CN113453548A - 用于保持活的和静态的生物材料的生存力的组合物、其制造方法及用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及用于延长保存和保持活的和静态的生物材料的组合物、其制造方法及用途。本发明提供了用于保持体内、离体和/或体外的活的和静态的生物材料的生存力的组合物，以及制造和使用这些组合物的方法。

Description

用于保持活的和静态的生物材料的生存力的组合物、其制造 方法及用途

相关申请的交叉引用

本申请要求于2019年2月14日提交的、名称为用于保持活的和静态的生物材料的生存力的组合物、其制造方法及用途的美国临时专利申请号62/805,784的优先权。

技术领域

本发明涉及用于保持活的和静态的生物材料的生存力，特别是用于保存用于移植所捐赠的器官，以及用于动物，特别是哺乳动物中的补液和水合的组合物，以及其制造和使用方法。

背景技术

保持活的和静态的生物材料的生存力的技术发展，以及特别是医学器官移植以及其他相关医学程序，已增加了对所有类型的这些生物材料的需求。鉴于对组织和血型匹配的严格要求，以及有限的捐赠来源，例如可用的心脏、肝、肺、肾和其他器官的供应，以及组织、胚胎、精子和细胞的供应通常大体上少于从其他生物材料的广泛列表中的等待延长生命的移植的患者或其他必要医学程序的数目。因此，仍然持续需要优化有限的生物材料的供应，尤其是捐赠的器官的供应。本领域寻求最大化捐赠的器官的可用性的一种途经特别是通过在捐赠之后但在再植术之前改进器官的保存。相同的技术通常用于所需的组织、胚胎、精子和细胞。

通常，现有技术中所见的当前供体器官保存方案并未尝试为对于从正常血液供应分离的器官重建类似体内的生理状态。而是，它们利用低温条件(通常低于20摄氏度)并储存在渗透中性晶体溶液(矿物盐或其他水溶性分子的水性溶液)中；现今最常使用的晶体溶液是生理盐水(0.9％浓度的氯化钠的溶液，其接近人血液中的浓度)。用于保存已从其通常的营养来源，例如活动物或人的血液循环中分离的器官的生存力的当前方法，取决于用通常与降低器官温度组合以略高于水的冰点(即略高于0℃)的支持性溶液接触和/或灌注器官。这旨在降低器官组织的代谢率，从而减缓营养物的消耗和废物的产生。然而，以这种方式支持的器官的储存和运输，即在低温储存中，在时间上仍然非常有限，并且降低器官组织的代谢率呈现许多显著的问题和缺点。同样，用胶体溶液代替晶体溶液呈现其自身的一组问题，胶体溶液包含较大的不溶性分子，诸如包含白蛋白的那些，以及特别是包含白蛋白诸如BSA(“牛血清白蛋白”)的那些，它们可能携带当被引入血流或用作用于对于动物再植术指定的捐赠的器官的保存培养基时对动物有害的病毒和细菌。还进一步地，虽然产品诸如包含羟乙基淀粉的Hextend^TM已示出一些希望，但将其用于病重的人与增加死亡和肾问题的风险相关联，并且因此不推荐在患有已知的炎症病症，诸如尤其肾脏损伤的人中。

据推测，用于再植术的储存时间短的一个重要原因是冷储存期间招致的损害，随后是加温和再灌注移植受体的血液期间发生的组织损伤。鉴于捐赠的器官的持续短缺，还仍然长期需要延长再植术前的储存或运输时间，其中，避免在运输期间将器官温度降低至接近0℃，只是使在移植前将温度回升接近体温，或至少保持在小得多的差异度范围内。

如可以容易理解的，本领域仍然长期需要用于在体内和体外两者中在远离正常循环支持的延长时期内改进存活的器官、组织、胚胎和细胞的保存的组合物和方法。显然需要在动物以及特别在人中还可用作补液和水合培养基，而无需任何或至少最小重新组合组合物的这样的上述组合物和方法。本发明满足了这些显著、长期的且还未得到满足的需求。

发明内容

根据一种优选的实施方式，本发明提供了一种组合物，所述组合物包含第一微量、第二微量和碱，其中所述第一微量包括花生四烯酸、亚油酸、亚麻酸、肉豆蔻酸、油酸、棕榈酸钠盐、硬脂酸、胆固醇(非动物来源)、Tween80(即聚山梨酯80)(非动物来源)、DL-a-生育酚和维生素A醋酸酯(即视黄醇)，其中所述第二微量包括D-生物素、L-半胱氨酸盐酸盐一水合物(非动物来源)、叶酸、还原型谷胱甘肽、核黄素、盐酸硫胺素和维生素B12，其中所述碱包括L-精氨酸盐酸盐、L-天冬氨酸、腺苷、L-抗坏血酸、无水氯化钙、重酒石酸胆碱、右旋糖酐-40、甘氨酸、L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、无水D-葡萄糖、L-组氨酸盐酸盐一水合物、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸盐酸盐、无水硫酸镁、D-甘露糖、L-脯氨酸、L-苯丙氨酸、磷酸二氢钾、泊洛沙姆188/Pluronic F-68、磷酸二氢钠一水合物、葡萄糖酸钠、L-苏氨酸、L-色氨酸和L-缬氨酸，并且进一步其中所述组合物包括L-胱氨酸和L-酪氨酸。

