CN113476388A - 化妆品用百合发酵物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本公开属生物发酵技术领域，提供了一种化妆品用百合发酵物的制备方法，包括：取适量百合和水混合、灭菌处理、冷却后得到发酵底物，所述百合和水的质量比为0.5～5:100；往所述发酵底物接种酵母菌和/或乳酸菌进行发酵处理，然后灭菌、分离处理，得到百合发酵液。本公开利用酵母菌和/或乳酸菌对百合进行液体发酵，能够提取出百合中的活性物质；先用酵母菌发酵再利用乳酸菌进行第二次发酵，提高了产品的安全性。将按照本公开制备的百合发酵物可应用于化妆品中，且能够提高化妆品的抗氧化抗衰性能。

Description

化妆品用百合发酵物及其制备方法

技术领域

本公开属于生物发酵技术领域，具体涉及一种化妆品用百合发酵物及其制备方法。

背景技术

百合，学名(Lilium brownii var.viridulum Baker)，是百合科(Liliaceae)百合属(Lilium)多年生草本球根植物，原产于中国，主要分布在亚洲东部、欧洲、北美洲等北半球温带地区，全球已发现有至少120个品种，其中55种产于中国。百合鳞茎含丰富淀粉，可食，亦作药用。

百合提取物主要含有甾体皂苷类、百合多糖等成分，具有降血糖、抗氧化、抗肿瘤、抗疲劳、增强机体免疫力、提高淋巴细胞转化率的特性；不仅临床上有着广泛的应用，而且作为加工保健产品的原料也极具有开发前景。

天然活性物质提取方法有水提取法、有机溶剂提取、超声波提取法、微波提取法、超临界流体萃取法和微生物发酵法等，百合内天然活性物质的提取多采用有机溶剂提取法。如何筛选出更利于活性物质提取的方法，仍是本领域研发人员面临的技术难题。发酵指人们借助微生物在有氧或无氧条件下的生命活动来制备微生物菌体本身、或者直接代谢产物或次级代谢产物的过程，在食品工业、生物和化学工业中均有广泛应用。对采用发酵技术提取营养物质已多有报道，但是根据发酵底物和发酵工艺条件的不同，提取效果差别很大。有赖于研究人员继续探索更多发酵底物组合及发酵方法制备出更多、更优功效的产品以满足消费者需求。

现有技术中，CN202010657142.0《一种有助睡眠的中药发酵保健食品及其制备方法》和CN202011315902.6《一种美容养颜益生菌发酵粉及其生产方法》都披露了将多种药食两用原料用多种益生菌发酵制备保健食品的方案。但是其方案中原料成分复杂，制备步骤繁多，且所得到的产品为食品，其用于化妆品的性能尚未可知。另外，有研究人员以新鲜百合与发酵糖液按质量比3:5在室温下避光发酵制备食用植物酵素(方晟,等.百合酵素自然发酵过程中有机酸及其体外抗氧化活性的变化[J].食品与与发酵工业,2019,45(22):39-45)，探究了其自然发酵过程中体外氧化活性、有机酸组成及含量的变化规律，以期为百合酵素产品的开发及精准制备提供科学依据，但是上述方案也是为开发食品，其用于化妆品的性能也未可知。

目前尚未有百合发酵提取物用于化妆品领域的报道。本申请人通过研究探索得到一种化妆品用百合发酵物及其制备方法。

发明内容

在下文中给出了关于本公开的简要概述，以便提供关于本公开的某些方面的基本理解。应当理解，这个概述并不是关于本公开的穷举性概述。它并不意图确定本公开的关键或重要部分，也不意图限定本公开的范围。其目的仅仅是以简化的形式给出某些概念，以此作为稍后论述的更详细描述的前序。

鉴于现有技术的上述缺陷，本公开的目的是提供一种化妆品用百合发酵物及其制备方法，该发酵产品具有良好的安全性、抗衰老功效。

根据本公开的第一个方面，提供了一种化妆品用百合发酵物的制备方法，包括：

取适量百合和水混合、灭菌处理、冷却后得到发酵底物，所述百合和水的质量比为0.5～5:100(比如1:100、1.5:100、2:100、2.5:100、3:100、3.5:100、4:100、4.5:100等)；

