BR112021012687A2

BR112021012687A2 - Inibidor de egfr resistente a tratamento de mutante l718 e/ou l792

Info

Publication number: BR112021012687A2
Application number: BR112021012687-2A
Authority: BR
Inventors: Shinichi Hasako; Takao Uno
Original assignee: Taiho Pharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 2018-12-28
Filing date: 2019-12-27
Publication date: 2021-09-28
Also published as: ZA202104679B; JP2022522573A; MX2021007852A; EP3902548A1; CA3124750A1; KR20210110329A; SG11202106986VA; IL284330A; TW202038965A; US20220072000A1; JP7303303B2; AU2019417691A1; WO2020138400A1; CN113423403A

Abstract

inibidor de egfr resistente a tratamento de mutante l718 e/ou l792. a presente invenção refere-se a um agente antitumoral para o tratamento de um paciente com tumor maligno expressando egfr com pelo menos uma mutação selecionada do grupo que consiste na mutação l718x no éxon 18 e na mutação l792x no éxon 20, em que x representa um resíduo arbitrário de aminoácidos, o agente antitumoral compreendendo (s)-n-(4-amino-6-metil-5-(quinolina-3-il)-8,9-dihidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida (composto (a)) ou um sal deste.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "INIBIDOR DE EGFR RESISTENTE A TRATAMENTO DE MUTANTE L718 E/OU L792". Campo da Técnica

[001] A presente invenção refere-se a um agente antitumoral contra o câncer, compreendendo um receptor do fator de crescimento epidérmico mutante resistente ao tratamento de éxon 18 e/ou éxon 20 (a seguir designado "EGFR"). Antecedentes da invenção

[002] O EGFR é uma tirosina quinase do tipo receptor, exerce a sua função fisiológica em tecido normal, estando ligado ao fator de crescimento epidérmico (a seguir também designado por EGF), que é um ligante, e contribui para o crescimento e a inibição da apoptose em tecidos epiteliais (NPL 1). Além disso, a mutação somática do gene EGFR foi conhecida como gene causador de câncer; por exemplo, o EGFR, no qual os códons 746 a 750 são deletados no éxon 19 (a seguir designado "mutação de deleção do éxon 19") e o EGFR, no qual a leucina codificada pelo códon 858 no éxon 21 é mutada para a arginina (a seguir denominada "mutação L858R") induz constantemente a atividade da quinase independente do EGF, contribuindo para o crescimento e sobrevida das células cancerosas (NPL 2). Estas mutações são observadas, por exemplo, em 30 a 50% do câncer de pulmão de células não pequenas no Leste Asiático. As mutações são também observadas em cerca de 10% do câncer do pulmão de células não pequenas na Europa e nos Estados Unidos, sendo consideradas como uma das causas de cânceres (NPL 3).

[003] Por conseguinte, a investigação e o desenvolvimento do inibidor do EGFR como agente antitumoral foram ativamente realizados e introduzidos no tratamento de vários cânceres pulmonares positivos à mutação do EGFR (NPL 2 e NPL 4). Gefitinibe, erlotinibe e afatinibe foram usados como agentes terapêuticos contra cânceres de pulmão positivo para EGFR L858R mutante e mutante de deleção do éxon 19. A mutação de deleção do éxon 19 e a mutação de L858R representam 90% da mutação de EGFR. Além disso, a ocorrência de resistência adquirida no processo de tratamento com esses agentes foi conhecida, e 50% dela é causada pela mutação de resistência do EGFR, na qual o códon 790 do éxon 20 é alterado de treonina para metionina (a seguir também denominada "mutação T790M"). Para tratar cânceres pulmonares que tenham esta mutação, o osimertinibe tem sido usado como um agente terapêutico. Assim, os tratamentos que utilizam inibidores do EGFR estão no processo de ser estabelecido para pacientes com câncer de pulmão com grandes mutações do EGFR. Lista de referências Literatura de patente

