CN113567579B - 一种评价饮料酒饮后代谢速率和舒适度的方法 - Google Patents

一种评价饮料酒饮后代谢速率和舒适度的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种评价饮料酒饮后代谢速率和舒适度的方法，属于挥发性成分检测领域。本方法利用固相萃取及液液萃取技术对灌胃酒样后的大鼠血浆样本中的高级醇进行萃取，并采用GC‑MS对萃取物进行定性定量分析。该方法提高了血浆样本高级醇含量的可检测度，同时无需衍生化等复杂操作，可以对血液中的多种高级醇，包括正丙醇、异丁醇、正丁醇、异戊醇、正己醇、苯乙醇等进行定性及定量分析，建立了大鼠血浆高级醇含量‑时间曲线，发现了酒后血液高级醇含量的峰值，为了解饮酒后高级醇在体内的代谢规律以及进一步分析高级醇和醉酒、“上头”之间的联系提供了依据。

Description

一种评价饮料酒饮后代谢速率和舒适度的方法
技术领域
本发明涉及一种评价饮料酒饮后代谢速率和舒适度的方法，属于挥发性成分检测领域。
背景技术
在我国，酒是传统文化的重要组成部分，不仅是一种嗜好品，更是人际交往和社会沟通的重要载体，但饮酒需适度，过量饮酒后不可避免的会导致醉酒、上头等现象，随着国人生活水平的不断提高和对健康的重视，黄酒消费越来越理性，对酒精饮料品质和健康有了更高要求，为满足大众日益提升的对饮酒舒适度的追求，需要一种评估饮料酒饮后醉酒及代谢速率的方法。
在此基础上，前期研究表明，酒中的高级醇是引起饮后上头等副作用的主要成分。适量的高级醇可以使黄酒产生香味物质和适宜的口感但是过量的高级醇或者是高级醇比例不当不仅会使酒体产生不愉快的气味，还会引起严重的“上头”现象，黄酒中主要的高级醇是正丙醇、异丁醇、异戊醇及苯乙醇，蒸馏酒如白酒、白兰地等中含有高级醇的种类与发酵酒有所区别，浓香型白酒中含量较高的高级醇是正丙醇、正丁醇、异戊醇、异丁醇、2-戊醇、正己醇，而目前评估酒精饮料饮后醉酒度及酒精代谢的相关研究及专利报道，如专利CN112415155A中公布了一种酒类饮后醉酒程度的综合评价方法，对小鼠灌胃酒样后的血液乙醇浓度进行定量，并监测潜伏期、沉醉期等行为学指标，二者结合，评估了白酒及保健酒的综合醉度；与之类似，专利CN 107908924 A公布了一种评价酒类饮后兴奋程度的方法，将小鼠灌胃后的行动轨迹与血液乙醇浓度相结合。但二者均未对小鼠血液样本中的高级醇含量进行定量，无法评估同等乙醇剂量下，酒样中的高级醇是否是行为学结果产生差异的原因，因此需要找寻一种可靠的检测方法，对血液样本中的高级醇含量进行检测，进而评价饮料酒饮后代谢速率和舒适度。然而，饮酒后进入血液中的高级醇含量较低，血液基质成分复杂，常规的检测方法灵敏度难以达到要求。
发明内容
针对目前评估饮料酒饮后醉度主要是以乙醇含量为指标，尚未有合适的评估方法将血液杂醇含量与饮后舒适度相联系，且酒后进入血液中的高级醇含量较低，血液基质成分复杂，常规的检测方法灵敏度难以达到要求的问题，本发明提供了一种评价饮料酒饮后舒适度的方法和一种测定饮料酒饮后代谢速率的方法，具体技术方案如下：
本发明的第一个目的是提供一种评价饮料酒饮后舒适度的方法，所述方法是以大鼠为模型，向大鼠灌胃酒样，每间隔15～120min取一次血样，检测血浆中高级醇含量，建立高级醇含量-时间曲线，计算从起始至高级醇代谢完成时的曲线下面积，利用曲线下面积表征饮料酒饮后舒适度；
检测样品为黄酒时，若高级醇含量-时间曲线下面积高于2200，则判断黄酒易产生不适感；若高级醇含量-时间曲线下面积低于2000，则判断黄酒饮后舒适度良好；
检测样品为白酒时，若高级醇含量-时间曲线下面积高于2800，则判断白酒易产生不适感；若高级醇含量-时间曲线下面积低于2500，则判断白酒饮后舒适度良好。
