CN113564084A - 植物乳杆菌x7022在预防和治疗便秘上的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种植物乳杆菌X7022用于制备预防和/或治疗便秘的功能食品或保健品的应用,所述植物乳杆菌X7022的保藏编号为CCTCC NO:M 2016505。本发明发现植物乳杆菌X7022的活菌对于便秘,包括急性便秘和慢性便秘,具有明显的预防以及改善效果,因此可用于制备预防和/或治疗便秘的功能食品或保健品,并且可以避免常规便秘治疗药物产生副作用的问题,因而具有很好的开发应用前景。
Description
技术领域
本发明属于微生物技术领域,具体地说,是关于一种植物乳杆菌X7022在预防和治疗便秘上的应用。
背景技术
美国胃肠病学学会(ACG)已发布便秘的治疗指南,包括饮食调整,心理治疗以及诸如纤维,泻药,解痉剂,抗抑郁药等治疗方法。具体药物如酚酞片、车前草、聚乙二醇、比沙可啶、双环胺、三氯乙酸等,但是均有一定的副作用,如导致人体肠胃胀气、腹痛、口干、头晕等。常规的便秘药物对身体的副作用较大,在缓解便秘的同时对身体仍会构成较大程度的损伤,且无法从根本上治疗便秘。
乳酸菌及其发酵得到的代谢产物具有很好的益生效果,所以也被称之为益生菌。当乳酸菌进入人体后可以产生乳酸使得肠道的pH下降,并且可以利用肠道中的糖类物质产生乳酸,从而可以广泛的抑制有害细菌的生长。随着人们生活水平的提高,以及对身体健康的日益重视,益生菌也得到了越来越多的关注。
发明内容
植物乳杆菌X7022(Lactiplantibacillus plantarum X7022)是本案发明人于2016年获得的一株功能型益生菌,在对其功能进行不断开发研究的过程中发现,植物乳杆菌X7022的活菌在便秘的预防,以及急、慢性便秘的治疗和缓解方面具有显著的效果,因此可用于制备预防和/或治疗便秘的功能食品或保健品。
因此,本发明的第一个方面,提供了所述植物乳杆菌X7022在制备预防和治疗便秘的功能食品或保健品中的应用,所述植物乳杆菌X7022的保藏编号为CCTCC NO:M 2016505。
根据本发明,所述应用中植物乳杆菌X7022采用活菌的形式。
根据本发明,所述便秘包括急性便秘和慢性便秘。
本发明发现植物乳杆菌X7022活菌对于便秘,包括急性便秘和慢性便秘,具有明显的预防以及改善效果,因此可用于制备预防和/或治疗便秘的功能食品或保健品,并且可以避免常规便秘治疗药物产生副作用的问题,因而具有很好的开发应用前景。
附图说明
图1为实施例1中对照组、模型组、阳性组和植物乳杆菌X7022组四组小鼠的首颗黑便排出时间对照图。
图2为实施例1中对照组、模型组、阳性组和植物乳杆菌X7022组四组小鼠的6h内排便颗粒数对照图。
图3为实施例1中对照组、模型组、阳性组和植物乳杆菌X7022组四组小鼠的排便湿重对照图。
图4为实施例1中对照组、模型组、阳性组和植物乳杆菌X7022组四组小鼠的小肠墨汁推进率对照图。
图5为实施例2中对照组、模型组、阳性组、植物乳杆菌X7022低剂量组和植物乳杆菌X7022低剂量组五组小鼠的首颗黑便排出时间对照图。
图6为实施例2中对照组、模型组、阳性组、植物乳杆菌X7022低剂量组和植物乳杆菌X7022低剂量组五组小鼠的6h内排便颗粒数对照图。
图7为实施例2中对照组、模型组、阳性组、植物乳杆菌X7022低剂量组和植物乳杆菌X7022低剂量组五组小鼠的排便湿重对照图。
图8为实施例2中对照组、模型组、阳性组、植物乳杆菌X7022低剂量组和植物乳杆菌X7022低剂量组五组小鼠的小肠墨汁推进率对照图。
图9为实施例3中对照组、模型组、阳性组、植物乳杆菌X7022低剂量组和植物乳杆菌X7022低剂量组五组小鼠的首颗黑便排出时间对照图。
图10为实施例3中对照组、模型组、阳性组、植物乳杆菌X7022低剂量组和植物乳杆菌X7022低剂量组五组小鼠的6h排便颗粒数对照图。