往所述发酵底物接种酵母菌和/或乳酸菌进行发酵处理，然后灭菌、分离处理，得到百合发酵液。

上述制备方法中，作为一种优选实施方式，所述发酵处理包括：先对所述发酵底物接种酵母菌进行第一次发酵培养；灭菌处理后再接种乳酸菌进行第二次发酵培养。

上述制备方法中，作为一种优选实施方式，所述酵母菌为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YWY-1，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编为100101，保藏日期为2019年03月27日，保藏编号为CGMCC No.17452。

上述制备方法中，作为一种优选实施方式，所述乳酸菌为如下菌种的至少一种：德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbruechii subsp.Bulgaricus)，布氏乳杆菌(Lactobacillus buchneri)，两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)。实践中，所述乳酸菌可采用如下菌种的至少一种：德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbruechiisubsp.Bulgaricus)，保藏编号为CGMCC 1.16075，可从CGMCC购买；布氏乳杆菌(Lactobacillus buchneri)，保藏编号为CGMCC 1.15607，可从CGMCC购买；两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)，保藏编号为CGMCC1.5029，可从CGMCC购买。进一步地，所述乳酸菌为德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbruechii subsp.Bulgaricus)，保藏编号为CGMCC1.16075。

上述制备方法中，作为一种优选实施方式，用于接种的酵母菌菌液的浓度为10⁴-10⁹CFU/mL(比如10⁵CFU/mL、10⁶CFU/mL、10⁷CFU/mL、10⁸CFU/mL等)，所述酵母菌菌液和所述发酵底物的体积比为5％-20％(比如8％、10％、12％、15％、18％等)。

上述制备方法中，作为一种优选实施方式，用于接种的乳酸菌菌液的浓度为10⁴-10⁹CFU/mL(比如10⁵CFU/mL、10⁶CFU/mL、10⁷CFU/mL、10⁸CFU/mL等)，所述乳酸菌菌液和所述发酵底物的体积比为5％-20％(比如8％、10％、12％、15％、18％等)。

上述制备方法中，作为一种优选实施方式，所述发酵处理时，如果采用酵母菌，则发酵培养的温度为20℃-28℃(比如22℃、24℃、26℃等)，时间为30-50h(比如32h、35h、40h、45h、48h等)，转速为100-180r/min(比如110r/min、120r/min、130r/min、140r/min、150r/min、160r/min、170r/min等)；如采用乳酸菌，则发酵培养的温度为37-45℃(比如38℃、40℃、42℃、44℃等)，时间为6-16h(比如7h、8h、10h、12h、14h、15h等)，静置培养。

上述制备方法中，作为一种优选实施方式，所述灭菌处理的温度是100-121℃(比如102℃、105℃、110℃、115℃、118℃等)，时间是15-30min(比如18min、20min、22min、25min、28min等)。

上述制备方法中，作为一种优选实施方式，所述分离处理采用离心方法；更优选地，离心转速为4500r/min-6000r/min(比如4800r/min、5000r/min、5200r/min、5500r/min、5800r/min等)，离心时间为30min-60min(比如35min、40min、45min、50min、55min等)。

上述制备方法中，作为一种优选实施方式，还包括：对所述百合发酵液进行防腐处理；更优选地，所述防腐处理为在所述百合发酵液冷却至45℃以下后添加质量比为2.3％的乙二醇和质量比为0.5％的戊二醇，即添加相对于百合发酵液的质量百分比2.3％的乙二醇和质量百分比0.5％的戊二醇。

上述制备方法中，作为一种优选实施方式，还包括：对所述百合发酵液进行干燥处理，最终得到百合发酵干粉；更优选地，所述干燥处理可以是喷雾干燥、真空冷冻干燥等。

上述制备方法中，作为一种优选实施方式，所述分离处理采用离心方法；更优选地，离心转速为4500r/min-6000r/min(比如4800r/min、5000r/min、5200r/min、5500r/min、5800r/min等)，离心时间为30min-60min(比如35min、40min、45min、50min、55min等)。

根据本公开的第二方面，还提供了一种采用上述方法制备的发酵产品，包括发酵液、发酵干粉等。

根据本公开的第三方面，还提供了上述发酵产品在制备化妆品中的应用；优选地，所述化妆品可以是面膜、精华液、爽肤水、乳液等。

按照本公开的方法制得的百合发酵物含有多糖、多肽等活性物质，具有良好的抗氧化作用、抗衰老作用，可以添加到包括但是不限于：面膜、精华液、爽肤水、乳液等化妆品中。

本公开利用酵母菌和/或乳酸菌对百合进行液体发酵，能够提取出百合中的活性物质；先用酵母菌发酵再利用乳酸菌进行第二次发酵，提高了产品的安全性。将按照本公开制备的百合发酵物可应用于化妆品中，且能够提高化妆品的抗氧化抗衰性能。

