h透明质酸的吸湿率为21％，而实施例24h的吸湿率36～43％(p＜0.01)。在保湿性方面，透明质酸表现出最好的保湿性能，实施例和对比例的保湿性能均低于透明质酸，但是相比而言，实施例的保湿性能优于对比例，特别是实施例4和实施例5的保湿曲线与透明质酸最为接近，可见，本发明所得提取物可以作为透明质酸的替代品。
对比实施例4、5和实施例1，结果显示，牛油果树叶提取物的保湿性和吸湿性要优于牛油果果肉提取物。
对比实施例1与对比例1～2，结果显示，步骤(2)以磷酸氢二钾水溶液与乙醇混合提取的样品的吸湿性和保湿性要明显优于单一的磷酸氢二钾水溶液或单一的无水乙醇提取物。
对比例3结果显示，步骤(5)甲醇洗脱物的吸湿和保湿性能优于乙醇洗脱物。
对比例4结果显示，步骤(4)乙醇洗脱物未经进一步的葡聚糖凝胶洗脱，直接将步骤(4)的乙醇洗脱物与水洗脱物混合时，可能由于有效成分含量减少，导致各项性能降低。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，但并不构成对本发明的限定，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种用于牛油果树提取物的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）取牛油果树原料，干燥，粉碎，过筛，加正己烷浸泡，过滤，弃滤液，干燥；所述牛油果树原料为牛油果肉、果仁或牛油果树叶；所述牛油果肉为成熟牛油果的果肉，所述牛油果树叶为至少3年生牛油果树的树叶；
（2）取步骤（1）所得物料，按料液比1g/20~30mL加至提取液中进行超声提取，其中，提取液为40~60wt%磷酸氢二钾水溶液和无水乙醇按体积比6~7:3~4混合的溶液，提取液用氢氧化钾调节pH为8~9，超声温度控制在30~60℃，超声时间20~30min，超声功率400~600W；
（3）步骤（2）超声结束后，离心，得上清液，将上清液浓缩，得浓缩物；
（4）步骤（3）所得浓缩物用大孔吸附树脂洗脱，每5~10g浓缩物先用水洗脱3~4个柱体积，收集水洗脱物，然后用体积浓度40~50%乙醇溶液洗脱3~4个柱体积，收集乙醇洗脱物；所述大孔吸附树脂包括D101型和/或D4006型；
（5）将步骤（4）所得乙醇洗脱物浓缩至原体积的30~50%，每5~10g浓缩物用葡聚糖凝胶Sephadex LH-20 洗脱3~4柱体积，洗脱液为甲醇，以1个柱体积为1个流分，收集第3~7流分，合并第3~7流分，得甲醇洗脱物；
（6）合并步骤（4）水洗脱物和步骤（5）甲醇洗脱物，步骤（4）水洗脱物和步骤（5）甲醇洗脱物的质量比为1:1~2。
2.采用权利要求1所述的提取方法所得的提取物。
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