CN113423403A - 对l718和/或l792突变型治疗有抗性的egfr抑制剂 - Google Patents

对l718和/或l792突变型治疗有抗性的egfr抑制剂 Download PDF

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Abstract

本发明提供了用于治疗表达EGFR的恶性肿瘤患者的抗肿瘤剂，所述EGFR具有至少一个选自下组的突变：外显子18中的L718X突变和外显子20中的L792X突变，其中X代表任意氨基酸残基，所述抗肿瘤剂包含(S)‑N‑(4‑氨基‑6‑甲基‑5‑(喹啉‑3‑基)‑8，9‑二氢嘧啶并[5，4‑b]吲哚嗪‑8‑基)丙烯酰胺(化合物(A))或其盐。

Description

对L718和/或L792突变型治疗有抗性的EGFR抑制剂
技术领域
本发明涉及针对癌症的抗肿瘤剂，所述癌症包含对外显子18和/或外显子20治疗有抗性的突变型表皮生长因子受体(在下文中称为“EGFR”)。
背景技术
EGFR是一种受体型酪氨酸激酶，通过与作为配体的表皮生长因子(下文中称为EGF)结合而在正常组织中发挥其生理功能，并且参与表皮组织中的生长和凋亡(NPL 1)。此外，EGFR基因的体细胞突变被认为是一种致癌基因；例如，缺失外显子19中的密码子746-750(下文中也称为“外显子19缺失突变”)的EGFR和由外显子21中的密码子858编码的亮氨酸突变为精氨酸(下文中也称为“L858R突变”)的EGFR不断诱导EGF非依赖性激酶活性，并且参与癌细胞的生长和存活(NPL 2)。例如，在东亚的30-50％的非小细胞肺癌中观察到这些突变。在欧洲和美国的约10％的非小细胞肺癌中也观察到这种突变，其被认为是癌症的病因之一(NPL 3)。
因此，已经积极地开展了作为抗肿瘤剂的EGFR抑制剂的研究开发，并且将其引入各种EGFR突变-阳性的肺癌的治疗中(NPL 2和NPL 4)。吉非替尼(gefitinib)、厄洛替尼(erlotinib)和阿法替尼(afatinib)已经用作针对外显子19缺失突变型和L858R突变型EGFR-阳性肺癌的治疗剂。外显子19缺失突变和L858R突变占EGFR突变的90％。此外，使用这些药剂的治疗过程中发生获得性耐药，并且其中的50％由其中外显子20中的密码子790由苏氨酸变为蛋氨酸(下文中也称为“T790M突变”)的耐药突变EGFR引起。为治疗具有这种突变的肺癌，已经使用奥希替尼(osimertinib)作为治疗剂。因此，对于具有主要EGFR突变的肺癌患者，正在建立使用EGFR抑制剂的治疗。
引用文件列表
专利文献
PTL 1：WO2015/175632A1
PTL 2：WO2015/025936A1
非专利文献
NPL 1：Nat.Rev.Cancer，vol.6，pp.803-812(2006)
NPL 2：Nature Medicine，vol.19，pp.1389-1400(2013)
NPL 3：Nat.Rev.Cancer，vol.7，pp.169-181(2007)
NPL 4：Clin.Cancer Res.，vol.24，pp.3097-3107(2018)
发明内容
技术问题
对于具有主要EGFR突变的肺癌患者，正在建立使用EGFR抑制剂的治疗。相比之下，对奥希替尼(osimertinib)治疗有抗性的患者的存在也是已知的。据报道，其一些原因是EGFR基因突变(NPL 4)。例如，已证实，除了外显子19缺失突变或L858R突变(二者都是新生突变)和T790M突变(其是获得性耐药突变)之外，具有以下突变的肺癌也对奥希替尼(osimertinib)治疗有抗性：由外显子18中的密码子718编码的亮氨酸替换为任意氨基酸的点突变(下文中也称为“L718X突变”)，或者由外显子20中的密码子792编码的亮氨酸替换为任意氨基酸的点突变(下文中也称为“L792X突变”)。有人提出L718X突变或L792X突变引起的氨基酸替换诱导空间位阻和疏水性结合减少，从而阻止EGFR与奥希替尼(osimertinib)的结合(NPL4)。因此，需要开发针对具有新生活性突变、T790M获得性耐药突变以及L718X突变或L792X突变的复合突变的EGFR具有高抑制活性的抑制剂。
因此，人们认为，开发对具有包含L718X或L792X的复合突变的EGFR具有高抑制活性的药物可以使其显示出对于对奥西替尼(osimertinib)治疗有抗性的肺癌的抗肿瘤作用，并预期其有助于延长尚未为其建立疗法的突变型EGFR-阳性癌症患者的生命和改善生活质量。此外，预期对于T790M(其是针对使用EGFR抑制剂的治疗的获得性耐药突变)具有高抑制活性的药物在使用针对外显子19或外显子21突变型EGFR(其为新生突变)的EGFR抑制剂的治疗期间降低获得性耐药的表达频率；因此预期其有助于延长癌症患者的寿命。
在此类情况下，本发明的目的是提供对L718和L792突变型EGFR具有高抑制活性的抑制剂，所述L718和L792突变型EGFR是对奥希替尼(osimertinib)治疗有抗性的突变，并且先前已知的EGFR抑制剂对它们的治疗效果不足。
问题的解决方案
本发明的发明人进行了深入研究，并且发现常规引入治疗的EGFR抑制剂对于除活性突变和T790M获得性耐药突变之外还包含L718和L792突变的复合突变的抑制活性很差。此外，发明人从比较化合物的共晶结构开始进行了深入研究，并且还发现本发明的化合物对于具有L718和L792突变的EGFR表现出极佳的已知活性，并且进一步显示出针对以上复合突变型EGFR的极佳抑制活性。由于此发现，发明人完成了本发明。
本发明涵盖以下实施方式。
项目1.用于治疗表达EGFR的恶性肿瘤患者的抗肿瘤剂，所述EGFR有至少一个选自下组的突变：外显子18中的L718X突变和外显子20中的L792X突变，其中X代表任意氨基酸残基，所述抗肿瘤剂包含(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8，9-二氢嘧啶并[5，4-b]吲哚嗪-8-基)丙烯酰胺(化合物(A))或其盐。
项目2.根据项目1的抗肿瘤剂，其中所述EGFR还具有至少一个选自下组的突变外显子19缺失突变，L858R，L861Q，G719X，E709X，和外显子20插入突变。
项目3.根据项目2的抗肿瘤剂，其中所述EGFR还具有T790M突变。
项目4.根据项目1-3中任一项的抗肿瘤剂，其中所述L718X突变是L718Q突变。
项目5.根据项目1-4中任一项的抗肿瘤剂，其中所述L792X突变是L792H，L792F，或L792Y。
项目6.用于治疗恶性肿瘤患者的方法，包括以下步骤：将(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8，9-二氢嘧啶并[5，4-b]吲哚嗪-8-基)丙烯酰胺或其盐施用给表达EGFR的恶性肿瘤患者，所述EGFR具有至少一个选自下组的突变：外显子18中的L718X突变和外显子20中的L792X突变。
项目7.(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8，9-二氢嘧啶并[5，4-b]吲哚嗪-8-基)丙烯酰胺或其盐用于治疗表达EGFR的恶性肿瘤患者，所述EGFR具有至少一个选自下组的突变：外显子18中的L718X突变和外显子20中的L792X突变。
项目8.(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8，9-二氢嘧啶并[5，4-b]吲哚嗪-8-基)丙烯酰胺或其盐用于治疗表达EGFR的恶性肿瘤患者的用途，所述EGFR具有至少一个选自下组的突变：外显子18中的L718X突变和外显子20中的L792X突变。