[004] PTL 1: WO2015/175632A1

[005] PTL 2: WO2015/025936A1 Literatura de não patente

[006] NPL 1: Nat. Rev. Cancer, vol. 6, pp. 803-812 (2006)

[007] NPL 2: Nature Medicine, vol. 19, pp. 1389-1400 (2013)

[008] NPL 3: Nat. Rev. Cancer, vol. 7, pp. 169-181 (2007)

[009] NPL 4: Clin. Cancer Res., vol. 24, pp. 3097-3107 (2018) Sumário da invenção Problema técnico

[0010] Tratamentos que utilizam inibidores do EGFR estão no processo de ser estabelecido para pacientes com câncer de pulmão com grandes mutações do EGFR. Em contraste, a presença de pacientes resistentes ao tratamento com osimertinibe também tem sido conhecida. É relatado que algumas das suas causas são mutações do gene do EGFR (NPL 4). Foi confirmado que, por exemplo, o câncer de pulmão tem, além da mutação da deleção do éxon 19 ou da mutação

L858R, ambas mutações de novo, e a mutação T790M, que é a mutação de resistência adquirida, a mutação pontual em que a leucina codificada pelo códon 718 no éxon 18 é substituída por um aminoácido arbitrário (a seguir também designado por "mutação L718X") ou mutação pontual em que a leucina codificada pelo códon 792 no éxon 20 é substituída por um aminoácido arbitrário (a seguir denominada "mutação L792X"), é resistente ao tratamento com osimertinibe. Propõe-se que a substituição do aminoácido causada pela mutação L718X ou pela mutação L792X induz um impedimento estérico e diminuição da ligação hidrofóbica, impedindo assim a ligação do EGFR ao osimertinibe (NPL 4). Assim, há uma demanda para o desenvolvimento de inibidores com alta atividade inibitória contra o EGFR, com mutação composta de mutação ativa de novo, mutação de resistência adquirida T790M e mutação L718X ou mutação L792X.

[0011] Por conseguinte, assume-se que o desenvolvimento de medicamentos com elevada atividade inibitória contra o EGFR tendo uma mutação composta contendo L718X ou L792X torne possível a exposição de efeitos antitumorais contra o câncer do pulmão resistente ao tratamento com osimertinibe, e espera-se que contribua para o prolongamento da vida e para a melhoria da qualidade de vida dos pacientes com câncer positivos para o EGFR mutante, para os quais não tenha sido estabelecida qualquer terapia. Além disso, espera-se que um medicamento com elevada atividade inibitória no que diz respeito ao T790M, que é uma mutação de resistência adquirida contra tratamentos que usam inibidores do EGFR, reduza a frequência de expressão da resistência adquirida durante os tratamentos que usam inibidores do EGFR contra o EGFR mutante do éxon 19 ou éxon 21, que é uma mutação de novo; e espera-se, portanto, que contribua para o prolongamento da vida dos pacientes oncológicos.

[0012] Nessas circunstâncias, um objetivo da presente invenção é fornecer um inibidor que tenha alta atividade inibitória contra o EGFR mutante L718 e L792, que é uma mutação resistente ao tratamento com osimertinibe, e para o qual os efeitos terapêuticos dos inibidores do EGFR anteriormente conhecidos são insuficientes. Solução para o problema

[0013] Os inventores da presente invenção conduziram uma pesquisa extensa, e descobriram que os inibidores do EGFR convencionalmente introduzidos no tratamento têm baixa atividade inibitória contra o EGFR mutante composto contendo mutações L718 e L792, além da mutação ativa e da mutação de resistência adquirida T790M. Além disso, os inventores conduziram uma extensa pesquisa a partir da comparação das estruturas de co-cristais de compostos, e também descobriram que o composto da presente invenção exibe excelente atividade inibitória contra o EGFR com mutações L718 e LLE18, e ainda exibe excelente atividade inibitória contra o EGFR mutante composto acima. Com base nesses achados, os inventores têm realizado a presente invenção.

[0014] A presente invenção abrange as seguintes modalidades.

