CN113502265A - 将t细胞重编程为类nk细胞的诱导剂及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了将T细胞重编程为类NK细胞的诱导剂及其应用，所述诱导剂包括DNA甲基转移酶抑制剂、组蛋白去乙酰酶抑制剂或组蛋白甲基转移酶EZH2抑制剂中的任意一种或至少两种的组合。本发明采用诱导剂诱导T细胞甲基化水平降低、抑制组蛋白去乙酰化及组蛋白甲基化，并表达NK细胞受体及细胞因子，实现了体外重编程T细胞为类NK细胞的目的，方法简单、效率高、周期短，制备的类NK细胞体外杀伤效果明显，在细胞免疫治疗领域具有重要意义。

Description

将T细胞重编程为类NK细胞的诱导剂及其应用

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及将T细胞重编程为类NK细胞的诱导剂及其应用。

背景技术

NK细胞是天然免疫系统的重要组成部分，其不需活化即可杀伤异常细胞，且杀伤效应无组织相容性复合体(MHC)限制性。NK细胞是人体内最有效、活力最强的免疫细胞之一，通过NKp46等NK细胞受体(NCR)识别病毒及病毒感染细胞，参与多种病毒的免疫应答反应。但是，由于人体内自然存在的NK细胞数量和再生能力有限，细胞来源成为限制NK细胞应用于肿瘤治疗的主要障碍。T细胞表面的T细胞受体(TCR)识别病毒感染细胞或外源抗原，并做出反应。类NK细胞不仅可以表达NCR受体如NKp46、NKp30、NKp44和NKG2D等，而且可以表达功能完整的TCR受体，同时具备T细胞和NK细胞的功能。类NK细胞具有比正常NK细胞更强的杀伤活性及更广谱的抗肿瘤效应，同时还能在体外条件下大量增殖，体外增殖的类NK细胞能在体内继续存活三周以上。将T细胞重编程为类NK细胞，为肿瘤及相关疾病的免疫治疗提供一种全新的细胞源，将极大地推动肿瘤细胞免疫治疗的发展。

目前，T细胞重编程方法主要基于转基因手段，包括慢病毒转染、PB系统电转、CRISPR/cas9系统敲除等，然而这些方法存在诸多缺陷，例如，慢病毒转染方式处理周期长、过程繁琐，电转方式会损失大量原代T细胞、效率较低，基因过表达或敲除过程存在脱靶几率，且以上三种方式均较难实现规模化应用，仍然不能从根本上实现体外大规模获取NK细胞的效果。

能否基于化合物药物在体外实现T细胞重编程，大规模制备类NK细胞，现有技术尚没有相关研究报道。

发明内容

针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供了将T细胞重编程为类NK细胞的诱导剂及其应用，采用诱导剂处理T细胞，使得T细胞去甲基化水平降低，组蛋白乙酰化及甲基化的进程受到抑制，并表达NK细胞的表面受体，分泌细胞因子，实现了体外重编程T细胞为类NK细胞的目的。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种将T细胞重编程为类NK细胞的诱导剂，所述诱导剂包括DNA甲基转移酶抑制剂、组蛋白去乙酰酶抑制剂或组蛋白甲基转移酶EZH2抑制剂中的任意一种或至少两种的组合。

本发明中，采用小分子药物DNA甲基转移酶抑制剂处理T细胞，使T细胞表达NK细胞受体，实现了体外将T细胞重编程为类NK细胞的目的。

优选地，所述DNA甲基转移酶抑制剂包括DNA甲基转移酶1抑制剂，优选为地西他滨和/或GSK-3484862。

本发明中，DNA甲基转化酶1(DNA methyltransferase 1，DNMT1)是人体最重要的甲基转移酶，还具有调节细胞周期和调控肿瘤抑制基因表达的能力。地西他滨(decitabine，DAC)是一种胞嘧啶类似物，属于特异性甲基转移酶抑制剂，可与DNA甲基转移酶共价结合抑制酶活性，使DNA去甲基化，从而使抑癌基因重新表达。GSK-3484862是另一种DNMT1非共价抑制剂，通过诱导DNA低甲基化达到抗癌症的作用。

