CN113440435A - 一种皮肤抗衰老组合物的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种皮肤抗衰老组合物的制备方法，采用以下步骤：A、按质量比称取1.0~10.0%半胱氨酸衍生物、0.1~2.0%核糖、0.1~2.0%维生素E、0.1~1.0%肌肽、5.0~25.0%磷脂酰甘油、1.0~5.0%泊洛沙姆407、10.0~35.0%多元醇、余量为去离子水；B、将磷脂酰甘油、维生素E、泊洛沙姆407、多元醇混合后加热至50℃，搅拌至完全溶解，作为A相；将半胱氨酸衍生物、核糖、肌肽、去离子水搅拌均匀，作为B相；C、将A相以不超过10mL/min的速度抽入到B相，真空脱泡，静置48h，得透明的立方液晶凝胶；D、将立方液晶凝胶在冰浴下超声破碎，得立方液晶粗分散体；E、将立方液晶粗分散体高压均质5~10次，得抗衰老组合物。本发明所得抗衰老组合物具有活性物包封率高、透皮吸收率高、稳定性好、使用便捷、抗衰老效果好的优点。

Description

一种皮肤抗衰老组合物的制备方法

技术领域

本发明涉及化妆品制备技术领域，特别涉及一种皮肤抗衰老组合物的制备方法。

背景技术

影响皮肤衰老的因素很多，主要包括光老化、自由基氧化、胶原蛋白降解等，另外在有炎症产生的情况下，细胞的免疫能力下降，也会加速皮肤的衰老，所以皮肤抗衰老的解决方案需要从抗光老化、抗自由基、抑制胶原蛋白降解及抗炎等四个方面共同入手。

半胱氨酸衍生物，不仅可以通过减少UVA诱导的MMP-1的产生，降低紫外线伤害，对光老化具有至关重要的作用，还可以通过抑制GPCR和TLR信号传导来减少促炎性细胞因子的释放，从而减少肌肤炎症的产生，提高皮肤细胞免疫能力，减缓皮肤快速衰老。但半胱氨酸衍生物的分子量大，存在皮肤难以透皮吸收的问题。

核糖是RNA的组成物之一，能够促进ATP的合成，为细胞注入能量，延缓皮肤衰老，但核糖稳定性较差，长时间放置易变质变味。

维生素E作为一种强抗氧化剂，不仅能保持皮下脂肪和弹性纤维以及联结胶原组织之间的联系，抑制脂质过氧化，还可以抑制蛋白激酶 C 的活性，减少胶原酶的表达，抑制胶原降解，保持皮肤弹性，从而达到抗衰老的作用，但维生素E难溶于水，且日常储存极易发生氧化而失活，使用具有局限性。

肌肽可以帮助表皮与真皮细胞抵抗自由基伤害，延长细胞生命周期，不会因为受损而复制出残缺老化的细胞，使肌肤能够顺利修复，再生健康光泽，与维生素E搭配，具有协同抗氧化效果。

本发明将半胱氨酸衍生物、核糖、维生素E和肌肽包裹在特定的立方液晶内，并进行纳米化，制备成皮肤抗衰老组合物。立方液晶具有与活性细胞细胞膜相似的结构和化学特性，能帮助活性成分穿透皮肤角质层，进一步进行纳米化后，可提高透皮吸收率。本发明的皮肤抗衰老组合物还可直接添加到化妆品配方中，能够最大程度保留抗衰活性物的活性，包封率高、稳定性好、使用方便。

发明内容

本发明要解决的技术问题是，利用立方液晶和纳米化技术同时负载半胱氨酸衍生物、核糖、维生素E和肌肽，制备出一种皮肤抗衰老组合物，该方法制备出的皮肤抗衰老组合物包封率高，透皮吸收率高，稳定性佳，使用便捷，抗衰老效果优异。

一种皮肤抗衰老组合物的制备方法，其特征在于采用以下步骤：

A、按质量比称取1.0~10.0%半胱氨酸衍生物、0.1~2.0%核糖、0.1~2.0%维生素E、0.1~1.0%肌肽、5.0~25.0%磷脂酰甘油、1.0~5.0%泊洛沙姆407、10.0~35.0%多元醇、余量为去离子水；所述半胱氨酸衍生物由N-乙酰基-S-法呢基-L-半胱氨酸、乙酰谷氨酰胺基法呢基半胱氨酸钠、异戊烯半胱氨酸、四甲基-十六烯基-半胱氨酸-甲酰基脯氨酸按质量比1.0~2.0: 1.0~2.0:1.0~3.0:2.0~3.0组成；所述多元醇为甘油、丁二醇、丙二醇中的任意一种；

