CN113475507A - 促进菌食性粉螨唾液蛋白分泌的诱剂及唾液蛋白收集方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种促进菌食性粉螨唾液蛋白分泌的诱剂及唾液蛋白收集方法，所述诱剂包括溶剂，以及溶解于所述溶剂中的引诱剂组分；所述溶剂包括蔗糖水溶液；所述引诱剂组分包括3‑辛酮和α‑萜品烯。本发明提供的促进菌食性粉螨唾液蛋白分泌的诱剂，通过蔗糖水溶液与3‑辛酮和α‑萜品烯的协同作用，利用3‑辛酮和α‑萜品烯的挥发性，对菌食性粉螨进行引诱，再通过3‑辛酮、α‑萜品烯以及蔗糖水溶液刺激被引诱的菌食性粉螨分泌唾液蛋白，从而增加唾液蛋白的分泌量，降低获取粉螨唾液蛋白的难度。

Description

促进菌食性粉螨唾液蛋白分泌的诱剂及唾液蛋白收集方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体而言，涉及一种促进菌食性粉螨唾液蛋白分泌的诱剂及唾液蛋白收集方法。
背景技术
螨虫属于蛛形纲(Arachinida)、蜱螨亚纲(Acari)，目前有5500属和1200亚属，有124总科540科。我国是食用菌生产大国，也是食用菌出口大国，螨虫是危害食用菌的一个重要类群，螨虫的种类多；据统计，我国目前发现的与食用菌栽培有关的有害螨类有21个科44种，其中粉螨科有13种之多，包括重要害螨：腐食酪螨(Tyrophagus putrescentiae)、长食酪螨(T.longior)、罗宾根螨(Rhizoglyphus robini)、粗脚粉螨(Acarus siro)等。
螨虫既可以取食菌丝，也可以为害子实体，寄主受害症状与病害相似，给螨虫的防治和鉴定工作带来困难，加之螨虫通常从栽培袋袋口或出菇(耳)孔处侵染袋(瓶)内，钻蛀到基质内取食为害，药剂的喷施后无法杀灭基质内的螨虫。
食用菌栽培经历四十年的快速发展，也逐步进入一个以设施标准化为重要特征的新时代，产品质量安全和生态环境保护也受到了前所未有的重视，食用菌生产过程中易受到害螨危害导致减产或绝收，成为制约食用菌产业健康发展的一个重要问题，迫切需要解决。
研究寄主与害虫之间的协同进化，有害生物的唾液在这种复杂的相互作用关系中起着关键的作用，对其成分的探究将有助于揭示相关作用元素，推动植物抗虫与昆虫抗逆机制的研究，对指导害虫治理具有非常重要的理论意义和实践价值。
粉螨科中菌食性螨类大多个体微小，成螨体长0.1mm～0.9mm，口器已退化，其口腔分泌物很难像鳞翅目体型较大昆虫那样直接吸取或半翅目等刺吸式口器昆虫通过双层膜夹营养液法来采集；粉螨体壁薄、鄂体在0.01mm以下、骨化度低，在解剖获取鄂体过程中极易破碎，很难收集到足够量的口腔分泌物，增加了获得高浓度高质量粉螨唾液蛋白的难度。
发明内容
本发明解决的问题是获取粉螨唾液蛋白的难度较大。
为解决上述问题，本发明提供一种促进菌食性粉螨唾液蛋白分泌的诱剂，包括溶剂，以及溶解于所述溶剂中的引诱剂组分；所述溶剂包括蔗糖水溶液；所述引诱剂组分包括3-辛酮和α-萜品烯。
选用蔗糖水溶液作为溶剂，一方面用于对引诱剂组分进行溶解，另一方面，还有利于促进菌食性粉螨分泌唾液，从而降低获取粉螨唾液蛋白的难度。
作为引诱剂组分的3-辛酮和α-萜品烯，具有挥发性，从而通过二者的挥发，有助于对菌食性粉螨产生味觉刺激，引诱菌食性粉螨，并促使菌食性粉螨分泌唾液，进一步与作为溶剂的蔗糖水溶液协同作用，能够获得稳定的、高浓度的唾液，从而有助于降低获取粉螨唾液蛋白的难度。
本申请提供的诱剂，同时具有对菌食性粉螨的引诱作用以及刺激唾液分泌作用，可以获得稳定的高浓度的菌食性粉螨的唾液；本申请以3-辛酮和α-萜品烯作为引诱剂组分，具有操作简单、方便，有效浓度区间宽，收集唾液效率高的特点，因此，本发明提供的促进菌食性粉螨唾液蛋白分泌的诱剂具有广阔的产业化前景，特别适用于食用菌-粉螨互作机制研究，以及在食用菌无公害生产中的使用，具有广阔的经济、社会和生态效益。