本发明中，采用地西他滨和/或GSK-3484862诱导T细胞甲基化水平降低并表达NK细胞杀伤相关分子，实现了体外重编程T细胞为类NK细胞的目的。

优选地，所述组蛋白去乙酰酶抑制剂包括Mocetinostat、Givinostat或Entinostat中的任意一种或至少两种的组合。

组蛋白去乙酰酶(HDAC)在染色体的结构修饰和基因表达调控中发挥着重要的作用，它可以抑制核小体的松弛，从而抑制各种转录因子和协同转录因子与DNA位点的结合，能与其他染色质调节器相互作用，调节表观遗传过程。Mocetinostat、Givinostat(ITF2357)以及Entinostat(MS-275)均是HDAC的新型异质选择性抑制剂。

优选地，所述组蛋白甲基转移酶抑制剂包括Tazemetostat和/或GSK126。

组蛋白甲基转移酶Zeste同源蛋白2增强子(enhancer of zeste homolog 2，EZH2)是多梳抑制复合体2(PRC2)的酶催化亚基，可通过对核小体组蛋白H3的27位赖氨酸(H3K27)进行甲基化修饰，进而导致下游靶基因的沉默，在细胞凋亡、细胞周期及细胞分化等重要生物学过程中发挥重要作用。Tazemetostat是一种口服EZH2小分子抑制剂，GSK126(GSK2816126)是一种新型的选择性酶活性抑制剂。

优选地，所述诱导剂还包括药学上接受的辅料。

优选地，所述辅料包括载体、稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、乳化剂、助溶剂、增溶剂、渗透压调节剂、表面活性剂、包衣材料、着色剂、pH调节剂、抗氧剂、抑菌剂或缓冲剂中的任意一种或至少两种的组合。

第二方面，本发明提供了一种将T细胞重编程为类NK细胞的方法，所述方法包括：

将激活的T细胞与第一方面所述的诱导剂共培养，得到类NK细胞。

优选地，所述诱导剂包括地西他滨、GSK-3484862、Mocetinostat、Givinostat、Entinostat、Tazemetostat或GSK126中的任意一种或至少两种的组合。

优选地，所述地西他滨的终浓度为0.05～0.5μM，例如可以是0.05μM、0.1μM、0.2μM、0.3μM、0.4μM或0.5μM。

优选地，所述GSK-3484862的终浓度为0.5～8μM，例如可以是0.5μM、1μM、2μM、3μM、4μM、5μM、6μM、7μM或8μM。

优选地，所述Mocetinostat的终浓度为0.1～0.5μM，例如可以是0.1μM、0.2μM、0.3μM、0.4μM或0.5μM。

优选地，所述Givinostat的终浓度为0.05～1μM，例如可以是0.05μM、0.1μM、0.2μM、0.3μM、0.4μM、0.5μM、0.6μM、0.7μM、0.8μM、0.9μM或1μM。

优选地，所述Entinostat的终浓度为0.05～1μM，例如可以是0.05μM、0.1μM、0.2μM、0.3μM、0.4μM、0.5μM、0.6μM、0.7μM、0.8μM、0.9μM或1μM。

优选地，所述Tazemetostat的终浓度为0.1～5μM，例如可以是0.1μM、0.5μM、1μM、2μM、3μM、4μM或5μM。

优选地，所述GSK126的终浓度为0.05～1μM，例如可以是0.05μM、0.1μM、0.2μM、0.3μM、0.4μM、0.5μM、0.6μM、0.7μM、0.8μM、0.9μM或1μM。

优选地，所述共培养的时间为3～10天，例如可以是3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天或10天，优选为5天。

优选地，所述将T细胞重编程为类NK细胞的方法包括：

向激活的T细胞中加入终浓度为0.05～0.5μM的地西他滨或终浓度为0.5～8μM的GSK-3484862、终浓度为0.05～1μM的GSK126、终浓度为0.1～0.5μM的Mocetinostat、终浓度为0.05～1μM的Givinostat、终浓度为0.05～1μM的Entinostat或终浓度为0.1～5μM的Tazemetostat中的任意一种或至少两种的组合，培养3～10天，每天进行半数换液，得到类NK细胞。

