CN113502158B - 金纳米簇的制备方法及其在胆红素和锌离子联级检测中的应用 - Google Patents
金纳米簇的制备方法及其在胆红素和锌离子联级检测中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了金纳米簇的制备方法，将牛血清白蛋白与HAuCl4·3H2O加水混合，加入组氨酸，调节混合液PH，在水浴下反应5～8h，得到浅黄色溶液，透析，冻干，即得。本发明还公开了上述金纳米簇在胆红素和锌离子联级检测中的应用。金纳米簇对fBR和Zn2+的响应迅速且灵敏，该方法适用于级联检测胆红素和Zn2+。
Description
技术领域
本发明涉及胆红素的检测方法，具体涉及金纳米簇的制备方法及其在胆红素和锌离子联级检测中的应用。
背景技术
作为血红素分解代谢的终产物，胆红素具有重要临床意义。肝功能不全可能导致血液中高水平的胆红素。过多的胆红素具有神经毒性。但是，对动脉粥样硬化、冠状动脉疾病和糖尿病并发症的病人，血清胆红素水平偏低。从这个意义上讲，胆红素还可被视为评估心血管疾病风险的生物标志物。荧光分析可以提供许多信息，具有易于实施、操作简便、灵敏度高和选择性好的优点，因此它是测定胆红素的有力技术。如《基于金纳米簇的胆红素荧光检测方法》(兰万、肖文香等，桂林电子科技大学学报，第37卷第3期、2017年6月)公开了，以牛血清白蛋白为模板在生理条件下制备金纳米簇，牛血清白蛋白起到稳定剂和还原剂的作用，将氯金酸的金离子还原，形成温度的金纳米簇。由于牛血清白蛋白能与游离胆红素形成复合物，当牛血清白蛋白保护的金纳米簇与胆红素作用时，胆红素会使金纳米簇的荧光发生猝灭现象，基于此可以实现对血清中胆红素的高灵敏度和高选择性检测。
锌是人体必需的微量元素，参与许多细胞过程、细胞增殖、生长与发育。锌缺乏会导致身体发育迟缓和神经系统疾病。过量的Zn2+会降低免疫力和疾病抵抗力。金纳米簇(AuNCs)已被用于对Hg(II)和Cu(II)的测定。但是将AuNCs用于检测锌离子的文献报道并不多见。市面上并未出现基于金纳米簇荧光猝灭及恢复实现对胆红素和锌离子的级联检测。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种金纳米簇的制备方法及其在胆红素和锌离子联级检测中的应用。
本发明提供的技术方案是金纳米簇的制备方法，包括以下步骤：
1)将牛血清白蛋白与HAuCl4·3H2O混合，加水搅拌，然后加入组氨酸，得到混合液；调节混合液PH至5～6，在水浴35～40℃下反应5～8h，得到浅黄色溶液；
2)将浅黄色溶液透析，冻干，得到具有蓝色荧光的金纳米簇。
步骤1)中，牛血清白蛋白在混合液中的浓度为25～30mg/mL；HAuCl4·3H2O在混合液中的浓度为5～8mmol/L；组氨酸在混合液中的浓度为0.1～0.2mmol/L。
作为优选，水浴温度为37℃，水浴时间为6h。
作为优选，采用0.01mol/L的氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液调节PH。
本发明还提供了上述金纳米簇在胆红素和锌离子联级检测中的应用。
上述应用方法，具体包括以下步骤：
胆红素的检测：将金纳米簇用50mmol/L的PBS缓冲液稀释至浓度为0.5mg/ml，得到金纳米簇溶液；往金纳米簇溶液中缓慢滴加胆红素溶液，以372nm波长的光照激发，测定440nm波长处的荧光强度，绘制胆红素标准曲线或计算回归方程，用于定量检测胆红素的浓度；
锌离子的检测：将金纳米簇用PBS缓冲液稀释至浓度为0.5mg/ml，得到金纳米簇溶液；往金纳米簇溶液中缓慢滴加胆红素溶液直至荧光猝灭；然后逐步添加锌离子溶液，同样以372nm波长的光激发，测定440nm波长处的荧光强度，绘制锌离子溶液标准曲线或计算回归方程，用于定量检测锌离子浓度。
本发明制备的金纳米簇在365nm下发射出强烈的蓝色荧光，加入胆红素溶液能让蓝色荧光猝灭，然后继续滴加锌离子溶液又能让荧光恢复，进而能联级检测胆红素和锌离子的浓度。