根据另一种优选的实施方式，本发明的组合物是单一溶液。

根据另一种优选的实施方式，本发明的组合物是由一种水性组分和两种粉末组分混配的单一溶液。

根据另一种优选的实施方式，本发明的组合物被混配成以下形式中的任一种：(1)水性溶液、(2)散剂、(3)(4)乳膏、(5)软膏、(6)糊剂或(7)凝胶。

根据另一种优选的实施方式，所述组合物基本上不含所有人和非人动物蛋白、生长因子和激素。

根据另一种优选的实施方式，所述组合物包含纳米颗粒或脂质体组分。

根据另一种优选的实施方式，所述组合物的pH优选保持在约7.1至约7.3的pH。

根据另一种优选的实施方式，所述组合物的渗量在约320mM/Kg至约430mM/Kg的范围内。

根据另一种优选的实施方式，制备所述组合物的方法包括以下步骤：将所述第一微量、所述第二微量和所述碱组合。

根据又另一种优选的实施方式，保存离体哺乳动物器官的方法包括以下步骤：用有效量的本发明的组合物接触或灌注所述哺乳动物器官。

根据又另一种优选的实施方式，为急性缺乏正常血液循环的器官或组织提供灌注支持的方法包括以下步骤：给药本发明的组合物。

根据又另一种优选的实施方式，治疗需要补液的人或非人动物的方法包括以下步骤：给药本发明的组合物。

根据又另一种优选的实施方式，保护活的或静态的生物材料的方法包括以下步骤：给药本发明的组合物。

根据又另一种优选的实施方式，保存器官的方法包括以下步骤：给药本发明的组合物。

根据又另一种优选的实施方式，修复因疾病或事故而受损害的解剖区域的方法包括给药本发明的组合物。

根据另一种优选的实施方式，组合物包括花生四烯酸、亚油酸、亚麻酸、肉豆蔻酸、油酸、棕榈酸钠盐、硬脂酸、胆固醇(非动物来源)、Tween80(即聚山梨酯80)(非动物来源)、DL-a-生育酚、维生素A醋酸酯(即视黄醇)、D-生物素、L-半胱氨酸盐酸盐一水合物(非动物来源)、叶酸、还原型谷胱甘肽、核黄素、盐酸硫胺素、维生素B12、L-精氨酸盐酸盐、L-天冬氨酸、腺苷、L-抗坏血酸、无水氯化钙、重酒石酸胆碱、右旋糖酐-40、甘氨酸、L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、无水D-葡萄糖、L-组氨酸盐酸盐一水合物、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸盐酸盐、无水硫酸镁、D-甘露糖、L-脯氨酸、L-苯丙氨酸、磷酸二氢钾、泊洛沙姆188/Pluronic F-68、磷酸二氢钠一水合物、葡萄糖酸钠、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-缬氨酸、L-胱氨酸和L-酪氨酸。

下文提供了本发明的优选实施方式的另外详细描述，并且提供有代表性实施例，然而这些优选实施方式和实施例不以任何方式限制本发明的范围。

实施本发明的最佳方式

本发明提供了用于保持体内、离体和/或体外的活的和静态的生物材料的生存力的组合物，以及制造和使用这些组合物的方法。广义上，将本发明的组合物配制成包括用于在非低温温度范围(例如但不限于，范围是约20℃至约37℃的温度)下保持体内和离体的活的和静态的生物材料的健康和生存力的支持性和/或防腐性营养物和其他物质。通过在非低温温度范围下保持体内和离体两者的活的和静态的生物材料的健康和生存力，本发明的组合物是令人惊讶地有利的，因为当使用这些本发明的组合物时不必要降低、减慢或停止细胞代谢。本发明还避免了与活的和静态的生物材料的冷冻保存相关联的所有问题。

广义上，并且在本发明的最优选的方面中，本发明的组合物包括各种组分的组合，包括但不限于选自以下之中的那些：氨基酸、各种脂肪酸、盐、糖、微量元素、维生素、某些碳水化合物、表面活性剂、乳化剂和体积膨胀剂。在优选的实施方式中，组合物可以进一步补充有成分的组合，这些成分可以包括但不限于缓冲液、抗炎剂和抗氧化剂，它们溶解或分散在水性介质或其他考虑形式中。本发明的组合物还优选地包含浓度类似于存在于血液、血清、血浆和/或正常身体组织中的那些浓度的许多营养物和矿物质因子。

现在将详细参考本发明和实施方式的各个方面。提供本发明的某些优选实施方式的以下语言和描述以进一步理解本发明的原理。然而，应当理解，不旨在限制本发明，并且还包括对本发明的原理的另外变化、修改和应用。

此外，除非另有定义，否则本说明书中使用的表示成分量、特性诸如分子量、反应条件等的所有数字应当理解为在所有情况下都被术语“约”修饰。因此，除非有相反指示，否则本说明书中阐述的数值参数是可以根据期望和预期的特性而变化的近似值。

本发明的组合物可以用于保持任何类型的生物材料的生存力。如本文所用，术语“生物材料”非常广义上旨在包括为活生物的部分的任何东西，或者源自活生物或从活生物获得的任何东西，该活生物包括任何人或非人动物或其他类型的活生物。生物材料的一些代表性、非限制性实例包括但不限于任何类型的器官、细胞、组织或任何其他类型的生物材料，诸如例如胚胎或精子。生物材料可以处于任何状态或条件，包括但不限于静态或非静态条件。本发明还考虑了生物材料可以直接从非人动物或人或其他活生物获得，没有任何遗传修饰，或者可以以一些方式改变或修饰生物材料，例如遗传修饰或另外通过一些类型的干预而改变(例如，通过CRISPR基因编辑改变)。这些仅作为生物材料的非限制性实例给出并且这些实例不旨在以任何方式限制本发明的范围。

如本文所用，术语“水性溶液”是指其中溶剂为水的溶液并且包括但不限于具有无机盐诸如磷酸钠或磷酸钾、氯化钠、氯化钾或氯化钙、乙酸钠或乙酸钾的缓冲液，以及有机和无机酸和碱，诸如氢氧化钠或氢氧化钾、乙酸等。

如本文所用的术语“组合物”旨在是指但不限于可以用于一种或多种有益目的，例如但不限于在人和/或非人动物受试者中的药物和/或医学用途的组成组分或成分的任何制剂、混合物或其他组合。

本发明考虑了本发明的组合物，包括但不限于D2脂质体复合物，其中组合物包括第一微量、第二微量和碱，并且其中这些组合物可以使用任何合适的一种或多种工艺制造，诸如，并且仅举例来说，碾磨和混合和/或溶解在可溶性基介质中。

如本文所用的术语“器官”包含但不限于实体器官例如肾、心脏、肝、肺，以及器官的功能部分例如皮肤段，动脉的部分，肝、肾、肺等的可移植的叶。除非另有说明，否则术语“组织”在本文中是指以聚集形式的存活的细胞材料，例如器官的小部分，以及分散的细胞，例如从心肌、肝或肾分散、分离和/或生长的细胞，包括骨髓细胞和后代细胞、血源性干细胞和后代，以及各种其他领域已知的血液元素。如本文所用的术语“胚胎”是指早期发育阶段的多细胞二倍体真核生物。如本文所用的术语“精子”是指精液中微小的、通常活跃能动的配子之一，其用于使卵子受精。并且如本文所用的术语“细胞”意指生物的最小结构和功能单位，通常是微观的，并且由封闭在膜中的细胞质和细胞核组成。

如本文所用，术语“大体上”或“基本上”应被理解为广义上是指在显著的程度上接近绝对或基本上绝对的程度的明确术语。例如，术语“基本上不含”应被理解为广义上是指接近于绝对不含的程度的明确术语。此外，通过非限制性实例，术语“大体上完全”应是指至少约百分之九十或更高完全的完全程度，或即，在显著的程度上，基本上百分之100完全。

术语“wt.％”或“重量％”是指组分在整个组合物中按重量计的浓度。

进一步地，为了描述方便而使用单数术语绝不旨在如此限制。因此，仅为了说明，除非另有说明，否则提及包括“纳米颗粒”的组合物包括提及一种或多种这样的纳米颗粒，例如提及具有用于预期目的的足够纳米颗粒的制品。

本发明的代表性组合物

本发明的一种优选实施方式涉及包含如本文进一步详细描述的“D2制剂”的脂质体复合物。这有时在本文中也可互换地称为“D2脂质体复合物”。如本文所用，术语“D2脂质体复合物”旨在是指“脂质体复合物”，其优选包含但不限于包括“纳米颗粒”脂质乳剂或脂质体组分的复合物。

