CN113512496A - 一种倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置及其使用方法和应用 - Google Patents
一种倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置及其使用方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113512496A CN113512496A CN202110776688.2A CN202110776688A CN113512496A CN 113512496 A CN113512496 A CN 113512496A CN 202110776688 A CN202110776688 A CN 202110776688A CN 113512496 A CN113512496 A CN 113512496A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- pool
- cells
- outlet
- inlet
- cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 title claims abstract description 54
- 238000010186 staining Methods 0.000 title claims abstract description 41
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 129
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 67
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 claims abstract description 26
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 claims abstract description 24
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 12
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 11
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 9
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 8
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 7
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 7
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 7
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 5
- 238000005192 partition Methods 0.000 claims 2
- 238000013461 design Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 5
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 3
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 3
- XDFNWJDGWJVGGN-UHFFFAOYSA-N 2-(2,7-dichloro-3,6-dihydroxy-9h-xanthen-9-yl)benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C1C2=CC(Cl)=C(O)C=C2OC2=CC(O)=C(Cl)C=C21 XDFNWJDGWJVGGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000005890 Neuroma Diseases 0.000 description 2
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- BQRGNLJZBFXNCZ-UHFFFAOYSA-N calcein am Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(CN(CC(=O)OCOC(C)=O)CC(=O)OCOC(C)=O)=C(OC(C)=O)C=C1OC1=C2C=C(CN(CC(=O)OCOC(C)=O)CC(=O)OCOC(=O)C)C(OC(C)=O)=C1 BQRGNLJZBFXNCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- MGIODCZGPVDROX-UHFFFAOYSA-N Cy5-bifunctional dye Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCN1C2=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C2C(C)(C)C1=CC=CC=CC(C(C1=CC(=CC=C11)S([O-])(=O)=O)(C)C)=[N+]1CCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O MGIODCZGPVDROX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000008676 import Effects 0.000 description 1