在本发明的一种实施方式中，对于黄酒酒样，检测的高级醇为正丙醇、异丁醇、异戊醇和苯乙醇；对于白酒酒样，检测的高级醇为正丙醇、异丁醇、异戊醇和正丁醇；对于威士忌或白兰地酒样，检测的高级醇为正丙醇、异丁醇、异戊醇、正戊醇和2-戊醇。
在本发明的一种实施方式中，所选用的大鼠为健康雄性SD大鼠或Wistar大鼠，周龄为6-8周。
在本发明的一种实施方式中，灌胃剂量按乙醇当量为0.8-1.2g/kg体重。
在本发明的一种实施方式中，大鼠灌胃样品后取血，经EDTA-Na或肝素钠抗凝处理后，取上清为血浆样本，采用液液萃取或固相萃取高级醇。
本发明的第二个目的是提供一种所述方法是以大鼠为模型，在相同的时间间隔后取血，检测血浆中的高级醇含量，建立高级醇含量-时间曲线，通过计算峰值含量、到达峰值时间和从峰值到代谢完成时间评价饮料酒饮后代谢速率。
在本发明的一种实施方式中，所述酒样包括黄酒、白酒、葡萄酒、威士忌和白兰地。
在本发明的一种实施方式中，所选用的大鼠为健康雄性SD大鼠或Wistar大鼠，周龄为6-8周，灌胃剂量按乙醇当量为0.8-1.2g/kg体重；大鼠灌胃样品后取血，经EDTA-Na或肝素钠抗凝处理后，取上清为血浆样本，提取高级醇。
在本发明的一种实施方式中，所述提取高级醇采用液液萃取或固相萃取；液液萃取操作步骤为：分别用5-10mL二氯甲烷萃、正戊烷或乙醚取血浆2次，合并萃取液，加入适量无水硫酸钠去除剩余水分，将萃取液氮吹缓慢浓缩至0.1-0.5mL；固相萃取操作步骤为：小柱填料量200-500mg，固定相为C18，小柱经5-8mL甲醇和5-8mL超纯水预活化，上样量2-3mL，5-10mL二氯甲烷、正戊烷或乙醚洗脱，洗脱液中加入适量无水硫酸钠去除水分，缓慢氮吹浓缩至0.1-0.5mL。
本发明的第三个目的是提供评价饮料酒饮后舒适度和测定代谢速率的方法在评估白酒、黄酒、葡萄酒、威士忌和白兰地饮后代谢速率、醉酒速率、醒酒速率和舒适度中的应用。
本发明的有益效果：
本方法提供了一种评价饮料酒饮后杂醇代谢速率及舒适度的方法，对饮酒后的动物血浆样本中的多种高级醇进行了定性及定量分析，建立了大鼠血浆高级醇含量-时间曲线，发现了酒后血液高级醇含量的峰值，为了解饮酒后高级醇在体内的代谢规律以及进一步分析高级醇和醉酒、“上头”之间的联系提供了依据。
附图说明
图1为大鼠血浆样本高级醇含量标准曲线图，A为大鼠血浆正丙醇浓度标曲图，B为大鼠血浆苯乙醇浓度标曲图，C为大鼠血浆异丁醇浓度标曲图，D为大鼠血浆异戊醇浓度标曲图；
图2为黄酒A、黄酒B及黄酒C组大鼠血浆样本高级醇含量定量结果图，A为大鼠血浆样本正丙醇含量定量结果图，B为大鼠血浆样本异丁醇含量定量结果图，C为大鼠血浆样本异戊醇含量定量结果图，D为大鼠血浆样本苯乙醇含量定量结果图；
图3为黄酒A、黄酒B及黄酒C组大鼠血浆样本高级醇含量-时间曲线下面积图；
图4为白酒A及白酒B组大鼠血浆样本高级醇含量定量结果图，A为大鼠血浆样本正丙醇含量定量结果图，B为大鼠血浆样本正丁醇含量定量结果图，C为大鼠血浆样本异丁醇含量定量结果图，D为大鼠血浆样本异戊醇含量定量结果图；
图5为白酒A及白酒B组大鼠血浆样本高级醇含量定量-时间曲线下面积图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述，但本发明的实施方式不限于此。
下述实施例中所述的成年雄性大鼠的周龄为6-8周，体重为280g～320g，健康状况良好。
实施例1：评价饮料酒饮后舒适度的方法的获得
1)使用不同产地和年份的20种成品酒(其中黄酒12种，白酒8种)分别对大鼠灌胃：