如本文所采用的术语“纳米颗粒”定义为但不限于两层乳剂颗粒，优选具有亲脂外层和亲水核，尺寸(平均直径)范围是约100nm至约300nm，以及更优选地尺寸范围是约100nm至约200nm。

如本文所用，“纳米颗粒”脂质乳剂或脂质体组分旨在是指包括亲脂外层和亲水内核的脂质乳剂或脂质体组分。这包括脂质和/或固醇外膜和必需脂肪酸和亲水内核。亲水内核包括必要材料，诸如蛋白衍生的生长因子和任选的额外的物质，诸如ATP等。在某些任选的实施方式中，该内核可以包括或代替为合适的氧载体，例如血红素蛋白或者血红素蛋白的溶液或悬浮液，包括例如天然衍生的血红素，任选地突变或化学修饰以具有有效的氧饱和曲线以运输和递送氧并去除在收获的器官或组织中的二氧化碳的重组血红素，和/或人造水溶性血红素，仅举几种类型的氧载体。

有利地，本发明的组合物不包含人或非人动物血清或未定义的蛋白。

不意指受关于本发明的组合物可如何操作的任何理论或假设的约束，在与处理的细胞的细胞膜接触时，疏水外层与细胞膜融合，允许本发明的纳米颗粒的亲水核被那些细胞吸收到细胞质中，从而递送增强生存力的补充能量化合物和必要的生长因子。相对于正常体液的渗量，升高的渗量还对减轻细胞肿胀起作用，并促进保存血管细胞的完整性。

在某些替代的实施方式中，本发明的组合物包括基础营养培养基，其优选地包括生理学上合适浓度的盐、水溶性维生素、氨基酸和核苷酸。这些包括，仅举例来说，并且但不限于，腺苷及其磷酸酯、尿苷及其磷酸酯、其他核苷酸和脱氧核苷酸；B族维生素，例如B1、B2、B6、B12，生物素，肌醇，胆碱，叶酸等；维生素辅酶和辅助因子，例如烟酰胺和黄素腺嘌呤二核苷酸，以及它们各自的磷酸酯、辅酶A等；各种生理盐和微量矿物质，例如钠盐、钾盐、镁盐、钙盐、铜盐、锌盐和铁盐；必需氨基酸，尽管所有二十种天然存在的氨基酸和/或其衍生物都任选地包括在内。基础营养培养基还包括例如pH缓冲液，诸如磷酸盐缓冲液和N-2-羟乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸(“HEPES”)缓冲液；单糖，例如葡萄糖；渗透增强剂，诸如任何合适的右旋糖酐、甘露糖等；以及任选的各种各样的组分，诸如别嘌呤醇、软骨素、羧化酶、生理有机酸，例如丙酮酸，以及任选地来自天然来源的营养提取物，例如酵母维生素提取物。

在另一种替代的实施方式中，任选地以生理浓度或高于生理浓度包括维生素C。

本发明的组合物还优选地包括含有具有亲脂外层和亲水核的脂质体或纳米级颗粒的脂质-水性乳剂。通常，这包括能够形成和稳定亲脂外层的亲脂组分，包括例如胆固醇、磷脂酰胆碱、维生素E、鳕鱼肝油等。额外的组分优选包括基于脂质的能量来源，包括生理学上相容量的游离脂肪酸，诸如亚油酸、亚麻酸、油酸及其功能等效物。

在另一种替代实施方式中，脂质-水性乳剂还优选地包括亲水支持性组分。另外支持性组分可以包括，例如，细胞间信使，诸如前列腺素，例如前列腺素E1。优选地，还包括生理学上相容的表面活性剂和清洁剂，例如，一种或多种水溶性表面活性剂，优选具有数千道尔顿的分子量的两亲嵌段共聚物，诸如聚环氧乙烷-聚环氧丙烷嵌段共聚物表面活性剂(例如，Pluronic F-68；来自BASF)和/或非离子表面活性剂。合适的非离子表面活性剂包括例如山梨糖醇酯的聚氧乙烯衍生物，例如作为

(Atlas Chemical Co.)可商购的聚氧乙烯山梨聚糖单油酸酯表面活性剂。

是特别优选的。本发明的组合物的核心部分优选可以不包括药学上显著量的磷脂酸或糖，或溶血磷脂酸或糖。

在其他某些实施方式中，本发明涉及用于当活的和静态的生物材料与正常生理支持分离时，保持这样的活的和静态的生物材料的生存力的纳米颗粒组合物。还公开了包含纳米颗粒组合物的组合物以及保存体内和离体两者的器官如肾的方法。

一种优选实施方式的另外描述：“D2制剂”

在一种优选的实施方式中，本发明考虑了具有各种组成化学组分的化学溶液(以下称为“D2制剂”)。更特别地，在优选的实施方式中，本发明考虑了“D2制剂”，其优选地包括第一微量溶液、第二微量粉末和碱粉末。例如，D2制剂可以包括以下组分：

1.第一微量(溶解以形成水性溶液)

2.第二微量(研磨成均匀的粉末形式)

3.碱(碾磨成均匀的粉末形式)

4.氢氧化钠(NaOH)

5.L-胱氨酸(C6H12N2O4S2)

6.L-酪氨酸(C9H11NO3)

根据此优选实施方式，第一微量溶液包括以下优选成分(下文表1中示出)。本发明还考虑了各种可能的替代成分，并且这些各种可能的替代成分的非限制性实例也在下文表1中列出和示出。应当理解，替代成分的这些非限制性实例仅通过说明提供，并不以任何方式限制本发明的范围。

此外，根据此优选实施方式，第二微量粉末包括以下优选成分(下文表2中示出)。本发明还考虑了各种可能的替代成分，并且这些各种可能的替代成分的非限制性实例也在下文表2中列出和示出。应当理解，替代成分的这些非限制性实例仅通过说明提供，并不以任何方式限制本发明的范围。

碱粉末

本发明的组合物，包括但不限于D2制剂，可以任选地与合适的氧载体组合用于增强保持组织和细胞生存力。

制造组合物的代表性方法和工艺

本发明的组合物通常优选通过制备用作最终产品的结构单元的必要成分的特定组合来生产。本发明考虑了本发明的组合物的制品，包括但不限于D2脂质体复合物(非动物来源)，其中，组合物包括第一微量、第二微量和碱。

本发明的组合物可以使用任何合适的一种或多种工艺来制备或制造。本文描述了制备本发明的组合物的方法的某些代表性实例，并且这些实例不以任何方式限制本发明的范围。

在一种代表性路径中，当制备脂质体复合物(诸如本文所述的D2脂质体复合物)时，在有效提供精细分散的乳剂，例如纳米颗粒级乳剂的条件下，利用微流化器或类似的这样的装置，其中纳米颗粒具有约100nm至约200nm的优选平均直径。所得的纳米颗粒级乳剂组合物提供各种微量营养物和其他组分，并提供如本文所述的所有令人惊讶且出乎意料的优点。