本发明制得的百合发酵物具有优越的安全性，可以直接作为面膜液或精华液或爽肤水等成品化妆品使用，对皮肤无副作用。

附图说明

图1为三种标准样品的HPLC图谱，三种标准样品分别为牛血清白蛋白(Mw67000)，维生素B₁₂(Mw1335)，氧化型谷胱甘肽(Mw614)；

图2各标准样品物质的相对分子质量对数与HPLC保留时间的关系曲线；

图3为空白样品(百合培养基)的HPLC图谱；

图4为实施例1酵母菌单独发酵百合所得样品的HPLC图谱；

图5为实施例2乳酸菌单独发酵百合所得样品的HPLC图谱；

图6为实施例3酵母菌乳酸菌两步发酵百合所得样品的HPLC图谱。

具体实施方式

在下文中将结合示范性实施例对本公开的技术方案进行描述。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中的百合来自市面销售，干品，品牌为方家铺子。

下述实施例中的酵母菌为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YWY-1，为申请人实验室自有，且已经提交中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)保藏，保藏日期为2019年03月27日，保藏编号为CGMCC No.17452。

下述实施例中的乳酸菌为为德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillusdelbruechii subsp.Bulgaricus)，保藏编号为CGMCC 1.16075，从CGMCC购买。

酵母菌和乳酸菌的种子培养基分别为酵母浸出粉胨葡萄糖培养基(YPD培养基)和乳酸细菌培养基(MRS培养基)。将酵母菌在28℃恒温震荡培养箱中150r/min培养48h，得到用于接种的酵母菌菌液，浓度约为10⁸CFU/mL。将乳酸菌在45℃恒温震荡培养箱中静置培养24h，得到用于接种的乳酸菌菌液，浓度约为10¹⁰CFU/mL。

实施例1酵母菌单独发酵

1)将百合按照3:100的料液比(质量比)与去离子水混合，置于三角瓶中，摇匀后，放入高压蒸汽灭菌锅进行灭菌，灭菌温度为121℃，灭菌时间20min，冷却后即得百合培养基(即发酵底物)；

2)将酵母菌菌液，按照8％的体积比例接入到百合培养基中，在温度为28℃、转速为150r/min的恒温震荡培养箱中发酵48h；

3)发酵完成后，离心过滤取上清液，离心转速5500rpm，离心时间45min，然后将上清液放入到高压蒸汽灭菌锅中进行灭菌，灭菌温度为110℃、灭菌时间30min；

4)灭菌完成后，将上清液置于常温下，冷却至45℃以下，添加防腐体系，即2.3wt.％乙二醇和0.5wt.％戊二醇。

实施例2乳酸菌单独发酵

1)将百合按照3:100的料液比(质量比)与去离子水混合，置于三角瓶中，摇匀后，放入高压蒸汽灭菌锅进行灭菌，灭菌温度为121℃，灭菌时间20min，冷却后即得百合培养基(即发酵底物)；

2)将乳酸菌菌液按照10％的体积比例接入到百合培养基中，在温度为45℃的恒温震荡培养箱中静置发酵8h；

3)发酵完成后，离心过滤取上清液，离心转速5500rpm，离心时间45min，然后将上清液放入到高压蒸汽灭菌锅中进行灭菌，灭菌温度为110℃、灭菌时间30min；

4)灭菌完成后置于常温下，冷却至45℃以下，添加防腐体系，即2.3wt.％乙二醇和0.5wt.％戊二醇。

实施例3酵母菌和乳酸菌先后发酵

1)将百合按照3:100的料液比(质量比)与去离子水混合，置于三角瓶中，摇匀后，放入高压蒸汽灭菌锅进行灭菌，灭菌温度为121℃，灭菌时间20min，冷却后即得百合培养基(即发酵底物)；

2)将酵母菌菌液，按照8％的体积比例接入到百合培养基中，在温度为28℃、转速为150r/min的恒温震荡培养箱中发酵48h；

3)发酵完成后，放入到高压蒸汽灭菌锅中进行灭菌，灭菌温度为110℃、灭菌时间30min；

4)灭菌完成后冷却至45℃以下，再按照10％的比例接种乳酸菌菌液，在温度为45℃的恒温震荡培养箱中静置发酵8h；

5)发酵完成后，离心过滤取上清液，离心转速5500rpm，离心时间45min，然后将上清液放入到高压蒸汽灭菌锅中进行灭菌，灭菌温度为110℃、灭菌时间30min；