[0015] Item 1.

[0016] Um agente antitumoral para o tratamento de um paciente com tumor maligno expressando EGFR com pelo menos uma mutação selecionada do grupo que consiste na mutação L718X no éxon 18 e na mutação L792X no éxon 20, em que X representa um resíduo arbitrário de aminoácidos, o agente antitumoral compreendendo (S)-N-(4-amino- 6-metil-5-(quinolina-3-il)-8,9-dihidropirimido[5,4-b]indolizin-8- il)acrilamida (Composto (A)) ou um sal deste.

[0017] Item 2.

[0018] O agente antitumoral de acordo com o item 1, no qual o EGFR tem ainda pelo menos uma mutação selecionada do grupo consistindo em mutação de deleção do éxon 19, L858R, L861Q, G719X,

E709X, e mutação de inserção do éxon 20.

[0019] Item 3.

[0020] O agente antitumoral de acordo com o item 2, em que o EGFR tem ainda mutação T790M.

[0021] Item 4.

[0022] O agente antitumoral de acordo com qualquer um dos itens 1 a 3, em que a mutação L718X é a mutação L718Q.

[0023] Item 5.

[0024] O agente antitumoral de acordo com qualquer um dos itens 1 a 4, em que a mutação de L792X é L792H, L792F ou L792Y.

[0025] Item 6.

[0026] Método de tratamento de um paciente com tumor maligno, compreendendo a etapa de administração do (S)-N-(4-amino-6-metil-5- (quinolin-3-il)-8,9-dihidropirimido [5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida ou um sal deste para um paciente com tumor maligno expressando EGFR que tenha pelo menos uma mutação selecionada do grupo que consiste em mutação L718X no éxon 18 e mutação L792X no éxon 20.

[0027] Item 7.

[0028] (S)-N-(4-amino-6-metil-5-(quinolin-3-il)-8,9-dihidropirimido [5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida ou um sal deste para tratar um paciente com tumor maligno expressando EGFR com pelo menos uma mutação selecionada do grupo consistindo em mutação L718X no éxon 18 e mutação L792X no éxon 20.

[0029] Item 8.

[0030] Uso do (S)-N-(4-amino-6-metil-5-(quinolin-3-il)-8,9- dihidropirimido [5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida ou um sal deste para um paciente com tumor maligno expressando EGFR que tenha pelo menos uma mutação selecionada do grupo que consiste em mutação L718X no éxon 18 e mutação L792X no éxon 20.

[0031] Item 9.

[0032] Uso do (S)-N-(4-amino-6-metil-5-(quinolin-3-il)-8,9- dihidropirimido [5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida ou um sal deste para a produção de um agente farmacêutico para tratar um paciente com tumor maligno expressando EGFR com pelo menos uma mutação selecionada do grupo consistindo em mutação L718X no éxon 18 e mutação L792X no éxon 20.

[0033] Item 10.

[0034] Uma composição farmacêutica compreendendo (S)-N-(4- amino-6-metil-5-(quinolin-3-il)-8,9-dihidropirimido [5,4-b]indolizin-8- il)acrilamida ou um sal deste e um carreador farmaceuticamente aceitável para tratar um paciente com tumor maligno expressando EGFR que tenha pelo menos uma mutação selecionada do grupo que consiste em mutação L718X no éxon 18 e mutação L792X no éxon 20, em que X representa um resíduo de aminoácidos arbitrário.

[0035] Item 11.

[0036] Um método para predizer os efeitos terapêuticos da quimioterapia usando um agente antitumoral compreendendo, como ingrediente ativo, (S)-N-(4-amino-6-metil-5-(quinolin-3-il)-8,9- dihidropirimido [5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida ou sal deste em um paciente com tumor maligno, o método compreendendo as etapas (1) e (2) abaixo:

[0037] (1) uma etapa para detectar a presença ou ausência de mutação do gene EGFR contido em uma amostra biológica obtida do paciente; e

[0038] (2) uma etapa para prever que a quimioterapia é altamente susceptível de apresentar efeitos terapêuticos suficientes em relação ao paciente quando os resultados da detecção na etapa (1) encontrarem que o gene EGFR tem pelo menos uma mutação selecionada do grupo consistindo em mutação L718X no éxon 18 e a mutação L792X no éxon 20, em que X representa um resíduo de aminoácidos arbitrário.