使用微流化(例如，通过微流化器或类似的这样的装置)

本发明考虑使用“微流化”，涉及在5000psi或高于5000psi的压力下的高压均化技术。在优选的实施方式中，此“微流化”工艺可用于产生具有平均直径优选约100nm至约300nm以及更优选约100nm至约200nm的均匀尺寸分布的脂质体或纳米颗粒。在本发明的替代方面，颗粒具有小于200nm的平均直径。除了微流化之外，可以任选地采用其他标准乳化方法，例如声处理、阀均化和叶片搅拌等。期望地，将水溶性表面活性剂，优选具有数千道尔顿的分子量的两亲嵌段共聚物，诸如聚环氧丙烷-聚环氧乙烷嵌段共聚物表面活性剂(例如，从BASF可商购的Pluronic F-68)和/或TWEEN80(非动物来源)添加至水性溶液中，以稳定涂覆的颗粒以防当它们形成时聚集。如果采用该方法，表面活性剂还用于增强(超)声处理的效果。用于微流化的优选装置的实例是使用由封装空气压缩机(例如来自SullairSolutions(密歇根城(Michigan City)，印第安纳州(IN))的No.ES-6)供应的压缩空气的来自Microfluidics Corp.(牛顿市(Newton)，马萨诸塞州(MA))的微流化器No.HC5000V。上文所述装置采用高压和高剪切均化来处理和乳化预混料-II(Premix-II)组合物并提供在期望尺寸范围内的纳米颗粒。

本发明的组合物，包括例如脂质体复合物，可以使用微流化器通过高压均化来制备。在优选的实施方式中，将组分以连续方式添加至微流化器储器并强制通过特别设计的空化或相互作用室，其中，高剪切应力和空化力形成高度分开的乳剂。通过多个循环，平均液滴或脂质体尺寸、分布和成分的组合产生期望的最终产品，例如优选的纳米颗粒。

可以以任何期望或合适的量或数量使用本发明的组合物的组分以制备期望的批次体积，例如，在已经将所有组分加工成微米级或纳米级乳剂之后的总批次体积或最终体积。

本发明的组合物还通过以下来制备：以有效获得均匀且透明的水性组合物同时避免不期望的反应或避免形成不溶性复合物的顺序溶解或分散组分。

本发明还考虑可以将本发明的组合物包装在容器中，以最小化、降低、防止或基本上消除暴露于光，从而降低或基本上消除组合物的组分的光氧化。

本发明还考虑本文所述的方法和工艺可以根据需要容易地按比例放大或缩小用于更小或更大的批次大小。

用于制备本发明的组合物的所有化学品都具有相当高的纯度并且可获得自生物化学品的众多商业供应商。优选地，这些是USP级或等效的。技术人员将理解，所采用的化学品任选地由展示出相同纯度和活性的大体上等效的化学品替代。

根据一种优选的代表性方法，如本文所述，可以安全且可靠地制备D2制剂。并且，在此实例中，D2制剂包括第一微量；第二微量；碱；L-胱氨酸；以及L-酪氨酸。

第一微量(即，本发明的优选的最终组合物的一种聚集组分)的样品制备

根据制备本发明的组合物的一个非限制性实例，第一步骤包括制备第一微量，本文也称为微量1溶液。在此实例中，称量多种组成的第一微量成分或化学品中的每一种，并每次将一种溶解在合适量的溶剂中，以形成微量1溶液。例如，每种组成的第一微量成分或化学品每次一种溶解在约十(10)至约三十五(35)mL的溶剂中。优选地溶剂是乙醇，并且更优选地溶剂是无水乙醇，尽管可以使用其他类似和合适的乙醇等效物。在此实例中，第一微量成分或化学品包括花生四烯酸、亚油酸、亚麻酸、肉豆蔻酸、油酸、棕榈酸钠、硬脂酸、胆固醇(非动物来源)、Tween 80(聚山梨酯80)(非动物来源)、DL-a-生育酚和维生素A醋酸酯(视黄醇)。已发现DL-a-生育酚和维生素A醋酸酯(视黄醇)有助于保护脂质体复合物的完整性。然后优选用去离子(DI)水使包括第一微量成分或化学品的微量1溶液达到最终体积，但在替代实施方式中，可使用蒸馏水或无菌水。可以使用任何合适的仪器，例如，用移液管来测量组成的化学品。所得微量1溶液可以在无菌条件下储存在任何合适的容器中，并优选储存在约负二十摄氏度(-20℃)至约负五摄氏度(-5℃)下。如本文进一步描述的，参考实施例1，这些方法可以用于安全且可靠地制备第一微量溶液。可以制备任何合适的批量，以及100升批量只是一个实例。

第二微量(即，本发明的优选的最终组合物的另一种聚集组分)的样品制备

继续上文描述的同一实例，并且根据优选的实施方式，在制备第一微量之后，下一步涉及制备第二微量，其中，第二微量成分包括D-生物素、L-半胱氨酸盐酸盐一水合物(非动物来源)、叶酸、还原型谷胱甘肽、核黄素、盐酸硫胺素和维生素B12。在此实例中，优选地在研钵和研杵中研磨第二微量的成分，直至其达到细小的均匀粉末。第二微量的一个实例在本文的实施例1中进一步详细地描述。可以制造任何合适的批量，例如1000L(升)批量的粉末。第二微量粉末可以在任何合适的容器中并在任何合适的温度下储存，但优选储存在约二摄氏度(2℃)至约八摄氏度(8℃)的温度下。

碱(即，本发明的优选的最终组合物的另一种聚集组分)的样品制备

继续上文描述的同一实例，并且根据优选的实施方式，并且在制备第二微量之后，下一步涉及制备碱，其中，碱成分包括L-精氨酸盐酸盐、L-天冬氨酸、腺苷、L-抗坏血酸、无水氯化钙、重酒石酸胆碱、右旋糖酐-40、甘氨酸、L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、无水D-葡萄糖、L-组氨酸盐酸盐一水合物、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸盐酸盐、无水硫酸镁、D-甘露糖、L-脯氨酸、L-苯丙氨酸、磷酸二氢钾、泊洛沙姆188/Pluronic F-68、磷酸二氢钠一水合物、葡萄糖酸钠、L-苏氨酸、L-色氨酸和L-缬氨酸，并且进一步其中最终组合物包括L-胱氨酸和L-酪氨酸。优选以粉末形式形成碱。此外，可以使用其他右旋糖酐作为如上文优选实施例方式中列出的优选右旋糖酐-40的替代物。