图11为实施例3中对照组、模型组、阳性组、植物乳杆菌X7022低剂量组和植物乳杆菌X7022低剂量组五组小鼠的6h排便湿重对照图。
图12为实施例3中对照组、模型组、阳性组、植物乳杆菌X7022低剂量组和植物乳杆菌X7022低剂量组五组小鼠的6h排便干重对照图。
图13为实施例3中对照组、模型组、阳性组、植物乳杆菌X7022低剂量组和植物乳杆菌X7022低剂量组五组小鼠的小肠墨汁推移率对照图。
本发明中应用的植物乳杆菌X7022(Lactiplantibacillus plantarum X7022)(最新的分类名称,保藏证明上为原拉丁文名称Lactobacillus plantarum X7022),该菌株来源于传统发酵食品臭豆腐,该菌株于2016年9月21日提交中国典型培养物保藏中心(ChinaCenter of Type Culture Collection,简称CCTCC),地址:中国.武汉.武汉大学,保藏编号为CCTCC NO:M 2016505。
具体实施方式
下面结合附图,以具体实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述。应理解,所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明的范围。
以下实施例中所使用的MRS液体培养基(MRS培养基)为本技术领域中常用于培养乳酸菌的选择性培养基;本发明不涉及对MRS培养基的改进,因此对其配方不做特别说明。
实施例1、植物乳杆菌X7022活菌对小鼠便秘的预防
受试活菌的制备:将活化后的植物乳杆菌X7022接种至MRS液体培养基内,并放置在37℃摇床内200rpm培养18h。将得到的菌液用无菌的10mL离心管进行离心,5000rpm,4℃离心15min后,弃去所有培养基,菌体用生理盐水将未除尽的培养基洗涤一遍后重新离心。最后使用生理盐水将活菌浓度稀释至9log CFU/mL备用。
建模药物:建模药物采用盐酸洛哌丁胺(止泻药),将其加水混匀稀释,现配现用。
阳性药物:受试药物采用酚酞片(用于治疗习惯性顽固性便秘),将酚酞片研磨至粉末状加水稀释,现配现用。
墨汁的制备:阿拉伯树胶100g,加水800mL,煮沸至溶液透明;称取活性炭50g加至上述溶液中煮沸3次,溶液冷却后加水定容至1000mL,4℃保存,用前摇匀。
实验动物的准备:
(a)动物房条件:保持温度为20±2℃,湿度为50±5%,每3天更换一次垫料。控制12h光照和12h黑暗的循环标准,每天早晨7点开灯。
(b)实验动物为SPF级雄性ICR小鼠,适应性喂养7天后开始实验,适应期内饲料喂基础饮食,在实验期内自由饮水和采食。
建模方法:首先进行为期两周的受试物灌胃,灌胃结束后采用盐酸洛哌丁胺进行灌胃建模。
受试物灌胃方法:将小鼠随机分为对照组、模型组、阳性组(20mg/kg)和植物乳杆菌X7022组(20mL/kg BW),共4组,每组12只小鼠。对照组和模型组给予受试物等量的生理盐水。
灌胃14天后,将各组小鼠禁食不禁水16h。除对照组外均灌胃给予盐酸洛哌丁胺(10mg/kg BW),对照组给予等量的生理盐水。
30min后,给予墨汁灌胃。每组取出6只小鼠进行单笼饲养,正常饮水进食,从灌胃墨汁起开始计时,分别记录每只动物的首颗黑便排出时间、6h内排便颗粒数和排便湿重。其余6只小鼠在灌胃墨汁25min后,脱颈椎将其处死,随后对喂食墨汁小鼠的腹部肠道根系和粘膜部分进行仔细解剖。剥离肠道间隙的粘膜,随后剪取肠管(由幽门至回盲部)后取出,并将此段剪取的肠管拉直并铺开。用卷尺仔细测量自顶部幽门端至墨汁前进的前沿端的长度,以及小鼠小肠的总长度。计算小肠墨汁推进率的公式如下:
四组小鼠的首颗黑便排出时间、6h内排便颗粒数、排便湿重以及小肠墨汁推进率如图1至图4。