附图说明
图1A为金纳米簇B-AuNCs的透射电镜图；
图1B为金纳米簇B-AuNCs的红外光谱图；
图2A金纳米簇B-AuNCs溶液(0.5mg/ml)的荧光光谱和吸收光谱图；
图2B为胆红素(10μM)和Zn2+(66μM)引起的荧光猝灭和恢复现象；
图3A为pH对B-AuNCs(F0)、B-AuNCs/fBR(F1)、B-AuNCs/fBR/Zn2+(F2)荧光强度及F0/F1和F2/F1强度比的影响。B-AuNCs浓度为0.5mg/mL，胆红素浓度为5mg/mL，Zn2+浓度为20mg/mL；
图3B为温度对B-AuNCs(F0)、B-AuNCs/fBR(F1)、B-AuNCs/fBR/Zn2+(F2)荧光强度及F0/F1和F2/F1强度比的影响。B-AuNCs浓度为0.5mg/mL，胆红素浓度为5mg/mL，Zn2+浓度为20mg/mL；
图4A为通过增加不同浓度的fBR后金纳米簇荧光猝灭情况；
图4B为所加入BR溶液浓度与金纳米簇溶液荧光光强变化前后比值(F0/F1)的标准曲线；
图4C为加入不同浓度的Zn2+后金纳米簇荧光增强情况
图4D为所加入Zn2+溶液浓度与金纳米簇溶液荧光光强变化前后比值(F2/F1)的标准曲线；
图5A为探讨了共存物质对fBR测定的影响。主要添加的共存物为葡萄糖(Glucose)、半乳糖(Galactose)、果糖(Fructose)、尿酸(Uric acid)、血红蛋白(Hemoglobin)、胆固醇(Cholesterol)、氨基酸(Creatine)、尿素(Urea)；
图5B为探讨了共存物质对Zn2+测定的影响。主要添加的共存物为钠离子(Na+)、钾离子(K+)、钙离子(Ga2+)、镁离子(Mg2+)、铁离子(Fe3+)、铜离子(Cu2+)。
具体实施方式
以下具体实施例对本发明作进一步阐述，但不作为对本发明的限定。
以下实施例和实验例所用的试剂和仪器为：
牛血清白蛋白(BSA)和氯金酸(HAuCl4·3H2O)分别购自Sigma-Aldrich和上海试剂公司(中国上海)。胆红素(fBR)购自上海麦克林试剂公司。
荧光测量是在Hitachi F-4600荧光分光光度计上进行的。用Hitachi UH-5300分光光度计测量UV-vis吸收光谱。金纳米团簇的形态是在JEOL 2100高分辨率透射电子显微镜(HRTEM)上测定的，其加速电压为200kV。红外光谱是在Nicolet 6700傅里叶红外光谱仪(FTIR)上测量的。
实施例1
金纳米簇的制备：
1)将牛血清白蛋白与HAuCl4·3H2O混合，加水搅拌，2min后加入组氨酸，得到混合液；采用0.01mol/L的氢氧化钠溶液调节混合液PH至5.5，在水浴37℃下反应6h，得到浅黄色溶液；牛血清白蛋白在混合液中的浓度为25mg/mL；HAuCl4·3H2O在混合液中的浓度为5mmol/L；组氨酸在混合液中的浓度为0.1mmol/L。
2)将浅黄色溶液在超纯水中通过透析(MWCO 35kDa)进一步纯化24h，去除未反应的物质，冻干，得到能发射蓝色荧光的金纳米簇，即B-AuNCs，于4℃下保存备用。
金纳米簇在胆红素和锌离子联级检测中的应用方法：
胆红素的检测：
1)将金纳米簇用50mmol/L的PBS缓冲液稀释至浓度为0.5mg/ml，得到金纳米簇溶液；
2)将1mg胆红素溶解于1ml、0.02mol/L的NaOH溶液中，然后用50mmol/L磷酸盐缓冲溶液(PBS)(pH7.4)将其稀释至10mL，以获得胆红素溶液1.71×10-4mol/L；
3)将金纳米簇溶液中缓慢滴加上述胆红素溶液，以372nm波长的光照激发，测定440nm波长处的荧光强度，绘制胆红素标准曲线或计算回归方程，用于定量检测胆红素的浓度；
锌离子的检测：
1)将金纳米簇用50mmol/L的PBS缓冲液稀释至浓度为0.5mg/ml，得到金纳米簇溶液；
2)将1mg胆红素溶解于1ml、0.02mol/L的NaOH溶液中，然后用50mmol/L磷酸盐缓冲溶液(PBS)(pH7.4)将其稀释至10mL，以获得胆红素溶液1.71×10-4mol/L；