- 230000008611 intercellular interaction Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/38—Caps; Covers; Plugs; Pouring means
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M29/00—Means for introduction, extraction or recirculation of materials, e.g. pumps
- C12M29/04—Filters; Permeable or porous membranes or plates, e.g. dialysis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M29/00—Means for introduction, extraction or recirculation of materials, e.g. pumps
- C12M29/20—Degassing; Venting; Bubble traps
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M37/00—Means for sterilizing, maintaining sterile conditions or avoiding chemical or biological contamination
- C12M37/04—Seals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
- C12M41/12—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of temperature
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
- C12M41/30—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration
- C12M41/34—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration of gas
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
- C12M41/46—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of cellular or enzymatic activity or functionality, e.g. cell viability
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
- G01N1/31—Apparatus therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/84—Systems specially adapted for particular applications
-
- G—PHYSICS
- G02—OPTICS
- G02B—OPTICAL ELEMENTS, SYSTEMS OR APPARATUS
- G02B21/00—Microscopes
- G02B21/0004—Microscopes specially adapted for specific applications
- G02B21/0088—Inverse microscopes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Thermal Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明提供了一种倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置及其使用方法和应用,所述装置包括池体(1),所述池体(1)包括池壁(2)、池底(3)和池盖(5),所述池壁(2)上设置进气口(11)、出气口(12)、进水口(13)和出水口(14),所述池底(3)上设有开口(7),所述池盖(5)上设有染液进出口(9)。本发明还提供了所述倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置的使用方法。本发明所述装置结构合理,设计科学,实现了细胞的原位培养、染色与观察,提高了工作效率。
Description
技术领域
本发明属于细胞培养技术领域,尤其涉及一种倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置及其使用方法和应用。
背景技术
在细胞培养过程中,对活细胞进行动态观测在生命科学研究领域及医学研究领域中具有重要意义,对细胞繁殖转移、细胞吞噬及细胞间的相互作用等进行研究是生命科学的重要基础。
目前,传统的细胞培养在培养箱中完成,尽管传统细胞培养箱的箱内环境控制系统能够尽量避免培养过程中打开箱门造成腔内温度的大幅波动,但也无法杜绝细胞从培养箱中取出,移至室温环境产生的温度变化及细胞污染的可能,也给操作人员增加了转移操作过程的失误风险。细胞染色技术用于区分不同种类、不同形态、不同状态的细胞及细胞间的相互作用,通常是将待检测样本取出,滴入具有不同染色效果的染色液和缓冲液,混合均匀完成染色后,再洗掉影响观察的染色液及缓冲液,完成整个染色过程后转移到显微镜上观察。