与对照组的正常小鼠相比,模型组的首颗粪便排出时间显著延长(p<0.05),且小肠墨汁推进率、6h排便颗粒数和排便湿重均显著减少(p<0.05),说明盐酸洛哌丁胺构建小鼠便秘模型成功。
与模型组相比,植物乳杆菌X7022组的首颗黑便排出时间缩短了47.1%,且与正常对照组相近。
与模型组相比,植物乳杆菌X7022组的6h排便颗粒数显著提升(p<0.05),相对于模型组提升了219%,且与正常对照组没有显著性差异。
与模型组相比,植物乳杆菌X7022组的6h排便湿重显著提升(p<0.05),相对于模型组提升了187%,且与对照组没有显著性差异。
与模型组相比,植物乳杆菌X7022组的小肠墨汁推进率显著提升(p<0.05),相对于模型组提升了78.5%,且与对照组没有显著性差异。
上述的实验结果说明,植物乳杆菌X7022具有显著的润肠通便作用,甚至服用后小鼠小肠墨汁推进率高于对照组,表明植物乳杆菌X7022对盐酸洛哌丁胺引发的便秘具有显著的抵抗作用,有效预防便秘的发生。
实施例2、植物乳杆菌X7022活菌对小鼠急性便秘的治疗
受试活菌制备:同实施例1。最后使用生理盐水将活菌浓度分别稀释至6log CFU/mL(低剂量)和9log CFU/mL(高剂量)。
墨汁的制备:同实施例1。
建模药物:同实施例1。
阳性药物:同实施例1。
实验动物的准备:同实施例1。
建模方法:首先进行为期一周的便秘模型建立,建模期间除了对照组每天灌胃等体积生理盐水外,其余各组每天进行盐酸洛哌丁胺(5mg/kg BW)的灌胃,建模结束后停止盐酸洛哌丁胺的灌胃。
受试物灌胃方法:将小鼠随机分为对照组、模型组、阳性组(20mg/kg BW)、植物乳杆菌X7022低剂量组(20mL/kg BW)和高剂量组(20mL/kg BW),共5组,每组12只小鼠。进行为期2周的受试物治疗阶段,在此期间,对照组和模型组灌胃等量的生理盐水。
在干预治疗2周后,对小鼠暂时禁食禁水16h。给予墨汁灌胃。每组取出6只小鼠进行单笼饲养,正常饮水进食,从灌胃墨汁起开始计时,分别记录每只动物的首颗黑便排出时间、6h内排便颗粒数和排便湿重。其余6只小鼠在灌胃墨汁25min后,脱颈椎将其处死,随后对喂食墨汁小鼠的腹部肠道根系和粘膜部分进行仔细解剖。剥离肠道间隙的粘膜,随后剪取肠管(由幽门至回盲部)后取出,并将此段剪取的肠管拉直并铺开。用卷尺仔细测量自顶部幽门端至墨汁前进的前沿端的长度,以及小鼠小肠的总长度。计算小肠推移率的公式同实施例1。
五组小鼠的首颗黑便排出时间、6h内排便颗粒数和排便湿重以及小肠墨汁推移率如图5至图8。
与正常对照组的正常小鼠相比,模型组的首颗粪便排出时间显著延长(p<0.05),且小肠墨汁推进率、6h排便颗粒数和排便湿重均显著减少(p<0.05),说明盐酸洛哌丁胺构建小鼠便秘模型成功。
与模型组相比,植物乳杆菌X7022高低剂量组的首颗黑便排出时间显著降低(p<0.05),X7022低剂量组和高剂量组相对于模型组分别缩短了34.1%和40.7%,且与照组相近。
与模型组相比,植物乳杆菌X7022高低剂量组的6h排便颗粒数显著提升(p<0.05),低剂量组和高剂量组相对于模型组分别提升了266%和328%,且与对照组没有显著性差异。
与模型组相比,植物乳杆菌X7022高低剂量组的6h排便湿重显著提升(p<0.05),X7022低剂量组和高剂量组相对于模型组提升了225%和331%,X7022高剂量组的排便重量相较于X7022低剂量组仍有显著性变化(p<0.05),且与对照组没有显著性差异。
与模型组相比,植物乳杆菌X7022高低剂量组的小肠墨汁推进率显著提升(p<0.05),相对于模型组提升了26.2%和32.7%,且与对照组没有显著性差异。
上述结果表明,植物乳杆菌X7022高低剂量均具有显著润肠通便作用。通过灌胃植物乳杆菌X7022对盐酸洛哌丁胺诱导的急性便秘模型小鼠具有显著治疗效果,且高剂量效果更佳。
实施例3、植物乳杆菌X7022活菌对小鼠慢性便秘的治疗
受试菌液的制备:同实施例2。