3)取3ml金纳米簇溶液，加入50μL、1.71×10-4mol/L胆红素溶液猝灭其荧光，然后缓慢添加10mmol/L锌离子溶液，同样以372nm波长的光激发，测定440nm波长处的荧光强度，绘制锌离子溶液标准曲线或计算回归方程，用于定量检测锌离子浓度。
实施例2
1)将牛血清白蛋白与HAuCl4·3H2O混合，加水搅拌，2min后加入组氨酸，得到混合液；采用0.01mol/L的氢氧化钾溶液调节混合液PH至5，在水浴35℃下反应5h，得到浅黄色溶液；牛血清白蛋白在混合液中的浓度为25mg/mL；HAuCl4·3H2O在混合液中的浓度为5mmol/L；组氨酸在混合液中的浓度为0.1mmol/L。
2)将浅黄色溶液在超纯水中通过透析(MWCO 35kDa)进一步纯化24h，去除未反应的物质，冻干，得到能发射蓝色荧光的金纳米簇，即B-AuNCs，于4℃下保存备用。
金纳米簇在胆红素和锌离子联级检测中的应用方法：
胆红素的检测：
1)将金纳米簇用50mmol/L的PBS缓冲液稀释至浓度为0.5mg/ml，得到金纳米簇溶液；
2)将1mg胆红素溶解于1ml、0.02mol/L的NaOH溶液中，然后用50mmol/L磷酸盐缓冲溶液(PBS)(pH7.4)将其稀释至10mL，以获得胆红素溶液1.71×10-4mol/L；
3)将金纳米簇溶液中缓慢滴加上述胆红素溶液，以372nm波长的光照激发，测定440nm波长处的荧光强度，绘制胆红素标准曲线或计算回归方程，用于定量检测胆红素的浓度；
锌离子的检测：
1)将金纳米簇用50mmol/L的PBS缓冲液稀释至浓度为0.5mg/ml，得到金纳米簇溶液；
2)将1mg胆红素溶解于1ml、0.02mol/L的NaOH溶液中，然后用50mmol/L磷酸盐缓冲溶液(PBS)(pH7.4)将其稀释至10mL，以获得胆红素溶液1.71×10-4mol/L；
3)取3ml金纳米簇溶液，加入50μL、1.71×10-4mol/L胆红素溶液猝灭其荧光，然后缓慢添加10mmol/L锌离子溶液，同样以372nm波长的光激发，测定440nm波长处的荧光强度，绘制锌离子溶液标准曲线或计算回归方程，用于定量检测锌离子浓度。
实施例3
1)将牛血清白蛋白与HAuCl4·3H2O混合，加水搅拌，2min后加入组氨酸，得到混合液；采用0.01mol/L的氢氧化钠溶液调节混合液PH至6，在水浴40℃下反应8h，得到浅黄色溶液；牛血清白蛋白在混合液中的浓度为30mg/mL；HAuCl4·3H2O在混合液中的浓度为8mmol/L；组氨酸在混合液中的浓度为0.2mmol/L。
2)将浅黄色溶液在超纯水中通过透析(MWCO 35kDa)进一步纯化24h，去除未反应的物质，冻干，得到能发射蓝色荧光的金纳米簇，即B-AuNCs，于4℃下保存备用。
金纳米簇在胆红素和锌离子联级检测中的应用方法：
胆红素的检测：
1)将金纳米簇用50mmol/L的PBS缓冲液稀释至浓度为0.5mg/ml，得到金纳米簇溶液；
2)将1mg胆红素溶解于1ml、0.02mol/L的NaOH溶液中，然后用50mmol/L磷酸盐缓冲溶液(PBS)(pH7.4)将其稀释至10mL，以获得胆红素溶液1.71×10-4mol/L；
3)将金纳米簇溶液中缓慢滴加上述胆红素溶液，以372nm波长的光照激发，测定440nm波长处的荧光强度，绘制胆红素标准曲线或计算回归方程，用于定量检测胆红素的浓度；
锌离子的检测：
1)将金纳米簇用50mmol/L的PBS缓冲液稀释至浓度为0.5mg/ml，得到金纳米簇溶液；
2)将1mg胆红素溶解于1ml、0.02mol/L的NaOH溶液中，然后用50mmol/L磷酸盐缓冲溶液(PBS)(pH7.4)将其稀释至10mL，以获得胆红素溶液1.71×10-4mol/L；
3)取3ml金纳米簇溶液，加入50μL、1.71×10-4mol/L胆红素溶液猝灭其荧光，然后缓慢添加10mmol/L锌离子溶液，同样以372nm波长的光激发，测定440nm波长处的荧光强度，绘制锌离子溶液标准曲线或计算回归方程，用于定量检测锌离子浓度。