B、将步骤A称取的磷脂酰甘油、维生素E、泊洛沙姆407、多元醇混合后加热至50℃，搅拌至完全溶解，作为A相；将步骤A称取的半胱氨酸衍生物、核糖、肌肽、去离子水投料至反应釜中混合后，搅拌均匀，作为B相；

C、将B相所在反应釜的搅拌速度调整至300-600r/min，将A相以不超过 10mL/min的速度缓慢抽入到B相所在反应釜中，抽料完成后继续搅拌20min，真空脱泡，然后放于室温黑暗处静置48h，得透明的立方液晶凝胶；

D、将步骤C所得立方液晶凝胶在冰浴条件下投入超声波破碎仪，设置超声功率为200W，超声工作时间为5 s，间断时间为10s，超声分散 10 min，得立方液晶粗分散体；

E、将步骤D所得的立方液晶粗分散体投入高压均质机，在4-10℃，压力15000psi条件下高压均质5~10次，得抗衰老组合物。

本发明制备的抗衰老组合物为立方液晶纳米粒，经偏光显微镜观察呈现暗视野，与立方液晶分子排列为各向同性这一特性相符。通过小角X射线散射仪(SAXS)表征可得该样品有4个散射峰，散射峰所对应的散射因子( q)从左到右依次为1.45，1.82，2.10，2.51，根据Bragg公式S=q/2π(S为散射矢量，q为散射因子)计算可得S₁:S₂:S₃:S₄=q₁∶q₂∶q₃∶q₄ =√2∶√3∶√4∶√6，可知其为典型的双菱形晶格立方晶(Pn3m)结构。经马尔文纳米粒径测定仪测定纳米化后的立方液晶平均粒径为185.9±5.6nm，经计算，立方液晶纳米粒的包封率达到84.6 ±1.5%。本发明制备的抗衰老组合物，25℃、 50℃环境下的样品保存三个月未变色、未变味，光照环境下保存三个月，未发生变色现象，保存至第三个月味道仅轻微改变，表明样品稳定性良好。

本发明所述N-乙酰基-S-法呢基-L-半胱氨酸（CAS：135304-07-3），购于SignumBiosciences，商品名ARAZINE；本发明所述乙酰谷氨酰胺基法呢基半胱氨酸钠，购于SignumBiosciences，商品名SIG-1191；本发明所述异戊烯半胱氨酸购于Signum Biosciences，商品名为SIG-990；本发明所述四甲基-十六烯基-半胱氨酸-甲酰基脯氨酸购于SignumBiosciences，商品名为SIG-1459。

本发明所述核糖（CAS：50-69-1），中文INCI名为核糖，能够促进ATP的合成，为细胞注入能量，有效减少皱纹，延缓皮肤衰老。

本发明所述维生素E（CAS：10191-41-0），中文INCI名为生育酚（维生素E），瑞士帝斯曼公司生产，是一种强抗氧化剂，抑制脂质过氧化，还可以抑制蛋白激酶 C 的活性，减少胶原酶的表达，抑制胶原降解，保持皮肤弹性。

本发明所述肌肽（CAS：305-84-0），中文INCI名为肌肽，分析纯，可以帮助表皮与真皮细胞抵抗自由基伤害，延长细胞生命周期。

本发明所述磷脂酰甘油（CAS：322647-44-9），是一种两亲性化合物，分析纯，可做表面活性剂，制备出特殊形态的载体，使包裹物更加稳定，同时做出的载体具有生物膜的特性，更加亲肤、安全。

本发明所述泊洛沙姆407（CAS：9003-11-6），中文INCI名为泊洛沙姆407，德国巴斯夫公司生产，是非离子型表面活性剂，在制备过程中作为稳定剂以防止纳米粒的聚集。