第三方面，本发明提供了一种第二方面所述的方法制备得到的类NK细胞，所述类NK细胞表达NK细胞受体和T细胞受体。

优选地，所述NK细胞受体包括NKp46、NKp30、NKp44或NKG2D中的任意一种或至少两种的组合。

第四方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括第三方面所述的类NK细胞。

优选地，所述药物组合物还包括药学上接受的载体、赋形剂或稀释剂中的任意一种或至少两种的组合。

第五方面，本发明提供了第一方面所述的诱导剂、第三方面所述的类NK细胞或第四方面所述的药物组合物在制备细胞免疫治疗药物中的应用。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

(1)本发明采用小分子药物DNA甲基转移酶抑制剂、组蛋白去乙酰酶抑制剂或组蛋白甲基转移酶EZH2抑制剂中的任意一种或至少两种的组合处理T细胞，使T细胞表达NK细胞受体，实现了体外将T细胞重编程为类NK细胞的目的；

(2)本发明采用上述诱导剂诱导产生的重编程T细胞显著高表达NK细胞受体NKp46和NKp30，体外杀伤效果明显，具有稳定的T细胞和NK细胞双重功能；所述重编程T细胞还可以分泌IFN-γ和颗粒酶B等细胞因子，产生免疫效应；

(3)本发明的制备类NK细胞的方法工艺简单、重编程效率高，显著缩短了T细胞体外重编程周期，提高了原代T细胞的利用率，适合于大规模工艺推广，在细胞免疫治疗领域具有重要意义。

附图说明

图1A为DMSO处理的T细胞中CD4 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；图1B为DAC诱导的T细胞中CD4 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；

图2A为DMSO处理的T细胞中CD8 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；图2B为DAC诱导的T细胞中CD8 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；

图3A为DMSO处理的T细胞中CD4 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；图3B为GSK-3484862诱导的T细胞中CD4 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；

图4A为DMSO处理的T细胞中CD8 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；图4B为GSK-3484862诱导的T细胞中CD8 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；

图5A为DMSO处理的T细胞中CD4 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；图5B为DAC和Mocetinostat共同诱导的T细胞中CD4 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；

图6A为DMSO处理的T细胞中CD8 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；图6B为DAC和Mocetinostat共同诱导的T细胞中CD8 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；

图7A为DMSO处理的T细胞中CD4 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；图7B为GSK-3484862和Mocetinostat共同诱导的T细胞中CD4 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；

图8A为DMSO处理的T细胞中CD8 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；图8B为GSK-3484862和Mocetinostat共同诱导的T细胞中CD8 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；

图9A为DMSO处理的T细胞中CD4 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；图9B为GSK-3484862诱导的T细胞中CD4 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；

图10A为DMSO处理的T细胞中CD8 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；图10B为GSK-3484862诱导的T细胞中CD8 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；

图11A为Tazemetostat处理的T细胞中CD4 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；图11B为GSK126诱导的T细胞中CD4 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；

图12A为Tazemetostat处理的T细胞中CD8 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；图12B为GSK126诱导的T细胞中CD8 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；

图13A为Tazemetostat和GSK-3484862共同诱导的T细胞中CD4 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；图13B为GSK126和GSK-3484862共同诱导的T细胞中CD4 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；

图14A为Tazemetostat和GSK-3484862共同诱导的T细胞中CD8 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；图14B为GSK126和GSK-3484862共同诱导的T细胞中CD8 T细胞NKp30和NKp46的表达情况图片；

图15A为GSK-3484862、DAC、Mocetinostat、GSK-3484862和Mocetinostat共同诱导、DAC和Mocetinostat共同诱导后的T细胞和DMSO处理后的T细胞对K562的体外杀伤结果图片；

图15B为GSK-3484862、Tazemetostat、GSK126、GSK-3484862和Tazemetostat共同诱导、GSK-3484862和GSK126共同诱导后的T细胞和DMSO处理后的T细胞对K562的体外杀伤结果图片；

图16A为DAC诱导T细胞与K562共培养分泌IFN-γ的水平的结果图片；图16B为DAC诱导T细胞与K562共培养分泌颗粒酶B的水平的结果图片；

图17A为GSK-3484862诱导T细胞与K562共培养分泌IFN-γ的水平的结果图片；图17B为GSK-3484862诱导T细胞与K562共培养分泌颗粒酶B的水平的结果图片；

图18A为DAC和Mocetinostat共同诱导T细胞与K562共培养分泌IFN-γ的水平的结果图片；图18B为DAC和Mocetinostat共同诱导T细胞与K562共培养分泌颗粒酶B的水平的结果图片；