可选地，所述溶剂还包括吐温-20。
通过加入吐温-20，有助于促进引诱剂组分与溶剂充分混合，从而有助于促进溶剂与引诱剂组分协同作用，进而有助于提高对菌食性粉螨的引诱作用以及味觉刺激作用，增加菌食性粉螨唾液的分泌量。
可选地，所述溶剂中，所述蔗糖的质量份数为20～25份；所述吐温-20的质量份数为0.1。
可选地，所述溶剂的pH范围为6～7.5。
可选地，所述3-辛酮与所述溶剂的量比为1mg/mL～50mg/mL。
可选地，所述α-萜品烯与所述溶剂的量比为0.5mg/mL～5mg/mL。
可选地，还包括利福平；所述利福平与所述溶剂的量比为0.05mg/mL。
本发明的另一目的在于提供一种唾液蛋白收集方法，包括如下步骤：
S3：将如上所述的促进菌食性粉螨唾液蛋白分泌的诱剂放置于第一培养皿的培养皿底座中；
S4：在放置有所述诱剂的所述培养皿底座上覆盖封口膜；
S5：用纱网收集菌食性粉螨后，将所述纱网反扣至所述封口膜上方，使所述菌食性粉螨位于所述封口膜上；
S6：在所述纱网上盖合培养皿上盖，得到装配完成的唾液收集装置；
S7：将所述装配完成的唾液收集装置放置于培养箱中，于26℃、黑暗条件下收集唾液。
由于粉螨与叶螨不同，其爬行力强、极易逃逸，这也增加了获得高浓度高质量粉螨唾液蛋白的难度，为解决该问题，本申请还提供一种与本申请中的唾液蛋白收集方法相适配的唾液蛋白收集装置，以便于通过该唾液蛋白收集装置来对粉螨唾液进行收集的同时，避免粉螨逃逸，保证唾液蛋白的收集量。
本申请提供的唾液蛋白收集方法采用的唾液蛋白收集装置包括第一培养皿，该第一培养皿包括培养皿底座，覆盖于培养皿底座上方的封口膜，放置于封口膜上的纱网，以及盖合在纱网上方的培养皿上盖；其中，培养皿底座内放置有如上所述的促进菌食性粉螨唾液蛋白分泌的诱剂；封口膜上设置有菌食性粉螨。
本申请优选封口膜的材质为Parafilm封口膜，以便于使得挥发的3-辛酮和α-萜品烯能够穿过该膜来对菌食性粉螨产生引诱以及味觉刺激作用。
对该唾液蛋白收集装置进行装配过程中，在培养皿底座中装满上述的诱剂，然后用Parafilm封口膜封口，且将Parafilm封口膜拉伸成薄膜，使得培养皿底座中无空气残存；本申请优选纱网为200目～300目的防虫网或无纺布，将菌食性粉螨放置于封口膜上，并将纱网覆盖于封口膜上后，进一步盖上培养皿上盖，以防止菌食性粉螨逃逸。
本申请优选步骤S7中收集唾液的时间为24h；收集过程中，优选将收集的样品于-80℃条件下储存，直至足够的样品(本申请优选约100mL，6～8个平皿样品)后，对收集的样品进行蛋白分析。
可选地，还包括：S1：将培养皿底座放置于第二培养皿内。
本申请优选第一培养皿以及第二培养皿的材质均为透明塑料或玻璃，并进一步优选第一培养皿中培养皿底座的直径范围为30mm～35mm，第二培养皿的底部直径范围为90mm～120mm。
可选地，还包括：S2：在所述第二培养皿内添加清水。
本申请优选将清水填充至培养皿底座1高度的1/2～3/4处，通过填充清水进一步防止菌食性粉螨逃逸。
与现有技术相比，本发明提供的促进菌食性粉螨唾液蛋白分泌的诱剂具有如下优势：
本发明提供的促进菌食性粉螨唾液蛋白分泌的诱剂，通过蔗糖水溶液与3-辛酮和α-萜品烯的协同作用，利用3-辛酮和α-萜品烯的挥发性，对菌食性粉螨进行引诱，再通过3-辛酮、α-萜品烯以及蔗糖水溶液刺激被引诱的菌食性粉螨分泌唾液蛋白，从而增加唾液蛋白的分泌量，降低获取粉螨唾液蛋白的难度。
本发明提供的促进菌食性粉螨唾液蛋白分泌的诱剂，除应用于对粉螨的唾液蛋白进行收集外，还可用作对有害螨虫进行诱集的引诱剂，从而起到对有害螨虫的防控作用。
附图说明
图1为本发明中唾液蛋白收集装置的爆炸图；
图2为本发明中唾液蛋白收集装置的结构简图；
图3为本发明中诱剂对菌食性粉螨行为测定的四点趋化性实验示意图；
图4为本发明中诱剂对菌食性粉螨的诱集效果；
图5为本发明收集的唾液蛋白质量；