[0039] Item 12.

[0040] Um método para tratar um paciente com tumor maligno, compreendendo as etapas (1) a (3) abaixo:

[0041] (1) uma etapa para detectar a presença ou ausência de mutação do gene EGFR contido em uma amostra biológica obtida do paciente;

[0042] (2) uma etapa para prever que a quimioterapia usando um agente antitumoral compreendendo, como ingrediente ativo, (S)-N-(4- amino-6-metil-5-(quinolin-3-il)-8,9-dihidropirimido [5,4-b]indolizin-8- il)acrilamida ou um sal deste é altamente susceptível de apresentar efeitos terapêuticos suficientes em relação ao paciente quando os resultados da detecção na etapa (1) encontrarem que o gene EGFR tem pelo menos uma mutação selecionada do grupo consistindo em mutação L718X no éxon 18 e a mutação L792X no éxon 20, em que X representa um resíduo de aminoácidos arbitrário; e

[0043] (3) uma etapa de administração de (S)-N-(4-amino-6-metil- 5-(quinolin-3-il)-8,9-dihidropirimido [5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida ou um sal deste a um paciente que foi previsto com alta probabilidade de responder suficientemente à quimioterapia usando um agente antitumoral compreendendo, como um ingrediente ativo,(S)-N-(4- amino-6-metil-5-(quinolin-3-il)-8,9-dihidropirimido [5,4-b]indolizin-8- il)acrilamida ou um sal deste, na etapa (2). Efeitos vantajosos da invenção

[0044] O agente antitumoral da presente invenção exerce alta atividade inibitória contra o EGFR com mutações L718 e L792. Portanto, o agente antitumoral da presente invenção é útil para fornecer um agente antitumoral que exerce efeitos terapêuticos superiores para um paciente com tumor maligno expressando EGFR com mutações L718 e L792.

[0045] A presente invenção também é útil em termos de fornecer um método para tratar um paciente com tumor maligno expressando EGFR com mutações L718 e L792.

[0046] A atividade inibitória do EGFR dos inibidores convencionais do EGFR foi notavelmente reduzida sob a presença da mutação T790M, que é a mutação de resistência adquirida na região do éxon 20, ou sob a presença de mutações L718 e L792. Assim, foi difícil exercer efeitos terapêuticos suficientes. Em contrapartida, o agente antitumoral da presente invenção tem uma atividade inibitória elevada contra o EGFR com mutação L718 e/ou L792, bem como com mutação ativa, como a mutação Ex19del ou L858R; assim, o agente antitumoral da presente invenção pode exercer efeitos terapêuticos superiores para um paciente com tumor maligno expressando EGFR com essas mutações complexas. O agente antitumoral da presente invenção tem alta atividade inibitória contra o EGFR com mutação L718 e/ou L792, embora tenha mutação T790M além das mutações acima; assim, o agente antitumoral da presente invenção pode exercer efeitos terapêuticos superiores para um paciente com tumor maligno expressando EGFR complexamente tendo essas mutações.

[0047] Além disso, o agente antitumoral da presente invenção também é útil para reduzir a frequência de expressão da resistência adquirida durante os tratamentos que usam inibidores de EGFR contra o EGFR mutante de éxon 18 ou o éxon 21, que é a mutação de novo, devido à sua elevada atividade inibitória contra o EGFR mutante de éxon 18 e éxon 20 resistente ao tratamento, mesmo sob a presença da mutação T790M, que é a mutação de resistência adquirida na região do éxon 20. Breve descrição dos desenhos

[0048] A Fig. 1 ilustra os resultados da avaliação da fosforilação (atividade inibitória) em um sistema de expressão forçada de EGFR mutante, usando células HEK293.