图19A为GSK-3484862和Mocetinostat共同诱导T细胞与K562共培养分泌IFN-γ的水平的结果图片；图19B为GSK-3484862和Mocetinostat共同诱导T细胞与K562共培养分泌颗粒酶B的水平的结果图片。

具体实施方式

为进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合实施例和附图对本发明作进一步地说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施方式仅仅用于解释本发明，而非对本发明的限定。

实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。

材料：

脐带血来自广东省脐带血造血干细胞库；

Pan T细胞分离试剂盒购自STEMCELL Technologies(加拿大)；

Transact购自德国美天旎生物技术有限公司；

地西他滨购自Selleck(中国，上海蓝木化工有限公司)；

GSK-3484862、GSK126、Mocetinostat、Givinostat、Entinostat和Tazemetostat购自MCE(MedChemExpress)公司；

CD3 PE-Cy7、CD4 APC-Cy7、CD8 FITC、NKp30 PE和NKp46 APC购自均购自BioLegend(美国)；

K562细胞来自ATCC；

ELISA检测试剂购自达科为生物技术有限公司。

实施例1人脐血原代T细胞的分离和体外培养

本实施例采用Ficoll-hypaque(聚蔗糖-泛影葡胺)密度梯度离心法从脐带血中分离单个核细胞(UCBMC)，取4×10⁷个CD3阳性UCBMC过夜培养，细胞密度为2×10⁶/mL，剩余UCBMC冻存；使用Pan T细胞分离试剂盒进行T细胞分选，培养一段时间获得≥4×10⁷个CD3阳性T细胞，活率≥70％，无细菌、真菌、支原体等外源微生物污染。

实施例2小分子药物诱导T细胞重编程

(1)取Transact激活36小时的T细胞，300g离心5min，用IMDM+5％FBS+1％双抗(100×青霉素-链霉素混合溶液)+IL2(300U)重悬T细胞并调整T细胞密度为(2～3)×10⁵个/mL；

(2)分别向重悬的T细胞中加入各组小分子抑制剂药物，各药物添加的终浓度如表1所示。每天进行半数换液，并根据换液后的体积补加新的药物；以初次加药记为Day0，持续补药到Day5时，300g离心5min换液，之后采用IMDM+5％FBS+1％双抗(100×青霉素-链霉素混合溶液)继续培养。

表1

分组	药物(浓度)
		1	DAC(0.2μM)
2	GSK-3484862(2μM)
		3	Mocetinostat(0.2μM)
4	Tazemetostat(2.5μM)
		5	GSK126(0.1μM)
6	DAC+Mocetinostat(0.2μM+0.2μM)
		7	GSK-3484862+Mocetinostat(2μM+0.2μM)
8	Tazemetostat+GSK3484862(2.5μM+1μM)
		9	GSK126+GSK-3484862(0.1μM+1μM)

实施例3流式细胞术检测重编程T细胞的表型

(1)取DAC诱导后、GSK-3484862诱导后、DAC和Mocetinostat共同诱导后以及GSK-3484862和Mocetinostat共同诱导后Day6的T细胞以及未处理的T细胞各200μL，400g离心4min，弃上清后，加入50μL磷酸盐缓冲液(PBS)重悬细胞，随后分别加入CD3 PE-Cy7、CD4APC-Cy7、CD8 FITC、NKp30 PE和NKp46 APC各0.5μL，4℃避光孵育30min；加入500μL PBS稀释抗体，400g离心4min，小心弃去上清，加入300μL PBS重悬细胞转移到流式管中，上机；

(2)应用BD-flowcyto分析软件进行数据分析，每管收取10000个细胞，以NKp30出现显著增加以及出现NKp46阳性的细胞群作为重编程成功的标志，计算阳性T细胞的百分比。

如图1A、图1B、图2A和图2B所示，DAC诱导组中CD4 T细胞中NKp30的表达率约为83.2％，而DMSO组中CD4 T细胞NKp30的表达率约为7.74％；地西他滨诱导组中CD8 T细胞NKp46的表达率约为11.2％，NKp30的表达率约为60.5％，而DMSO组中CD8 T细胞NKp46的表达率约为0.26％，NKp30的表达率约为12.2％。说明地西他滨能够诱导T细胞表达NKp30和NKp46。