项目9.(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8，9-二氢嘧啶并[5，4-b]吲哚嗪-8-基)丙烯酰胺或其盐用于制备用于治疗表达EGFR的恶性肿瘤患者的药物中的用途，所述EGFR具有至少一个选自下组的突变：外显子18中的L718X突变和外显子20中的L792X突变。
项目10.药物组合物，包含：(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8，9-二氢嘧啶并[5，4-b]吲哚嗪-8-基)丙烯酰胺或其盐和药学可接受的载剂，所述药物组合物用于治疗表达EGFR的恶性肿瘤患者，所述EGFR具有至少一个选自下组的突变：外显子18中的L718X突变和外显子20中的L792X突变，其中X代表任意氨基酸残基。
项目11.用于预测在恶性肿瘤患者中使用包含(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8，9-二氢嘧啶并[5，4-b]吲哚嗪-8-基)丙烯酰胺或其盐作为活性成分的抗肿瘤剂进行化疗的治疗效果的方法，所述方法包括以下步骤(1)和(2)：
(1)检测在从患者获得的生物样品中所含的EGFR基因是否存在突变的步骤；和
(2)当步骤(1)中的检测结果发现EGFR基因具有至少一个选自下组的突变：外显子18中的L718X突变和外显子20中的L792X突变的突变，其中X代表任意氨基酸残基时，预测化疗极有可能对患者显示出足够的治疗效果的步骤。
项目12.用于治疗恶性肿瘤患者的方法，包括以下步骤(1)至(3)：
(1)检测在从患者获得的生物样品中所含的EGFR基因是否存在突变的步骤；
(2)当步骤(1)中的检测结果发现EGFR基因具有至少一个选自下组的突变：外显子18中的L718X突变和外显子20中的L792X突变的突变，其中X代表任意氨基酸残基时，预测使用包含(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8，9-二氢嘧啶并[5，4-b]吲哚嗪-8-基)丙烯酰胺或其盐作为活性成分的化疗剂进行的化疗极有可能对患者显示出足够的治疗效果的步骤；
(3)对恶性肿瘤患者施用(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8，9-二氢嘧啶并[5，4-b]吲哚嗪-8-基)丙烯酰胺或其盐的步骤，所述恶性肿瘤患者已经在步骤(2)中被预测极有可能对使用包含(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8，9-二氢嘧啶并[5，4-b]吲哚嗪-8-基)丙烯酰胺或其盐作为活性成分的抗肿瘤剂进行的化疗有充分应答。
发明的有利效果
本发明的抗肿瘤剂针对具有L718和L792突变的EGFR发挥高抑制活性。因此，本发明的抗肿瘤剂可用于提供对表达具有L718和L792突变的EGFR的恶性肿瘤患者有优异治疗效果的抗肿瘤剂。
本发明还用于提供用于治疗表达具有L718和L792突变的EGFR的恶性肿瘤患者的方法。
在T790M突变(其是外显子20区域中的获得性耐药突变)存在下或者在L718和L792突变存在下，常规EGFR抑制剂的EGFR抑制活性显著降低。因此，难以发挥足够的治疗效果。相比之下，本发明的抗肿瘤剂对具有L718和/或L792突变以及具有活性突变(例如Ex19del或L858R突变)的EGFR具有高抑制活性；因此，本发明的抗肿瘤剂可以对表达具有这些复杂突变的EGFR的恶性肿瘤患者发挥优异的治疗效果。对于具有L718和/或L792突变的EGFR，即使其除了上述突变之外还具有T790M突变，本发明的抗肿瘤剂也高抑制活性；因此，本发明的抗肿瘤剂可以对表达具有这些突变的EGFR的恶性肿瘤患者发挥优异的治疗效果。
此外，本发明的抗肿瘤剂还可以用于在使用针对外显子18或外显子21突变型EGFR(其为新生突变)的EGFR抑制剂的治疗期间降低获得性抗性的表达频率，这是因为即使在T790M突变(其是在外显子20区域中的获得性耐药突变)的存在下，其对于对外显子18和外显子20治疗有抗性的突变型EGFR也有高抑制活性。
附图说明
图1示出了使用HEK293细胞在突变型EGFR强制表达系统中磷酸化(抑制活性)的评估结果。
具体实施方式
在下文中详细解释了本说明书中所用发明范围内的各种定义的优选的示例。
在本说明书中，“EGFR”是指人表皮生长因子受体蛋白，也称为ErbB-1或HER1。
在本说明书中，“野生型EGFR”是指没有体细胞突变的EGFR，其是包含由SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的蛋白质(GenBank登录号：NP_005219.2)。
在本说明书中，“外显子18”是指野生型EGFR(SEQ ID NO：1)的氨基酸序列中的第688-728位区域。
在本说明书中，“对外显子18治疗有抗性的突变”是指野生型EGFR(SEQ ID NO：1)的外显子18区域中的氨基酸中的点突变或缺失突变。优选的对外显子18治疗有抗性的突变是在外显子18区域中有1个氨基酸替换的点突变。更优选地，对外显子18治疗有抗性的突变是L718X(X代表构成由遗传信息编码的蛋白质的氨基酸中不是亮氨酸的任意氨基酸残基)，其是将由外显子18的密码子718编码的亮氨酸替换为任意氨基酸的点突变。更具体地，L718X的优选的示例包括L718Q，其是将由外显子18的密码子718编码的亮氨酸替换为谷氨酰胺的点突变；以及L718V，其是将由密码子718编码的亮氨酸替换为缬氨酸的点突变。
在本说明书中，“外显子18活性突变”是指野生型EGFR(SEQ ID NO：1)的外显子18区域中氨基酸中的点突变或缺失突变。优选的外显子18活性突变是外显子18区域中有1个氨基酸替换的点突变。更优选地，外显子18活性突变是E709X，其是将由外显子18的密码子709编码的谷氨酸替换为任意氨基酸的点突变；或G719X，其是将由外显子18的密码子719编码的甘氨酸替换为任意氨基酸的点突变。更具体地，E709X的优选的示例包括E709K，其是将由外显子18区域中的密码子709编码的谷氨酸替换为赖氨酸的点突变；以及E709A，其是将由外显子18区域中的密码子709编码的甘氨酸替换为丙氨酸的点突变。G719X的优选的示例包括G719A，其是将由外显子18区域中的密码子719编码的甘氨酸替换为丙氨酸的点突变；G719S，其是将由外显子18区域中的密码子719编码的甘氨酸替换为丝氨酸的点突变；和G719C，其是由外显子18区域中的密码子719编码的甘氨酸替换为半胱氨酸的点突变。
在本发明中，“外显子20”是指野生型EGFR(SEQ ID NO：1)的氨基酸序列中的第824-875位区域。
在本说明书中，“对外显子20治疗有抗性的突变”是指野生型EGFR(SEQ ID NO：1)的外显子20区域的氨基酸中的点突变。优选的对外显子20治疗有抗性的突变是在外显子20区域中有1个氨基酸替换的点突变。更优选地，对外显子20治疗有抗性的突变是L792(X代表构成由遗传信息编码的蛋白质的氨基酸中不是亮氨酸的任意氨基酸残基)，其是将由外显子20中的密码子792编码的亮氨酸替换为任意氨基酸的点突变。具体示例包括L792H，其是将由外显子20区域中的密码子792编码的亮氨酸替换为组氨酸的点突变；L792F，其是将由密码子792编码的亮氨酸替换为苯丙氨酸的点突变；L792Y，其是将由密码子792编码的亮氨酸替换为酪氨酸的点突变；L792R，其是将由密码子792编码的亮氨酸替换为精氨酸的点突变；L792V，其是将由密码子792编码的亮氨酸替换为缬氨酸的点突变；和L792P，其是将由密码子792编码的亮氨酸替换为脯氨酸的点突变。在这些之中，L792F、L792H和L792Y是优选的。