墨汁的制备:同实施例1。
建模药物:同实施例1。
阳性药物:受试药物采用聚乙二醇4000散(用于治疗便秘),将其加水混匀稀释,现配现用。
实验动物的准备:同实施例1。
建模方法:首先进行为期一周的便秘模型建立,建模期间除了对照组每天灌胃等体积生理盐水外,其余各组每天进行盐酸洛哌丁胺(5mg/kg BW)的灌胃。一周建模结束后仍保持每天上午9点盐酸洛哌丁胺的灌胃,并每天下午18点进行受试物治疗。
受试物灌胃方法:将小鼠随机分为对照组、模型组、阳性组(3000mg/kg BW)、植物乳杆菌X7022低剂量组(20mL/kg BW)和高剂量组(20mL/kg BW),共5组,每组12只小鼠。每天下午18点进行受试物治疗,为期2周。在此期间,正常对照组和模型组灌胃等量的生理盐水。
在干预治疗2周后,对小鼠暂时禁食禁水16h。给予墨汁灌胃。每组取出六只小鼠进行单笼饲养,正常饮水进食,从灌胃墨汁起开始计时,分别记录每只动物的首颗黑便排出时间、6h内排便颗粒数和排便湿重。其余六组小鼠在灌胃墨汁25min后,脱颈椎将其处死,随后对喂食墨汁小鼠的腹部肠道根系和粘膜部分进行仔细解剖。剥离肠道间隙的粘膜,随后剪取肠管(由幽门至回盲部)后取出,并将此段剪取的肠管拉直并铺开。用卷尺仔细测量自顶部幽门端至墨汁前进的前沿端的长度,以及小鼠小肠的总长度。计算小肠推移率的公式同实施例1。
五组小鼠的首颗黑便排出时间、6h内排便颗粒数和排便湿重干重以及小肠墨汁推移率如图9至图13。
与对照组的正常小鼠相比,模型组的首颗粪便排出时间显著延长(p<0.05),且小肠墨汁推进率、6h排便颗粒数和排便湿重均显著减少(p<0.05),说明盐酸洛哌丁胺构建小鼠便秘模型成功。
与模型组相比,植物乳杆菌X7022高低剂量组的首颗黑便排出时间显著降低(p<0.05)。植物乳杆菌X7022低剂量组和高剂量组相对于模型组分别缩短了46.6%和51.3%,且与正常对照组相近。
与模型组相比,植物乳杆菌X7022高剂量组的6h排便颗粒数显著提升(p<0.05),低剂量组有一定的提升但不具有显著性。低剂量组和高剂量组相对于模型组提升了52.3%和128%,且与正常对照组没有显著性差异。
与模型组相比,植物乳杆菌X7022高剂量组的6h排便湿重显著提升(p<0.05),低剂量组有一定的提升但不具有显著性。低剂量组和高剂量组相对于模型组提升了69.0%和136%,且与对照组没有显著性差异。
与模型组相比,植物乳杆菌X7022高剂量组的6h排便干重显著提升(p<0.05),低剂量组有一定的提升但是不具有显著性。X7022低剂量组和高剂量组相对于模型组提升了69.0%和158%,且与对照组没有显著性差异。
与模型组相比,植物乳杆菌X7022高低剂量组的小肠墨汁推进率显著提升(p<0.05),相对于模型组提升了30.4%和39.3%,且与正常对照组没有显著性差异。
上述的实验结果说明,植物乳杆菌X7022高剂量组具有显著的润肠通便作用,且与对照组无显著差异。说明灌胃高剂量植物乳杆菌X7022对盐酸洛哌丁胺诱导的慢性便秘模型小鼠具有显著的治疗效果。
Claims (4)
1.一种植物乳杆菌X7022的应用,其特征在于,用于制备预防和/或治疗便秘的功能食品或保健品,所述植物乳杆菌X7022的保藏编号为CCTCC NO:M 2016505。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述植物乳杆菌X7022采用活菌的形式。
3.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述便秘为急性便秘。
4.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述便秘为慢性便秘。
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