在Wistar大鼠适应性饲养7天后，按空白组、食用酒精组、黄酒组、白酒组分笼，按10mL/kg体重即乙醇剂量1.2g/kg体重(黄酒)、4g/kg体重(白酒)给予大鼠对应样品的灌胃。饲养环境为23±2℃，12h循环光照，大鼠自由饮水，饲喂普通维持饲料。
2)在大鼠灌胃后的相同间隔后取血，提取大鼠血浆中的高级醇，并利用气质联用检测高级醇含量：
在灌胃后开始计时，各组大鼠分别在15min、30min、45min、60min、75min、90min、105min、120min、150min、180min、240min、300min、360min、480min、600min时取血液样本，取出的血液样本经过EDTA抗凝后、4℃离心15min，过膜后得血浆样品，于-80℃保存备用。
取3mL血浆样本，使用液液萃取或固相萃取对高级醇进行提取。对于黄酒酒样，检测的高级醇为正丙醇、异丁醇、异戊醇和苯乙醇；对于白酒酒样，检测的高级醇为正丙醇、异丁醇、异戊醇和正丁醇；对于威士忌或白兰地酒样，检测的高级醇为正丙醇、异丁醇、异戊醇、正戊醇和2-戊醇。
液液萃取操作步骤为：分别用5mL二氯甲烷萃取血浆2次，合并萃取液，加入适量无水硫酸钠去除剩余水分，将萃取液氮吹缓慢浓缩至0.1-0.5mL。
固相萃取操作步骤为：小柱填料量200-500mg，固定相为C18、poly-sery PSD或poly-sery HLB，经6mL甲醇和6mL超纯水预活化，上样量2-3mL，5-10mL二氯甲烷洗脱，洗脱液中加入适量无水硫酸钠去除水分，缓慢氮吹浓缩至0.1-0.5mL。同时以血浆样本为基质，配制各高级醇不同浓度的标准品。
GC-MS对处理的样品及标准品进行测定并分析结果。
色谱条件：DB-Wax(30m×0.25mm×0.25μm)，进样口温度250℃，不分流进样，升温程序为40℃保持2min，以7℃/min升温至230℃保持10min，载气为氦气(>99.999％)，流速1.0mL/min。
质谱条件：电离方式EI，电离能量70eV，传输线温度和离子源温度分别为240℃、280℃，扫描方式采用特征离子扫描，杂醇的选择离子分别为：正丙醇：59、60；异丁醇：74、43；正丁醇：41、43、56；异戊醇：55、42、75；正戊醇：42、55、70；正己醇：41、56、69；正庚醇:56、70、83；苯乙醇:91、122。溶剂延迟4.2min，进样量1μL。
3)建立各个样品的高级醇含量-时间曲线，分析各杂醇的代谢速率并计算其曲线下面积。
不同酒样杂醇的代谢规律包括代谢总时长、到达峰值的时间及代谢速率，代谢速率由杂醇含量峰值及代谢至结束的时间确定；
标准曲线由空白血浆样本添加不同浓度高级醇所得，正丙醇、异丁醇、异戊醇及苯乙醇的浓度均为10-800μg/L；
4)进行感官实验验证杂醇含量-时间曲线下面积作为评价饮料酒饮后舒适度的指标。
对不同酒样进行感官品评，由30名志愿者(N＝30)进行舒适度评价，品评运用饮后感受评价量表(见表1)打分，无感觉4-5，轻微3-4，中度2-3，稍重1-2，严重0-1，总分为25分。当感官评分大于等于20分，饮料酒饮后舒适度较好，上头、口干等现象较轻微；当感官评分小于等于17分，饮料酒饮后舒适度较差，上头、口干等现象较为显著；当感官评分在17～20之间，认为饮料酒饮后舒适度一般。
表1饮后感受评价量表
Figure BDA0003166423630000041
Figure BDA0003166423630000051
上述20种成品酒的各酒样信息、感官评价总分及高级醇含量-曲线下面积的总值见表2：
表2 20个不同酒样饮后感受评价得分均值(分)及杂醇含量-时间曲线下面积总值
Figure BDA0003166423630000052
注：表中的黄酒的杂醇含量指的是正丙醇、异丁醇、异戊醇和苯乙醇的总含量；白酒的杂醇含量指的是正丙醇、异丁醇、异戊醇和正丁醇的总含量