6)灭菌完成后置于常温下，冷却至45℃以下，添加防腐体系，即2.3wt.％乙二醇和0.5wt.％戊二醇。

性能实验

一、发酵液理化性质分析

对实施例1制备所得的百合发酵液进行理化性质分析。其外观为浅黄色至浅灰色液体，pH值4.7，固形物含量6.4％，菌落总数小于50CFU/mL，无致病菌检出。

对实施例2制备所得的百合发酵液进行理化性质分析。其外观为浅黄色液体pH值4.3，固形物含量4.7％，菌落总数小于50CFU/mL，无致病菌检出。

对实施例3制备所得的百合发酵液进行理化性质分析。其外观为浅黄色液体，pH值4.7，固形物含量4.7％，菌落总数小于50CFU/mL，无致病菌检出。根据化妆品卫生标准GB7916-87，化妆品细菌总数不高于1000CFU/ml，所以上述百合发酵液符合化妆品质量要求。

对实施例1至实施例3中制得的百合发酵液进行成分分析，所得结果如下：

表1.1实施例1-实施例3制得的发酵液理化性质比较

	实施例1	实施例2	实施例3	发酵前空白对照
					多肽含量mg/ml	2.40	2.30	2.97	2.28
标准差	0.05	0.16	0.21	0.024
					多糖含量mg/mL	18.83	17.30	19.90	17.55
标准差	0.33	0.20	0.08	1.25

从表1.1中可以看出：发酵后实施例所得发酵液多肽含量均高于发酵前；且实施例3双菌发酵后的多糖含量和多肽含量均高于单菌发酵。

另外，还对实施例1至3的多肽分子量进行测定。

多肽分子量的测定方法如下：

1、色谱条件：1)色谱柱：TsK gel 2000SW_XL 300mm×7.8mm；2)流动相：0.05mol/L磷酸盐缓冲液(pH 7)+0.3mol/L NaCl；3)检测波长：UV 220nm；4)流速：1ml/min；5)柱温：25℃；6)样品制备：以流动相为溶剂配制浓度为5mg/ml的样品，再在用微孔膜(0.45μm)过滤后供进样。7)标准样品：将牛血清蛋白(Mr 67000)、B12(Mr 1335)、氧化型谷胱甘肽(Mr 614)配成混标，每中物质含量均为5mg/ml。

2、标准曲线的制定：将三种标准样品按5mg/ml配制，按照上述色谱条件制作标准曲线，如图1所示。图1为三种标准样品的HPLC图谱，三种标准样品分别为牛血清白蛋白(Mw67000)，维生素B₁₂(Mw1335)，氧化型谷胱甘肽(Mw614)，由于使用的柱子型号为TSKge12000SW_XL(凝胶柱)，所以根据凝胶渗透层析原理，分子量大的物质先被洗脱下来，从图1中可以看到洗脱峰出现时所对应的洗脱时间分别为6.84min,10.12min,12.40min，根据三种标准样品的相对分子质量对数值(见表1.2)，随后制作三种标准样品的相对分子质量对数与标准样品经HPLC的洗脱时间的关系曲线(如图2)。

表1.2标准物质的分子量与洗脱时间

从表1.2中可以看到标准样品分子量的对数值与洗脱时间的对应关系。以分子量的对数为纵坐标，洗脱时间为横坐标，利用三个坐标点(5.377，4.826)，(9.3，3.125)，(10.419，2.788)做出一条直线，此直线即为标准曲线，如图2所示。

采用最小二乘法，求出直线的回归方程为：y＝-0.4119x+7.0253，其回归系数R2＝0.9966。由方程的回归系数R²＝0.9966可知，混合标样的标准曲线线性关系较好，可以提高计算的精确程度。关系式中x代表洗脱时间，y代表分子量对数。这样当样品进行HPLC分析时，即可通过洗脱图谱中每种物质洗脱峰的出现时间计算其对应的分子量，结果参见表1.3和图3-图6。