实验例
1、胆红素及Zn2+的联级测定
将实施例1制备的金纳米簇B-AuNCs溶解在PBS缓冲液(pH＝7.4，50mM)中以获得0.5mg/ml的金纳米簇溶液。
通过实施例1中绘制得到的胆红素标准曲线和锌离子标准曲线后，将未知浓度的胆红素溶液滴加到0.5mg/ml的金纳米簇溶液中，以372nm波长的光激发，立即测定440nm波长处的荧光强度，即可根据胆红素标准曲线得到胆红素的浓度。然后继续逐步添加未知浓度锌离子溶液，以372nm波长的光激发，立即测定440nm波长处的荧光强度，即可根据锌离子溶液标准曲线得到锌离子溶液浓度。
2、结果与分析
2.1金纳米簇的表征
牛血清白蛋白(BSA)通常被用作形成金属纳米团簇的导向剂，因为它具有-OH，-NH和-SH，在弱酸性条件下，使用BSA作为还原剂和保护剂制备了能发射蓝色荧光的金纳米簇。在pH为5.5时，获得发射蓝色荧光的金纳米簇能力最强。加入组氨酸作为辅助还原剂是因为在非碱性条件下有助于提高BSA的还原能力，更好的保护金纳米簇的蓝光响应。
金纳米团簇的形貌通过HRTEM表征。具有蓝色荧光的金纳米簇可简写为B-AuNCs，是接近球形的颗粒，粒径约为0.8nm(图1A)。晶格间距约为0.22nm，对应于Au金属的{111}晶面之间的间距。FTIR光谱用于表征B-AuNCs制备过程中的蛋白质结构变化。图1B显示B-AuNC具有与BSA相似的振动峰。在1652cm-1和1541cm-1附近的强峰分别归因于蛋白的酰胺I带(主要为C＝O伸缩振动)和酰胺II谱带(C-N伸缩振动结合N-H弯曲振动模式)。1385cm-1处的峰属于羧酸中的O-H弯曲振动。酰胺I带吸收峰(1652cm-1)位于典型的α-螺旋峰范围(1648～1657cm-1)中，这意味着α-螺旋是BSA中主要的二级结构。峰无明显变化表明BSA与AuNCs结合后二级结构的变化较小。结合AuNCs后，酰胺I带吸收峰强度降低表明蛋白中α-螺旋结构的含量降低。与BSA相比，B-AuNCs在1385cm-1处O-H弯曲振动峰强度明显下降可能与AuNCs形成过程中-COO-与金的络合有关。
2.2胆红素引起金纳米簇(B-AuNCs)荧光猝灭
将实施例1制备的B-AuNCs溶解在PBS缓冲液(pH＝7.4，50mM)中以获得0.5mg/ml的金纳米簇溶液。如图2A所示，所获得的金纳米簇溶液在365nm下发射出强烈的蓝色荧光。B-AuNCs有一位于280nm处的弱吸收峰，源自于BSA中的色氨酸基团的吸收，因为金纳米簇是包埋于BSA结构中的。在可见光范围内未出现特征吸收峰，表明未形成等离子激元金颗粒。B-AuNCs的激发和发射峰分别出现在372nm和440nm处。
由于胆红素的疏水性，其在血液中的循环是以牛血清白蛋白为结合载体的。胆红素和BSA之间的相互作用导致蓝色荧光金纳米簇的荧光猝灭，如图2B所示。为进一步扩展B-AuNCs/fBR测量系统的应用范围，对其荧光恢复进行了研究。胆红素含有几个可以与金属离子形成络合物的配位基团。Zn2+能争夺胆红素与BSA的结合，实验研究了B-AuNCs，B-AuNCs/Zn2+，B-AuNCs/fBR，B-AuNCs/fBR/Zn2+和fBR/Zn2+的荧光行为，结果如图2B所示。在372nm激发时，在胆红素溶液或胆红素-Zn2+体系中未观察到荧光发射。Zn2+的加入导致B-AuNCs荧光发射强度轻微下降。加入胆红素则引起B-AuNCs的有效荧光猝灭。当将Zn2+加入B-AuNCs/fBR体系时，被胆红素猝灭的荧光明显恢复。基于B-AuNCs的荧光猝灭和恢复现象，建立了胆红素和Zn2+的分析方法。
2.3优化实验条件
