CN105029031A - 一种利用粪菌移植提高断奶仔猪生长性能和降低腹泻率的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于动物医学技术领域，特别涉及一种利用粪菌移植提高断奶仔猪生长性能和降低腹泻率的方法。一种利用粪菌移植提高断奶仔猪生长性能和降低腹泻率的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)粪菌液的制备；(2)采用菌粪移植的方法对断奶仔猪进行治疗。本发明的方法具有提高断奶仔猪平均日增重、平均日采食量，可显著降低断奶仔猪的腹泻率的优点。本发明中采用健康动物的粪菌液可替代抗生素，可为粪菌移植在动物生产中的应用提供参考。
Description
技术领域
本发明属于动物医学技术领域，特别涉及一种利用粪菌移植提高断奶仔猪生长性能和降低腹泻率的方法。
背景技术
断奶仔猪生长性能是反映断奶仔猪营养状态最直接的指标。断奶仔猪胃肠道较短小，消化器官发育程度低，消化机能不完善，肠道微生态极易失衡。另外抗生素的应用，对断奶仔猪的肠道屏障功能有一定的损害，影响猪体的健康生长。益生菌能在动物肠道内定殖，调节肠道微生态区系，维护消化道的健康状况，其代谢活动产生的有机酸与消化酶等物质可以促进肠道对养分物质的消化、吸收，从而提高仔猪生长性能。
断奶仔猪腹泻是一类综合性的病症，是仔猪多种消化道疾病共同表达的方式，是多种病因相互作用的结果。健康仔猪消化道内的微生物菌群保持动态的平衡，其中有益微生物起重要的作用。额外添加益生菌可以增加有益菌在肠道内定殖，改善肠道微生物菌群的状况。若仔猪腹泻发病率较高，饲喂屎肠球菌不但能降低仔猪的腹泻率，还能提高仔猪日增重。
目前，在畜禽养殖中大量使用抗生素以预防腹泻与促进生长，但抗生素不仅抑制致病微生物，还破坏消化道微生态平衡；部分抗生素在畜产品中残留，对人类的健康造成极大威胁。大量研究证明，微生态制剂是抗生素最佳替代品之一。
粪菌移植(fecalmicrobiotatransplantation，FMT)就是从健康动物粪便中分离功能菌群，然后再移植到患病动物消化道，通过重建患病动物的肠道菌群，从而实现对疾病的治疗。十六世纪，中国明代的李时珍在《本草纲目》里记载，口服粪水可以治疗严重腹泻、发热、呕吐与便秘等疾病。肠道微生态系统是哺乳动物体内非常复杂的系统，肠道菌群种类可达1000余种，细菌总数可达100万亿，是动物细胞数量的10倍。菌群定植于动物肠道，经过不断的相互作用与相互竞争，形成动态的微生物平衡，参与机体的营养、代谢与免疫调节，对动物健康有重要的影响。
目前，粪菌移植已被作为一种特殊的器官移植。本发明采用健康动物的粪菌液替代抗生素，研究其对断奶仔猪生长性能与腹泻率的影响，为粪菌移植在动物生产中的应用提供参考。
公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提高断奶仔猪生长性能和降低腹泻率的方法，从而克服在畜禽养殖中因滥用抗生素用于预防腹泻与促进生长而导致抗生素不仅抑制致病微生物，还破坏消化道微生态平衡；部分抗生素在畜产品中残留，进而对人类的健康造成极大威胁的缺陷。
本发明提供的技术方案如下：
一种利用粪菌移植提高断奶仔猪生长性能和降低腹泻率的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)粪菌液的制备；
(2)采用菌粪移植的方法对断奶仔猪进行治疗。
作为优选，步骤(2)中所述的粪菌液为已断奶仔猪的粪菌液。
作为优选，步骤(1)中所述的粪菌液的制备方法包括如下步骤：
(A)搅拌：取约2kg动物粪便置于搅拌器，加入10L无菌生理盐水，然后搅拌均匀；
(B)过滤：将粪便浆体经粒径为2.0mm的不锈钢滤网过滤除去其中的大颗粒物质，再经粒径为0.25mm的不锈钢滤网过滤2-3次，得到过滤的样本；
(C)离心与悬浮：将过滤的样本以5000-7000r/min速率离心15min，并使沉淀再悬浮于生理盐水中，得到无色无味的新鲜粪菌液；
(D)存放：将获得的新鲜粪菌液可以置于-80℃作为冻存粪菌液保存1-8周。
作为优选，步骤(A)中所述动物粪便为排出体外0-2h内的新鲜粪便。
作为优选，步骤(A)中加入粪便与无菌生理盐水的质量体积比为1:5。
作为优选，步骤(2)中所述断奶仔猪为21-28日龄的断奶仔猪。
作为优选，步骤(2)中所述的采用菌粪移植的方法对断奶仔猪进行治疗的具体操作为：每日对断奶仔猪饲喂基础饲粮，并口腔灌服粪菌液50-200mL/日。
作为优选，所述基础饲粮按质量百分比包括以下组分：玉米51.62％、豆粕15.00％、膨化大豆13.65％、乳清粉8.00％、乳糖5.00％、鱼粉2.00％、磷酸氢钙1.28％、石粉1.00％、赖氨酸盐酸盐0.57％、苏氨酸0.25％、食盐0.25％、DL-蛋氨酸0.20％、胆碱0.12％、色氨酸0.06％和预混料1.00％。