在本说明书中，“外显子20插入突变”是指将一个或多个(优选地，1-7个，更优选地，1-4个)氨基酸插入EGFR的外显子20区域(SEQ ID NO：1)的氨基酸序列中的第824-875位区域。优选的示例包括将氨基酸序列FQEA(从N-末端侧起依次为苯丙氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸和丙氨酸)插入外显子20区域中的第763位丙氨酸和第764位酪氨酸之间的突变(A763_Y764insFQEA)，将氨基酸序列ASV(从N-末端侧起依次为丙氨酸、丝氨酸和缬氨酸)插入外显子20区域中的第769位缬氨酸和第770位天冬氨酸之间的突变(V769_D770insASV)，将氨基酸序列SVD(从N-末端侧起依次为丝氨酸、缬氨酸和天冬氨酸)插入外显子20区域的第770位天冬氨酸和第771位天冬酰胺之间的突变(D770_N771insSVD)，将氨基酸序列NPG(从N-末端侧起依次为天冬酰胺、脯氨酸和甘氨酸)插入外显子20区域中的第770位天冬氨酸和第771位天冬酰胺之间的突变(D770_N771insNPG)，将氨基酸G(甘氨酸)插入外显子20区域中的第770位天冬氨酸和第771位天冬酰胺之间的突变(D770_N771insG)，在外显子20区域中缺失第770位天冬氨酸之后插入氨基酸序列GY(从N-末端侧起依次为甘氨酸和酪氨酸)的突变(D770>GY)，将氨基酸N(天冬酰胺)插入外显子20区域中的第771位天冬酰胺和第772位脯氨酸之间的突变(N771_P772insN)，将氨基酸序列PR(从N-末端侧起依次为脯氨酸和精氨酸)插入外显子20区域中的第772位脯氨酸和第773位组氨酸之间的突变(P772_R773insPR)，将氨基酸序列NPH(从N-末端侧起依次为天冬酰胺、脯氨酸和组氨酸)插入外显子20区域中的第773位组氨酸和第774位缬氨酸之间的突变(H773_V774insNPH)，将氨基酸序列PH(从N-末端侧起依次为脯氨酸和组氨酸)插入外显子20区域中的第773位组氨酸和第774位缬氨酸之间的突变(H773_V774insPH)，将氨基酸序列AH(从N-末端侧起依次为丙氨酸和组氨酸)插入外显子20区域中的第773位组氨酸和第774位缬氨酸之间的突变(H773_V774insAH)，将氨基酸H(组氨酸)插入外显子20区域中的第773位组氨酸和第774位缬氨酸之间的突变(H773_V774insH)，将氨基酸序列HV(从N-末端侧起依次为组氨酸和缬氨酸)插入外显子20区域中的第774位缬氨酸和第775位半胱氨酸之间的突变(V774_C774insHV)，将氨基酸序列EAFQ(从N-末端侧起依次为谷氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸和谷氨酰胺)插入外显子20区域中的第761位丙氨酸和第762位谷氨酸之间的突变(A761_E762insEAFQ)等。更优选的示例包括将氨基酸序列ASV(从N-末端侧起依次为丙氨酸、丝氨酸和缬氨酸)插入外显子20区域中的第769位缬氨酸和第770位天冬氨酸之间的突变(V769_D770insASV)，将氨基酸序列SVD(从N-末端侧起依次为丝氨酸、缬氨酸和天冬氨酸)插入外显子20区域中的第770位天冬氨酸和第771位天冬酰胺之间的突变(D770_N771insSVD)，将氨基酸G(甘氨酸)插入外显子20区域中的第770位天冬氨酸和第771位天冬酰胺之间的突变(D770_N771insG)，将氨基酸序列NPH(从N-末端侧起依次为天冬酰胺、脯氨酸和组氨酸)插入外显子20区域中的第773位组氨酸和第774位缬氨酸之间的突变(H773_V774insNPH)，和将氨基酸序列PH((从N-末端侧起依次为脯氨酸和组氨酸)插入外显子20区域中的第773位组氨酸和第774位缬氨酸之间的突变(H773_V774insPH)。特别优选的示例包括将氨基酸序列FQEA(从N-末端侧起依次为苯丙氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸和丙氨酸)插入外显子20区域中的第763位丙氨酸和第764位酪氨酸之间的突变(A763_Y764insFQEA)，将氨基酸序列ASV(从N-末端侧起依次为丙氨酸、丝氨酸和缬氨酸)插入外显子20区域中的第769位缬氨酸和第770位天冬氨酸之间的突变(V769_D770insASV)，将氨基酸序列SVD(从N-末端侧起依次为丝氨酸、缬氨酸和天冬氨酸)插入外显子20区域中的第770位天冬氨酸和第771位天冬酰胺之间的突变(D770_N771insSVD)，将氨基酸G(甘氨酸)插入外显子20区域中的第770位天冬氨酸和第771位天冬酰胺之间的突变(D770_N771insG)，将氨基酸序列NPH(从N-末端侧起依次为天冬酰胺、脯氨酸和组氨酸)插入外显子20区域中的第773位组氨酸和第774位缬氨酸之间的突变(H773_V774inchsNPH)，将氨基酸序列PH(从N-末端侧起依次为脯氨酸和组氨酸)插入外显子20区域中的第773位组氨酸和第774位缬氨酸之间的突变(H773_V774insPH)等。
在本发明中，“外显子21”是指野生型EGFR(SEQ ID NO：1)的氨基酸序列中的第824-875位区域。
在本说明书中，“外显子21活性突变”是指野生型EGFR(SEQ ID NO：1)的外显子21中的氨基酸中的点突变。优选的外显子21活性突变是外显子21区域中有1个氨基酸替换的点突变。更优选地，外显子21活性突变是L858X，其是将由外显子21区域中的密码子858编码的亮氨酸替换为任意氨基酸的点突变；或L861X，其是将由外显子21区域中的密码子864编码的亮氨酸替换为任意氨基酸的点突变(X代表构成由遗传信息编码的蛋白质的氨基酸中不是亮氨酸的任意氨基酸残基)。更具体地，优选的示例包括L858R，其是将由外显子21区域中的密码子858编码的亮氨酸突变为精氨酸的点突变；和L861Q，其是将由外显子21区域中的密码子864编码的亮氨酸替换为谷氨酰胺的点突变。
在本发明中，“对外显子18和/或外显子20治疗有抗性的突变”涵盖“对外显子18治疗有抗性的突变”、“对外显子20治疗有抗性的突变”和“对外显子18和外显子20治疗有抗性的突变”。
在本发明中，“点突变”是指引起一个或多个(例如，约1-10个，优选约1-5个，更优选地约1、2或3个)氨基酸残基的替换、插入或缺失的突变；并且可以包括作为核酸的框内插入和/或缺失。
“具有对外显子18和/或外显子20治疗有抗性的突变的EGFR”涵盖“具有对外显子18治疗有抗性的突变的EGFR”、“具有对外显子20治疗有抗性的突变的EGFR”和“具有对外显子18和外显子21治疗有抗性的突变的EGFR”。
在本说明书中，“具有对外显子18治疗有抗性的突变的EGFR”是指具有至少以上外显子18中的L718X突变作为对外显子18治疗有抗性的突变的EGFR。作为对外显子18治疗有抗性的突变，EGFR还可以具有除了L718X之外的外显子18突变，但优选具有单一的L718X突变。此外，EGFR可以具有除了对外显子18治疗有抗性的突变之外的突变(例如，外显子19缺失突变、L858R突变和L790M突变)。
在本说明书中，“具有对外显子20治疗有抗性的突变的EGFR”是指具有至少以上外显子20中的L792X突变作为对外显子20治疗有抗性的突变的EGFR。作为对外显子20治疗有抗性的突变，EGFR可以具有除了L792X突变之外的突变，但优选具有单一的L718X突变。此外，EGFR可以具有除了对外显子20治疗有抗性的突变之外的突变(例如，外显子19缺失突变、L858R突变和L790M突变)。
在本说明书中，“外显子19”是指野生型EGFR(SEQ ID NO：1)的氨基酸序列中的第729-823位区域。