本申请研究了介质pH值对B-AuNCs(F0)，B-AuNCs/fBR(F1)、B-AuNCs/fBR/Zn2+(F2)荧光强度的影响，如图3A所示。在PH6.0～8.0范围内随着pH值增加，三个体系的荧光强度升高。从pH 6.0逐渐升高到7.4，F0/F1和F2/F1的强度比值逐渐增大，在pH 7.4时达到最大值。然后在碱性介质中荧光比值下降。这表明生理pH值条件下，荧光探针对胆红素和Zn2+的响应灵敏度最高。在碱性介质中，AuNCs的蛋白质保护层可能会经历构型转变，使其不利于胆红素的结合，从而导致灵敏度降低。测定Zn2+时，Zn2+在碱性条件下会与OH-形成络合物或沉淀，从而降低其浓度。因此，在碱性溶液中观察到相对较弱的荧光恢复效率。在pH 7.4时最佳的响应灵敏度意味着该传感系统可用于测定血清中的fBR和Zn2+。
在纳米簇的应用中应考虑温度效应。实验研究了温度对胆红素和Zn2+的荧光响应的影响，结果如图3B所示。当温度从25℃升高到35℃时，B-AuNCs的发射强度略有增加，然后在35～37℃时达到平稳，最后在温度高于37℃时下降。温度从25℃升至30℃后，被fBR猝灭的荧光强度稍有下降。而被Zn2+恢复的B-AuNCs的荧光强度略有上升，在35～45℃范围内保持相对稳定。显然，在35℃时fBR和Zn2+的响应最灵敏。
2.4胆红素和Zn2+的测定
在最佳实验条件(pH 7.4，35℃)下，研究了B-AuNCs探针对fBR和Zn2+的响应性能。当B-AuNCs溶液(0.5mg/mL)与浓度低于30μM的fBR作用时，随着胆红素浓度增加其荧光强度被逐渐猝灭(图4A和4B)。当fBR浓度大于30μM时，荧光猝灭程度达到饱和，因为此时BSA的fBR结合位点被完全占据。根据F0/F1与fBR浓度在0～30.00μmol·L-1范围内的线性关系建立校正曲线(图4B)，检出限为21±0.8nM(S/N＝3)。
当与Zn2+作用时，B-AuNCs/fBR体系被猝灭的荧光可恢复，如图4C所示，但是，B-AuNCs的荧光不能被恢复到初始水平。当Zn2+的浓度高于80μM时，代表荧光恢复效率的F2/F1值几乎不变。Zn2+测定的线性范围为1.00～80.00μmol·L-1(图4D)，检出限为0.91±0.08μM(S/N＝3)。
对于fBR传感，由于BSA具有胆红素结合位点，因此B-AuNCs的蛋白质保护层可作为fBR的识别单元。由fBR引起的B-AuNCs的荧光猝灭可以用两种机理解释。一方面，BSA可以与fBR结合形成复合物。fBR和BSA之间的结合可能会改变靠近Au核的BSA模板的局部环境，从而导致纳米簇的聚集。另一方面，荧光能量转移也对荧光猝灭有贡献，因为B-AuNCs的发射峰与以440nm为中心的fBR的吸收峰有很大程度的重叠。将Zn2+加到B-AuNCs/fBR溶液中，Zn2 +与BSA-fBR复合物中的fBR竞争性配位。但是，加入Zn2+不能使荧光强度恢复到原始水平，原因在于某些聚集的纳米团簇无法逆转。当Zn2+浓度较高时，在660nm附近出现了一个弱荧光峰(图4C)，这是较大的纳米团簇Au25的特征发射峰。这个新出现的峰证实了在fBR、Zn2+的测定中金纳米簇可从小颗粒聚集成大颗粒。
2.5方法选择性及实际样品中fBR和Zn2+的测定
通过与一些常见的生物分子或生物相关的金属离子共存，研究了该方法对fBR或Zn2+的选择性。通过与5μM胆红素共存，研究了一些常见的生物分子对胆红素测定的影响，例如葡萄糖、果糖、半乳糖、肌酸、胆固醇、尿素、尿酸(10mM)和血红蛋白(Hb)(5μM)。研究了对Na+(150mM)，K+(50mM)，Ca2+(5mM)，Mg2+(5mM)，Fe2+(30μM)和Cu2+(30μM)等金属离子对Zn2+(20μM)的干扰进行了检测。如图5A、5B所示，共存物质不会明显干扰fBR和Zn2+的检测。
通过检测血清或牛奶中的fBR或Zn2+来评估分析方法的性能。人血清是从当地医院获得的，牛奶为商业产品。根据上述步骤进行了fBR和Zn2+的检测。在检测之前，将血清样品用PBS(pH＝7.4，50mM)溶液稀释5倍。将一些已知浓度的fBR或Zn2+掺入样品并进行测试。如表1和表2所示，回收率良好，这表明所开发的方法具有在实际样品中检测胆红素和Zn2+的潜力。
表1.人血清样品中fBR的测定(检测次数n＝3).