图6为本发明中LC-MS/MS质谱检测收集唾液蛋白的质量；
图7为图6的局部放大图。
附图标记说明：
1-培养皿底座；2-封口膜；3-纱网；4-培养皿上盖；5-第二培养皿。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制，基于本发明的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更为明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施例做详细的说明。
首先，本申请通过实施例1～实施例4来验证溶剂中不同的蔗糖浓度对菌食性粉螨的唾液分泌量的影响。本申请中唾液蛋白收集方法通过如图1、图2所示的唾液蛋白收集装置来实现。
实施例1
S1：将培养皿底座1放置于第二培养皿5内；
S2：在第二培养皿5内添加清水至培养皿底座1高度的1/2处；
S3：将溶剂放置于培养皿底座1中，溶剂中吐温-20的质量百分比为0.1％，蔗糖的质量百分比为5％，其余为水；溶剂的pH为6～7.5；
S4：在放置有溶剂的培养皿底座1上覆盖封口膜2；
S5：用80目的过滤筛收集腐食酪螨、罗宾根螨成螨各0.1g，转置2.0mL的离心管中饥饿24h，然后用灭菌后的超纯水清洗4次后，用200～300目的纱网3收集，吸干纱网3上的水分，将其反扣在封口膜2上，使菌食性粉螨位于封口膜2上；
S6：在纱网3上盖合培养皿上盖4，得到装配完成的唾液收集装置；
S7：将装配完成的唾液收集装置放置于60％RH的培养箱(SPX-2501C型，苏州江东精密仪器有限公司)中，于26℃、黑暗条件下收集唾液。
收集唾液24h后，使用Hamilton微量注射器在无菌条件下(Laminar Flowcabinet，ESCO，Singapore)对培养皿底座1内的唾液进行收集。将样品储存在-80℃直至收集足够的样品(约100mL，6-8个平皿样品)用于蛋白分析。
实施例2
本实施例步骤S3中蔗糖的质量百分比为10％，其余与实施例1中相同。
实施例3
本实施例步骤S3中蔗糖的质量百分比为20％，其余与实施例1中相同。
实施例4
本实施例步骤S3中蔗糖的质量百分比为25％，其余与实施例1中相同。
进一步的，对实施例1～实施例4中的溶剂配制完成后，进行高压灭菌，再加入利福平；利福平与溶剂的量比为0.05mg/mL。
对实施例1～实施例4收集的唾液蛋白进行检测，分析不同蔗糖浓度对唾液蛋白浓度的影响。
分别将实施例1～实施例4合并后的口腔分泌物转移到分子量10KD的超滤管内(Amicon Uitra-15，Merck-Millipore，German)，4℃下，10,000rpm，离心1h浓缩至1000μL，加入尿素粉末和10％SDS溶液，使尿素终浓度为8M，SDS浓度为0.1％，继续浓缩样品至100μL。
蛋白浓度分析：采用Eppendorf Biophotometer蛋白测定仪通过Bradford法测定总蛋白的含量。以15.0mg/mL牛血清蛋白为标准蛋白，用蛋白定量染料分别稀释10×、13.3×、20×、40×和100×，测定595nmOD值，制作标准曲线。取20μL的浓缩样品用蛋白定量染料按2×、5×和10×的浓度梯度稀释，测定595nm OD值，得到样品的蛋白浓度。
具体结果详见表1所示。
从表1的结果可看出，随着溶剂中蔗糖浓度的提高，唾液蛋白收集量逐渐提高。
其次，通过实施例5来验证不同浓度的诱剂组分对菌食性粉螨的诱集作用。
实施例5