表1.3空白样品、实施例1至3所得样品的多肽分子量测定结果

从表1.3中可以看出：实施例1的酵母菌单独发酵所得百合发酵液、实施例2的乳酸菌单独发酵百合所得发酵液和实施例3的酵母菌乳酸菌两步发酵百合所得发酵液的分子量相对于发酵前变得较为单一，分子量变小，更容易透皮吸收。

二、发酵液的安全性检测

人体斑贴试验主要是用于检测化妆品终产品或原料的刺激性。本发明对实施例1至实施例3获得的百合发酵液进行人体封闭式斑贴试验，旨在对其潜在皮肤刺激性进行评估。

1、试验对象

选择合适的志愿者30人，年龄范围在18-60岁随机选择。

2、试验方法

将液体样品(即百合发酵液)0.02mL到0.025mL滴加在滤纸片上，再将滤纸片置于斑试器内。每个样品均设置空白对照，在对照斑试器孔内加入与样品等量的样品溶剂，如蒸馏水或橄榄油(本实施例采用蒸馏水)。

试验部位选为人体背部，利用无刺激性的胶带将斑试器固定贴敷于受试者背部。测试周期持续24h。为了试验结果的准确、可信和科学，在测试期间志愿者按照要求，不能摘掉斑试器，亦不可使受试部位接触水。24h后去除斑试器，静置30min后，等待压痕消失，观察皮肤的反应。如果试验结果为阴性，则需要在斑贴试验后24h和48h分别再观察一次。

3、试验结果

斑贴试验结果如表2所示，表2中各级别表示的含义如下：0级＝阴性反应。1级＝可疑反应；仅有微弱红斑。2级＝弱阳性反应(红斑反应)；红斑、浸润、水肿、可有丘疹。3级＝强阳性反应(疱疹反应)；红斑、浸润、水肿、丘疹、疱疹；反应可超出受试区。4级＝极强阳性反应(融合性疱疹反应)；明显红斑、严重浸润、水肿、融合性疱疹；反应超出受试区。

表2实施例1至3制得的发酵液的斑贴试验结果

从表2中可以看出：尚未开始发酵的底物可能有轻微的可疑反应，实施例1得到的酵母菌单独发酵百合发酵液、实施例2所得的乳酸菌单独发酵百合发酵液以及实施例3得到的酵母菌乳酸菌两步发酵所得的百合发酵液都未产生可疑反应，说明本发明提供的百合发酵液安全性较高，不会给人体带来不良反应。

三、发酵液的抗氧化性能检测

DPPH是一种早期合成的有机自由基，常用来评估抗氧化物的供氢能力，它在有机溶剂中非常稳定，呈紫色，而且在517nm处有一个特征吸收峰，当遇到自由基清除剂时，DPPH的孤对电子被配对而使其退色，也就是在最大吸收波长处的吸光值变小。因此，可通过测定吸光值的变化来评价样品对DPPH自由基的清除效果。

以实施例1-实施例3制备得到的百合发酵液作为待测液，以维生素C为阳性对照。DPPH自由基清除实验的具体实验步骤为：

(1)取等体积(3mL)的待测液与2×10^-4mol/L的DPPH溶液混匀(A₁管)；

(2)取等体积(3mL)的无水乙醇(待测物溶剂)与2×10^-4mol/L的DPPH溶液混匀(A₂管)；

(3)取等体积(3mL)的无水乙醇与待测液混匀(A₃管)；

(4)反应30min后，在517nm下测A₁管、A₂管、A₃管吸光度值。

清除率计算公式为：清除率(％)＝[(A₂+A₃)-A₁]/A₂。具体结果参见表3。

表3实施例1至3制得的发酵液的DPPH自由基清除实验结果

	实施例1	实施例2	实施例3	发酵前空白对照
					DPPH自由基清除率	38.4％	40.25％	47.2％	36％

由表3可知，发酵后的自由基清除能力高于发酵前空白对照，其中实施例3的自由基清除能力最高。

四、发酵液的细胞毒性检测

人皮肤成纤维细胞(HSF)培养于含10％胎牛血清以及1％双抗(1×10⁵U/L青霉素、100mg/L链霉素)的DMEM培养基中。细胞生长于37℃、5％CO₂饱和湿度的培养箱中，当细胞融合达到85％以上时，以0.05％胰酶消化传代。将对数生长期状态良好的人皮肤成纤维细胞接种于细胞培养板中进行实验。