Descrição das modalidades

[0049] Os exemplos preferíveis de várias definições no escopo da presente invenção usadas nesta especificação são explicados em detalhe abaixo.

[0050] Neste relatório descritivo, "EGFR" refere-se a uma proteína receptora do fator de crescimento epidérmico humano e é também referido como ErbB-1 ou HER1.

[0051] Neste relatório descritivo, "EGFR do tipo selvagem" refere- se ao EGFR livre de mutação somática, que é uma proteína compreendendo a sequência de aminoácidos representada pela SEQ ID NO: 1 (Genbank, nº de acesso: NP_005219.2).

[0052] Neste relatório descritivo, "éxon 18" refere-se à região 688- 728 na sequência de aminoácidos do EGFR do tipo selvagem (SEQ ID NO: 1).

[0053] Neste relatório descritivo, "mutação resistente ao tratamento com éxon 18" refere-se à mutação pontual ou à mutação de deleção no aminoácido na região do éxon 18 do EGFR do tipo selvagem (SEQ ID NO: 1). A mutação preferível resistente ao tratamento com éxon 18 é a mutação pontual com 1 substituição de aminoácidos na região do éxon

18. Mais preferivelmente, a mutação resistente ao tratamento com éxon 18 é L718X (X representa, entre os aminoácidos que constituem uma proteína codificada por informação genética, um resíduo de aminoácidos arbitrário sem ser a leucina), que é a mutação pontual em que a leucina codificada por códon 718 do éxon 18 é substituída por um aminoácido arbitrário. Mais especificamente, exemplos preferíveis de L718X incluem L718Q, que é a mutação pontual em que a leucina codificada pelo códon 718 na região do éxon 18 é substituída pela glutamina; e L718V, que é a mutação pontual em que a leucina codificada pelo códon 718 é substituída pela valina.

[0054] Neste relatório descritivo, "mutação ativa do éxon 18" refere-

se à mutação pontual ou à mutação de deleção no aminoácido na região do éxon 18 do EGFR do tipo selvagem (SEQ ID NO: 1). A mutação ativa do éxon 18 preferível é a mutação pontual com 1 substituição de aminoácidos na região do éxon 18. De preferência, a mutação ativa do éxon 18 é E709X, que é a mutação pontual em que o ácido glutâmico codificado pelo códon 709 do éxon 18 é substituído por um aminoácido arbitrário; ou G719X, que é a mutação pontual em que a glicina codificada pelo códon 719 do éxon 18 é substituída por um aminoácido arbitrário. Mais especificamente, exemplos preferíveis de E709X incluem E709K, que é a mutação pontual em que o ácido glutâmico codificado pelo códon 709 na região do éxon 18 é substituída pela lisina; e E709A, que é a mutação pontual em que o ácido glutâmico codificado pelo códon 709 é substituído pela alanina. Os exemplos preferíveis do G719X incluem o G719A, que é a mutação pontual na qual a glicina codificada pelo códon 719 na região do éxon 18 é substituída pela alanina; o G719S, que é a mutação pontual na qual a glicina codificada pelo códon 719 na região do éxon 18 é substituída pela serina; e G719C, que é a mutação pontual em que a glicina codificada pelo códon 719 na região do éxon 18 é substituída pela cisteína.

[0055] Na presente invenção, "éxon 20" refere-se à região 824-875 na sequência de aminoácidos do EGFR do tipo selvagem (SEQ ID NO: 1).