在本说明书中，“外显子19缺失突变”是指在野生型EGFR(SEQ ID NO：1)的外显子19区域中的缺失一个或多个氨基酸的突变。除了该区域中的缺失之外，也包括插入一个或多个任意氨基酸的突变。外显子19缺失突变的示例包括缺失外显子19区域中的第746位谷氨酸到第750位丙氨酸的5个氨基酸的突变(Del E746-A750)，缺失外显子19区域中的第747位亮氨酸到第753位脯氨酸的7个氨基酸之后插入丝氨酸的突变(Del 747-P753insS)，缺失外显子19区域中的第747位亮氨酸到第751位苏氨酸的5个氨基酸的突变(Del L747-T751)，缺失外显子19区域中的第747位亮氨酸到第750位丙氨酸的4个氨基酸之后插入脯氨酸的突变(Del 747-A750insP)等。优选的示例包括缺失外显子19区域中的第746位谷氨酸到第750位丙氨酸的5个氨基酸的突变(Del E746-A750)。
此外，具有对外显子18和/或外显子20治疗有抗性的突变的EGFR还可以具有至少一个选自下组的突变：外显子19缺失突变、L858R、L861Q、G719X、E709X和外显子20插入突变。具体的示例包括具有外显子18区域中的L718X突变还具有外显子19缺失突变的EGFR，具有外显子20区域具有L792X突变还具有外显子19缺失突变的EGFR，具有外显子18区域中的L718X突还具有L858R的EGFR，具有外显子20区域中的L792X突变还具有L858R的EGFR，具有外显子18区域中的L718X突变还具有L861Q的EGFR，具有外显子20区域中的L792X突变还具有L861Q的EGFR，具有外显子18区域中的L718X突变还具有G719X的EGFR，具有外显子20区域中的L792X突变还具有G719X的EGFR，具有外显子18区域中的L718X突变还具有E709X的EGFR，具有外显子20区域中的L792X突变还具有E709X的EGFR，具有外显子18区域中的L718X突变还具有外显子20插入突变的EGFR，和具有外显子20区域中的L792X突变还具有外显子20插入突变的EGFR。这些之中优选的是具有外显子18区域中的L718X突变还具有外显子19缺失突变的EGFR，具有外显子20区域中的L792X突变还具有外显子19缺失突变的EGFR，具有外显子18区域中的L718X突变还具有L858R的EGFR，和具有外显子20区域中的L792X突变还具有L858R的EGFR。
此外，除了上述的外显子19缺失突变、L858R、L861Q、G719X、E709X和外显子20插入突变之外，具有对外显子18和/或外显子20治疗有抗性的突变的EGFR还可以具有T790M突变。T790M是外显子20区域中的获得性耐药突变。已知T790M是因使用现有的EGFR抑制剂产生的。T790M的获得经常会降低现有药物对恶性肿瘤患者的效果。
在本发明中，示例包括，具有外显子18区域中的L718X突变、具有外显子19缺失突变、还具有T790M突变的EGFR，具有外显子20区域中的L792X突变、具有外显子19缺失突变、还具有T790M突变的EGFR，具有外显子18区域中的L718X突变、具有L858R、还具有T790M突变的EGFR，具有外显子20区域中的L792X突变、具有L858R、还具有T790M突变的EGFR，具有外显子18区域中的L718X突变、具有L861Q、还具有T790M突变的EGFR，具有外显子20区域中的L792X突变、具有L861Q、还具有T790M突变的EGFR，具有外显子18区域中的L718X突变、具有G719X、还具有T790M突变的EGFR，具有外显子20区域中的L792X突变、具有G719X、还具有T790M突变的EGFR，具有外显子18区域中的L718X突变、具有E709X、还具有T790M突变EGFR，具有外显子20区域中的L792X突变、具有E709X、还具有T790M突变的EGFR，具有外显子18区域中的L718X突变、具有外显子20插入突变、还具有T790M突变的EGFR，和具有外显子20区域中的L792X突变、具有外显子20插入突变、还具有T790M突变的EGFR。这些之中优选的是具有外显子18区域中的L718X突变、具有外显子19缺失突变、还具有T790M突变的EGFR，具有外显子20区域中的L792X突变、具有外显子19缺失突变、还具有T790M突变的EGFR，具有外显子18区域中的L718X突变、具有L858R、还具有T790M突变的EGFR，和具有外显子20区域中的L792X突变、具有L858R、还具有T790M突变的EGFR。
在具有以上复合突变的EGFRs中，特别优选具有外显子18区域中的L718Q突变的EGFR，具有外显子20区域中的L792F突变的EGFR，具有L792H突变的EGFR，和具有L792Y突变的EGFR。
在本发明中，用于检测恶性肿瘤患者表达的EGFR中的突变的方法不受特别限制，只要该方法能够检测突变即可，并且可以使用任何已知的检测方法。
用于检测EGFR突变的样品不受特别限制，只要该样品是从恶性肿瘤患者分离的生物样品，特别是从恶性肿瘤患者获得并且含有恶性肿瘤细胞的样品即可。生物样品的示例包括体液(例如，血液、尿液等)、组织、其提取物和所得组织的培养物。取决于生物样品的类型，可以适当地选择获得生物样品的方法。
根据测量方法对生物样品进行适当处理，制备生物样品。此外，根据其测量方法，可以通过常规方法制备包含用于检测的引物或探针的试剂。
在本发明的一个实施方式中，可在向恶性肿瘤患者施用抗肿瘤剂之前执行检测本发明的突变在恶性肿瘤患者表达的EGFR中的存在的步骤。
恶性肿瘤可以包括两种或更多种不同种类的恶性肿瘤细胞。此外，两种或更多种恶性肿瘤可以在单个患者中发生。因此，单个患者可以同时具有不同的EGFR的突变(例如，外显子18突变是L718Q和L718V外显子18突变；外显子20突变是L792F、L792H、L792Y、L792R、L792V和L792P外显子20突变；然而，对其不作限制)。
本发明的抗肿瘤剂包含(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8，9-二氢嘧啶并[5，4-b]吲哚嗪-8-基)丙烯酰胺(化合物(A))或其盐作为活性成分。化合物(A)由以下化学式表示。
[化学式1]
Figure BDA0003137069520000121
在下文中解释用于制备本发明的化合物的方法。
本发明的化合物A可以通过WO2015/025936A1中公开的制备方法、实施例中所述的方法等来制备。然而，本发明的化合物的制备方法不限于这些反应示例。
当本发明的化合物A具有例如光学异构体、立体异构体和互变异构体之类的异构体时，除非另有规定，否则任何异构体及其混合物都包括在本发明的化合物的范围内。例如，当本发明的化合物具有光学异构体时，除非另有规定，外消旋混合物和从外消旋混合物分离的光学异构体也包括在本发明的化合物的范围内。
化合物A的盐是指任何药学上可接受的盐；示例包括碱加成盐和酸加成盐。
碱加成盐的示例包括碱金属盐，例如钠盐和钾盐；碱土金属盐，如钙盐和镁盐；铵盐；以及有机胺盐，例如三甲胺盐、三乙胺盐、二环己胺盐、乙醇胺盐、二乙醇胺盐、三乙醇胺盐、普鲁卡因盐和N，N-二苄基乙二胺盐。
酸加成盐的示例包括无机酸盐，例如盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐和高氯酸盐；有机酸盐，如醋酸盐、甲酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、抗坏血酸盐和三氟乙酸盐；以及磺酸盐，如甲烷磺酸盐、异硫氰酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。