作为优选，所述预混料为每千克饲粮提供VA4800IU、VD3880IU、VE30IU、VK32.4mg、VB12.0mg、VB28.0mg、VB61.2mg、VB120.03mg、叶酸2.0mg、生物素0.2mg、烟酸40mg、泛酸25.0mg、Cu14.4mg、Fe120mg、Zn125mg、Mn50mg、Co0.48mg、Se0.3mg和I0.3mg。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
(1)本发明采用菌粪移植的方法替代抗生素，使益生菌能在动物肠道内定殖，调节肠道微生态区系，维护消化道的健康状况，其代谢活动产生的有机酸与消化酶等物质可以促进肠道对养分物质的消化、吸收，从而提高仔猪生长性能，可提高断奶仔猪平均日增重和平均日采食量。
(2)本发明的方法可显著降低断奶仔猪的腹泻率。
(3)本方法中采用健康动物的粪菌液可替代抗生素，为粪菌移植在动物生产中的应用提供参考。
附图说明
图1是母猪菌粪移植对断奶仔猪腹泻率的影响。
图2是已断奶仔猪菌粪移植对断奶仔猪腹泻率的影响。
主要附图标记说明：
Ⅰ组-对照组，Ⅱ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ组-试验组。
具体实施方式
下面结合附图，对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。
除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。
实施例：
1材料与方法
1.1试验材料
粪菌液制备:
(1)搅拌：取约2kg动物粪便置于搅拌器，加入10L无菌生理盐水进行初步加工；
(2)过滤：将粪便浆体经2.0mm的不锈钢滤网过滤除去其中的大颗粒物质，再经0.25mm的不锈钢滤网过滤2-3次，得到过滤的样本；
(3)离心与悬浮：将过滤的样本以6000r/min速率离心15min，并使沉淀再悬浮于生理盐水中，得到无色无味的新鲜粪菌液；
(4)存放：将获得的新鲜粪菌液可以置于80℃作为冻存粪菌液保存1-8周。
1.2试验动物及设计
粪菌供体动物：选用健康母猪和已断奶仔猪各1头，无任何已知的传染病，最近2个月内未使用抗菌类药物且未使用易导致肠道微生态紊乱的药物。
粪菌受体动物：选用(21±2)日龄“杜×长×大”三元杂交的断奶仔猪84头，粪菌移植前3d停止用抗菌类药物。本试验采用单因素随机化试验设计，按性别、窝源与体重基本一致原则随机分为7组。Ⅰ组为对照组，饲喂基础饲粮；Ⅱ-VII组为试验组，其中Ⅱ-IV组饲喂基础饲粮，并每日分别口腔灌服50、100、150ml母猪粪菌液，V-VII组饲喂基础饲粮，并每日分别口腔灌服50、100、150ml已断奶仔猪粪菌液。每组3个重复，每个重复4头仔猪，公母各占一半。
1.3饲粮及饲养管理
参照NRC(1998)5-10kg仔猪饲养标准配制成玉米-豆粕型的基础饲粮，其组成与营养水平见表1。试验在广西大学科研猪场进行，试验期为21d。全封闭猪舍，乳头式饮水器，粉料饲喂，自由采食和饮水。在仔猪进入猪舍前对猪舍进行清扫消毒，且试验前按照猪场的常规管理程序进行驱虫、免疫防疫。
表1基础饲粮的组成与营养水平
| 项目 | 含量(％) |
| 原料 | —— |
| 玉米 | 51.62 |
| 豆粕 | 15.00 |
| 膨化大豆 | 13.65 |
| 乳清粉 | 8.00 |
| 乳糖 | 5.00 |
| 鱼粉 | 2.00 |
| 磷酸氢钙 | 1.28 |
| 石粉 | 1.00 |
| 赖氨酸盐酸盐 | 0.57 |
| 苏氨酸 | 0.25 |
| DL-蛋氨酸 | 0.20 |
| 胆碱(50％) | 0.12 |
| 色氨酸 | 0.06 |
| 预混料 | 1.00 |
| 合计 | 100.00 |
| 营养水平 | —— |
| 消化能(MJ/kg) | 14.45 |
| 粗蛋白质 | 18.50 |
| 钙 | 0.90 |
| 有效磷 | 0.46 |
| 可消化赖氨酸 | 1.36 |
| 可消化蛋氨酸 | 0.46 |
| 可消化蛋氨酸+可消化胱氨酸 | 0.73 |
注：预混料为每千克饲粮提供VA4800IU、VD3880IU、VE30IU、VK32.4mg、VB12.0mg、VB28.0mg、VB61.2mg、VB120.03mg、叶酸2.0mg、生物素0.2mg、烟酸40mg、泛酸25.0mg、Cu14.4mg、Fe120mg、Zn125mg、Mn50mg、Co0.48mg、Se0.3mg和I0.3mg。
1.4测定指标及方法
1.4.1生长性能测定
试验开始时(仔猪断奶当天)对每头空腹仔猪进行称重，记录仔猪初始重，断奶后14、21d清晨称量空腹仔猪个体重，计算平均日增重(ADG)。按重复为单位，记录给料量与剩余料量，计算平均日采食量(ADFI)与料重比(F/G)。
1.4.2腹泻率的测定