本发明所采用高压均质机为上海鲤跃精密机械贸易有限公司的M-110EH高压均质机；所采用冷冻干燥装置为美国LABCONCO公司的FreeZone真空冷冻干燥机；所采用超声波破碎仪为上海三信仪器有限公司的JYD-650智能型超声波细胞破碎仪；所采用偏光显微镜为上海光学仪器六厂的SM-59XC偏光显微镜；所采用小角X射线散射(SAXS)仪为德国布鲁克公司的NANOSTAR小角X射线散射仪；所采用马尔文纳米粒径测定仪为马尔文帕纳科公司的Zetasizer Nano ZS90纳米粒径测定仪。

本发明将半胱氨酸衍生物、核糖、维生素E和肌肽这四类原料进行组合，可从多维度来对抗肌肤衰老。半胱氨酸衍生物可以防止紫外线对细胞的伤害，减少光老化因素带来的衰老；还可抑制多种炎症因子的表达，提高皮肤免疫力，减少炎症对皮肤的损伤。核糖促进ATP的合成，为细胞注入能量，延缓细胞层面造成的衰老。维生素E和肌肽协同作用可避免产生过量自由基，清除体内产生的过氧化脂质，减缓细胞氧化速度，减慢自由基因素造成的衰老。同时该抗衰老组合物具有补水保湿的能力，可使肌肤呈现一个健康饱满的状态，避免皮肤宏观出现衰老的症状。

本发明利用两亲性脂质材料磷脂酰甘油与稳定剂泊洛沙姆407水合制成抗衰老组合物，该组合物具有立方液晶结构，是含双连续水区和脂质区的闭合脂质双层“蜂窝状”结构，能够同时包封水溶性、脂溶性及两亲性分子。立方液晶具有同活性细胞细胞膜相似的结构和化学特性，能帮助抗衰老组合物穿透角质层，然后再利用高压均质技术将立方液晶纳米化，使其颗粒更小，提高组合物的透皮吸收率。

本发明将半胱氨酸衍生物、核糖、维生素E和肌肽包裹在特定的立方液晶内，可直接添加到化妆品配方中，能够最大程度保留抗衰活性物的活性，包封率高、稳定性好、透皮吸收性好、使用方便。

为验证实施例1所得抗衰老组合物的抗衰老功效及透皮吸收率，本发明进行了以下对比测试。

1、实施例1制备样品的功效性实验

表1精华液配方

测试方案：实施例1制备得到的抗衰老组合物立方液晶纳米粒为样品1；样品2为实施例1的各组分同比例直接混合而成。

选取年龄在30-50岁之间的150名志愿者，平均分成A组，B组，C组3组。要求A组志愿者每天早晚在脸上使用加入样品1的精华液（配方见表1）两次，B组志愿者每天早晚在脸上使用加入样品2的精华液（配方见表1）两次，C组志愿者每天早晚在脸上使用未加入抗衰活性物的精华液（配方与见表1，未加入样品1和样品2）两次做空白对照组。使用前和使用1周、2周、4周时随访，随访时间为日间的同一时间，测试前受试者需在恒温恒湿（室温22±2℃、相对湿度45±5%）环境下静坐20min，然后MPA580皮肤弹性测试仪和PROMOS PICO皮肤皱纹检测仪对受试者面部进行检测和分析。表2为A、B、C组志愿者在不同时间节点，肌肤弹性测试结果平均值。

表2 肌肤弹性测试结果

使用前、使用1周、2周、4周后的MPA580皮肤弹性测试仪测试的R2和R5 统计数据如表2所示。分析可知，A组、B组的R2、R5值在逐渐升高，C组的R2、R5值基本无变化，且A组的R2、R5值的升高速度明显高于B组，说明抗衰老活性物可有效提升皮肤弹性，且通过立方液晶纳米粒处理过的抗衰老组合物效果明显优于未处理过的组合物。

表3 肌肤皱纹测试结果

使用前、使用1周、2周、4周后PROMOS PICO皮肤皱纹检测仪测试的统计数据（A、B、C组50人的平均值）如表3所示，其中Sa、Sq、Sk、Sv、Wd为皱纹深度因子，用于表征皱纹深浅，Sa、 Sq、Sk、Wd与皱纹深度正相关，Sv与皱纹深度负相关；aWa、pWa为皱纹面积因子，与皱纹面积正相关；Wv为皱纹严重程度综合因子，与皱纹严重程度正相关。由表3中数据分析，A、B组的各皱纹正相关因子随使用时间有明显下降，皱纹负相关因子则随使用时间有明显上升，但是A组的下降活上升的幅度明显优于B组，而C组（空白对照组）各数据仅有微小变化。可见，添加了抗衰活性物的A、B组精华液可有效减少肌肤皱纹，添加了样品1的精华液减少皱纹的效果明显优于添加样品2的精华液。

2、本发明所制备的抗衰老组合物立方液晶纳米粒的透皮吸收验证

测试方案： 实验采用垂直型的Franz扩散池法，选用巴马香猪皮作为离体透皮实验皮肤，选用去离子水作为接收液，磁力搅拌速度为200rpm，实验室恒温37±0.5℃。以实施例1所制备的10g样品1为实验组A，10g 样品2（样品2为实施例1中抗衰老组合物的比例直接混合而成）为实验组B，本实验提及的百分比均为质量比。以每隔10min通过高效液相色谱分析仪的接收液中N-乙酰基-S-法呢基-L-半胱氨酸的含量来计算透皮吸收率。每组实验进行三次， 取平均值，实验结果如表4。

表4 透皮吸收测试结果

表4中数据表明，实验组A的透皮吸收速度一直保持着较快的增长，而实验组B的透皮吸收明显慢于实验组A，说明本发明所制备的抗衰老组合物立方液晶纳米粒相比起未加立方液晶纳米粒处理的抗衰老组合物，更有利于功效性成分的渗透。

综上所述，本发明所得抗衰老组合物具有活性物包封率高、透皮吸收率高、稳定性好、使用便捷、抗衰老效果好的优点。

具体实施方式

实施例1：一种皮肤抗衰老组合物的制备方法，其特征在于采用以下步骤：

A、按质量比称取5.0%半胱氨酸衍生物、1%核糖、2%维生素E、0.5%肌肽、15%磷脂酰甘油、3.0%泊洛沙姆407、10.0%甘油、余量为去离子水。所述半胱氨酸衍生物由N-乙酰基-S-法呢基-L-半胱氨酸、乙酰谷氨酰胺基法呢基半胱氨酸钠、异戊烯半胱氨酸、四甲基-十六烯基-半胱氨酸-甲酰基脯氨酸按质量比1.0: 1.0:1.0:2.0组成；

B、将步骤A称取的磷脂酰甘油、维生素E、泊洛沙姆407、甘油混合后加热至50℃，搅拌至完全溶解，作为A相；将步骤A称取的半胱氨酸衍生物、核糖、肌肽、去离子水投入到反应釜中混合后搅拌均匀，作为B相；

C、将B相所在反应釜的搅拌速度调整至300r/min，将A相以不超过 10mL/min的速度缓慢抽入到B相所在反应釜中，抽料完成后继续搅拌20min，真空脱泡，然后放于室温黑暗处静置48h，得透明的立方液晶凝胶；

D、将步骤C所得立方液晶凝胶在冰浴条件下投入超声波破碎仪，设置超声功率为200W，超声工作时间为5 s，间断时间为10s，超声分散 10 min，得立方液晶粗分散体；

E、将步骤D所得的立方液晶粗分散体投入高压均质机，在4℃，压力15000psi条件下高压均质5~10次，得抗衰老组合物。

实施例2：一种皮肤抗衰老组合物的制备方法，其特征在于采用以下步骤：

A、按质量比称取10.0%半胱氨酸衍生物、0.1%核糖、1%维生素E、1%肌肽、25.0%磷脂酰甘油、5.0%泊洛沙姆407、35.0%丁二醇、余量为去离子水；所述半胱氨酸衍生物由N-乙酰基-S-法呢基-L-半胱氨酸、乙酰谷氨酰胺基法呢基半胱氨酸钠、异戊烯半胱氨酸、四甲基-十六烯基-半胱氨酸-甲酰基脯氨酸按质量比2.0: 2.0: 3.0: 3.0组成；

B、将步骤A称取的磷脂酰甘油、维生素E、泊洛沙姆407、丁二醇混合后加热至50℃，搅拌至完全溶解，作为A相；将步骤A称取的半胱氨酸衍生物、核糖、肌肽、去离子水投入到反应釜中混合后搅拌均匀，作为B相；

C、将B相所在反应釜的搅拌速度调整至600r/min，将A相以不超过 10mL/min的速度缓慢抽入到B相所在反应釜中，抽料完成后继续搅拌20min，真空脱泡，然后放于室温黑暗处静置48h，得透明的立方液晶凝胶；

D、将步骤C所得立方液晶凝胶在冰浴条件下投入超声波破碎仪，设置超声功率为200W，超声工作时间为5 s，间断时间为10s，超声分散 10 min，得立方液晶粗分散体；

E、将步骤D所得的立方液晶粗分散体投入高压均质机，在10℃，压力15000psi条件下高压均质5~10次，得抗衰老组合物。

实施例3：一种皮肤抗衰老组合物的制备方法，其特征在于采用以下步骤：

A、按质量比称取1.0%半胱氨酸衍生物、2%核糖、0.1%维生素E、0.1%肌肽、5.0%磷脂酰甘油、1.0%泊洛沙姆407、20.0%丙二醇、余量为去离子水；所述半胱氨酸衍生物由N-乙酰基-S-法呢基-L-半胱氨酸、乙酰谷氨酰胺基法呢基半胱氨酸钠、异戊烯半胱氨酸、四甲基-十六烯基-半胱氨酸-甲酰基脯氨酸按质量比1.0: 1.0: 2.0: 2.0组成；

B、将步骤A称取的磷脂酰甘油、维生素E、泊洛沙姆407、丁二醇混合后加热至50℃，搅拌至完全溶解，作为A相；将步骤A称取的半胱氨酸衍生物、核糖、肌肽、去离子水投入到反应釜中混合后搅拌均匀，作为B相；

C、将B相所在反应釜的搅拌速度调整至450r/min，将A相以不超过 10mL/min的速度缓慢抽入到B相所在反应釜中，抽料完成后继续搅拌20min，真空脱泡，然后放于室温黑暗处静置48h，得透明的立方液晶凝胶；

D、将步骤C所得立方液晶凝胶在冰浴条件下投入超声波破碎仪，设置超声功率为200W，超声工作时间为5 s，间断时间为10s，超声分散 10 min，得立方液晶粗分散体；

E、将步骤D所得的立方液晶粗分散体投入高压均质机，在8℃，压力15000psi条件下高压均质5~10次，得抗衰老组合物。

Claims (1)

1.一种皮肤抗衰老组合物的制备方法，其特征在于采用以下步骤：

A、按质量比称取1.0~10.0%半胱氨酸衍生物、0.1~2.0%核糖、0.1~2.0%维生素E、0.1~1.0%肌肽、5.0~25.0%磷脂酰甘油、1.0~5.0%泊洛沙姆407、10.0~35.0%多元醇、余量为去离子水；所述半胱氨酸衍生物由N-乙酰基-S-法呢基-L-半胱氨酸、乙酰谷氨酰胺基法呢基半胱氨酸钠、异戊烯半胱氨酸、四甲基-十六烯基-半胱氨酸-甲酰基脯氨酸按质量比1.0~2.0:1.0~2.0:1.0~3.0:2.0~3.0组成；所述多元醇为甘油、丁二醇、丙二醇中的任意一种；

B、将步骤A称取的磷脂酰甘油、维生素E、泊洛沙姆407、多元醇混合后加热至50℃，搅拌至完全溶解，作为A相；将步骤A称取的半胱氨酸衍生物、核糖、肌肽、去离子水投料至反应釜中混合后，搅拌均匀，作为B相；

C、将B相所在反应釜的搅拌速度调整至300-600r/min，将A相以不超过 10mL/min的速度缓慢抽入到B相所在反应釜中，抽料完成后继续搅拌20min，真空脱泡，然后放于室温黑暗处静置48h，得透明的立方液晶凝胶；

D、将步骤C所得立方液晶凝胶在冰浴条件下投入超声波破碎仪，设置超声功率为200W，超声工作时间为5 s，间断时间为10s，超声分散 10 min，得立方液晶粗分散体；

E、将步骤D所得的立方液晶粗分散体投入高压均质机，在4-10℃，压力15000psi条件下高压均质5~10次，得抗衰老组合物。