优选混合碱的成分(上文列出的)，并且优选地以约一(1)小时的短间隔碾磨碱的成分以防止粘在碾磨机上。然后优选使碾磨机在间隔之间静置约三十(30)分钟，以有助于避免工艺期间的过热。在此实例中，制备了500升(500L)的批量。碱的一个实例在实施例1中进一步详细描述。精确地并且根据与粉末介质生产相关的所有当前标准操作程序配制每批的碱。所有批也都经受严格的碾磨和工艺品质测试。还进行粒度测试。碱优选储存在约二摄氏度(2℃)至约八摄氏度(8℃)的温度下。

利用样品第一微量、第二微量和碱的本发明的优选的最终组合物的样品制备

在制备第一微量、第二微量和碱之后，并且继续此实例，使用如上文所述的成分，根据以下代表性程序制备本发明的最终组合物。组合以下组分以制备最终的“D2制剂”：

·第一微量

·第二微量

·碱

·氢氧化钠(NaOH)

·L-胱氨酸；以及

·L-酪氨酸。

在此非限制性实例中，制备100升(100L)批量并优选储存在约二摄氏度(2℃)至约八摄氏度(8℃)的温度下。可以使用任何合适的批量和储存温度。在制备最终“D2制剂”期间，优选进行以下步骤。将大约1至2克(1至2g)氢氧化钠溶解在约100mL水中。然后将L-胱氨酸和L-酪氨酸溶解在氢氧化钠溶液中。如果需要，可以添加更多氢氧化钠以溶解L-胱氨酸和L-酪氨酸。然后将氢氧化钠溶液[包含溶解在其中的L-胱氨酸和L-酪氨酸]添加至包含以下的大桶中：(i)第一微量、(ii)第二微量以及(iii)碱。第一微量、第二微量和碱的特定量的实例通过在实施例1中的说明提供。

在其他实施方式中，本发明还考虑到不含未定义蛋白或动物血清的许多可商购细胞或组织培养基产品也可用于制备组合物，前提是这样的培养基与本文本发明的组合物的特定要求相容。可商购的细胞或组织培养基产品的实例包括但不限于杜尔贝科氏改良伊格尔培养基(Dulbecco's Modified Eagle's medium)(DMEM)以及还有改良DMEM。

例如，并且仅出于说明目的，除了本文描述的基本细胞营养培养基之外，组合物优选具有以下特征和要素：能量底物，以补充细胞内ATP能量池(energy pool)，并在灌注和保存工艺期间提供有氧代谢；以及一种或多种抗氧化剂和/或黄嘌呤氧化酶抑制剂，以减轻由于氧自由基的存在和/或形成引起的再灌注损伤。

其他优选实施方式：在组合物中包括其他剂

在某些替代实施方式中，本发明的组合物进一步包括一种或多种安全且有效的治疗剂。可以包括任何合适类型的治疗剂，如保健专业人员认为必要或适当的。治疗剂的这样的实例包括但不限于一种或多种抗微生物剂，诸如抗生素、抗菌剂、特异性抗体和/或用于控制器官、组织、胚胎和/或细胞中的微生物污染的其他领域已知的剂。由Goodman&Gilman's,THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS,10th Edition,McGraw Hill引用了治疗剂的实例，以其全文通过援引并入本文。

在某些额外的替代实施方式中，本发明的组合物进一步包括以下中的一种或多种：抗凝剂、溶栓剂和抗血小板药剂(以防止在器官制备、储存、运输和移植期间凝血或纤维蛋白形成)，例如肝素和相关的糖胺聚糖；双香豆素(dicumarol)、苯丙香豆素(phenprocoumon)、醋硝香豆素、双香豆乙酸乙酯(ethyl biscoumacetate)、茚二酮(indandione)及其衍生物、阿司匹林和双嘧达莫等。

非甾体抗炎剂也可以任选地包括在某些替代实施方式中，例如，其中，据信，炎症过程是缩短旨在对于移植和/或研究和开发或其他分析(诸如病理检查)的运输的器官、组织、胚胎或细胞的有用储存寿命的病因。所有前述的剂由Goodman&Gilman's,Id.更详细地阐述，如通过援引并入本文。将所包括的这些剂或化合物的量描述为有效实现期望治疗结果的量。它会根据所选的组合物和技术人员的需要而稍微变化。举例来说，一种或多种任选的剂可以以范围是最终溶液的约0.01至约10％的量存在。

本发明的组合物的代表性优点

如本文描述，应当理解如本文描述的“本发明的组合物”旨在包括但不限于D2脂质体复合物。本发明的组合物具有许多显著且出乎意料的优点和非预期用途。下文描述了这些代表性优点和预期用途中的一些，但应当理解，这些被描述仅出于说明目的，并不以任何方式限制本发明的组合物的所有优点和预期用途。

不含或基本上不含所有人和非人动物蛋白

不同于通常包含一种或多种人和非人动物蛋白、生长因子和/或激素的常规组合物，本发明的组合物不含或基本上不含所有人和非人动物蛋白、生长因子和/或激素。这降低或优选地消除了关于由生长因子的存在引起的潜在肿瘤或癌症的担忧。与现有技术的常规组合物相比，因此本发明的组合物具有出乎意料且显著改进的安全性分布。

本发明的组合物不含或基本上不含任何病毒或其他病原体。因此，与现有技术的常规“血液代用品”、水合培养基和常规器官保存培养基相比，本发明的组合物具有显著改进的安全性分布并且安全得多。

器官、组织、胚胎和细胞的增强的生存力

根据本发明，已经发现本发明的新颖的组合物和制剂可以用作器官保存培养基来保存一个或多个器官，而不必利用低温条件来保存一个或多个器官。因此，本发明的新颖的组合物和制剂不降低活的或静态的生物材料，诸如举例来说器官、组织、胚胎、精子和细胞的代谢率，并且这出乎意料且显著地增强了这样的活的和静态的生物材料的生存力。

生物材料的增强的氧合

本发明的组合物还提供了活的生物材料诸如举例来说，器官、组织、胚胎、精子和细胞的增强的氧合，以及在储存和运输期间改进这样的生物材料的生存力和寿命。这降低或优选地消除了关于器官和组织坏死的担忧，并且还有助于降低或防止在储存期间胚胎、精子和细胞或器官组织的细胞凋亡(程序性细胞死亡)。

在给药动物后，还发现本发明的组合物提供了额外的出乎意料的益处，因为已经发现它们通过血脑屏障。

其他代表性的优点和益处

本发明的组合物还提供了额外的益处，因为组合物的某些组分还可以具有免疫增强、免疫刺激剂、抗氧化剂、抗炎、营养和/或其他益处。此外，如本文所述，组合物中还可以包括一种或多种其他治疗剂(例如但不限于一种或多种抗生素)。

早期测试数据表明，本发明的组合物具有广泛的令人惊讶且出乎意料的益处，并且它们具有非常高程度的安全性并且在增强活的生物材料诸如举例来说，器官、组织、胚胎、精子和细胞的生存力上是非常有效的。

早期测试数据示出，本发明的组合物当作为静脉内流体给药于狗或其他非人动物进行水合和补液时是安全且有效的，并且在已经完成适当的测试后假设同样将示出人也是安全且有效的。