[0056] Neste relatório descritivo, "mutação resistente ao tratamento com éxon 20" refere-se à mutação pontual no aminoácido na região do éxon 20 do EGFR do tipo selvagem (SEQ ID NO: 1). A mutação preferível resistente ao tratamento com éxon 20 é a mutação pontual com 1 substituição de aminoácidos na região do éxon 20. Mais preferivelmente, a mutação resistente ao tratamento com éxon 20 é L792X (X representa, entre os aminoácidos que constituem uma proteína codificada por informação genética, um resíduo de aminoácidos arbitrário sem ser a leucina), que é a mutação pontual em que a leucina codificada pelo códon 792 na região do éxon 20 é substituída por um aminoácido arbitrário. Exemplos específicos incluem o L792H, que é a mutação pontual na qual a leucina codificada pelo códon 792 na região do éxon 20 é substituída pela histidina; o L792F, que é a mutação pontual na qual a leucina codificada pelo códon 792 é substituída pela fenilalanina; L792Y, que é a mutação pontual na qual a leucina codificada pelo códon 792 é substituída pela tirosina; L792R, que é a mutação pontual na qual a leucina codificada pelo códon 792 é substituída por arginina; L792V, que é a mutação pontual na qual a leucina codificada pelo códon 792 é substituída por valina; e L792P, que é a mutação pontual na qual a leucina codificada pelo códon 792 é substituída pela prolina. Entre estes, são preferíveis os L792F, L792H e L792Y.

[0057] Neste relatório descritivo, "mutação de inserção do éxon 20" refere-se à mutação com inserção de um ou mais aminoácidos (de preferência 1 a 7, com mais preferência 1 a 4) na região do éxon 20 do EGFR (sequência de aminoácidos 761 a 823 na SEQ ID NO: 1). Exemplos preferíveis incluem mutação com inserção de sequência de aminoácidos FQEA (fenilalanina, glutamina, ácido glutâmico e alanina sequencialmente do lado N-terminal) entre 763 alanina e 764 tirosina na região do éxon 20 (A763_Y764insFQEA), mutação com inserção de sequência de aminoácidos ASV (alanina, serina e valina sequencialmente a partir do lado do N-terminal) entre 769 valina e 770 ácido asparágico na região do éxon 20 (V769_D770insASV), mutação com inserção de sequência de aminoácidos SVD (serina, valina e ácido asparágico sequencialmente do lado N-terminal) entre 770 ácido asparágico e 771 asparagina na região do éxon 20 (D770_N771insSVD), mutação com inserção de sequência de aminoácidos NPG (asparagina, prolina e glicina sequencialmente do lado N-terminal) entre 770 ácido aspargo e 771 asparagina na região do éxon 20 (D770_N771insNPG), mutação com inserção de aminoácido G (glicina) entre 770 ácido asparágico e 771 asparagina na região do éxon 20 (D770_N771insG), mutação com inserção de sequência de aminoácidos GY (glicina e tirosina sequencialmente a partir do N- terminal) após a deleção de 770 ácido asparágico na região do éxon 20 (D770>GY), mutação com inserção de aminoácido N (asparagina) entre 771 asparagina e 772 prolina na região do éxon 20 (N771_P772insN), mutação com inserção de sequência de aminoácidos PR (prolina e arginina sequencialmente a partir do lado N-terminal) entre 772 prolina e 773 histidina na região do éxon 20 (P772_R773insPR), mutação com inserção da sequência de aminoácidos NPH (asparagina, prolina e histidina sequencialmente a partir do lado N-terminal) entre 773 histidina e 774 valina na região do éxon 20 (H773_V774insPH), mutação com inserção da sequência de aminoácido PH (prolina e histidina sequencialmente a partir do lado N-terminal) entre 773 histidina e 774 valina na região do éxon 20 (H773_V774insPH), mutação com inserção da sequência de aminoácidos AH (alanina e histidina sequencialmente a partir do lado N-terminal) entre 773 histidina e 774 valina na região do éxon 20 (H773_V774insAH), mutação com inserção de aminoácido H (histidina) entre 773 histidina e 774 valina na região do éxon 20 (H773_V774insH), mutação com inserção de sequência de aminoácidos HV (histidina e valina sequencialmente a partir do lado N-terminal) entre 774 valina e 775 cisteína na região do éxon 20 (V774_C77ins4HV), mutação com inserção da sequência de aminoácidos EAFQ (ácido glutâmico, alanina, fenilalanina e glutamina sequencialmente do lado do N-terminal) entre 761 alanina e 762 ácido glutâmico na região do éxon 20 (A761_E762insEAFQ), e assim por diante.