综合饮后感受评价得分以及杂醇含量-时间曲线下面积结果，将杂醇含量-时间曲线下面积2000-2200这一范围作为评价黄酒饮后舒适度的标准，曲线下面积高于2200的黄酒饮后舒适度较差，上头、口干等现象较为显著，曲线下面积低于2000的黄酒饮后舒适度较好，上头、口干等现象较轻微；曲线下面积在2000-2200这一范围的黄酒饮后舒适度一般。将杂醇含量-时间曲线下面积2500-2800这一范围作为评价白酒饮后舒适度的标准，曲线下面积高于2800的白酒饮后舒适度较差，上头、口干等现象较为显著，曲线下面积低于2500的白酒饮后舒适度较好，上头、口干等现象较轻微曲线下面积在2500-2800之一范围的白酒饮后舒适度一般。
实施例2
研究1种绍兴黄酒(黄酒A)灌胃后大鼠血浆中高级醇含量的变化。酒精度为14％vol，黄酒样品A正丙醇浓度为45.21mg/L、异丁醇含量为67.12mg/L、异戊醇含量为191.87mg/L、苯乙醇含量为117.50mg/L，高级醇总含量为421.70mg/L。
成年雄性Wistar大鼠在适应性饲养一周后开始试验，分为空白组及样品组，适应期后空白组灌胃生理盐水，样品组灌胃黄酒A样品，每组20只，灌胃剂量为10mL/kg体重，即每只灌胃3mL生理盐水或对应黄酒样品，乙醇剂量为1.2g/kg体重。灌胃后开始计时，在0.5h、1h、1.5h、2h和4h时，每个时间点每组处死4只大鼠，腹主动脉取血，EDTA抗凝管收集血液样本，经3000rpm，4℃离心后得到上层血浆样本。
取3mL血浆样本，使用固相萃取对高级醇进行提取。固相萃取操作步骤为：小柱填料量200-500mg，固定相为C18，经6mL甲醇和6mL超纯水预活化，上样量3mL，5mL二氯甲烷洗脱，洗脱液中加入适量无水硫酸钠去除水分，缓慢氮吹浓缩至0.5mL。
以空白组大鼠血浆样本为基质，添加高级醇母液(含有高浓度正丙醇、异丁醇、异戊醇及苯乙醇)配制成浓度分别为800μg/L、400μg/L、100μg/L、50μg/L及10μg/L的标准品。分别取3mL上述标准品与样品采用相同的处理方法进行萃取及浓缩。
标准品及样品处理后均由GC-MS进行测定，气相色谱(GC)条件：采用DB-Wax(30m×0.25mm×0.25μm)，进样口温度250℃，不分流进样，升温程序为40℃保持2min，以7℃/min升温至230℃保持10min，载气为氦气(>99.999％)，流速1.0mL/min；质谱(MS)条件：电离方式EI，电离能量70eV，传输线温度和离子源温度分别为240℃、280℃，扫描方式采用特征离子扫描，杂醇的选择离子分别为：正丙醇：59、60；异丁醇：74、43；正丁醇：41、43、56；异戊醇：55、42、75；正戊醇：42、55、70；正己醇：41、56、69；正庚醇：56、70、83；苯乙醇：91、122。溶剂延迟4.2min，进样量1μL。检测完成后，标曲结果如图1所示：
4种高级醇在10-800μg/L范围内展现了良好的线性，拟合曲线如表1所示：
表3大鼠血浆样本高级醇含量标准曲线
Figure BDA0003166423630000061
注：Y是响应(信号的峰面积)，X是各物质的浓度
使用标准曲线以外标法对各组大鼠血浆样本测定结果进行定量分析，结果如图2所示。
实施例3
研究1种古越龙山黄酒(黄酒B)灌胃后大鼠血浆中高级醇含量的变化。酒精度为14％vol，黄酒样品B正丙醇浓度为37.10mg/L、异丁醇含量为66.50mg/L、异戊醇含量为169.50mg/L、苯乙醇含量为118.75mg/L，高级醇总含量为391.85mg/L。
动物实验及样本检测参照实施例1进行，使用标准曲线以外标法对大鼠血浆样本测定结果进行定量分析，结果如图2所示。