现有技术中的培养装置难以满足活细胞的原位培养、原位染色及原位观察的需求。CN209797991U公开了一种原位观测细胞培养箱,包括主机与细胞培养室;所述的主机包括温控装置、气体控制装置和液体控制装置,以及CO2进气口、第一进气口、第一出气口和注水口;所述的气体控制装置的入口与CO2进气口和第一进气口相连接,出口与第一出气口相连接;所述液体控制装置的入口与注水口相连接,出口与第一出气口相连接;所述的细胞培养室包括盒体和上盖板,盒体内放置微流控芯片;所述盒体上设有偶数个液体管路接口;所述上盖板上设有上观察窗;所述盒体底部设有下观察窗,所述下观察窗与所述上观察窗相对设置;所述盒体上设有第二进气口和第二出气口,所述第二进气口与第一出气口进行连通,所述第二出气口与第一进气口进行连通。该装置实现了细胞的原位培养与观察,但是无法直接对装置内的细胞进行染色,操作较为不便。
因此,如何提供一种装置,可以实现细胞的原位培养、染色和观察,方便研究人员的操作,减少外界环境对细胞的影响,已成为亟待解决的问题。
发明内容
针对现有技术的不足和实际需求,本发明提供一种倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置及其使用方法和应用,杜绝了从培养箱中转移细胞到室温环境中产生的影响,也避免了操作人员转移操作中可能出现的失误,同时满足了细胞的原位培养、染色和观察,便于实时观察细胞的培养、吞噬及相互作用等情况。
为达此目的,本发明采用如下技术方案:
第一方面,本发明提供了一种倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置,所述装置包括池体1,所述池体1包括池壁2、池底3和池盖5,所述池壁2上设置进气口11、出气口12、进水口13和出水口14,所述池底3上设有开口7,所述池盖5上设有染液进出口9。
本发明中,通过设置进气口11、出气口12、进水口13和出水口14,实现了装置内气体组成及温度的恒定,避免因周围环境条件骤变而对细胞的生理状态造成影响;通过设置可以放置培养皿的开口7,实现了细胞的原位培养与观察,配合染液进出口9与注射器的使用,实现了细胞的原位染色与观察,方便对细胞进行实时观测及定位,实验结果更加准确,使用也更加方便。
优选地,所述装置中还设有池隔板4,所述池隔板4与所述池壁2、池底3围合的闭合空间中装有恒温循环水。
优选地,所述池盖5上还设有温度传感器插入口8。
优选地,所述装置还包括温度控制系统15、CO2气体控制系统16和加湿系统17。
优选地,所述池体1中含有CO2、空气和水蒸气的混合气体。
本发明中,所述混合气体的具体组分可根据培养的细胞种类进行选择,此处不做限定。
优选地,所述进气口11、出气口12、进水口13、出水口14和染液进出口9上装有过滤器10。
本发明中,所述过滤器10帮助维持培养池内的无菌环境。
优选地,所述开口7的大小与培养皿的大小相同。
优选地,所述开口7的四周设置环形支撑板,所述支撑板的上方装有密封圈6。
本发明中,通过合适大小的开口7与环形支撑板的相互配合,可以将培养皿固定在池底3,具有抗压、减震、维持细胞培养环境稳定的效果。
优选地,所述染液进出口9的数量与开口7的数量相同。
本发明中,染液进出口9和开口7的数量可根据具体的实验需求加以确定,此处不做限定。
作为优选技术方案,本发明所述倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置,包括池体1,所述池体1包括池壁2、池底3和池盖5,所述池壁2上设置进气口11、出气口12、进水口13和出水口14,所述池底3上设有开口7,所述池盖5上设有温度传感器插入口8和染液进出口9,所述进气口11、出气口12、进水口13、出水口14和染液进出口9上装有过滤器10;
所述装置中还设有池隔板4,所述池隔板4与所述池壁2、池底3围合的闭合空间中装有恒温循环水;
所述装置还包括温度控制系统15、CO2气体控制系统16和加湿系统17;
所述池体1中含有CO2、空气和水蒸气的混合气体;
所述开口7的大小与培养皿的大小相同,其四周设置环形支撑板,所述支撑板的上方装有密封圈6;
所述染液进出口9的数量与开口7的数量相同。
第二方面,本发明提供了一种第一方面所述的倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置的使用方法,所述使用方法包括:
将所述装置和培养皿消毒后置于无菌操作台中,将细胞接种在培养皿中,并将接种后的培养皿转移到装置的池体1的开口7中,盖上池盖5,调节池体1中的气体和温度,培养细胞,并进行观察。
本发明中,所述装置使用简单,方便操作,降低了操作失误的可能性,提高了研究人员的工作效率,应用价值极高。
优选地,所述使用方法还包括更换过滤器10的步骤。
优选地,所述消毒包括紫外消毒和/或高温消毒。
优选地,所述盖上池盖5后还包括将池体1转移到显微镜上的步骤。
优选地,所述调节池体1中的气体和温度的步骤包括:
将CO2气体控制系统16连入进气口11和出气口12,调节气体流量,排尽池体1中的空气;
将设好温度的循环水管连入进水口13和出水口14,装上温度控制系统15。
优选地,所述使用方法还包括染色的步骤。
优选地,所述染色的方法包括:
用注射器从染液进出口9中吸出培养液,加入染液,染色后吸出,再加入洗液清洗,吸出洗液。
作为优选技术方案,本发明所述倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置的使用方法,包括以下步骤:
更换进气口11、出气口12、进水口13、出水口14和染液进出口9上的过滤器10,将所述装置和培养皿紫外消毒和/或高温消毒后置于无菌操作台中;
将细胞接种在培养皿中,并将接种后的培养皿转移到装置的池体1的开口7中,盖上池盖5,将池体1转移到显微镜上;