配制五组溶剂相同，引诱剂含量不同的诱剂，其中五组诱剂中溶剂的配方均选用实施例4中溶剂的配方；第一组诱剂中，3-辛酮(3-Octanone)与溶剂的量比为1mg/mL，α-萜品烯(ααTerpinene)与溶剂的量比为0.5mg/mL；第二组诱剂中，3-辛酮(3-Octanone)与溶剂的量比为5mg/mL，α-萜品烯(α品Terpinene)与溶剂的量比为1.0mg/mL；第三组诱剂中，3-辛酮(3-Octanone)与溶剂的量比为1 0mg/mL，α-萜品烯(α-Terpinene)与溶剂的量比为2.0mg/mL；第四组诱剂中，3-辛酮(3-Octanone)与溶剂的量比为20mg/mL，α-萜品烯(α-Terpinene)与溶剂的量比为5.0mg/mL；第五组诱剂中，3-辛酮(3-Octanone)与溶剂的量比为50mg/mL，α-萜品烯(α-Terpinene)与溶剂的量比为5.0mg/mL。
采用四点趋化性实验，参见图3所示，将培养皿底座分为四个象限，并对上述所述五组配方进行分组，每三种组成一组实验组，每组实验重复三次来确定该组诱剂对腐食酪螨、罗宾根螨的诱集作用。实验中，将含有不同配方的滤纸片(直径2cm)置于其中三个象限内，剩余一个象限作为空白对照，随后将100头成螨放置在底座中间，并允许它们自由爬行，盖上上盖，20min后选取每个象限中滤纸片上的螨虫数量为有效数据；计算每个象限中螨虫数量，并确定它们的趋化性指数(Hsueh et al.2017)；趋化指数通过以下公式计算：
(CI)＝[(X)-(Ⅳ)]/(I+Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ) (1)
其中X为象限I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ中某一象限中的螨虫数，IV为空白象限中的螨虫数，通过将X象限中的螨虫数减去空白象限中的螨虫数，除以螨虫总数，获得趋化指数；该趋化指数为螨虫对象限内诱剂的喜好情况。
采用SPSS20.0统计软件处理数据，所有数据采用均数±标准差(±S)表示，均数比较用单因素方差分析(One-Way ANOVA)作多组间比较，诱集效果详见图4所示。
结论：诱剂中的两种效力组分在不同浓度下对腐食酪螨、罗宾根螨都有一定的诱集作用；其中，3-辛酮在10mg/mL浓度下、α-萜品烯在2.0mg/mL浓度下对两种粉螨的诱集效果最为显著。
再次，通过实施例6～实施例8来验证不同浓度的诱剂组分对唾液分泌量的影响。
实施例6
S1：将培养皿底座1放置于第二培养皿5内；
S2：在第二培养皿5内添加清水至培养皿底座1高度的1/2处；
S3：将诱剂放置于培养皿底座1中，诱剂的溶剂中吐温-20的质量百分比为0.1％，蔗糖的质量百分比为25％，其余为水；溶剂的pH为6～7.5；对溶剂高压灭菌后加入利福平，利福平与溶剂的量比为0.05mg/mL；引诱剂组分中，3-辛酮(3-Octanone)与溶剂的量比为5mg/mL，α-萜品烯(α品Terpinene)与溶剂的量比为1.0mg/mL；
S4：在放置有诱剂的培养皿底座1上覆盖封口膜2；
S5：用80目的过滤筛收集腐食酪螨、罗宾根螨成螨各0.1g，转置2.0mL的离心管中饥饿24h，然后用灭菌后的超纯水清洗4次后，用200～300目的纱网3收集，吸干纱网3上的水分，将其反扣在封口膜2上，使菌食性粉螨位于封口膜2上；
S6：在纱网3上盖合培养皿上盖4，得到装配完成的唾液收集装置；
S7：将装配完成的唾液收集装置放置于60％RH的培养箱(SPX-2501C型，苏州江东精密仪器有限公司)中，于26℃、黑暗条件下收集唾液。
收集唾液24h后，使用Hamilton微量注射器在无菌条件下(Laminar Flowcabinet，ESCO，Singapore)对唾液进行收集。将样品储存在-80℃直至收集足够的样品(约100mL，6-8个平皿样品)用于蛋白分析，具体分析过程参见实施例1中相关描述，结果详见表1中数据。
对腐食酪螨唾液蛋白浓度和分子量进行检测。
实施例7
本实施例步骤S3中3-辛酮(3-Octanone)与溶剂的量比为10mg/mL，α-萜品烯(α品Terpinene)与溶剂的量比为2.0mg/mL，其余均与实施例6中相同。
实施例8