实施例4
研究1种古越龙山黄酒(黄酒C)灌胃后大鼠血浆中高级醇含量的变化。酒精度为14％vol，黄酒样品C正丙醇浓度为35.67mg/L、异丁醇含量为66.55mg/L、异戊醇含量为154.15mg/L、苯乙醇含量为94.94mg/L，高级醇总含量为354.31mg/L。
动物实验及样本检测参照实施例1进行，使用标准曲线以外标法对大鼠血浆样本测定结果进行定量分析，结果如图2所示。
空白组(灌胃生理盐水)大鼠血浆中未检测到正丙醇等物质。
图2为实施例2-4大鼠血浆样本高级醇定量结果，黄酒A灌胃后，大鼠血浆中正丙醇含量在1.5h左右达到峰值，约为533.53μg/L，异丁醇、异戊醇及苯乙醇则在0.5h时含量最高，分别达到258.72μg/L、273.92μg/L及367.96μg/L；黄酒B组大鼠血浆中高级醇含量的峰值较黄酒A组要低，且到达峰值的时间较晚，正丙醇含量在1.5h时达到峰值，为358.89μg/L，异丁醇、异戊醇及苯乙醇含量均在1h时最高，分别为171.80μg/L、195.87μg/L及153.76μg/L，黄酒C组大鼠血浆中高级醇含量的峰值较黄酒A组要低，且到达峰值的时间较晚，正丙醇含量在1.5h时达到峰值，为377.42μg/L，异丁醇、异戊醇及苯乙醇含量均在1h时最高，分别为147.23μg/L、213.32μg/L及153.66μg/L，黄酒B和黄酒C组大鼠在血液高级醇含量方面差异不显著，仅异戊醇在0-1h内黄酒C组含量高于黄酒B组。
在代谢总时长方面，3种酒样的正丙醇及异丁醇均在4h时代谢结束，异戊醇和苯乙醇在4h时在血浆中仍能检出且含量差异不显著。
在代谢速率方面，黄酒A正丙醇代谢速率为213.412μg/(L·min)，异丁醇代谢速率为73.92μg/(L·min)，异戊醇代谢速率为56.69μg/(L·min)，苯乙醇代谢速率为75.46μg/(L·min)；黄酒B正丙醇代谢速率为143.556μg/(L·min)，异丁醇代谢速率为57.27μg/(L·min)，异戊醇代谢速率为46.84μg/(L·min)，苯乙醇代谢速率为20.88μg/(L·min)；黄酒C正丙醇代谢速率为150.968μg/(L·min)，异丁醇代谢速率为49.08μg/(L·min)，异戊醇代谢速率为45.94μg/(L·min)，苯乙醇代谢速率为20.85μg/(L·min)。
图3为Wistar大鼠血浆4种高级醇含量与时间的曲线下面积计算结果，4种主要高级醇的结果类似，黄酒A组大鼠血浆中含量-时间曲线下面积要高于黄酒B组和C组，而黄酒B和C间差异不显著，表明黄酒B和C的灌胃引起的血浆高级醇含量增加效果要小于黄酒A，可能不易上头。
此外，对3种不同来源的黄酒进行了感官评价，样品感官品评由30名志愿者(N＝30)进行舒适度评价，品评运用饮后感受评价量表(见表2)打分，无感觉4-5，轻微3-4，中度2-3，稍重1-2，严重0-1，总分为25分；根据评分情况结合血液中4种杂醇含量-时间曲线总下面积综合评估3种黄酒样品的饮后舒适度。
表4饮后感受评价量表
Figure BDA0003166423630000081
通过志愿者对各样品黄酒进行品评运用饮后感受评价量表进行评分，评价总分及4种杂醇血液中含量-曲线下面积的总值见表3：
表5 3个黄酒样品饮后感受评价得分均值(分)及杂醇含量-时间曲线下面积总值
Figure BDA0003166423630000082
注：表中的杂醇含量指的是正丙醇、异丁醇、异戊醇和苯乙醇的总含量