将CO2气体控制系统16连入进气口11和出气口12,调节气体流量,排尽池体1中的空气;将设好温度的循环水管连入进水口13和出水口14,装上温度控制系统15,调节池体1中的气体和温度,培养细胞,并进行观察;
用注射器从染液进出口9中吸出培养液,加入染液,染色后吸出,再加入洗液清洗,晃动池体1,吸出洗液,染色后进行观察。
相比于现有技术,本发明具有如下有益效果:
本发明所述倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置结构设置科学合理,可以实现细胞的原位培养与观察,可以避免传统培养箱法培养中取出细胞时因环境骤变从而引发细胞的应激反应,生理状态发生改变从而对实验结果造成影响;通过设置染液进出口9实现了细胞的原位染色,从而可以对待观察细胞进行持续地观察,免除了寻找观察对象所需的时间,提升了工作效率;操作简单,使用方便,降低了实验失误的风险,促进了相关产品的推广与使用。
附图说明
图1为本发明实施例1中的倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置的侧视图;
图2为本发明实施例1中的倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置的俯视图;
图3为本发明实施例1中的倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置的开口7的结构俯视图;
图4为本发明实施例2中hMSCs细胞染色后激光共聚焦显微镜拍摄的图片(比例尺=50μm);
图5为本发明实施例3中的倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置的侧视图;
图6为本发明实施例3中的倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置的俯视图;
图7为本发明实施例4中N2A细胞染色后激光共聚焦显微镜拍摄的图片(比例尺=50μm);
图8为本发明实施例5中4T1细胞染色后激光共聚焦显微镜拍摄的图片(比例尺=10μm)。
图中,1-池体,2-池壁,3-池底,4-池隔板,5-池盖,6-密封圈,7-开口,8-温度传感器插入口,9-染液进出口,10-过滤器,11-进气口,12-出气口,13-进水口,14-出水口,15-温度控制系统,16-CO2气体控制系统,17-加湿系统。
具体实施方式
为进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果,以下结合实施例和附图对本发明作进一步地说明。可以理解的是,此处所描述的具体实施方式仅仅用于解释本发明,而非对本发明的限定。
实施例中未注明具体技术或条件者,按照本领域内的文献所描述的技术或条件,或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。
材料:
培养皿购自美国康宁Corning;
过滤器购自Thermo Scientific;
小鼠乳腺癌4T1细胞、小鼠神经瘤母细胞N2A细胞和人骨髓间充质干细胞hMSCs细胞购自酶研生物;
细胞培养液购自Gibco;
细胞染液Calcein-AM和PI购自Invitrogen。
细胞染液DAPI、CY5和DCFH购自Thermo Scientific。
实施例1
本实施例提供一种倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置,其侧视图如图1所示,俯视图如图2所示。
所述倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置包括池体1,所述池体1包括池壁2、池底3和池盖5,所述池壁2上设置进气口11、出气口12、进水口13和出水口14,所述池底3上设有开口7,所述池盖5上设有温度传感器插入口8和染液进出口9,所述进气口11、出气口12、进水口13、出水口14和染液进出口9上装有过滤器10;
所述装置中还设有池隔板4,所述池隔板4与所述池壁2、池底3围合的闭合空间中装有恒温循环水;
所述装置还包括温度控制系统15、CO2气体控制系统16和加湿系统17;
所述池体1中含有CO2、空气和水蒸气的混合气体;
所述开口7的大小与培养皿的大小相同,直径为20mm,其四周设置环形支撑板,所述支撑板的上方装有密封圈6,开口7的结构俯视图如图3所示;
所述染液进出口9的数量与开口7的数量相同,均为4个。
本发明所述倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置设计科学,结构合理,可以实现细胞的原位培养、染色和观察。
实施例2
本实施例使用实施例1制备的倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置,对细胞进行培养、染色和观察,具体步骤如下:
(1)更换进气口11、出气口12、进水口13、出水口14和染液进出口9上的过滤器10,将所述装置和培养皿紫外消毒后置于无菌操作台中;
(2)将人骨髓间充质干细胞(hMSCs)接种在培养皿中,并将接种后的培养皿转移到装置的池体1的开口7中,盖上池盖5,将池体1转移到激光共聚焦显微镜的载物台上;
(3)将CO2气体控制系统16连入进气口11和出气口12,调节气体流量,排尽池体1中的空气;将设好温度的循环水管连入进水口13和出水口14,装上温度控制系统15,调节池体1中的气体为5%的CO2和空气的混合气体,调节温度为37℃,培养细胞,并进行观察;
(4)人骨髓间充质干细胞(hMSCs)在池体1中于37℃和5%的CO2的条件下培养48h后,用注射器从染液进出口9中吸出培养液,用PBS清洗5次。从染液进出口9中加入用PBS稀释好的各组分浓度分别为2μmol/L的Calcein-AM和4μmol/L的PI,使染色液刚好没过样品,孵育15min,用PBS清洗,晃动池体1,吸出洗液,进行激光共聚焦显微镜观察;