本实施例步骤S3中3-辛酮(3-Octanone)与溶剂的量比为20mg/mL，α-萜品烯(α品Terpinene)与溶剂的量比为5.0mg/mL，其余均与实施例6中相同。
表1
Figure BDA0003125169140000121
其中腐食酪螨唾液蛋白和分子量检测的过程如下：
使用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-PAGE法初步检测蛋白质量和分子量大小。
将收集的各重复样品加入等体积的2×SDS-PAGE Loading Buffer，煮沸裂解5min，冰浴2min，12,000rpm离心10min，取上清液-20℃保存备用。
1)分离胶的制备
按表2成分配制10mL 12％分离胶：
表2
ddH2O 3.3mL
30％丙烯酰胺混合液 4.0mL
1.5M Tris(pH8.8) 2.5mL
10％SDS 0.1mL
10％过硫酸铵 0.1mL
TEMED 0.004mL
总体积 10mL
各成分加入后迅速旋涡混匀，用微量移液器将其小心地注入准备好的玻璃板间隙中，并为积层胶留出足够空间。轻轻在顶层加入一薄层水封顶，以防止空气中的氧对凝胶聚合的抑制作用。凝胶聚合完成后，倒掉覆盖的水层，用水清洗凝胶顶部数次，用滤纸吸干凝胶顶端的水。
2)积层胶的制备
按表3成分配制2mL 5％的积层胶：
表3
Figure BDA0003125169140000131
Figure BDA0003125169140000141
各成分加入后迅速旋涡混匀，用微量移液器将其灌注到分离胶上，灌满后小心插入加样梳，尽可能避免产生气泡。
3)待积层胶凝固后，小心拔下梳子。将凝胶固定于电泳装置上，加入足量的1待Tris-甘氨酸电泳缓冲液，在加样孔中分别加入20μL样品。
4)样品在积层胶中电泳时，使用80V电压，待溴酚蓝带进入分离胶后，将电压升至120V，继续电泳直至溴酚蓝带到达分离胶的底部且开始泳出胶底面，关闭电源。
5)卸下凝胶，将其浸泡在至少5倍体积的考马斯亮蓝R-250染色液中，置水平摇床上室温染色4h～5h，之后取出染色的凝胶并回收染液，以备再用，将凝胶浸泡于考马斯亮蓝脱色液中，在水平摇床上脱色4h～8h，其间更换脱色液3～4次，直至凝胶脱色到条带清晰为止，观察记录结果并拍照。
12％SDS-PAGE电泳结果显示唾液蛋白的大小在40-60KDa，蛋白分离出两条清晰的条带，详见图5所示；其中TPS1为实施例8收集的唾液蛋白样品；TPS2和TPS3分别为实施例6和实施例7收集的唾液蛋白样品。
进一步通过LC-MS/MS质谱检测收集唾液蛋白的质量及其组成。
质谱分析：使用Thermo Scientific公司的Q Exactive质谱仪进行质谱分析。采用Shotgun质谱鉴定技术，先将收集的唾液蛋白溶液浓缩，然后采用SDS-PAGE凝胶电泳进行蛋白分离，酶切消化成肽段混合物之后再用质谱技术进行鉴定腐食酪螨分泌物中的化学物质组成。
高效液相系统：戴安NCS3500系统。Buffer A＝99.9％水、0.1％甲酸；Buffer B＝99.9％乙腈、0.1％甲酸。质谱仪：Q Exactive。质谱全扫描范围m/z 350-1600。全扫描中选择离子强度TOP25的母离子进行二级质谱鉴定。母离子使用HCD方法碎裂，进行二级质谱序列测定，生成质谱检测原始文件。质谱检测原始文件使用Proteome Discoverer软件(简称PD软件)与NCBI蛋白质组数据库进行搜库计算分析，软件计算结果使用过滤设置：碎片离子误差范围fragment ion为0.05Da；母离子质量数误差范围precursor mass为20ppm；肽段非特异性断裂数为0(allow non-specific cleavage at:none)；每条肽段漏切位点的阈值设置为2(maximum，missed clravages per peptide:2)；固定修饰选“oarbamidomethyl”，可变修饰选“oxidation”；所采用的酶是经TPCK处理的胰蛋白酶(enzyme:trypsin)；每条肽段翻译后修饰类型最多有3种。搜库结束后用假阳性率FDR<1％和鉴定到的蛋白中特有肽段(unique peptide)≥1这两个条件对保留结果可靠的多肽和蛋白。然后与本实验的腐食酪螨基因组进行比对再筛选核实。