从饮后感受评价得分可以看出，黄酒B、C评分较高且无显著差异，品质较好，整体饮后舒适度较好，上头程度较轻，而黄酒A评分较低，品质稍差，饮后有一定的不适感，这与检测所得大鼠血浆杂醇含量-时间曲线下面积结果相符，实施例2中样品的杂醇-时间曲线下面积值要显著高于实施例3和4中的黄酒样品，曲线下面积越高，舒适度越低，表明实施例1所述方法可以用于评价黄酒饮后舒适度，综合实施例2、3和4的评价结果，验证了可以将杂醇含量-时间曲线下面积2000-2200作为评价黄酒饮后舒适度的标准，面积高于2200的黄酒易产生“上头”等不适感，面积在2000-2200间的黄酒仅有轻微的饮后不适感，而低于2000的黄酒则饮后舒适度良好。
实施例5
研究1种浓香型白酒样品(白酒A)灌胃后大鼠血浆中高级醇含量的变化。酒精度为50％vol，白酒样品A正丙醇浓度为324.28mg/L、异丁醇含量为219.52mg/L、正丁醇含量为477.06mg/L、异戊醇含量为249.09mg/L、2-戊醇含量为203.06mg/L、正己醇含量为213.88mg/L，高级醇总含量为1686.89mg/L。
成年雄性Wistar大鼠在适应性饲养一周开始试验，分为空白组及样品组，适应期后空白组灌胃生理盐水，样品组灌胃白酒A，每组20只，灌胃剂量为10mL/kg体重，即每只灌胃3mL生理盐水或对应白酒样品，乙醇剂量为4g/kg体重。灌胃后开始计时，在0.5h、1h、1.5h、2h和4h时，每个时间点每组处死4只大鼠，腹主动脉取血，EDTA抗凝管收集血液样本，经3000rpm，4℃离心后得到上层血浆样本。
取3mL血浆样本，使用液液萃取对高级醇进行提取。液液萃取操作步骤为：分别用5mL二氯甲烷萃取血浆2次，合并萃取液，加入适量无水硫酸钠去除剩余水分，将萃取液氮吹缓慢浓缩至0.5mL。
参考实施例2，以空白组大鼠血浆样本为基质，添加高级醇母液(含有高浓度正丙醇、异丁醇、异戊醇及正丁醇)分别配制成浓度为800μg/L、400μg/L、100μg/L、50μg/L及10μg/L的标准品。分别取3mL各标准品与样品采用相同的处理方法进行萃取及浓缩。
标准品及样品处理后均由GC-MS进行测定，气相色谱(GC)条件：采用DB-Wax(30m×0.25mm×0.25μm)，进样口温度250℃，不分流进样，升温程序为40℃保持2min，以7℃/min升温至230℃保持10min，载气为氦气(>99.999％)，流速1.0mL/min；质谱(MS)条件：电离方式EI，电离能量70eV，传输线温度和离子源温度分别为240℃、280℃，扫描方式采用特征离子扫描，杂醇的选择离子如权利要求书中所述。溶剂延迟4.2min，进样量1μL。
4种高级醇在10-800μg/L范围内展现了良好的线性，拟合曲线如表4所示：
表6大鼠血浆样本高级醇含量标准曲线
Figure BDA0003166423630000091
注：Y是响应(信号的峰面积)，X是各物质的浓度
使用标准曲线以外标法对大鼠血浆样本测定结果进行定量分析，结果如图4所示。
实施例6
研究1种浓香型白酒样品(白酒B)灌胃后大鼠血浆中高级醇含量的变化。酒精度为50％vol，白酒样品B正丙醇浓度为207.53mg/L、异丁醇含量为242.40mg/L、正丁醇含量为263.87mg/L、异戊醇含量为284.15mg/L、2-戊醇含量为92.37mg/L、正己醇含量为94.56mg/L，高级醇总含量为1184.88mg/L。
动物实验及样本检测参照实施例5进行，使用标准曲线以外标法对大鼠血浆样本测定结果进行定量分析，结果如图4所示。
空白组(灌胃生理盐水)大鼠血浆中未检测到正丙醇等物质，在此不多作描述。
如图4所示，白酒A灌胃后，大鼠血浆中正丙醇、正丁醇及异戊醇的含量在0.5h左右达到峰值，分别为386.72μg/L、393.52μg/L及335.026μg/L，异丁醇含量则在1h时最高，为254.76μg/L；白酒B组大鼠血浆中高级醇含量的峰值较白酒A组要低，正丙醇、正丁醇及异丁醇含量在0.5h时达到峰值，分别为274.52μg/L、227.87μg/L及233.34μg/L，异戊醇含量则在1h时最高，分别为298.80μg/L。