本发明的组合物的品质控制

还考虑了本发明的组合物的品质控制研究，例如但不限于还可以进行“D2制剂”(对于品质控制研究的样品结果参见实施例1)。通过进行品质控制研究，可以评估组合物的数种标准，包括但不限于组合物的外观、无菌度、无菌过滤、pH、渗量、内毒素水平、支原体水平和到期时间(即保质期)。无菌过滤可以用任何合适尺寸的过滤器例如0.22微米的过滤器进行。

已经发现，可以将本发明的组合物配制成具有非常长的保质期或储存，例如但不限于最高达且至二十四(24)个月的储存并在无菌和温度和湿度控制的条件下，以满足所有监管规范和要求，例如用于商业目的。

这样的品质控制研究的代表性结果在实施例1中描述和示出。实施例1中示出的结果简单地仅出于说明目的，并不以任何方式限制本发明的范围。

还考虑了本发明的组合物可以被可靠且有效地配制、制备或制造以及包装和测试，以遵守任何监管要求和规范，包括但不限于FDA、GLP、GMP和ISO标准、规则、要求和规范。

本发明的最终组合物，例如“D2制剂”的pH优选保持在约7.1至约7.3的pH。还考虑了可存在本发明的最终组合物的pH的一些变化，并且这样的变化也在本发明的范围内。

此外，本发明的最终组合物例如“D2制剂”的渗量优选保持在约320mM/Kg至约430mM/Kg的范围内。还考虑了可存在本发明的最终组合物的渗量的一些变化，并且这样的变化也在本发明的范围内。

对于本发明的最终组合物例如第二微量制剂的无菌度的测量，可以测量有氧生长和厌氧生长两者。

本发明的组合物和制剂的应用和用途

对于本文描述的本发明的组合物和制剂的所有代表性应用和用途，应当理解通过用本发明的组合物和制剂灌注和/或接触而保存的器官和组织包括但不包括限于肾、肝、肺、心脏、心肺组合、胰腺、和消化道的其他器官、血管、内分泌器官或组织、皮肤、骨骼和不胜枚举的其他器官和组织。

对于本文描述的本发明的组合物和制剂的所有代表性应用和用途，还应当理解本发明的组合物和制剂可用于平民和军人两者，以及任何类型的非-人动物(包括任何类型的哺乳动物或非哺乳动物)。非人动物的代表性实例包括但不限于狗、猫、马、猪、羊、兔、小鼠、大鼠等。

此外，本发明考虑了本文描述的组合物和制剂可以经由任何合适的给药途径给药，包括但不限于静脉内递送或通过其他合适的灌注方式。例如，在动物研究(诸如但不限于犬的安全性研究)中，本文描述的组合物和制剂可以作为静脉内流体给药。

如本文所描述，用于器官保存和储存的常规路径(其中，术语“常规路径”旨在是指其他人的先前有缺陷的路径)通常利用低温条件来保存器官，并且他们的常规路径通常与降低器官温度(例如，略高于水的冰点)以降低器官组织的代谢率组合。然而，这些常规路径导致器官、组织、胚胎、精子和细胞的损害，以及器官、组织、胚胎、精子和细胞的生存力丧失。本发明的新颖的组合物和制剂克服了这些严重的缺陷和缺点，因为本发明的新颖的组合物和制剂可以用作器官保存培养基来保存一个或多个器官，而不必利用低温条件来保存一个或多个器官。因此，本发明的新颖的组合物和制剂不降低器官、组织、胚胎、精子和细胞的代谢率，并且这出乎意料且显著地增强了器官、组织、胚胎、精子和细胞的生存力。

此外，关于本发明的组合物和制剂，虽然本文已经描述了组成成分的某些特定量、浓度、剂量或用量，但应当理解这些仅是非限制性实例，并不以任何方式限制本发明的范围。本发明考虑可以使用任何合适量、浓度、剂量或用量的组成成分。

还应当理解，对于本文描述的所有方法，包括本发明的新颖的组合物和制剂以安全且有效方式的应用和用途，本发明考虑这样的应用和用途始终由具有所需专业培训的一名或多名合适且批准的专业人员密切监督、监管和监控。例如，本发明的新颖的组合物和制剂在人中的应用和用途将始终需要由适当的保健专业人员的密切监督和监控。

作为血液代用品的应用和用途，例如，对急性缺乏正常血液循环的器官或组织的 灌注支持

本发明还包括用于治疗需要这样的支持性治疗的活动物或人的方法，包括本发明的新颖的组合物和制剂以安全且有效方式的应用和用途。因此，简单举例来说，本发明的组合物用于为由创伤引起的急性缺乏正常血液循环的器官或组织提供局部或全身循环或灌注支持，例如通过本发明的组合物的灌注或临时循环以支持部分切断的肢体或类似病症或其他创伤情况，直到实现受损害脉管系统的手术修复。因此，例如，本发明的新颖的组合物和制剂可以以安全且有效方式用作血液代用品。

还考虑在修复因疾病或事故而受损害的解剖区域期间或之前采用的本发明的组合物，例如，在恢复循环完整性之前帮助保存完全或部分切断的手指或肢体。这样的用途和方法还包括本发明的新颖的组合物和制剂以安全且有效方式的应用和用途。

补液的应用和用途

本发明的组合物可以用作补液，以及用于动物器官、组织、胚胎、精子和细胞的保存、储存和运输。

因此，本发明还包括用于治疗需要补液的活动物或人的方法，包括本发明的新颖的组合物和制剂以安全且有效方式的应用和用途。治疗需要补液的人或非人动物的实例包括但不限于治疗人或非人动物脱水。

保存和保护旨在用于器官移植的完整组织和/或器官

本发明进一步考虑用于保存和保护旨在用于器官移植的完整组织和/或器官的方法，包括本发明的新颖的组合物和制剂以安全且有效方式的应用和用途。本发明的新颖的组合物和制剂作为器官保存培养基的这样的用途包括，例如，当人/供体已将用于移植的一个或多个器官捐赠给需要该一个或多个器官的受体或患者时保存一个或多个器官。

当提及移植，例如器官移植到供体时，应当理解这包含从人器官供体移植的器官，然而也旨在包含异种移植。通过使用本发明的组合物，例如通过灌注在移植前储存的器官，器官可以保存持续的时间段。例如，仅出于说明，器官在合适且适当的储存温度(例如，约2℃至约8℃)下储存约48小时至约72小时。

本发明还包括以下方法：在临床死亡发生后，但在已经取出感兴趣的器官或组织用于捐赠之前，治疗或支持动物或人中的组织或器官，该方法包括本发明的新颖的组合物和制剂以安全且有效方式的应用和用途。需要渗透和营养支持用于最佳储存和运输的任何器官在体内和体外两者均受益于本发明的组合物。