(5)实验结束后,关闭气源、水源,拆下温度传感器;从激光共聚焦显微镜上移下池体1,打开池盖5,取出共聚焦培养皿,拆下所有的过滤器10,将池体1进行杀菌消毒,并放入无菌操作台中后续备用。
细胞的免疫荧光图片如图4所示。由图可以看出,细胞形态规则,密度均匀,活细胞数量很多,证明细胞生理状态良好,所述装置可以为细胞提供适宜的培养环境,并且可以实现细胞的原位培养、染色与观察,使用方便,提升了工作效率。
实施例3
本实施例提供一种倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置,其侧视图如图5所示,俯视图如图6所示。
所述倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置包括池体1,所述池体1包括池壁2、池底3和池盖5,所述池壁2上设置进气口11、出气口12、进水口13和出水口14,所述池底3上设有开口7,所述池盖5上设有温度传感器插入口8和染液进出口9,所述进气口11、出气口12、进水口13、出水口14和染液进出口9上装有过滤器10;
所述装置中还设有池隔板4,所述池隔板4与所述池壁2、池底3围合的闭合空间中装有恒温循环水;
所述装置还包括温度控制系统15、CO2气体控制系统16和加湿系统17;
所述池体1中含有CO2、空气和水蒸气的混合气体;
所述开口7的大小与培养皿的大小相同,直径为20mm,其四周设置环形支撑板,所述支撑板的上方装有密封圈6,开口7的结构与实施例1中相同;
所述染液进出口9的数量与开口7的数量相同,均为6个。
本发明所述倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置可以实现细胞的原位培养、原位观察及原位染色,使用方便,提升了工作效率。
实施例4
本实施例使用实施例3制备的倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置,对小鼠神经瘤母细胞(N2A)进行培养、染色和观察,使用的细胞染液为DCFH,具体染色步骤与实施例2相同。
细胞的免疫荧光图片如图7所示。由图可以看出细胞分布均匀,形态规则,细胞生理状态良好,内部结构清晰可见,说明所述倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置具有实际应用的价值。
实施例5
本实施例使用实施例3制备的倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置,对小鼠乳腺癌细胞(4T1)进行培养、染色和观察,使用的细胞染液为DAPI和CY5,具体染色步骤与实施例2相同。
细胞的免疫荧光图片如图8所示。由图可以看出细胞形态清晰,染色清楚。结合图4、7和8可知,本申请所述的倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置对多种细胞类型均适用,应用前景广阔。
综上所述,本发明提供了一种倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置,所述装置实现了细胞培养过程中细胞的原位培养与观察,避免细胞因从培养箱中移出而产生应激状态,生理状态稳定,实验结果更加准确;染液进出口9与注射器配合使用,实现了细胞的原位染色,可以对观察对象进行连续观察,提升了工作效率;结构合理,使用方便,具有用于实际科研工作中的价值,应用前景广阔。
申请人声明,本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法,但本发明并不局限于上述详细方法,即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了,对本发明的任何改进,对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等,均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
Claims (10)
1.一种倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置,其特征在于,所述装置包括池体(1),所述池体(1)包括池壁(2)、池底(3)和池盖(5),所述池壁(2)上设置进气口(11)、出气口(12)、进水口(13)和出水口(14),所述池底(3)上设有开口(7),所述池盖(5)上设有染液进出口(9)。
2.根据权利要求1所述的倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置,其特征在于,所述装置中还设有池隔板(4),所述池隔板(4)与所述池壁(2)、池底(3)围合的闭合空间中装有恒温循环水;
优选地,所述池盖(5)上还设有温度传感器插入口(8);
优选地,所述装置还包括温度控制系统(15)、CO2气体控制系统(16)和加湿系统(17);
优选地,所述池体(1)中含有CO2、空气和水蒸气的混合气体。
3.根据权利要求1或2所述的倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置,其特征在于,所述进气口(11)、出气口(12)、进水口(13)、出水口(14)和染液进出口(9)上装有过滤器(10)。
4.根据权利要求1~3任一项所述的倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置,其特征在于,所述开口(7)的大小与培养皿的大小相同;
优选地,所述开口(7)的四周设置环形支撑板,所述支撑板的上方装有密封圈(6);
优选地,所述染液进出口(9)的数量与开口(7)的数量相同。