通过Shotgun LC-MS/MS分析，参见图6、图7所示，在腐食酪螨的水状唾液中共鉴定到203种蛋白序列，其中98种蛋白检测到的肽段丰度较高，有2-23条唯一肽段；高质量蛋白15个(score>60)。选择唯一肽段>2，score>60的15种蛋白质进行重点分析。在这些蛋白中有5个蛋白为螨虫变应原蛋白：Der f38、Der f25、Der f9、Der f和Tyr P3六种不同分型；此外，能量代谢相关的蛋白酶有4个，钾离子通路蛋白1个，昆虫激肽类蛋白2个，肌动蛋白2个以及与昆虫免疫信号传导相关蛋白-载脂蛋白1个。
结论：相对于蔗糖溶液收集的唾液蛋白含量，本发明提供的3-辛酮和α-萜品烯为效力组分的诱剂能有效刺激粉螨的唾液分泌，蛋白含量高达7.255±1.15mg/mL，能满足蛋白质谱分析对蛋白浓缩和质量要求，便于开展科学研究。
以上实验结果表明，本发明提供的刺激菌食性粉螨唾液蛋白分泌的诱剂及唾液蛋白收集方法，能够高效地获得高浓度高质量的螨虫等小型动物的唾液蛋白，操作简便，快捷高效。其中所提供的3-辛酮和α-萜品烯为效力组分的诱剂，还可以应用在害螨的绿色防治上，具有有效浓度区间宽、引诱效率高等特点，具有广阔的经济、社会和生态效益。
虽然本公开披露如上，但本公开的保护范围并非仅限于此。本领域技术人员，在不脱离本公开的精神和范围的前提下，可进行各种变更与修改，这些变更与修改均将落入本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种促进菌食性粉螨唾液蛋白分泌的诱剂，其特征在于，包括溶剂，以及溶解于所述溶剂中的引诱剂组分；所述溶剂包括蔗糖水溶液；所述引诱剂组分包括3-辛酮和α-萜品烯。
2.如权利要求1所述的促进菌食性粉螨唾液蛋白分泌的诱剂，其特征在于，所述溶剂还包括吐温-20。
3.如权利要求2所述的促进菌食性粉螨唾液蛋白分泌的诱剂，其特征在于，所述溶剂中，所述蔗糖的质量份数为20～25份；所述吐温-20的质量份数为0.1。
4.如权利要求1所述的促进菌食性粉螨唾液蛋白分泌的诱剂，其特征在于，所述溶剂的pH范围为6～7.5。
5.如权利要求1～4任一项所述的促进菌食性粉螨唾液蛋白分泌的诱剂，其特征在于，所述3-辛酮与所述溶剂的量比为1mg/mL～50mg/mL。
6.如权利要求1～4任一项所述的促进菌食性粉螨唾液蛋白分泌的诱剂，其特征在于，所述α-萜品烯与所述溶剂的量比为0.5mg/mL～5mg/mL。
7.如权利要求1～4任一项所述的促进菌食性粉螨唾液蛋白分泌的诱剂，其特征在于，还包括利福平；所述利福平与所述溶剂的量比为0.05mg/mL。
8.一种唾液蛋白收集方法，其特征在于，包括如下步骤：
S3：将如权利要求1～7任一项所述的促进菌食性粉螨唾液蛋白分泌的诱剂放置于第一培养皿的培养皿底座(1)中；
S4：在放置有所述诱剂的所述培养皿底座(1)上覆盖封口膜(2)；
S5：用纱网(3)收集菌食性粉螨后，将所述纱网(3)反扣至所述封口膜(2)上方，使所述菌食性粉螨位于所述封口膜(2)上；
S6：在所述纱网(3)上盖合培养皿上盖(4)，得到装配完成的唾液收集装置；
S7：将所述装配完成的唾液收集装置放置于60％RH的培养箱中，于26℃、黑暗条件下收集唾液。
9.如权利要求8所述的唾液蛋白收集方法，其特征在于，还包括：S1：将培养皿底座(1)放置于第二培养皿(5)内。
10.如权利要求9所述的唾液蛋白收集方法，其特征在于，还包括：S2：在所述第二培养皿(5)内添加清水。
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