如图3A、图3B、图4A和图4B所示，GSK-3484862诱导组中CD4 T细胞NKp46的表达率约为5.16％，NKp30的表达率约为81.4％，而DMSO组中CD4 T细胞NKp30的表达率约为7.74％；GSK-3484862诱导组中CD8 T细胞NKp46的表达率约为21.4％，NKp30的表达率约为50.8％，而DMSO组中CD8 T细胞NKp46的表达率约为0.26％，NKp30的表达率约为12.2％。说明GSK-3484862能够诱导T细胞表达NKp30和NKp46。

如图5A、图5B、图6A和图6B所示，与DMSO诱导的T细胞相比，DAC和Mocetinostat共同诱导的T细胞中CD4 T细胞中NKp30表达量为7.84％，而NKp46几乎不表达，此外，DAC和Mocetinostat共同诱导的T细胞中CD8 T细胞NKp30表达量为20.4％，而NKp46也几乎不表达。

如图7A、图7B、图8A和图8B所示，GSK-3484862和Mocetinostat共同诱导的T细胞中CD4 T细胞NKp30的表达量为59.5％，NKp46的表达量为13.4％，而CD8细胞中NKp30表达量49.6％，NKp46的表达量为37.2％，说明相比于DAC和Mocetinostat共同诱导的结果，GSK-3484862和Mocetinostat诱导的T细胞中NKp30和NKp46的表达水平均明显增高。

此外，取GSK-3484862诱导后、Tazemetostat诱导后、GSK126诱导后、Tazemetostat和GSK-3484862共同诱导的以及GSK-3484862和GSK126共同诱导后Day5的T细胞以及未处理的T细胞进行相同的操作，通过流式细胞术对重编程T细胞的表型进行鉴定；结果如图9A、图9B、图10A、图10B、图11A、图11B、图12A、图12B、图13A、图13B、图14A和图14B所示。由图可知，与DMSO相比，单一抑制剂诱导的T细胞中CD4和CD8的NKp46和NKp30均有明显表达，进一步地，GSK-3484862与Tazemetostat和GSK126联用后，诱导T细胞中的CD4和CD8的NKP46的表达量均明显提高，以上结果表明单抑制剂(Tazemetostat、GSK126、GSK-3484862)或双抑制剂(Tazemetostat+GSK-3484862、GSK-3484862+GSK126)联用均可诱导T细胞重编程为类NK细胞。

实施例4小分子药物诱导的重编程T细胞的体外杀伤检测

(1)分别使用GSK-3484862、DAC、Mocetinostat、GSK-3484862和Mocetinostat共同诱导以及DAC和Mocetinostat共同诱导后的T细胞和DMSO处理后的T细胞按照不同的效靶比(16:1、8:1、4:1、2:1、1:1、1:2、1:4)与1×10⁴个K562细胞(人慢性髓系白血病细胞)混合，加入到96孔细胞培养板中，每组设3个复孔，并设单独加肿瘤细胞组作为阳性对照，250×g离心5min后，置于37℃、5％CO₂培养箱共培养24小时；

(2)24小时后，向96孔细胞培养板中加入100μL/孔荧光素酶底物(1×)，将细胞重悬混匀，立即通过多功能酶标仪测定RLU(relative light unit)，测定时间为0.1秒，荧光素酶(Luciferase)定量杀伤效率评估方法的杀伤比例计算公式为：

100％×(对照孔读数-实验孔读数)/对照孔读数(不加细胞的空白组读数可以忽略)。

结果如图15A所示，GSK-3484862、DAC、Mocetinostat、GSK-3484862和Mocetinostat共同诱导以及DAC和Mocetinostat共同诱导后的T细胞均可有效杀伤人慢性髓系白血病细胞。

此外，按照相同的方法，分别使用GSK-3484862、Tazemetostat、GSK126、GSK-3484862和Tazemetostat共同诱导以及GSK-3484862和GSK126共同诱导T细胞，并使用DMSO处理后的T细胞作为对照，检测重编程后的T细胞对K562细胞的杀伤能力，结果如图15B所示。结果显示GSK-3484862、Tazemetostat、GSK126、GSK-3484862和Tazemetostat共同诱导以及GSK-3484862和GSK126共同诱导后的T细胞均可有效杀伤人慢性髓系白血病细胞。