本发明的化合物或其盐也包含其前药。前药是指在体内生理条件下，可通过与酶、胃酸等反应转化为本发明的化合物或其盐的化合物，即可通过酶促氧化、水解、还原等方法转化为本发明的化合物或其盐的化合物；或可通过用胃酸等水解或类似方式转化为本发明的化合物或其盐的化合物。此外，前药可以是在生理条件下能转化为本发明的化合物或其盐的化合物”，例如以下中所述的那些：“Iyakuhin no Kaihatsu[Development ofPharmaceuticals]，”Vol.7，Molecular Design，published in 1990 by Hirokawa ShotenCo.，pp.163-198。
疾病描述
本发明中靶向的肿瘤的具体示例包括但不特别限于头颈癌、胃肠道癌(食道癌、胃癌、十二指肠癌、肝癌、胆管癌(例如，胆囊癌和胆管癌)、胰腺癌、结直肠癌(例如，结肠癌和直肠癌)等)、肺癌(例如，非小细胞肺癌、小细胞肺癌和间皮瘤)、乳腺癌、生殖道癌(卵巢癌、子宫癌(例如，宫颈癌和子宫内膜癌)等)、泌尿系统癌(例如，肾癌、膀胱癌、前列腺癌和睾丸肿瘤)，造血系统肿瘤(例如白血病、恶性淋巴瘤和多发性骨髓瘤)、骨肉瘤、软组织肉瘤、皮肤癌、脑瘤等。优选的示例包括肺癌、乳腺癌、头颈癌、脑瘤、子宫癌、胃肠道癌、造血肿瘤和皮肤癌。特别优选肺癌。
当本发明的化合物或其盐用作药物剂时，如果需要，可以添加药物载剂，从而根据预防和治疗目的形成合适的剂型。剂型的示例包括口服制剂、注射剂、栓剂、软膏、贴剂等。优选口服制剂。此类剂型可以通过本领域技术人员常规已知的方法形成。
作为药学上可接受的载剂，用作制备材料的各种常规的有机或无机载剂材料可作为赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂或着色剂掺和在固体制剂中；或者作为溶剂、增溶剂、悬浮剂、等渗剂、缓冲剂或舒缓剂掺和在液体制剂中。此外，如果需要，还可以使用药物制剂添加剂，例如防腐剂、抗氧化剂、着色剂、甜味剂和稳定剂。
口服固体制剂如下制备：在将赋形剂任选地与赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、味觉掩蔽剂或调味剂等一起添加到本发明的化合物中后，通过常用方法将所得混合物配制成片剂、包衣片、颗粒、粉末、胶囊等。
赋形剂的示例包括乳糖、蔗糖、D-甘露醇、葡萄糖、淀粉、碳酸钙、高岭土、微晶纤维素及硅酸酐。粘合剂的示例包括水、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、简单糖浆、液体葡萄糖、液体α-淀粉、液体明胶、D-甘露醇、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基淀粉、甲基纤维素、乙基纤维素、虫胶、磷酸钙、聚乙烯吡咯烷酮等。崩解剂的示例包括干淀粉、海藻酸钠、粉状琼脂、碳酸氢钠、碳酸钙、十二烷基硫酸钠、硬脂酸单甘油酯、乳糖等。润滑剂的示例包括纯化滑石粉、硬脂酸钠、硬脂酸镁、硼砂、聚乙二醇等。着色剂的示例包括氧化钛、氧化铁等。味觉掩蔽剂或调味剂的示例包括蔗糖、苦橙皮、柠檬酸、酒石酸等。
当制备用于口服的液体制剂时，可以向本发明的化合物中添加掩蔽剂、缓冲剂、稳定剂、调味剂等；所得混合物可以按照常用方法配制成口服液体制剂、糖浆、酏剂等。
当制备注射剂时，可以向本发明的化合物中添加pH调节剂、缓冲剂、稳定剂、等渗剂、局部麻醉剂等；混合物可以按照常用方法配制成皮下、肌内或静脉注射剂。
本文使用的pH调节剂和缓冲液的示例包括柠檬酸钠、乙酸钠和磷酸钠。稳定剂的示例包括焦亚硫酸钠、EDTA、巯基乙酸和硫代乳酸。局部麻醉剂的示例包括盐酸普鲁卡因和盐酸利多卡因。等渗剂的示例包括氯化钠、葡萄糖、D-甘露醇和甘油。
当制备栓剂时，可以将相关领域中已知的药学上可接受的载剂，例如聚乙二醇、羊毛脂、可可脂和脂肪酸甘油三酯添加到化合物A，并且在必要时可以将表面活性剂如吐温80(注册商标)添加到化合物A中，并且可根据常用方法将所得混合物配制成栓剂。
当制备软膏时，在必要时可以将常用的碱、稳定剂、润湿剂、防腐剂等掺入化合物A中；将所得混合物按常用方法混合配制成软膏。
碱的示例包括液体石蜡、白矿脂、白蜂蜡、辛基十二醇和石蜡。
防腐剂的示例包括对氧苯甲酸甲酯、对氧苯甲酸乙酯和对氧苯甲酸丙酯。
当制备贴剂时，可根据常用方法将如上所述的软膏、乳膏、凝胶、糊剂等涂覆到常用基材上。
基材的示例包括含有棉、短纤维或化学纤维的机织织物或非织造织物；也可以使用软氯乙烯、聚乙烯、聚氨酯等的薄膜或泡沫片。
要被加入到每一个此类单位剂型中的化合物A的量取决于对其施用该化合物的患者的状况、其剂型等。一般而言，在口服剂的情况下，化合物的量优选为每单位剂型中有0.05mg到1000mg。在注射剂的情况下，化合物的量优选为每单位剂型中有0.01mg到500mg；在栓剂的情况下，化合物的量优选为每单位剂型中有1至1000mg。
此外，此类剂型的药物的每日剂量取决于患者的状况、体重、年龄、性别等，不能一概而论。通常，本发明化合物的成人(体重：50Kg)的每日剂量通常可为0.05至5000mg，优选0.1至1000mg；并且优选以每天一剂，或以两到三个分开剂量施用。
本发明还提供治疗恶性肿瘤患者的方法，包括以下步骤：向表达具有对外显子18和/或外显子20治疗有抗性的突变的EGFR的恶性肿瘤患者施用化合物A或其盐。
本发明还提供了用于治疗表达具有对外显子18和/或外显子20治疗有抗性的突变的EGFR的恶性肿瘤患者的化合物A或其盐。
本发明还提供了化合物A或其盐用于治疗表达具有对外显子18和/或外显子20治疗有抗性的突变的EGFR的恶性肿瘤患者的用途。
本发明还提供了化合物A或其盐用于制备用于治疗表达具有对外显子18和/或外显子20治疗有抗性的突变的EGFR的恶性肿瘤患者的药物剂的用途。
本发明还提供了用于预测在恶性肿瘤患者中使用包含化合物A或其盐作为活性成分的抗肿瘤剂进行化疗的治疗效果的方法，该方法包括以下步骤(1)和(2)：
(1)检测在从患者获得的生物样品中所含的EGFR基因是否存在突变的步骤；和
(2)当步骤(1)中的检测结果发现EGFR基因具有对外显子18和/或外显子20治疗有抗性的突变时，预测该化疗极有可能对患者显示出足够的治疗效果的步骤；
本发明还提供了用于治疗恶性肿瘤患者的方法，包括以下步骤(1)至(3)：
(1)检测在从患者获得的生物样品中所含的EGFR基因是否存在突变的步骤；和
(2)当步骤(1)中的检测结果发现EGFR基因具有对外显子18和/或外显子20治疗有抗性的突变时，预测使用包含(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8,9-二氢嘧啶并[5,4-b]吲哚嗪-8-基)丙烯酰胺或其盐作为活性成分的抗肿瘤剂进行的化疗极有可能对患者显示出足够的治疗效果的步骤；
(3)对恶性肿瘤患者施用(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8，9-二氢嘧啶并[5，4-b]吲哚嗪-8-基)丙烯酰胺或其盐的步骤，所述恶性肿瘤患者已经在步骤(2)中被预测极有可能对使用包含(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8，9-二氢嘧啶并[5，4-b]吲哚嗪-8-基)丙烯酰胺或其盐作为活性成分的抗肿瘤剂进行的化疗有充分应答。
EGFR基因的基础序列是公众已知的。cDNA的基础序列的GenBank登录号是NM_005228.4。
”治疗效果”可通过肿瘤收缩效应、抑制复发效应、延长寿命效应等来评价。抑制复发的效果可表现为不复发期的延长程度或复发率的改善程度；并且寿命延长效应可以表示为整个生存时间的程度或无进展生存的中位数的延长程度等。使用包含化合物A或其盐作为活性成分的抗肿瘤剂进行的化疗的“足够的治疗效果”意味着通过施用包含化合物A或其盐作为活性成分的抗肿瘤剂获得优越的治疗效果，例如与不给药相比，延长生存时间、抑制复发等。