通过用本发明的组合物和制剂灌注和/或接触而保存的器官和组织包括但不包括限于肾、肝、肺、心脏、心肺组合、胰腺、和消化道的其他器官、血管、内分泌器官或组织、皮肤、骨骼和不胜枚举的其他器官和组织。

在手术程序期间保存和保护组织和/或器官

本发明进一步考虑用于在手术程序，例如在局部血液循环中断或受损的情况下期间保存和保护组织和/或器官的方法，包括本发明的新颖的组合物和制剂以安全且有效方式的应用和用途。这样的情况包括，例如，作为需要局部或全身循环中断的手术程序的部分的组织或者一个或多个器官的灌注。

为研究和/或诊断目的保存和保护组织和/或器官

进一步考虑本发明的组合物用于在研究环境中为人和动物两者保存活的和静态的生物，在研究环境中，需要存活的细胞、器官和其他培养技术用于需要保存体外的组织生存力的基础和应用生物医学研究和/或诊断程序。用于保存此生物材料的这样的方法包括本发明的新颖的组合物和制剂以安全且有效方式的应用和用途。在研究环境中用途的一个实例是在室温下保存用D2制剂在低流量下灌注的豚鼠离体心脏。这些组合物还可用于保存其他器官，诸如例如肾。

本发明的组合物还可以用于以安全且有效方式灌注生物材料(并且其保持器官、组织、胚胎、精子或细胞的生存力，作为实例)，使得可以进行诊断程序和测试，例如用于检测和筛选所述生物材料的任何病原体。

进一步考虑本发明的组合物可以用于活的和静态的生物材料储存和保存以用于研究目的的运送。

本发明的组合物可以用于兽医应用和人应用两者，并且可以制备组合物以满足用于人的所有FDA监管要求。本发明的组合物也可以被制备成溶液或任何其他合适的形式。

本发明的组合物的其他应用的实例

在另一个实例中，本发明的组合物可以用于供体肝或其他供体器官的氧合机器灌注。这些组合物还可以用于在室温下肾脏同种移植物的脉动灌注。

这些组合物还可以用于安全、有效且可靠地保持来自冷冻保存的细胞和组织，例如，在研究环境中，使得细胞和组织具有显著增强的细胞和组织生存力。常规或传统路径通常利用非常高百分比的二甲基亚砜(DMSO)，例如约5％至约10％之间的DMSO，这可对细胞和组织是非常有损害的，并具有不良后果。相比之下，根据本发明，令人惊讶地发现，当利用方法安全、有效且可靠地保持来自冷冻保存的细胞和组织时，需要显著更低的DMSO(例如，仅需要约2％DMSO至约5％DMSO)。

又另一个实例是这些组合物作为离体肺灌注和移植的器官保存溶液，以及保护肺的微脉管系统的用途。又另一个非限制性实例是这些组合物为小鼠附睾精子提供运输系统的用途。

又另一个非限制性实例是这些组合物用于保存解冻冷冻保存的小鼠精子的活力和受精潜能的用途。

本发明还提供了这些组合物在富氧培养基中用于肿瘤组织运输的用途。

本发明还提供了这些组合物用于保持用于人胚胎干细胞培养的无异源物的人饲养细胞的用途。

还令人惊讶地发现，本发明的组合物除了作为器官保存溶液之外，还在离体肺灌注和移植期间保护肺的微脉管系统。

实施例

以下描述和呈现多个实施例以说明本发明，但不以任何方式限制本发明的范围。

实施例1：“LQL09 WI REV00”“D2制剂”的制备

在此代表性实施例中，使用以下描述的成分或组成化学品，制备本发明的优选组合物(以下称为“D2制剂”)。D2制剂包括以下组分：

·第一微量

·第二微量

·碱

·氢氧化钠(NaOH)

·L-胱氨酸；以及

·L-酪氨酸。

制备D2制剂的成分/组分的总结：

(i)：第一微量溶液的制备：将以下化学品每次一种溶解在10-35mL的无水乙醇中。然后用去离子(DI)水使溶液达到最终体积。*化学品以μL计测量(用移液管)。**以mL计测量(用移液器)。此第一微量溶液优选地储存在-20至-5℃下。

(ii)第二微量化学品的制备：在研钵和研杵中研磨第二微量化学品的成分，直至其为细小的均匀粉末。(CN-C051可以用CN-C010替代，只要该批已经从非动物来源验证)。制造1000L(升)的批量。第二微量粉末优选储存在约2℃至约8℃的温度下。

(iii)碱粉末的制备：混合以下化学品。优选以约1小时的短间隔碾磨化学品以防止粘在碾磨机上。然后使碾磨机在间隔之间静置约30分钟。在此实例中，制备了500升(500L)的批量。

在此实施例中，精确地并且根据与粉末介质生产相关的所有当前标准操作程序配制该批的碱。所有批还都经受严格的碾磨和工艺品质测试。还进行粒度测试。碱优选储存在约2℃至约8℃的温度下。

碱的样品测试结果：

<u>测试</u>	<u>规范</u>
		粒度	90％(通过100目)
到期时间	48个月

(iv)最终“D2制剂”的制备：使用如上文描述的成分，根据以下代表性程序制备最终“D2制剂”。因此，组合了以下组分：

·第一微量溶液

·第二微量化学品

·碱粉末

·氢氧化钠(NaOH)

·L-胱氨酸；以及

·L-酪氨酸。

在此非限制性实施例中，制备100升(100L)批量，并且优选储存在约2℃至约8℃的温度下。此外，在此非限制性实施例中，在制备期间，进行以下步骤：*大约1至2g的*CN-S004(氢氧化钠)溶解在约100mL水中。然后将*CN-C018(L-胱氨酸)和*CN-T004(L-酪氨酸)溶解在*CN-S004溶液中。(如果需要增溶，添加更多*CN-S004。)然后将*CN-S004溶液[包含*CN-C018(L-胱氨酸)和*CN-T004(L-酪氨酸)溶解在*CN-S004溶液中]添加至包括第一微量溶液、第二微量化学品和碱粉末的大桶中。

“D2制剂”的pH优选保持在约7.1至约7.3的pH。

“D2制剂”的渗量优选保持在约320mM/Kg至约430mM/Kg的范围内。

在此实施例中，“D2制剂”的品质控制研究得出以下结果：

对于“D2制剂”的无菌度测量，可以测量有氧生长和厌氧生长两者。

初步心脏移植结果(颈模型)

表1

表2

表3

初步心脏移植结果(腹部模型)

表4

上文来自在约翰斯·霍普金斯大学(John’s Hopkins University)完成的颈模型心脏移植研究(同种移植术研究)的图1描绘了小鼠心脏移植物重新移植后的重新搏动时间，以秒(s)计。在室温下进行的第一研究中，从小鼠(n＝2)分离心脏并在室温(37℃)下将心脏储存在D2溶液(本发明)中6小时(t＝6h)。移植后，心脏在100秒(1分40秒)内起始其搏动。尽管心脏移植证明不成功，但重新搏动时间延长超过600秒(10min)。