5.根据权利要求1~4任一项所述的倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置,其特征在于,所述装置包括池体(1),所述池体(1)包括池壁(2)、池底(3)和池盖(5),所述池壁(2)上设置进气口(11)、出气口(12)、进水口(13)和出水口(14),所述池底(3)上设有开口(7),所述池盖(5)上设有温度传感器插入口(8)和染液进出口(9),所述进气口(11)、出气口(12)、进水口(13)、出水口(14)和染液进出口(9)上装有过滤器(10);
所述装置中还设有池隔板(4),所述池隔板(4)与所述池壁(2)、池底(3)围合的闭合空间中装有恒温循环水;
所述装置还包括温度控制系统(15)、CO2气体控制系统(16)和加湿系统(17);
所述池体(1)中含有CO2、空气和水蒸气的混合气体;
所述开口(7)的大小与培养皿的大小相同,其四周设置环形支撑板,所述支撑板的上方装有密封圈(6);
所述染液进出口(9)的数量与开口(7)的数量相同。
6.一种权利要求1~5任一项所述的倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置的使用方法,其特征在于,所述使用方法包括:
将所述装置和培养皿消毒后置于无菌操作台中,将细胞接种在培养皿中,并将接种后的培养皿转移到装置的池体(1)的开口(7)中,盖上池盖(5),调节池体(1)中的气体和温度,培养细胞,并进行观察。
7.根据权利要求6所述的倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置的使用方法,其特征在于,所述使用方法还包括更换过滤器(10)的步骤;
优选地,所述消毒包括紫外消毒和/或高温消毒;
优选地,所述盖上池盖(5)后还包括将池体(1)转移到显微镜上的步骤。
8.根据权利要求6或7所述的倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置的使用方法,其特征在于,所述调节池体(1)中的气体和温度的步骤包括:
将CO2气体控制系统(16)连入进气口(11)和出气口(12),调节气体流量,排尽池体(1)中的空气;
将设好温度的循环水管连入进水口(13)和出水口(14),装上温度控制系统(15)。
9.根据权利要求6~8任一项所述的倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置的使用方法,其特征在于,所述使用方法还包括染色的步骤;
优选地,所述染色的方法包括:
用注射器从染液进出口(9)中吸出培养液,加入染液,染色后吸出,再加入洗液清洗,吸出洗液。
10.根据权利要求6~9任一项所述的倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置的使用方法,其特征在于,所述使用方法包括:
更换进气口(11)、出气口(12)、进水口(13)、出水口(14)和染液进出口(9)上的过滤器(10),将所述装置和培养皿紫外消毒和/或高温消毒后置于无菌操作台中;
将细胞接种在培养皿中,并将接种后的培养皿转移到装置的池体(1)的开口(7)中,盖上池盖(5),将池体(1)转移到显微镜上;
将CO2气体控制系统(16)连入进气口(11)和出气口(12),调节气体流量,排尽池体(1)中的空气;将设好温度的循环水管连入进水口(13)和出水口(14),装上温度控制系统(15),调节池体(1)中的气体和温度,培养细胞,并进行观察;
用注射器从染液进出口(9)中吸出培养液,加入染液,染色后吸出,再加入洗液清洗,晃动池体(1),吸出洗液,染色后进行观察。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110776688.2A CN113512496A (zh) | 2021-07-09 | 2021-07-09 | 一种倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置及其使用方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110776688.2A CN113512496A (zh) | 2021-07-09 | 2021-07-09 | 一种倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置及其使用方法和应用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN113512496A true CN113512496A (zh) | 2021-10-19 |
Family
ID=78066737
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202110776688.2A Pending CN113512496A (zh) | 2021-07-09 | 2021-07-09 | 一种倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置及其使用方法和应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN113512496A (zh) |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20010050810A1 (en) * | 1997-09-04 | 2001-12-13 | Lorincz Andrew E. | Microscope slide having culture media and method for use |