试验期间每日观察仔猪精神状态与腹泻情况。腹泻评判标准：正常粪便呈条形或者粒状，而腹泻粪便呈软粪、稠状或者液状，成形或者不成形，粪水分离。腹泻率计算公式：腹泻率＝试验期仔猪腹泻头次/(试验猪头数×试验时间)×100％。
1.5数据分析
采用SPSS19.0软件进行单因素方差分析，且进行Duncan多重比较。数据用“平均数±标准差”来表示。
2结果与分析
2.1本发明的方法对断奶仔猪生长性能的影响
表2母猪菌粪移植对断奶仔猪生长性能的影响
注：不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，相同小写字母者差异不显著(P>0.05)，下同。
由表2可知，仔猪平均日增重方面，移植母猪粪菌液的Ⅱ-IV组与对照I组相比显著增加(P<0.05)，其中以处理III组效果最明显，平均日增重达276.67g；平均日采食量方面，处理组较对照组的平均日采食量均有显著增加(P<0.05)，其中处理III组与对照I组相比，平均日采食量增加23.60g，差异显著(P<0.05)；料重比方面，处理III组较对照I组降低了0.22，差异显著(P<0.05)。
表3已断奶仔猪菌粪移植对断奶仔猪生长性能的影响
由表3可知，仔猪平均日增重方面，移植已断奶仔猪粪菌液的V-VII组与对照I组相比显著增加(P<0.05)，其中以处理VI组效果最明显，平均日增重达285.24g；平均日采食量方面，处理组较对照组的平均日采食量均有显著增加(P<0.05)，其中处理VI组与对照I组相比，增加31.39g，差异显著(P<0.05)；料重比方面，处理VI组和处理VII组较对照I组分别降低了0.24和0.23，差异显著(P<0.05)。
由表2-3可知，仔猪平均日增重、平均日采食量方面，移植已断奶仔猪粪菌液的V-VII组与移植母猪粪菌液的Ⅱ-IV组相比均有所增加，其中处理VI组效果显著优于处理III组(P<0.05)；料重比方面，处理III组、处理VI组效果最优，但两者并无显著差异(P>0.05)。
2.2本发明的方法对断奶仔猪腹泻率的影响(见附图1-2)
由图1可知，处理III组较对照I组的腹泻率降低50.62％，差异极显著(P<0.01)；处理II组比对照I组腹泻率下降39.11％，差异显著(P<0.05)，但处理IV组与对照I组无明显差异(P>0.05)。
由图2可知，处理VI组较对照I组的腹泻率降低52.14％，差异极显著(P<0.01)，处理V组、处理VII组比对照I组腹泻率分别下降45.43％、36.71％，差异显著(P<0.05)。
由图1-2可知，断奶仔猪的腹泻率降低效果，以处理III组、处理VI组最优，且处理VI组效果显著优于处理III组(P<0.05)。
3讨论
3.1本发明的方法对断奶仔猪生长性能的影响
本试验结果表明，仔猪平均日增重、平均日采食量方面，移植已断奶仔猪粪菌液的V-VII组与移植母猪粪菌液的Ⅱ-IV组较对照I组均有所增加，其中移植已断奶仔猪粪菌液组的效果最好，且处理VI组效果显著优于处理III组；料重比方面，移植母猪粪菌液的III组、移植已断奶仔猪粪菌液的VI组效果最优，两者并无显著差异。
3.2本发明的方法对断奶仔猪腹泻率的影响
本试验结果表明，移植已断奶仔猪粪菌液的V-VII组与移植母猪粪菌液的Ⅱ-IV组较对照I组的腹泻率均有所降低，其中移植已断奶仔猪粪菌液的VI组、移植母猪粪菌液的III组腹泻率有极显著降低效果，且处理VI组效果显著优于处理III组。
4结论
本发明的方法能明显改善断奶仔猪的生长性能与腹泻率，且移植已断奶仔猪粪菌液100mL时饲养效果最佳，平均日增重为285.24g、平均日采食量为431.35g、料重比为1.51、腹泻率为14.76％。
前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。
Claims (9)
1.一种利用粪菌移植提高断奶仔猪生长性能和降低腹泻率的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)粪菌液的制备；
(2)采用菌粪移植的方法对断奶仔猪进行治疗。
2.根据权利要求1所述的利用粪菌移植提高断奶仔猪生长性能和降低腹泻率的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的粪菌液为已断奶仔猪的粪菌液。
3.根据权利要求1所述的利用粪菌移植提高断奶仔猪生长性能和降低腹泻率的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的粪菌液的制备方法包括如下步骤：
(A)搅拌：取动物粪便置于搅拌器，加入无菌生理盐水，然后搅拌均匀；
(B)过滤：将粪便浆体经粒径为2.0mm的不锈钢滤网过滤除去其中的大颗粒物质，再经粒径为0.25mm的不锈钢滤网过滤2-3次，得到过滤的样本；
(C)离心与悬浮：将过滤的样本以5000-7000r/min速率离心15min，并使沉淀再悬浮于生理盐水中，得到无色无味的新鲜粪菌液；
(D)存放：将获得的新鲜粪菌液可以置于-80℃作为冻存粪菌液保存1-8周。