实施例
下文中参考以下测试例更详细地描述本发明。然而，本发明不限于此实施例(测试例)。
测试例1
体外药效测试
使用HEK293细胞进行的突变型EGFR强制表达系统中细胞内磷酸化的评价结果(抑 制活性)
化合物的细胞内靶抑制活性基于以下指标进行评估：使用Jump-in(商标)Grip(商标)HEK293细胞(Thermo Fisher Scientific Inc.)(以下也称为”HEK293细胞”)的突变型EGFR强制表达系统中的细胞内EGFR磷酸化。HEK293细胞保存在含GlutaMAX(商标)-I的D-MEM(高葡萄糖)(Thermo Fisher Scientific Inc.)中，其包含10％透析FBS。将HEK293细胞接种于96孔平底微孔板的每个孔中，使每个孔的细胞计数为10,000，并在含5％CO2气体的培养箱中于37℃温育过夜。随后，将编码人EGFR基因(Del E746-A750(下文中也称为“Ex19del”)、Ex19del+T790M(符号“+”表示两种突变均包含)、Ex19del+T790M+L718Q、Ex19del+T790M+L792H、Ex19del+T790M+L792F、Ex19del+T790M+L792Y、L858R、L858R+T790M、L858R+T790M+L718Q、L858R+T790M+L792H、L858R+T790M+L792F或L858R+T790M+L792Y)的pcDNATM 6.2/V5-DEST载体与Opti-MEM(商标)I(Thermo Fisher ScientificInc.)一起使用ViaFect(商标)转染试剂(Promega Corporation)导入。将细胞再次在含5％CO2气体的培养箱中于37℃温育过夜。第二天，将化合物A、厄洛替尼、阿法替尼(afatinib)和奥希替尼(osimertinib)(厄洛替尼(erlotinib)，阿法替尼(afatinib)和奥希替尼(osimertinib)可以在下文中各自称为“对比化合物”)独立地溶解在DMSO中，并且用DMSO或培养基稀释。随后将溶液独立地添加到细胞培养板的每个孔中，并且将细胞在含5％CO2气体的培养箱中于37℃温育6小时。在温育之后，用20％中性缓冲福尔马林(Wako PureChemical Industries,Ltd.)固定细胞，并用Odyssey(商标)封闭缓冲液(PBS)(M&STechnoSystems Inc.)封闭。然后将细胞与一抗(EGFR抗体混合物#AHR5062(Thermo FisherScientific Inc.)和磷酸化EGFR受体(Tyr1068)抗体#2234L(CST))反应，用Odyssey(商标)阻断缓冲液(PBS)稀释至1/200，并使细胞在4℃静置过夜。第二天，将细胞与二抗(IRDye800CW Goat aRabbit#926-32211和IRDye 680RD Goat aMouse#926-68070(M&STechnoSystems Inc.)反应，用Odyssey(商标)阻断缓冲液(PBS)稀释至1/800，并使细胞在室温静置1小时。荧光强度(以下也称为“FI”)使用Odyssey(商标)CLx红外成像系统(LI-CORBioscience)在800nm和700nm的荧光波长下检测。
从在800nm或700nm的荧光波长下检测到的FI中减去不含一抗的孔的FI得到的值被称为FI(800，EGFR)-空白(对于800nm)和FI(700，p-EGFR)-空白(对于700nm)。将通过用每个孔的FI(700，p-EGFR)-空白除以FI(800，EGFR)-空白得到的值确定为FI(p-EGFR/EGFR)。使用以下公式计算磷酸化EGFR率，以确定EGFR被磷酸化50％的试验化合物浓度(IC50)(μM))。表1说明了结果。
磷酸化EGFR率(％)＝T/C×100
T：添加测试化合物的孔的FI(p-EGFR/EGFR)。
C：未添加测试化合物的孔的FI(p-EGFR/EGFR)。
由表1可知，化合物A对含有L718Q和L792X的复合突变型EGFR的细胞内磷酸化具有高抑制活性；其活性高于厄洛替尼(erlotinib)、阿法替尼(afatinib)和奥西替尼(osimertinib)。
[表1]
Figure BDA0003137069520000181
序列表
<110> TAIHO PHARMACEUTICAL CO., LTD.
<120> 对L718和/或L792突变型治疗有耐药性的EGFR抑制剂
<130> P19-261WO
<150> JP 2018-247131
<151> 2018-12-28
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1210
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala
1 5 10 15
Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu Glu Glu Lys Lys Val Cys Gln
20 25 30
Gly Thr Ser Asn Lys Leu Thr Gln Leu Gly Thr Phe Glu Asp His Phe
35 40 45
Leu Ser Leu Gln Arg Met Phe Asn Asn Cys Glu Val Val Leu Gly Asn
50 55 60
Leu Glu Ile Thr Tyr Val Gln Arg Asn Tyr Asp Leu Ser Phe Leu Lys
65 70 75 80
Thr Ile Gln Glu Val Ala Gly Tyr Val Leu Ile Ala Leu Asn Thr Val
85 90 95
Glu Arg Ile Pro Leu Glu Asn Leu Gln Ile Ile Arg Gly Asn Met Tyr
100 105 110
Tyr Glu Asn Ser Tyr Ala Leu Ala Val Leu Ser Asn Tyr Asp Ala Asn
115 120 125
Lys Thr Gly Leu Lys Glu Leu Pro Met Arg Asn Leu Gln Glu Ile Leu
130 135 140
His Gly Ala Val Arg Phe Ser Asn Asn Pro Ala Leu Cys Asn Val Glu
145 150 155 160
Ser Ile Gln Trp Arg Asp Ile Val Ser Ser Asp Phe Leu Ser Asn Met
165 170 175
Ser Met Asp Phe Gln Asn His Leu Gly Ser Cys Gln Lys Cys Asp Pro
180 185 190
Ser Cys Pro Asn Gly Ser Cys Trp Gly Ala Gly Glu Glu Asn Cys Gln
195 200 205
Lys Leu Thr Lys Ile Ile Cys Ala Gln Gln Cys Ser Gly Arg Cys Arg
210 215 220
Gly Lys Ser Pro Ser Asp Cys Cys His Asn Gln Cys Ala Ala Gly Cys
225 230 235 240
Thr Gly Pro Arg Glu Ser Asp Cys Leu Val Cys Arg Lys Phe Arg Asp
245 250 255