此后，将D2溶液与HTK(组氨酸-色氨酸-小鼠(n＝6))比较，并在4℃下储存12小时。当重新移植起始时，在小于10秒内开始搏动，而从3只小鼠(n＝3)分离的心脏在4℃下在与第一试验类似的条件下储存24小时。当重新移植时，心脏起始在小于30秒内搏动。在类似的低温条件下，从2只小鼠(n＝2)中取出心脏并在4℃在HTK中保存24小时，并重新移植。与用D2溶液处理移植物相比，使用HTK的24小时低温保存延长了移植后心脏重新搏动所需的时间，这是HTK不期望的结果。而用D2溶液处理的保存24小时的心脏当再移植时在小于50秒的跨度内起始双循环，以及在HTK中保存的持续相同时间段的心脏当再移植时则花费超过300-600秒(6-10min)以起始心脏充盈并为循环补充血液，从而证明本发明的D2是超过HTK的巨大改进。与HTK相比，使用D2处理的移植物对小鼠心脏的低温保存将重新搏动时间降低60分之一。

图2建立了12h和24h低温保存之间的循环关系。当统计学上比较移植后重新搏动和移植物搏动所需时间之间的关系时，在保存时间12和24小时确定了统计学上的显著差异(p<0.0001)。这详尽阐述了保存时间对同种移植术后的心脏搏动的起始有影响。

图3是心脏功能的评估，其中，进行其功能得分以确定移植后的心脏功能。在室温下用D2保存12小时的研究没有提供功能得分，因为即使在10分钟后也没有建立重新搏动。因此没有进行评估。进行了用D2用于室温保存的研究，但在此阶段未评估心脏功能得分，尽管100秒后注意到心脏搏动(参见图1)。然而，当相对于HTK，使用D2研究低温保存时，与用HTK的24小时保存相比，使用D2在12和24小时的低温保存期间的心脏功能得分具有高得多的得分。用D2在12小时和24小时保存之间的比较已经示出，12小时保存具有比24小时显著更高的得分。将它与HTK在保存24小时下相比，使用D2在24小时的心脏功能的功能得分是HTK的3倍，以及在12小时的D2是HTK的4倍。总之，在低温条件下用D2处理的心脏在12小时和24小时的心脏功能是同样正常的，而使用HTK的低温保存显著降低了移植的心脏的心脏功能。因此，本发明的D2能够在室温和低温温度两者下以比目前最常用的且最先进的哺乳动物心脏保存溶液之一的HTK更好的状态保存心脏。

Claims (22)

1.一种组合物，所述组合物包括第一微量、第二微量和碱，

其中所述第一微量包括花生四烯酸、亚油酸、亚麻酸、肉豆蔻酸、油酸、棕榈酸钠、硬脂酸、胆固醇、Tween80(聚山梨酯80)、DL-a-生育酚和维生素A醋酸酯(视黄醇)，

其中所述第二微量包括D-生物素、L-半胱氨酸盐酸盐一水合物、叶酸、还原型谷胱甘肽、核黄素、盐酸硫胺素和维生素B12，

其中所述碱包括L-精氨酸盐酸盐、L-天冬氨酸、腺苷、L-抗坏血酸、无水氯化钙、重酒石酸胆碱、右旋糖酐-40、甘氨酸、L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、无水D-葡萄糖、L-组氨酸盐酸盐、一水合物、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸盐酸盐、无水硫酸镁、D-甘露糖、L-脯氨酸、L-苯丙氨酸、磷酸二氢钾、泊洛沙姆188/Pluronic F-68、磷酸二氢钠一水合物、葡萄糖酸钠、L-苏氨酸、L-色氨酸和L-缬氨酸，并且进一步其中所述组合物包括L-胱氨酸和L-酪氨酸。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物是溶液。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物基本上不含所有人和非人动物蛋白。

4.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物包括至少一种纳米颗粒或脂质体组分。

5.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物基本上不含任何病毒或其他病原体。

6.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物的pH为约7.1至约7.3。

7.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物的渗量在约320mM/Kg至约430mM/Kg的范围内。

8.一种制备根据权利要求1所述的组合物的方法，所述方法包括将所述第一微量、所述第二微量和所述碱组合。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述组合物的pH为约7.1至约7.3。

10.根据权利要求8所述的方法，其中，所述组合物基本上不含所有人和非人动物蛋白。

11.一种保存离体哺乳动物器官的方法，所述方法包括用有效量的根据权利要求1所述的组合物接触或灌注所述哺乳动物器官。

12.一种为急性缺乏正常血液循环的器官或组织提供灌注支持的方法，所述方法包括给药根据权利要求1所述的组合物。

13.一种治疗需要补液的人或非人动物的方法，所述方法包括给药根据权利要求1所述的组合物。

14.一种保护器官、组织或细胞的方法，所述方法包括给药根据权利要求1所述的组合物。

15.一种修复因疾病或事故而受损害的解剖区域的方法，所述方法包括给药根据权利要求1所述的组合物。

16.一种组合物，所述组合物包括花生四烯酸、亚油酸、亚麻酸、肉豆蔻酸、油酸、棕榈酸钠、硬脂酸、胆固醇、Tween80(聚山梨酯80)、DL-a-生育酚、维生素A醋酸酯(视黄醇)、D-生物素、L-半胱氨酸盐酸盐一水合物、叶酸、还原型谷胱甘肽、核黄素、盐酸硫胺素和维生素B12、L-精氨酸盐酸盐、L-天冬氨酸、腺苷、L-抗坏血酸、无水氯化钙、重酒石酸胆碱、右旋糖酐-40、甘氨酸、L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、无水D-葡萄糖、L-组氨酸盐酸盐一水合物、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸盐酸盐、硫酸镁(无水)、D-甘露糖、L-脯氨酸、L-苯丙氨酸、磷酸二氢钾、泊洛沙姆188/Pluronic F-68、磷酸二氢钠一水合物、葡萄糖酸钠、L-苏氨酸、L-色氨酸和L-缬氨酸、L-胱氨酸和L-酪氨酸。

17.一种用于保持活的和静态的生物材料的生存力的系统，其中，所述系统包括根据权利要求17所述的组合物，进一步其中，所述系统保护、保持和增强所述活的和静态的生物材料的生存力。

18.根据权利要求17所述的系统，其中，所述活的和静态的生物材料选自由以下组成的组：器官、组织、胚胎、精子和细胞。

19.根据权利要求18所述的系统，其中，所述生物材料选自人和非人哺乳动物的组。

20.根据权利要求17所述的系统，其中，所述组合物基本上不含所有人和非人动物蛋白。

21.根据权利要求17所述的系统，其中，所述组合物包括至少一种纳米颗粒或脂质体组分。

22.根据权利要求17所述的系统，其中，所述组合物基本上不含任何病毒或其他病原体。