实施例5小分子药物诱导的重编程T细胞对细胞因子的分泌

将DAC诱导的T细胞、GSK-3484862诱导的T细胞、DAC和Mocetinostat共同诱导的T细胞以及GSK-3484862和Mocetinostat共同诱导的T细胞和DMSO处理的T细胞分别与人慢性髓系白血病细胞K562共培养48h，利用ELISA检测上清中细胞因子IFN-γ和颗粒酶B的表达水平。

结果如图16A、图16B、图17A、图17B、图18A、图18B、图19A和图19B所示，表明DAC诱导、GSK-3484862诱导、DAC和Mocetinostat共同诱导以及GSK-3484862和Mocetinostat共同诱导的T细胞均可以产生免疫效应。

综上所述，本发明采用地西他滨和/或GSK-3484862将T细胞诱导为类NK细胞，方法简单、效率高、周期短，适合于大规模制备，得到的类NK细胞体外杀伤效果明显，具有稳定的T细胞和NK细胞双重功能，在细胞免疫治疗领域具有重要的应用前景。

申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.一种将T细胞重编程为类NK细胞的诱导剂，其特征在于，所述诱导剂包括DNA甲基转移酶抑制剂、组蛋白去乙酰酶抑制剂或组蛋白甲基转移酶EZH2抑制剂中的任意一种或至少两种的组合。

2.根据权利要求1所述的诱导剂，其特征在于，所述DNA甲基转移酶抑制剂包括DNA甲基转移酶1抑制剂，优选为地西他滨和/或GSK-3484862；

优选地，所述组蛋白去乙酰酶抑制剂包括Mocetinostat、Givinostat或Entinostat中的任意一种或至少两种的组合；

优选地，所述组蛋白甲基转移酶抑制剂包括Tazemetostat和/或GSK126。

3.根据权利要求1或2所述的诱导剂，其特征在于，所述诱导剂还包括药学上接受的辅料；

优选地，所述辅料包括载体、稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、乳化剂、助溶剂、增溶剂、渗透压调节剂、表面活性剂、包衣材料、着色剂、pH调节剂、抗氧剂、抑菌剂或缓冲剂中的任意一种或至少两种的组合。

4.一种将T细胞重编程为类NK细胞的方法，其特征在于，所述方法包括：

将激活的T细胞与权利要求1～3任一项所述的诱导剂共培养，得到类NK细胞。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述诱导剂包括地西他滨、GSK-3484862、Mocetinostat、Givinostat、Entinostat、Tazemetostat或GSK126中的任意一种或至少两种的组合；

优选地，所述地西他滨的终浓度为0.05～0.5μM；

优选地，所述GSK-3484862的终浓度为0.5～8μM；

优选地，所述Mocetinostat的终浓度为0.1～0.5μM；

优选地，所述Givinostat的终浓度为0.05～1μM；

优选地，所述Entinostat的终浓度为0.05～1μM；

优选地，所述Tazemetostat的终浓度为0.1～5μM；

优选地，所述GSK126的终浓度为0.05～1μM。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述共培养的时间为3～10天。

7.根据权利要求4-6任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括：

向激活的T细胞中加入终浓度为0.05～0.5μM的地西他滨、终浓度为0.5～8μM的GSK-3484862、终浓度为0.05～1μM的GSK126、终浓度为0.1～0.5μM的Mocetinostat、终浓度为0.05～1μM的Givinostat、终浓度为0.05～1μM的Entinostat或终浓度为0.1～5μM的Tazemetostat中的任意一种或至少两种的组合，培养3～10天，每天进行半数换液，得到类NK细胞。

8.一种权利要求4-7任一项所述的方法制备得到的类NK细胞，其特征在于，所述类NK细胞表达NK细胞受体和T细胞受体；

优选地，所述NK细胞受体包括NKp46、NKp30、NKp44或NKG2D中的任意一种或至少两种的组合。

9.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括权利要求8所述的类NK细胞；

优选地，所述药物组合物还包括药学上接受的载体、赋形剂或稀释剂中的任意一种或至少两种的组合。

10.权利要求1-3任一项所述的诱导剂、权利要求8所述的类NK细胞或权利要求9所述的药物组合物在制备细胞免疫治疗药物中的应用。

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