Glu Ala Thr Cys Lys Asp Thr Cys Pro Pro Leu Met Leu Tyr Asn Pro
260 265 270
Thr Thr Tyr Gln Met Asp Val Asn Pro Glu Gly Lys Tyr Ser Phe Gly
275 280 285
Ala Thr Cys Val Lys Lys Cys Pro Arg Asn Tyr Val Val Thr Asp His
290 295 300
Gly Ser Cys Val Arg Ala Cys Gly Ala Asp Ser Tyr Glu Met Glu Glu
305 310 315 320
Asp Gly Val Arg Lys Cys Lys Lys Cys Glu Gly Pro Cys Arg Lys Val
325 330 335
Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn
340 345 350
Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp
355 360 365
Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr
370 375 380
Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu
385 390 395 400
Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp
405 410 415
Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln
420 425 430
His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu
435 440 445
Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser
450 455 460
Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu
465 470 475 480
Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu
485 490 495
Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro
500 505 510
Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn
515 520 525
Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly
530 535 540
Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro
545 550 555 560
Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro
565 570 575
Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val
580 585 590
Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp
595 600 605
Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys
610 615 620
Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly
625 630 635 640
Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu
645 650 655
Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met Arg Arg Arg His
660 665 670
Ile Val Arg Lys Arg Thr Leu Arg Arg Leu Leu Gln Glu Arg Glu Leu
675 680 685
Val Glu Pro Leu Thr Pro Ser Gly Glu Ala Pro Asn Gln Ala Leu Leu
690 695 700
Arg Ile Leu Lys Glu Thr Glu Phe Lys Lys Ile Lys Val Leu Gly Ser
705 710 715 720
Gly Ala Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Leu Trp Ile Pro Glu Gly Glu
725 730 735
Lys Val Lys Ile Pro Val Ala Ile Lys Glu Leu Arg Glu Ala Thr Ser
740 745 750
Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Ser
755 760 765
Val Asp Asn Pro His Val Cys Arg Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser
770 775 780
Thr Val Gln Leu Ile Thr Gln Leu Met Pro Phe Gly Cys Leu Leu Asp
785 790 795 800
Tyr Val Arg Glu His Lys Asp Asn Ile Gly Ser Gln Tyr Leu Leu Asn
805 810 815
Trp Cys Val Gln Ile Ala Lys Gly Met Asn Tyr Leu Glu Asp Arg Arg
820 825 830
Leu Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Val Leu Val Lys Thr Pro
835 840 845
Gln His Val Lys Ile Thr Asp Phe Gly Leu Ala Lys Leu Leu Gly Ala
850 855 860
Glu Glu Lys Glu Tyr His Ala Glu Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp
865 870 875 880
Met Ala Leu Glu Ser Ile Leu His Arg Ile Tyr Thr His Gln Ser Asp
885 890 895
Val Trp Ser Tyr Gly Val Thr Val Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ser
900 905 910
Lys Pro Tyr Asp Gly Ile Pro Ala Ser Glu Ile Ser Ser Ile Leu Glu
915 920 925
Lys Gly Glu Arg Leu Pro Gln Pro Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr
930 935 940
Met Ile Met Val Lys Cys Trp Met Ile Asp Ala Asp Ser Arg Pro Lys
945 950 955 960