在代谢总时长方面，两种酒样的高级醇在4h时均未代谢结束，在4h时在血浆中仍能检出且含量差异不显著。
在代谢速率方面，白酒A正丙醇代谢速率为65.14μg/(L·min)，正丁醇代谢速率为81.25μg/(L·min)，异丁醇代谢速率为49.02μg/(L·min)，异戊醇代谢速率为62.08μg/(L·min)；白酒B正丙醇代谢速率为54.11μg/(L·min)，正丁醇代谢速率为49.53μg/(L·min)，异丁醇代谢速率为38.90μg/(L·min)，异戊醇代谢速率为58.12μg/(L·min)。
图5为Wistar大鼠血浆高级醇含量与时间的曲线下面积计算结果，4种主要高级醇的结果类似，白酒A组大鼠血浆中含量-时间曲线下面积要显著高于白酒B组，表明白酒B的灌胃引起的血浆高级醇含量增加效果要小于白酒A，可以认为白酒B饮后高级醇代谢情况要优于白酒A，不易上头。
此外，对2种不同来源的白酒进行了感官评价，样品感官品评由30名志愿者(N＝30)进行舒适度评价，品评运用饮后感受评价量表打分，见表2，无感觉4-5，轻微3-4，中度2-3，稍重1-2，严重0-1，总分为25分；根据评分情况结合血液中4种杂醇含量-时间曲线总下面积综合评估2种白酒样品的饮后舒适度。
通过志愿者对各样品黄酒进行品评运用饮后感受评价量表进行评分，评价总分及4种杂醇血液中含量-曲线下面积的总值见表5：
表7 2个白酒样品饮后感受评价得分均值(分)及杂醇含量-时间曲线下面积总值
Figure BDA0003166423630000101
注：表中的杂醇含量指的是正丙醇、异丁醇、异戊醇和正丁醇的总含量
从饮后感受评价得分可以看出，白酒B品质较好，整体饮后舒适度较好，上头程度较轻，而白酒A评分较低，品质稍差，饮后有一定的不适感，这与检测所得大鼠血浆杂醇含量-时间曲线下面积结果相符，实施例5中样品的杂醇-时间曲线下面积值要显著高于实施例6中的黄酒样品，曲线下面积越高，舒适度越低，表明实施例1所述的方法可以用于评价白酒饮后舒适度，综合实施例5和6的评价结果，验证了可以将杂醇含量-时间曲线下面积2500-2800作为评价白酒饮后舒适度的标准，面积高于2800的白酒易产生“上头”等不适感，面积在2500-2800间的白酒仅有轻微的饮后不适感，而低于2500的白酒则饮后舒适度良好。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (6)

1.一种评价饮料酒饮后舒适度的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
（1）样品的制备：以大鼠为模型，向大鼠灌胃酒样，每间隔15~120 min取一次血样，分离得到血浆，使用液液萃取或固相萃取对血浆中的高级醇进行提取后得到样品，所述液液萃取操作步骤为：分别用5-10 mL二氯甲烷、正戊烷或乙醚萃 取血浆2次，合并萃取液，加入适量无水硫酸钠去除剩余水分，将萃取液氮吹缓慢浓缩至0.1-0.5 mL；所述固相萃取操作步骤为：小柱填料量200-500 mg，固定相为C18，小柱经5-8 mL甲醇和5-8 mL超纯水预活化，上样量2-3 mL，5-10 mL二氯甲烷、正戊烷或乙醚洗脱，洗脱液中加入适量无水硫酸钠去除水分，缓慢氮吹浓缩至0.1-0.5 mL；
（2）标准品的制备：以血浆样本为基质，配制浓度为10-800 μg/L的各高级醇标准品；