表2.人血清样品和牛奶中的Zn2+的测定(检测次数n＝3).
3、结论
使用组氨酸作为还原剂和BSA作为保护剂制备了发射蓝色荧光的金纳米簇。B-AuNCs的蛋白质保护层充当fBR响应的识别单元。fBR和BSA之间的结合使金纳米簇的荧光猝灭。可以通过添加Zn2+恢复淬灭的荧光。因此，B-AuNCs/fBR系统可以扩展为基于开启荧光的Zn2+分析。金纳米簇对fBR和Zn2+的响应迅速且灵敏，该方法适用于级联检测胆红素和Zn2+。
Claims (5)
1.一种金纳米簇在胆红素和锌离子联级检测中的应用，其特征在于：所述金纳米簇按以下方法制备，包括以下步骤：
1）将牛血清白蛋白与HAuCl4·3H2O混合，加水搅拌，然后加入组氨酸，得到混合液；调节混合液PH至5～6，在水浴35～40℃下反应5～8h，得到浅黄色溶液；
2）将浅黄色溶液透析，冻干，得到能发射蓝色荧光的金纳米簇。
2.根据权利要求1所述的金纳米簇在胆红素和锌离子联级检测中的应用，其特征在于：步骤1）中，牛血清白蛋白在混合液中的浓度为25～30mg/mL；HAuCl4·3H2O在混合液中的浓度为5～8mmol/L；组氨酸在混合液中的浓度为0.1～0.2 mmol/L。
3.根据权利要求1所述的金纳米簇在胆红素和锌离子联级检测中的应用，其特征在于：水浴温度为37℃，水浴时间为6h。
4.根据权利要求1所述的金纳米簇在胆红素和锌离子联级检测中的应用，其特征在于：采用0.01mol/L的氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液调节PH。
5.根据权利要求1所述的金纳米簇在胆红素和锌离子联级检测中的应用，其特征在于：
胆红素的检测：将金纳米簇用50mmol/L的PBS缓冲液稀释至浓度为0.5mg/ml，得到金纳米簇溶液；往金纳米溶液中缓慢滴加胆红素溶液，以372nm波长的光照激发，测定440nm波长处的荧光强度，绘制胆红素标准曲线或计算回归方程，用于定量检测胆红素的浓度；
锌离子的检测：将金纳米簇用PBS缓冲液稀释至浓度为0.5mg/ml，得到金纳米簇溶液；往金纳米簇溶液中缓慢滴加胆红素溶液直至荧光猝灭；然后逐步添加锌离子溶液，同样以372nm波长的光激发，测定440nm波长处的荧光强度，绘制锌离子溶液标准曲线或计算回归方程，用于定量检测锌离子浓度。
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| CN104614355A (zh) * | 2015-02-06 | 2015-05-13 | 盐城工学院 | 一种基于牛血清蛋白功能化的金纳米团簇光散射探针检测Cu2+浓度的方法 |
| CN106947471A (zh) * | 2017-03-08 | 2017-07-14 | 吉林大学 | 一种水溶性的金纳米簇荧光材料、制备方法及应用 |
| CN112775432A (zh) * | 2019-10-23 | 2021-05-11 | 武汉大学苏州研究院 | 一种基于牛血清白蛋白的短波红外荧光金纳米簇及其制备方法与应用 |
| CN112008091A (zh) * | 2020-08-14 | 2020-12-01 | 福建医科大学 | 一种高灵敏、低毒、具氧化模拟酶活性的金纳米簇制备方法与应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113502158A (zh) | 2021-10-15 |
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