Mais exemplos preferíveis incluem mutação com inserção de sequência de aminoácidos ASV (alanina, serina e valina sequencialmente a partir do lado N-terminal) entre 769 valina e 770 ácido asparágico na região do éxon 20 (V769_D770insASV), mutação com inserção de sequência de aminoácidos SVD (serina, valina e ácido asparágico sequencialmente do lado N-terminal) entre 770 ácido asparágico e 771 asparagina na região do éxon 20 (D770_N771insSVD), mutação com inserção de aminoácido G (glicina) entre 770 ácido asparágico e 771 asparagina na região do éxon 20 (D770_N771insG), mutação com inserção de sequência de aminoácidos NPH (asparagina, prolina e histidina sequencialmente a partir do lado N-terminal) entre 773 histidina e 774 valina na região do éxon 20 (H773_V774insNPH), e mutação com inserção da sequência de aminoácidos PH (prolina e histidina sequencialmente a partir do lado N-terminal) entre 773 histidina e 774 valina na região do éxon 20 (H773_VinsPH). Exemplos particularmente preferíveis incluem mutação com inserção de sequência de aminoácidos FQEA (fenilalanina, glutamina, ácido glutâmico e alanina sequencialmente do lado N-terminal) entre 763 alanina e 764 tirosina na região do éxon 20 (A763_Y764insFQEA), mutação com inserção de sequência de aminoácidos ASV (alanina, serina e valina sequencialmente a partir do lado N-terminal) entre 769 valina e 770 ácido asparágico na região do éxon 20 (V769_D770insASV), mutação com inserção de sequência de aminoácidos SVD (serina, valina e ácido asparágico sequencialmente a partir do lado N-terminal) entre 770 ácido asparégico e 771 asparagina na região do éxon 20 (D770_N771insSVD), mutação com inserção de aminoácido G (glicina) entre 770 ácido asparágico e 771 asparagina na região do éxon 20 (D770_N771insG), mutação com inserção de sequência de aminoácidos NPH (asparagina, prolina e histidina sequencialmente a partir do lado N-terminal) entre 773 histidina e 774 valina na região do éxon 20 (H773_V774inchsNPH), mutação com inserção da sequência de aminoácidos PH (prolina e histidina sequencialmente a partir do lado

N-terminal) entre 773 histidina e 774 valina na região do éxon 20 (H773_V774insPH), e assim por diante

[0058] Na presente invenção, "éxon 21" refere-se à região 824-875 na sequência de aminoácidos do EGFR do tipo selvagem (SEQ ID NO: 1).

[0059] Neste relatório descritivo, "mutação ativa do éxon 21" refere- se à mutação pontual no aminoácido na região do éxon 21 do EGFR do tipo selvagem (SEQ ID NO: 1). A mutação ativa do éxon 21 preferível é a mutação pontual com 1 substituição de aminoácidos na região do éxon

21. Com mais preferência, a mutação ativa do éxon 21 é L858X, que é a mutação pontual em que a leucina codificada pelo códon 858 na região do éxon 21 é substituída por um aminoácido arbitrário; ou L861X, que é a mutação pontual em que a glicina codificada pelo códon 861 na região do éxon 21 é substituída por um aminoácido arbitrário (X representa, entre os aminoácidos que constituem uma proteína codificada por informação genética, um resíduo de aminoácidos arbitrário sem ser a leucina). Mais especificamente, exemplos preferíveis incluem L858R, que é a mutação pontual em que a leucina codificada pelo códon 858 na região do éxon 21 é mutada para arginina; e L861Q, que é a mutação pontual em que a leucina codificada pelo códon 861 na região do éxon 21 é substituída pela glutamina.