（3）采用GC-MS对步骤（1）得到的样品及步骤（2）得到的标准品进行测定，用标准品建立峰面积-浓度标准曲线，检测所述样品中各高级醇的含量；其中，色谱条件：DB-Wax色谱柱，进样口温度250℃，不分流进样，升温程序为40℃保持2 min，以7℃/min升温至230℃保持10min，载气为氦气，流速1.0 mL/min；
质谱条件：电离方式EI，电离能量70 eV，传输线温度和离子源温度分别为240℃、280℃，扫描方式采用特征离子扫描，杂醇的选择离子分别为：正丙醇：59、60；异丁醇：74、43；正丁醇：41、43、56；异戊醇：55、42、75；正戊醇：42、55、70；正己醇：41、56、69；正庚醇:56、70、83；苯乙醇:91、122；溶剂延迟4.2 min，进样量1 μL；
（4）建立曲线：以步骤（3）得到的各高级醇的含量及步骤（1）的间隔时间为函数，建立样品的各高级醇总含量-时间曲线；
（5）计算各高级醇的代谢速率：通过计算各高级醇峰值含量、到达峰值时间和从峰值到代谢完成时间计算酒饮后代谢速率；
（6）通过步骤（4）的曲线及步骤（5）的代谢速率计算步骤（4）的曲线面积；
利用曲线下面积表征饮料酒饮后舒适度；
所述酒样为黄酒时，若各高级醇总含量-时间曲线下面积高于2200，则判断黄酒易产生不适感；若高级醇含量-时间曲线下面积低于2000，则判断黄酒饮后舒适度良好，所述高级醇为正丙醇、异丁醇、异戊醇和苯乙醇；
所述酒样为白酒时，若各高级醇总含量-时间曲线下面积高于2800，则判断白酒易产生不适感；若高级醇含量-时间曲线下面积低于2500，则判断白酒饮后舒适度良好，所述高级醇为正丙醇、异丁醇、异戊醇和正丁醇。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所选用的大鼠为健康雄性SD大鼠或Wistar大鼠，周龄为6-8周。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，灌胃剂量按乙醇当量为0.8-1.2 g/kg体重。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，大鼠灌胃样品后取血，经EDTA-Na或肝素钠抗凝处理后，取上清为血浆样本，采用液液萃取或固相萃取高级醇。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所选用的大鼠为健康雄性SD大鼠或Wistar大鼠，周龄为6-8周，灌胃剂量按乙醇当量为0.8-1.2 g/kg体重；大鼠灌胃样品后取血，经EDTA-Na或肝素钠抗凝处理后，取上清为血浆样本，提取高级醇。
6.权利要求1-5任一项所述的方法在评估白酒、黄酒饮后代谢速率、醉酒速率、醒酒速率和舒适度中的应用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CA1305873C (en) * 1987-05-26 1992-08-04 Howel Gwynne Giles Method and means for detecting alcohol levels in humans
CN111830219B (zh) * 2019-04-16 2022-06-28 中国食品发酵工业研究院有限公司 一种关联性判定酒体中引起上头的主要高级醇类物质的方法
US11717554B2 (en) * 2019-09-19 2023-08-08 Max R&D Llc Method for preventing or treating hangover symptom(s) associated with consumption of alcoholic beverage(s)
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