AU1866102A (en) * | 1996-11-01 | 2002-04-18 | University Of Pittsburgh | A method and apparatus for holding cells |
CN104830681A (zh) * | 2014-02-09 | 2015-08-12 | 李保伟 | 一种细胞培养载玻片系统 |
CN205750100U (zh) * | 2016-06-28 | 2016-11-30 | 中国人民解放军军事医学科学院附属医院 | 细胞培养及细胞免疫化学染色装置 |
CN107699486A (zh) * | 2017-09-22 | 2018-02-16 | 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 | 用于染色观察的细胞培养皿及细胞培养染色、观察方法 |
CN209797991U (zh) * | 2018-12-28 | 2019-12-17 | 苏州汶颢微流控技术股份有限公司 | 一种原位观测细胞培养箱 |
CN112513631A (zh) * | 2018-08-03 | 2021-03-16 | 奥林巴斯株式会社 | 细胞检查装置和细胞检查方法 |
-
2021
- 2021-07-09 CN CN202110776688.2A patent/CN113512496A/zh active Pending
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU1866102A (en) * | 1996-11-01 | 2002-04-18 | University Of Pittsburgh | A method and apparatus for holding cells |
US20010050810A1 (en) * | 1997-09-04 | 2001-12-13 | Lorincz Andrew E. | Microscope slide having culture media and method for use |
CN104830681A (zh) * | 2014-02-09 | 2015-08-12 | 李保伟 | 一种细胞培养载玻片系统 |
CN205750100U (zh) * | 2016-06-28 | 2016-11-30 | 中国人民解放军军事医学科学院附属医院 | 细胞培养及细胞免疫化学染色装置 |
CN107699486A (zh) * | 2017-09-22 | 2018-02-16 | 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 | 用于染色观察的细胞培养皿及细胞培养染色、观察方法 |
CN112513631A (zh) * | 2018-08-03 | 2021-03-16 | 奥林巴斯株式会社 | 细胞检查装置和细胞检查方法 |
CN209797991U (zh) * | 2018-12-28 | 2019-12-17 | 苏州汶颢微流控技术股份有限公司 | 一种原位观测细胞培养箱 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102174395B (zh) | 诱导多能干细胞自动化扩增与培养系统 | |
CN102296029B (zh) | 灌注式生物反应器系统 | |
TWI233449B (en) | High efficient cell-cultivating device | |
CN105586249B (zh) | 一种可实现三维支架循环灌流的循环灌流生物反应器装置 | |
CN203048953U (zh) | 一种可拆卸的植物组织液体培养装置 | |
CN103194390B (zh) | 双环路振荡灌注式生物反应系统 | |
JP5055479B2 (ja) | 自動細胞培養装置 | |
CN101899394B (zh) | 外循环动物细胞培养生物反应器 | |
CN110540937A (zh) | 一种适用于gmp合规自动化生产的多隔舱单元培养系统 | |
Grayson et al. | Bioreactor cultivation of functional bone grafts | |
CN203320029U (zh) | 片状载体固流床贴壁细胞制备装置 | |
CN102835310A (zh) | 一种双盘组合式植物组织培养容器 | |
CN101402917B (zh) | 一种生产组织工程产品的生物反应器 | |
JPS6231908B2 (zh) | ||
CN113512496A (zh) | 一种倒置显微镜用细胞的原位培养、染色和观察的装置及其使用方法和应用 | |
CN2863808Y (zh) | 一种细胞多槽培养器 | |
JP5981653B2 (ja) | 無菌条件下の植物の大規模成長のためのバイオリアクタ容器 | |
CN111334429A (zh) | 一种模块式多功能细胞工作站 | |
CN116179352A (zh) | 全自动化干细胞培养设备 | |
CN108977358B (zh) | 一种封闭式生物反应器及其细胞培养方法 | |
CN208857315U (zh) | 一种植物细胞和器官液体培养袋 | |
CN114276913A (zh) | 一种肿瘤细胞智能培养系统及方法 | |
CN201770705U (zh) | 外循环动物细胞培养生物反应器 | |
CN213295382U (zh) | 一种抗肿瘤实验用肿瘤细胞三维培育装置 | |
CN1063224C (zh) | 气升式周期浸没光照植物细胞组织器官培养方法及培养反应器 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |