CN113425717B - 一种提高口服幽门螺杆菌疫苗效力的药剂及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种提高口服幽门螺杆菌疫苗效力的药剂及其应用，属于疫苗开发技术领域，口服幽门螺杆菌疫苗包括：A1蛋白、氯化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、甘油和水。将质子泵抑制剂在口服幽门螺杆菌疫苗使用前使用，可使鼠胃液pH呈中性，能有效保护幽门螺杆菌疫苗不被胃酸破坏，本发明突破了口服免疫唾液效价检测阳转率为零的瓶颈，为幽门螺杆菌疫苗在肠道发挥免疫效应奠定了基础。

Description

一种提高口服幽门螺杆菌疫苗效力的药剂及其应用
技术领域
本发明属于疫苗开发技术领域，具体涉及一种提高口服幽门螺杆菌疫苗效力的药剂及其应用。
背景技术
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)在2017年我国《第五次全国幽门螺杆菌感染处理共识报告》中全球感染者约有44亿，平均感染率为62.8％；我国约为50％ (儿童约为30％)，感染人数高达7.68亿。幽门螺杆菌能在人与人之间进行传播，是一种感染性疾病，也是一种传染病。目前幽门螺杆菌的治疗采用抗菌疗法，在长期的治疗过程中，幽门螺杆菌的耐药性逐渐增加，根除率在2012年下降至7 3.5％。到目前为止，幽门螺杆菌疫苗还没有上市销售。
幽门螺杆菌疫苗临床前研究动物模型主要集中在鼠模型。开发一种预防或根除幽门螺杆菌感染的疫苗已被证明具有极大的挑战性，需要广泛的抗原、佐剂和给药系统。由于幽门螺杆菌是人胃黏膜表面的寄生菌，目前幽门螺杆菌疫苗临床试验或临床前试验的给药途径绝大部分都为口服肠道免疫，通过口服肠道免疫来激发黏膜免疫系统，使产生的血清IgG和胃黏膜IgA抗体介入清除幽门螺杆菌。
口服幽门螺杆菌疫苗到达肠道后，在黏膜佐剂作用下抗原发挥免疫效应。为保护口服幽门螺杆菌疫苗中抗原成分不被胃酸破坏，目前常用的免疫前处理方法为：免疫前30min，给鼠口服灌胃0.3mL的胃酸中和液，此方法抑制胃酸作用弱，持续时间短，灌胃的疫苗易被胃酸破坏，使疫苗不能在肠道发挥免疫效应，不利于幽门螺杆菌疫苗通过口服灌胃来研究评价，阻碍了幽门螺杆菌疫苗临床前研究。
因此，如何提供一种提高口服幽门螺杆菌疫苗效力的药剂及其应用是本领域亟待解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提高口服幽门螺杆菌疫苗效力的药剂及其应用，该方法使鼠胃液呈pH中性，大大降低了胃酸对口服幽门螺杆菌疫苗的破坏，保证了幽门螺杆菌疫苗能在肠道发挥免疫效应，为通过口服灌胃幽门螺杆菌疫苗来评价免疫效应以及开发幽门螺杆菌疫苗提供了新的方法。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种提高口服幽门螺杆菌疫苗效力的药剂，包括：质子泵抑制剂；
质子泵抑制剂至少包括：奥美拉唑、兰索拉唑、泮托拉唑、雷贝拉唑、埃索美拉唑、艾普拉唑或上述各药物的盐类衍生物中的一种；
优选的，所述各药物的盐类衍生物包括：奥美拉唑钠盐、兰索拉唑钠盐、泮托拉唑钠盐、雷贝拉唑钠盐、埃索美拉唑钠盐或艾普拉唑钠盐；
优选的，所述各药物的盐类衍生物包括：奥美拉唑钾盐、兰索拉唑钾盐、泮托拉唑钾盐、雷贝拉唑钾盐、埃索美拉唑钾盐或艾普拉唑钾盐；
一种口服幽门螺杆菌疫苗组剂，包括：口服幽门螺杆菌疫苗和质子泵抑制剂；
口服幽门螺杆菌疫苗包括：A1蛋白、氯化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、甘油和水；A1蛋白序列如SEQ.ID.NO.1所示；
SEQ.ID.NO.1序列如下：
AsnGlyAspLysLeuTyrArgAlaAspSerArgProProAspGluProTrpLysLeuThrProLysGluLe uAspLysLeuMetLeuHisTyrAlaGlyGluLeuAlaArgLysArgLysGluLysGlyIleLysLeuAsnTyrValGluAlaValAlaLeuIleSerAlaHisIleMetGluGluAlaArgAlaGlyLysLysThrAlaAlaGluLeuMetGlnG luGlyArgThrLeuLeuLysProAspAspValMetAspGlyValAlaSerMetIleHisGluValGlyIleGluAlaMetPheProAspGlyThrLysLeuValThrValHisThrProIleGluAlaAsnGlyLeuGluProTrpIleHisHi sAlaProGlnGlyCysGlyAsnSerSerArgThrIleThrAspAspThrCysAsnGluGluThrGlnAsnLeuSerThrIleTyrLeuArgLysTyrGlnSerLysValLysArgGlnIlePheSerAspTyrGlnSerAspIleAspLysHis AsnArgIleArgAspGluLeuAlaProGlnSerIleThrGluLeuCysSerGluTyrArgAsnThrGlnIleTyrThrIleAsnAspLysIleLeuSerTyrThrGluSerMetAlaGlyLysArgGluMetValIleIleThrPheLysSerGl yAlaThrPheGlnValGluValProGlySerGlnHisIleAspSerGlnLysLysAlaIleGluArgMetLysAspThrLeuArgIleThrTyrLeuThrGluThrLysIleAspLysLeuCysValTrpAsnAsnLysThrProAsnSerIleA laAlaIleSerMetGluAsnAlaProGlnSerIleThrGluLeuCysSerGluTyrArgAsnThrGlnIleTyrThrIleAsnAspLysIleLeuSerTyrThrGluSerMetAlaGlyLysArgGluMetValIleIleThrPheLysSerGlyAl aThrPheGlnValGluValProGlySerGlnHisIleAspSerGlnLysLysAlaIleGluArgMetLysAspThrLeuArgIleThrTyrLeuThrGluThrLysIleAspLysLeuCysValTrpAsnAsnLysThrProAsnSerIleAlaA laIleSerMetGluAsnAlaProGlnSerIleThrGluLeuCysSerGluTyrArgAsnThrGlnIleTyrThrIleAsnAspLysIleLeuSerTyrThrGluSerMetAlaGlyLysArgGluMetValIleIleThrPheLysSerGlyAlaT hrPheGlnValGluValProGlySerGlnHisIleAspSerGlnLysLysAlaIleGluArgMetLysAspThrLeuArgIleThrTyrLeuThrGluThrLysIleAspLysLeuCysValTrpAsnAsnLysThrProAsnSerIleAlaAlaI leSerMetGluAsnAlaProGlnSerIleThrGluLeuCysSerGluTyrArgAsnThrGlnIleTyrThrIleAsnAspLysIleLeuSerTyrThrGluSerMetAlaGlyLysArgGluMetValIleIleThrPheLysSerGlyAlaThr PheGlnValGluValProGlySerGlnHisIleAspSerGlnLysLysAlaIleGluArgMetLysAspThrLeuAr gIleThrTyrLeuThrGluThrLysIleAspLysLeuCysValTrpAsnAsnLysThrProAsnSerIleAlaAlaIleSerMetGluAsnAlaProGlnSerIleThrGluLeuCysSerGluTyrArgAsnThrGlnIleTyrThrIleAsnAs pLysIleLeuSerTyrThrGluSerMetAlaGlyLysArgGluMetValIleIleThrPheLysSerGlyAlaThrPheGlnValGluValProGlySerGlnHisIleAspSerGlnLysLysAlaIleGluArgMetLysAspThrLeuArgIl eThrTyrLeuThrGluThrLysIleAspLysLeuCysValTrpAsnAsnLysThrProAsnSerIleAlaAlaIleSerMetGluAsn；
口服幽门螺杆菌疫苗中：A1蛋白2.5mg/mL、氯化钠1.17％，碳酸钠0.03％，碳酸氢钠0.18％，甘油5mL/100mL；
优选的，所述氯化钠1.17mg/mL，碳酸钠0.03mg/mL，碳酸氢钠0.18mg/ mL；
一种提高口服幽门螺杆菌疫苗免效力的处理方法，包括以下步骤：
(1)将断水断食后的动物，腹部注射质子泵抑制剂；
(2)注射质子泵抑制剂后，给动物使用口服幽门螺杆菌疫苗；
步骤(1)中，所述断水断食时间为24h；
步骤(1)中，所述质子泵抑制剂的注射用量为0.02-2mg/只；
优选的，质子泵抑制剂的溶剂为无菌生理盐水；
优选的，质子泵抑制剂溶液注射量为10-1000μL；
步骤(2)中，所述使用口服幽门螺杆菌疫苗的时间为腹部注射质子泵抑制剂后50-150min；
所述动物品种为：Balb/c小鼠、C57小鼠、沙鼠或SD大鼠中的一种。
综上所述，本发明公开了一种提高口服幽门螺杆菌疫苗效力的药剂及其应用。使用本发明口服幽门螺杆菌疫苗及其处理方法。其唾液IgA抗体滴度为1： 5，阳转率为80％；血清IgG抗体滴度为1：800，阳转率为80％。不采用免疫前处理方法进行口服幽门螺杆菌疫苗的唾液IgA抗体滴度为1：5，阳转率为0％；血清IgG抗体滴度为1：400，阳转率为40％。通过本发明方法突破了口服免疫唾液效价检测阳转率为0的瓶颈，为解决口服幽门螺杆菌疫苗免疫效应发挥指明了方向(即疫苗免疫后无效价或效价低，是抗原本身性质决定还是免疫口服给药途径问题)，使幽门螺杆菌疫苗成功开发向前迈进了一步。
附图说明
图1为口服幽门螺杆菌疫苗效价检测结果。A为未经质子泵抑制剂前处理唾液I gA效价检测，B为经质子泵抑制剂前处理唾液IgA效价检测；C为未经质子泵抑制剂前处理血清IgG效价检测；D为经质子泵抑制剂前处理血清IgG效价检测。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1腹腔注射质子泵抑制剂后Balb/c小鼠胃液pH值检测
6周龄雌性Balb/c小鼠，18g±2g，共20只。自购买后采用随机分组法对鼠进行分组，10只/笼。饲养条件为：普通级环境中饲养，温度为22±4℃，湿度为 55±10％，一周换1次垫料，每天光照为12小时白昼交替，24小时换气通风，每周定期对环境消毒，饲料为常规饲料，水为纯水仪制备后经高压灭菌获得，自由进食进水。
过渡饲养7天后，行小鼠胃液pH值检测实验，小鼠胃液pH值检测方案为：
用无菌注射器吸取溶液A，采用腹腔注射方式给每只小鼠注射250uL溶液A；溶液A组成：0.1mg奥美拉唑/只鼠，溶剂为无菌生理盐水。在腹腔注射溶液A 后30min、45min、60min、75min、90min、105min、120min、135min、150min、 165min检测；每个时间点检测2只小鼠胃液pH值，取平均值。
在宰杀鼠前，将鼠断食断水24h，在不违背动物伦理道德下，对鼠进行颈椎脱臼处死，用75％酒精棉球对鼠腹部进行擦拭消毒，用手术剪剪开鼠腹腔，将胃取出。
将鼠全胃沿胃大弯剪开，用移液器吸取适量胃液滴在pH试纸上。pH试纸来源于杭州试三科技有限公司，pH试纸使用详见pH试纸说明书。
小鼠胃液pH值检测结果如下：
Figure SMS_1
Balb/c小鼠腹腔注射溶液A后，小鼠胃液pH值呈中性最佳时间为60min-1 20min。
实施例2口服灌胃Balb/c小鼠后液体在胃中停留时间
6周龄雌性Balb/c小鼠，18g±2g，共20只。自购买后采用随机分组法对鼠进行分组，10只/笼。饲养条件为：普通级环境中饲养，温度为22±4℃，湿度为 55±10％，一周换1次垫料，每天光照为12小时白昼交替，24小时换气通风，每周定期对环境消毒，饲料为常规饲料，水为纯水仪制备后经高压灭菌获得，自由进食进水。
过渡饲养7天后，进行口服灌胃实验，口服灌胃Balb/c小鼠后液体在胃中停留时间实验方案：
用灌胃针吸取生理盐水，每只小鼠口服灌胃0.3mL；灌胃结束后2min、4mi n、6min、8min、10min、12min、14min、16min、18min、20min检测鼠胃中液体残余及排空情况；每个时间点检测2只小鼠，取综合判定结果。
在宰杀鼠前，将鼠断食断水24h，在不违背动物伦理道德下，对鼠进行颈椎脱臼处死。用75％酒精棉球对鼠腹部进行擦拭消毒，用手术剪剪开鼠腹腔，将胃取出。
将鼠全胃沿胃大弯剪开，看胃中液体残余及排空情况。
小鼠胃中液体残余及排空结果如下：
Figure SMS_2
Balb/c小鼠口服灌胃后，液体在胃中停留时间为12min内，超过12min胃内液体全部排空。
实施例3
口服幽门螺杆菌疫苗前准备：
6周龄雌性Balb/c小鼠，18g±2g，共20只。鼠自购买后采用随机分组法对鼠进行分组，10只/笼。饲养条件为：普通级环境中饲养，温度为22±4℃，湿度为55±10％，一周换1次垫料，每天光照为12小时白昼交替，24小时换气通风，每周定期对环境消毒，饲料为常规饲料，水为纯水仪制备后经高压灭菌获得，自由进食进水。过渡饲养1天后进行免疫实验。
幽门螺杆菌疫苗组成如下：A1蛋白2.5mg/mL，溶剂为：氯化钠1.17％，碳酸钠0.03％，碳酸氢钠0.18％，甘油5mL/100mL，溶液pH为8.5。
免疫前将幽门螺杆菌疫苗从-80℃取出放置在4℃冰箱解冻备用。
用无菌注射器吸取幽门螺杆菌疫苗，采用口服灌胃方式给小鼠灌胃1mL疫苗。共免疫3次，免疫时间点为0天、7天、28天。免疫结束后2h恢复食水。每次免疫操作均相同。
采血和采唾液前需提前断食断水24h。采用Elisa间接法对唾液IgA和血清I gG进行检测。封闭液组成：0.01M PBS，1％BSA，溶剂为水。PBST洗涤液组成： 0.01M PBS，0.05mL/100mLTween-20，溶剂为水。抗体稀释液组成：0.01M PBS，0.05mL/100mLTween-20，0.5％BSA，溶剂为水。底物缓冲液组成：磷酸氢二钠 1.4％，一水合柠檬酸1％，溶剂为水。2M硫酸组成：浓硫酸11.22mL/100mL，溶剂为水。1mg/mLTMB组成：TMB 0.1％，溶剂为DMSO。显色液组成：1mg/ mLTMB：底物缓冲液：30％双氧水配制体积比例为100:900:1。
用2ug/mL免疫抗原包被酶标板，包被条件为37℃下孵育2h，后用PBST洗涤液洗板三次。300μL/孔将封闭液加入上述酶标板，放入4℃冰箱中，封闭过夜。再用PBST洗涤液洗上述酶标板三次，将此酶标板命名为酶标板1并放入4℃冰箱保存备用。
口服幽门螺杆菌疫苗免疫前处理：
在免疫前24h给鼠断食断水。每次口服免疫前60min采用腹腔注射方式给小鼠注射250uL溶液A(溶液A：0.1mg奥美拉唑/只鼠，溶剂为无菌生理盐水)。
幽门螺杆菌疫苗口服免疫：
幽门螺杆菌疫苗组成如下：A1蛋白2.5mg/mL，溶剂为：氯化钠1.17％，碳酸钠0.03％，碳酸氢钠0.18％，甘油5mL/100mL，溶液pH为8.5。
免疫前将幽门螺杆菌疫苗从-80℃取出放置在4℃冰箱解冻备用。
用无菌注射器吸取幽门螺杆菌疫苗，采用口服灌胃方式给小鼠灌胃0.4mL 疫苗。
免疫结束后2h恢复食水。
每次免疫操作均相同。
采血和采唾液前需提前断食断水24h。
口服幽门螺杆菌疫苗免疫后血清IgG检测：
末次免疫结束后第10天对小鼠进行采集尾静脉血，第32天采集小鼠眼眶静脉血。将采集的血室温静置4h，采用3000g离心2min，吸上清，后再重复上述操作一次，将分离的血清放置在-80℃保存备用；将血清样本用抗体稀释液以 1:800进行稀释，100μL/孔加入酶标板1中，37℃、孵育45min，PBST洗涤液洗板三次，此酶标板命名为酶标板2；将羊抗鼠IgG二抗用抗体稀释液1:10000 进行稀释，100μL/孔加入酶标板2，37℃、孵育45min，PBST洗涤液洗板三次，此酶标板命名为酶标板3；将显色液按100μL/孔加入酶标板3中，37℃、孵育 15min，后按50μL/孔加入2M H2SO4终止液，此酶标板命名为酶标板4；将酶标板4放入酶标分析仪中，选择OD450进行检测，将检测数据保存并进行后续分析。末次免疫后32天血清IgG检测结果如图1。
结论：腹腔注射质子泵抑制剂法口服灌胃免疫Balb/c小鼠，血清IgG抗体滴度为1:800，阳转率为80％。
口服幽门螺杆菌疫苗免疫后唾液IgA检测：
末次免疫结束后第10天、第32天对小鼠进行采唾液。采集小鼠唾液前，需给小鼠腹腔注射5mg/mL毛果芸香碱20uL,采集唾液放置在-80℃保存备用；将唾液样本用抗体稀释液以1:5进行稀释，100μL/孔加入酶标板1中，37℃、孵育45min，PBST洗涤液洗板三次，此酶标板命名为酶标板5；将羊抗鼠IgA二抗用抗体稀释液1:5000进行稀释，100μL/孔加入酶标板5，37℃、孵育45min，P BST洗涤液洗板三次，此酶标板命名为酶标板6；将显色液按100μL/孔加入酶标板6中，37℃、孵育15min，后按50μL/孔加入2M H2SO4终止液，此酶标板命名为酶标板7；将酶标板7放入酶标分析仪中，选择OD450进行检测，将检测数据保存并进行后续分析。末次免疫后32天唾液IgA检测结果如图1。
结论：腹腔注射质子泵抑制剂法口服灌胃免疫Balb/c小鼠，唾液IgA抗体滴度为1:5，阳转率为80％。
对比例1口服灌胃胃酸中和液后Balb/c小鼠胃液pH值检测
6周龄雌性Balb/c小鼠，18g±2g，共20只。鼠自购买后采用随机分组法对鼠进行分组，10只/笼。饲养条件为：普通级环境中饲养，温度为22±4℃，湿度为55±10％，一周换1次垫料，每天光照为12小时白昼交替，24小时换气通风，每周定期对环境消毒，饲料为常规饲料，水为纯水仪制备后经高压灭菌获得，自由进食进水。过渡饲养7天，进行鼠胃液pH值检测实验。用无菌注射器吸取胃酸中和液，采用口服灌胃方式给每只小鼠灌胃0.3mL，在口服灌胃胃酸中和液后5min、10min、15min、20min、25min、30min、35min、40min、45min、 50min检测；每个时间点检测2只小鼠胃液pH值，取平均值。
胃酸中和液组成如下：氯化钠108.8mM，氯化钾4.3mM，氯化钙1.0mM，无水硫酸镁0.6mM，磷酸氢二钠0.3mM，磷酸二氢钾0.3mM，碳酸氢钠181.8 mM，溶剂为水。
在宰杀鼠前，将鼠断食断水24h，在不违背动物伦理道德下，对鼠进行颈椎脱臼处死。用75％酒精棉球对鼠腹部进行擦拭消毒，用手术剪剪开鼠腹腔，将胃取出。将鼠全胃沿胃大弯剪开，用移液器吸取适量胃液滴在pH试纸上。pH 试纸使用详见pH试纸说明书。
小鼠胃液pH值检测结果如下：
Figure SMS_3
Balb/c小鼠口服灌胃胃酸中和液后，小鼠胃液pH值呈酸性时间为15min后，胃酸中和液起保护时间为0min-10min。当口服灌胃胃酸中和液30min后，再通过口服灌胃疫苗免疫小鼠，其胃酸中和液未发挥中和胃酸来保护疫苗不被胃酸破坏的作用。
对比例2口服灌胃胃酸中和液法免疫Balb/c小鼠
口服灌胃胃酸中和液法免疫Balb/c小鼠免疫前准备
6周龄雌性Balb/c小鼠，共20只，鼠自购买后采用随机分组法对鼠进行分组，10只/笼。饲养条件为：普通级环境中饲养，温度为22±4℃，湿度为55 ±10％，一周换1次垫料，每天光照为12小时白昼交替，24小时换气通风，每周定期对环境消毒，饲料为常规饲料，水为纯水仪制备后经高压灭菌获得，自由进食进水。过渡饲养7天。
幽门螺杆菌疫苗组成如下：A1蛋白2.5mg/mL，溶剂为：氯化钠1.17％，碳酸钠0.03％，碳酸氢钠0.18％，甘油5mL/100mL，溶液pH为8.5；共免疫3次，免疫时间点为0天、7天、28天，其余准备工作同上。
口服灌胃胃酸中和液法免疫Balb/c小鼠免疫前处理
免疫前24h给鼠断食断水，口服免疫前30min灌胃0.3mL胃酸中和液。其余前处理操作同上。
口服灌胃胃酸中和液法口服灌胃免疫Balb/c小鼠
口服灌胃免疫1次小鼠，灌胃体积为0.4mL。其余灌胃操作同上。
口服灌胃胃酸中和液法疫苗免疫后血清IgG检测
通过Elisa间接法检测末次免疫结束后第10天、第32天小鼠血清IgG，末次免疫后32天血清IgG检测结果如图1。
结论：口服灌胃胃酸中和液法口服灌胃免疫Balb/c小鼠，血清IgG抗体滴度为1:400，阳转率为40％。
口服灌胃胃酸中和液法疫苗免疫后唾液IgA检测
通过Elisa间接法检测末次免疫结束后第10天、第32天小鼠唾液IgA，末次免疫后32天血清IgG检测结果如图1。
结论：口服灌胃胃酸中和液法口服灌胃免疫Balb/c小鼠，唾液IgA抗体滴度为1:5，阳转率为0。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对上述实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
序列表
<110> 成都亿妙生物科技有限公司
<120> 一种提高口服幽门螺杆菌疫苗效力的药剂及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 700
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Asn Gly Asp Lys Leu Tyr Arg Ala Asp Ser Arg Pro Pro Asp Glu Pro
1 5 10 15
Trp Lys Leu Thr Pro Lys Glu Leu Asp Lys Leu Met Leu His Tyr Ala
20 25 30
Gly Glu Leu Ala Arg Lys Arg Lys Glu Lys Gly Ile Lys Leu Asn Tyr
35 40 45
Val Glu Ala Val Ala Leu Ile Ser Ala His Ile Met Glu Glu Ala Arg
50 55 60
Ala Gly Lys Lys Thr Ala Ala Glu Leu Met Gln Glu Gly Arg Thr Leu
65 70 75 80
Leu Lys Pro Asp Asp Val Met Asp Gly Val Ala Ser Met Ile His Glu
85 90 95
Val Gly Ile Glu Ala Met Phe Pro Asp Gly Thr Lys Leu Val Thr Val
100 105 110
His Thr Pro Ile Glu Ala Asn Gly Leu Glu Pro Trp Ile His His Ala
115 120 125
Pro Gln Gly Cys Gly Asn Ser Ser Arg Thr Ile Thr Asp Asp Thr Cys
130 135 140
Asn Glu Glu Thr Gln Asn Leu Ser Thr Ile Tyr Leu Arg Lys Tyr Gln
145 150 155 160
Ser Lys Val Lys Arg Gln Ile Phe Ser Asp Tyr Gln Ser Asp Ile Asp
165 170 175
Lys His Asn Arg Ile Arg Asp Glu Leu Ala Pro Gln Ser Ile Thr Glu
180 185 190
Leu Cys Ser Glu Tyr Arg Asn Thr Gln Ile Tyr Thr Ile Asn Asp Lys
195 200 205
Ile Leu Ser Tyr Thr Glu Ser Met Ala Gly Lys Arg Glu Met Val Ile
210 215 220
Ile Thr Phe Lys Ser Gly Ala Thr Phe Gln Val Glu Val Pro Gly Ser
225 230 235 240
Gln His Ile Asp Ser Gln Lys Lys Ala Ile Glu Arg Met Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Arg Ile Thr Tyr Leu Thr Glu Thr Lys Ile Asp Lys Leu Cys Val
260 265 270
Trp Asn Asn Lys Thr Pro Asn Ser Ile Ala Ala Ile Ser Met Glu Asn
275 280 285
Ala Pro Gln Ser Ile Thr Glu Leu Cys Ser Glu Tyr Arg Asn Thr Gln
290 295 300
Ile Tyr Thr Ile Asn Asp Lys Ile Leu Ser Tyr Thr Glu Ser Met Ala
305 310 315 320
Gly Lys Arg Glu Met Val Ile Ile Thr Phe Lys Ser Gly Ala Thr Phe
325 330 335
Gln Val Glu Val Pro Gly Ser Gln His Ile Asp Ser Gln Lys Lys Ala
340 345 350
Ile Glu Arg Met Lys Asp Thr Leu Arg Ile Thr Tyr Leu Thr Glu Thr
355 360 365
Lys Ile Asp Lys Leu Cys Val Trp Asn Asn Lys Thr Pro Asn Ser Ile
370 375 380
Ala Ala Ile Ser Met Glu Asn Ala Pro Gln Ser Ile Thr Glu Leu Cys
385 390 395 400
Ser Glu Tyr Arg Asn Thr Gln Ile Tyr Thr Ile Asn Asp Lys Ile Leu
405 410 415
Ser Tyr Thr Glu Ser Met Ala Gly Lys Arg Glu Met Val Ile Ile Thr
420 425 430
Phe Lys Ser Gly Ala Thr Phe Gln Val Glu Val Pro Gly Ser Gln His
435 440 445
Ile Asp Ser Gln Lys Lys Ala Ile Glu Arg Met Lys Asp Thr Leu Arg
450 455 460
Ile Thr Tyr Leu Thr Glu Thr Lys Ile Asp Lys Leu Cys Val Trp Asn
465 470 475 480
Asn Lys Thr Pro Asn Ser Ile Ala Ala Ile Ser Met Glu Asn Ala Pro
485 490 495
Gln Ser Ile Thr Glu Leu Cys Ser Glu Tyr Arg Asn Thr Gln Ile Tyr
500 505 510
Thr Ile Asn Asp Lys Ile Leu Ser Tyr Thr Glu Ser Met Ala Gly Lys
515 520 525
Arg Glu Met Val Ile Ile Thr Phe Lys Ser Gly Ala Thr Phe Gln Val
530 535 540
Glu Val Pro Gly Ser Gln His Ile Asp Ser Gln Lys Lys Ala Ile Glu
545 550 555 560
Arg Met Lys Asp Thr Leu Arg Ile Thr Tyr Leu Thr Glu Thr Lys Ile
565 570 575
Asp Lys Leu Cys Val Trp Asn Asn Lys Thr Pro Asn Ser Ile Ala Ala
580 585 590
Ile Ser Met Glu Asn Ala Pro Gln Ser Ile Thr Glu Leu Cys Ser Glu
595 600 605
Tyr Arg Asn Thr Gln Ile Tyr Thr Ile Asn Asp Lys Ile Leu Ser Tyr
610 615 620
Thr Glu Ser Met Ala Gly Lys Arg Glu Met Val Ile Ile Thr Phe Lys
625 630 635 640
Ser Gly Ala Thr Phe Gln Val Glu Val Pro Gly Ser Gln His Ile Asp
645 650 655
Ser Gln Lys Lys Ala Ile Glu Arg Met Lys Asp Thr Leu Arg Ile Thr
660 665 670
Tyr Leu Thr Glu Thr Lys Ile Asp Lys Leu Cys Val Trp Asn Asn Lys
675 680 685
Thr Pro Asn Ser Ile Ala Ala Ile Ser Met Glu Asn
690 695 700

Claims (1)

1.一种口服幽门螺杆菌疫苗组剂，其特征在于，包括：口服幽门螺杆菌疫苗和注射用的奥美拉唑；所述口服幽门螺杆菌疫苗的使用时间为腹部注射奥美拉唑后50-150min；
所述口服幽门螺杆菌疫苗包括：2.5mg/mL的A1蛋白、1.17％的氯化钠、0.03%的碳酸钠、0.18%的碳酸氢钠、5mL/100mL的甘油和水；A1蛋白序列如SEQ.ID.NO.1所示。
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