4.根据权利要求3所述的粪菌液的制备方法，其特征在于，步骤(A)中所述动物粪便为排出体外0-2h内的新鲜粪便。
5.根据权利要求3所述的粪菌液的制备方法，其特征在于，步骤(A)中加入粪便与无菌生理盐水的质量体积比为1:5。
6.根据权利要求1所述的利用粪菌移植提高断奶仔猪生长性能和降低腹泻率的方法，其特征在于，步骤(2)中所述断奶仔猪为21-28日龄的断奶仔猪。
7.根据权利要求1所述的利用粪菌移植提高断奶仔猪生长性能和降低腹泻率的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的采用菌粪移植的方法对断奶仔猪进行治疗的具体操作为：每日对断奶仔猪饲喂基础饲粮，并口腔灌服粪菌液50-200mL/日。
8.根据权利要求7所述的利用粪菌移植提高断奶仔猪生长性能和降低腹泻率的方法，其特征在于，所述基础饲粮按质量百分比包括以下组分：玉米51.62％、豆粕15.00％、膨化大豆13.65％、乳清粉8.00％、乳糖5.00％、鱼粉2.00％、磷酸氢钙1.28％、石粉1.00％、赖氨酸盐酸盐0.57％、苏氨酸0.25％、食盐0.25％、DL-蛋氨酸0.20％、胆碱0.12％、色氨酸0.06％和预混料1.00％。
9.根据权利要求8所述的利用粪菌移植提高断奶仔猪生长性能和降低腹泻率的方法，其特征在于，所述预混料为每千克饲粮提供VA4800IU、VD3880IU、VE30IU、VK32.4mg、VB12.0mg、VB28.0mg、VB61.2mg、VB120.03mg、叶酸2.0mg、生物素0.2mg、烟酸40mg、泛酸25.0mg、Cu14.4mg、Fe120mg、Zn125mg、Mn50mg、Co0.48mg、Se0.3mg和I0.3mg。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Huang Jinhua Inventor after: Wang Shichang Inventor after: Wang Shanru Inventor after: Li Xingfang Inventor before: Wang Shichang Inventor before: Wang Shanru Inventor before: Li Xingfang |
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| COR | Change of bibliographic data | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20160513 Address after: 530004 the Guangxi Zhuang Autonomous Region XiXiangTang Nanning University Road No. 100 Applicant after: Guangxi University Applicant after: GUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE Address before: 530004 the Guangxi Zhuang Autonomous Region XiXiangTang Nanning University Road No. 100 Applicant before: Guangxi University |
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| CB02 | Change of applicant information |
Address after: 530007 the Guangxi Zhuang Autonomous Region XiXiangTang Nanning University Road No. 176 Applicant after: GUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE Applicant after: Guangxi University Address before: 530004 the Guangxi Zhuang Autonomous Region XiXiangTang Nanning University Road No. 100 Applicant before: Guangxi University Applicant before: GUANGXI AGRICULTURAL VOCATIONAL AND TECHNICAL COLLEGE |
|
| COR | Change of bibliographic data | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20151111 |