利用MTT法检测发酵液对人皮肤成纤维细胞的存活率的影响。具体步骤如下：消化对数生长期细胞，用含血清的DMEM终止消化反应。细胞计数板计数，将细胞悬液浓度调整到5×10⁴个/mL，将细胞悬液按照每孔100μL的比例接种到96孔板上，37℃、5％CO₂条件下孵育过夜。去除培养液，加入已过滤除菌的百合发酵液，每样品做6个复孔，培养24h。培养结束后每孔加入MTT溶液(5mg/mL)和DMEM的混合溶液(v/v，1：5)100μL，孵育4h。去除培养基，每孔加入150μL的DMSO，37℃孵育10min后读取490nm下实验组的吸光度(记为A)。将无细胞的处理组(细胞悬液用无血清的DMEM代替，其余步骤相同)设定为空白对照组，记为B。将细胞对照组(用无血清DMEM替代样品溶液，其余步骤相同)记为C。

细胞活力的计算公式如下：细胞活力(％)＝(A-B)/(C-B)×100；

具体结果参见表4。

表4实施例1至3制得的发酵液的细胞MTT实验结果

	发酵前空白对照	实施例1	实施例2	实施例3
					细胞活力％	57.07	100.08	108.24	124.62
标准差std	5.079406	3.818974	12.20607	22.32536

由表4可知，尚未开始发酵的底物处理的细胞存活率较低，实施例1得到的酵母菌单独发酵百合发酵液、实施例2所得的乳酸菌单独发酵百合发酵液以及实施例3得到的酵母菌乳酸菌两步发酵所得的百合发酵液都对细胞有良好的增殖作用，特别是实施例3得到的发酵液效果更佳。

最后，还需要说明的是，在本公开中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。

尽管上面已经通过本公开的具体实施例的描述对本公开进行了披露，但是，应该理解，本领域技术人员可在所附方案的精神和范围内设计对本公开的各种修改、改进或者等同物。这些修改、改进或者等同物也应当被认为包括在本公开所要求保护的范围内。

Claims (10)

1.一种化妆品用百合发酵物的制备方法，其特征在于，包括：

取适量百合和水混合、灭菌处理、冷却后得到发酵底物，所述百合和水的质量比为0.5～5:100；

往所述发酵底物接种酵母菌和/或乳酸菌进行发酵处理，然后灭菌、分离处理，得到百合发酵液。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述发酵处理包括：先对所述发酵底物接种酵母菌进行第一次发酵培养；灭菌处理后再接种乳酸菌进行第二次发酵培养。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述酵母菌为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YWY-1，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编为100101，保藏日期为2019年03月27日，保藏编号为CGMCC No.17452；

优选地，用于接种的酵母菌菌液的浓度为10⁴-10⁹CFU/mL，所述酵母菌菌液和所述发酵底物的体积比为5％-20％。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述乳酸菌为以下菌种的至少一种：德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbruechii subsp.Bulgaricus)，布氏乳杆菌(Lactobacillus buchneri)，两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)，保藏编号为CGMCC 1.5029；

优选地，所述乳酸菌为以下菌种的至少一种：德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbruechii subsp.Bulgaricus)，保藏编号为CGMCC 1.16075；布氏乳杆菌(Lactobacillus buchneri)，保藏编号为CGMCC 1.15607；两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)，保藏编号为CGMCC 1.5029；

更优选地，所述乳酸菌为德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbruechiisubsp.Bulgaricus)，保藏编号为CGMCC 1.16075；

优选地，用于接种的乳酸菌菌液的浓度为10⁴-10⁹CFU/mL，所述乳酸菌菌液和所述发酵底物的体积比为5％-20％。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述发酵处理时，如果采用酵母菌，则发酵培养的温度为20℃-28℃，时间为30-50h，转速为100-180r/min；如采用乳酸菌，则发酵培养的温度为37-45℃，时间为6-16h，静置培养。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述灭菌处理的温度是100-121℃，时间是15-30min。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述分离处理采用离心方法；更优选地，离心转速为4500r/min-6000r/min，离心时间为30min-60min。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的制备方法，其特征在于，还包括：对所述百合发酵液进行防腐处理；更优选地，所述防腐处理为在所述百合发酵液冷却至45℃以下后添加2.3％乙二醇和0.5％戊二醇。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的制备方法，其特征在于，还包括：对所述百合发酵液进行干燥处理，最终得到百合发酵干粉；更优选地，所述干燥处理为喷雾干燥或真空冷冻干燥。

10.一种采用如权利要求1-9中任一项所述的方法制备的发酵产品。

Images