Phe Arg Glu Leu Ile Ile Glu Phe Ser Lys Met Ala Arg Asp Pro Gln
965 970 975
Arg Tyr Leu Val Ile Gln Gly Asp Glu Arg Met His Leu Pro Ser Pro
980 985 990
Thr Asp Ser Asn Phe Tyr Arg Ala Leu Met Asp Glu Glu Asp Met Asp
995 1000 1005
Asp Val Val Asp Ala Asp Glu Tyr Leu Ile Pro Gln Gln Gly Phe
1010 1015 1020
Phe Ser Ser Pro Ser Thr Ser Arg Thr Pro Leu Leu Ser Ser Leu
1025 1030 1035
Ser Ala Thr Ser Asn Asn Ser Thr Val Ala Cys Ile Asp Arg Asn
1040 1045 1050
Gly Leu Gln Ser Cys Pro Ile Lys Glu Asp Ser Phe Leu Gln Arg
1055 1060 1065
Tyr Ser Ser Asp Pro Thr Gly Ala Leu Thr Glu Asp Ser Ile Asp
1070 1075 1080
Asp Thr Phe Leu Pro Val Pro Glu Tyr Ile Asn Gln Ser Val Pro
1085 1090 1095
Lys Arg Pro Ala Gly Ser Val Gln Asn Pro Val Tyr His Asn Gln
1100 1105 1110
Pro Leu Asn Pro Ala Pro Ser Arg Asp Pro His Tyr Gln Asp Pro
1115 1120 1125
His Ser Thr Ala Val Gly Asn Pro Glu Tyr Leu Asn Thr Val Gln
1130 1135 1140
Pro Thr Cys Val Asn Ser Thr Phe Asp Ser Pro Ala His Trp Ala
1145 1150 1155
Gln Lys Gly Ser His Gln Ile Ser Leu Asp Asn Pro Asp Tyr Gln
1160 1165 1170
Gln Asp Phe Phe Pro Lys Glu Ala Lys Pro Asn Gly Ile Phe Lys
1175 1180 1185
Gly Ser Thr Ala Glu Asn Ala Glu Tyr Leu Arg Val Ala Pro Gln
1190 1195 1200
Ser Ser Glu Phe Ile Gly Ala
1205 1210

Claims (12)

1.用于治疗表达EGFR的恶性肿瘤患者的抗肿瘤剂，所述EGFR有至少一个选自下组的突变：外显子18中的L718X突变和外显子20中的L792X突变，其中X代表任意氨基酸残基，所述抗肿瘤剂包含(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8，9-二氢嘧啶并[5，4-b]吲哚嗪-8-基)丙烯酰胺(化合物(A))或其盐。
2.根据权利要求1的抗肿瘤剂，其中所述EGFR还具有至少一个选自下组的突变：外显子19缺失突变，L858R，L861Q，G719X，E709X，和外显子20插入突变。
3.根据权利要求的抗肿瘤剂2，其中所述EGFR还具有T790M突变。
4.根据权利要求1-3中任一项的抗肿瘤剂，其中所述L718X突变是L718Q突变。
5.根据权利要求1-4中任一项的抗肿瘤剂，其中所述L792X突变是L792H、L792F或L792Y。
6.用于治疗恶性肿瘤患者的方法，包括以下步骤：将(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8，9-二氢嘧啶并[5，4-b]吲哚嗪-8-基)丙烯酰胺或其盐施用给表达EGFR的恶性肿瘤患者，所述EGFR具有至少一个选自下组的突变：外显子18中的L718X突变和外显子20中的L792X突变。
7.(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8，9-二氢嘧啶并[5，4-b]吲哚嗪-8-基)丙烯酰胺或其盐，用于治疗表达EGFR的恶性肿瘤患者，所述EGFR具有至少一个选自下组的突变：外显子18中的L718X突变和外显子20中的L792X突变。
8.(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8，9-二氢嘧啶并[5，4-b]吲哚嗪-8-基)丙烯酰胺或其盐用于治疗表达EGFR的恶性肿瘤患者的用途，所述EGFR具有至少一个选自下组的突变：外显子18中的L718X突变和外显子20中的L792X突变。
9.(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8，9-二氢嘧啶并[5，4-b]吲哚嗪-8-基)丙烯酰胺或其盐用于制备用于治疗表达EGFR的恶性肿瘤患者的药物中的用途，所述EGFR具有至少一个选自下组的突变：外显子18中的L718X突变和外显子20中的L792X突变。
10.药物组合物，包含：(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8，9-二氢嘧啶并[5，4-b]吲哚嗪-8-基)丙烯酰胺或其盐和药学可接受的载剂，所述药物组合物用于治疗表达EGFR的恶性肿瘤患者，所述EGFR具有至少一个选自下组的突变：外显子18中的L718X突变和外显子20中的L792X突变，其中X代表任意氨基酸残基。
11.用于预测在恶性肿瘤患者中使用包含(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8，9-二氢嘧啶并[5，4-b]吲哚嗪-8-基)丙烯酰胺或其盐作为活性成分的抗肿瘤剂进行化疗的治疗效果的方法，所述方法包括以下步骤(1)和(2)：
(1)检测在从患者获得的生物样品中所含的EGFR基因是否存在突变的步骤；和
(2)当步骤(1)中的检测结果发现EGFR基因具有至少一个选自下组的突变：外显子18中的L718X突变和外显子20中的L792X突变的突变，其中X代表任意氨基酸残基时，预测化疗极有可能对患者显示出足够的治疗效果的步骤。
12.用于治疗恶性肿瘤患者的方法，包括以下步骤(1)至(3)：
(1)检测在从患者获得的生物样品中所含的EGFR基因是否存在突变的步骤；
(2)当步骤(1)中的检测结果发现EGFR基因具有至少一个选自下组的突变：外显子18中的L718X突变和外显子20中的L792X突变的突变，其中X代表任意氨基酸残基时，预测使用包含(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8，9-二氢嘧啶并[5，4-b]吲哚嗪-8-基)丙烯酰胺或其盐作为活性成分的化疗剂进行的化疗极有可能对患者显示出足够的治疗效果的步骤；
(3)对恶性肿瘤患者施用(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8，9-二氢嘧啶并[5，4-b]吲哚嗪-8-基)丙烯酰胺或其盐的步骤，所述恶性肿瘤患者已经在步骤(2)中被预测极有可能对使用包含(S)-N-(4-氨基-6-甲基-5-(喹啉-3-基)-8，9-二氢嘧啶并[5，4-b]吲哚嗪-8-基)丙烯酰胺或其盐作为活性成分的抗肿瘤剂进行的化疗有充分应答。
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