[0060] Na presente invenção, "mutação resistente ao tratamento do éxon 18 e/ou éxon 20 " abrange "mutação resistente ao tratamento do éxon 18", "mutação resistente ao tratamento do éxon 20", "mutação resistente ao tratamento do éxon 18 e éxon 20".

[0061] Na presente invenção, a "mutação pontual" refere-se à mutação que provoca a substituição, inserção ou deleção de um ou mais resíduos de aminoácidos (por exemplo, cerca de 1 a 10, de preferência cerca de 1 a 5, com mais preferência cerca de 1, 2 ou 3); e pode incluir a mutação de inserção e/ou deleção na estrutura como ácido nucleico.

[0062] "EGFR com mutação resistente ao tratamento do éxon 18 e/ou éxon 20 " abrange "EGFR com mutação resistente ao tratamento do éxon 18", "EGFR com mutação resistente ao tratamento do éxon 20" e "EGFR com mutação resistente ao tratamento do éxon 18 e éxon 21".

[0063] Neste relatório descritivo, "EGFR com mutação resistente ao tratamento do éxon 18" refere-se ao EGFR com pelo menos a mutação L718X acima no éxon 18 como a mutação resistente ao tratamento do éxon 18. O EGFR pode ainda ter uma mutação do éxon 18 que não o L718X, mas tem de preferência uma única mutação L718X como a mutação resistente ao tratamento do éxon 18. Além disso, o EGFR pode ter uma mutação que não seja a mutação resistente ao tratamento do éxon 18 (por exemplo, mutação de deleção do éxon 19, mutação L858R e mutação L790M).

[0064] Neste relatório descritivo, o "EGFR com mutação resistente ao tratamento do éxon 20" refere-se ao EGFR com pelo menos a mutação L792X acima no éxon 20 como a mutação resistente ao tratamento do éxon 20. O EGFR pode ter uma mutação que não a mutação L718X, mas tem de preferência uma única mutação L718X como a mutação 20 resistente ao tratamento do éxon. Além disso, o EGFR pode ter uma mutação que não seja a mutação resistente ao tratamento do éxon 20 (por exemplo, mutação de deleção do éxon 19, mutação L858R e mutação L790M).

[0065] Neste relatório descritivo, "éxon 19" refere-se à região 729- 823 na sequência de aminoácidos do EGFR do tipo selvagem (SEQ ID NO: 1).

[0066] Neste relatório descritivo, "mutação de deleção do éxon 19" refere-se à mutação com deleção de um ou mais aminoácidos na região do éxon 19 do EGFR do tipo selvagem (SEQ ID NO: 1). Além da deleção nesta região, a mutação com inserção de um ou mais aminoácidos arbitrários também é incluída. Exemplos de mutação de deleção do éxon 19 incluem mutação com deleção de 5 aminoácidos de 746 ácido glutâmico para 750 alanina na região do éxon 19 (Del E746-A750), mutação com inserção de serina após deleção de 7 aminoácidos de 747 leucina para 753 prolina na região do éxon 19 (Del 747-P753insS), mutação com deleção de 5 aminoácidos de 747 leucina a 751 treonina na região do éxon 19 (Del L747-T751), mutação com inserção de prolina após deleção de 4 aminoácidos de 747 leucina para 750 alanina na região do éxon 19 (Del 747-A750insP), e assim por diante. Os exemplos preferíveis incluem a mutação com deleção de 5 aminoácidos de 746 ácido glutâmico para 750 alanina na região do éxon 19 (Del E746-A750).

[0067] Além disso, o EGFR com mutação resistente ao tratamento do éxon 18 e/ou éxon 20 pode ainda ter pelo menos uma mutação selecionada do grupo consistindo em mutação de deleção do éxon 19, L858R, L861Q, G719X, E709X, e mutação de inserção do éxon 20. Exemplos específicos incluem o EGFR com mutação L718X na região do éxon 18 tendo ainda mutação de deleção do éxon 19, o EGFR com mutação L792X na região do éxon 20 tendo ainda mutação de deleção do éxon 19, o EGFR com mutação L718X na região do éxon 18 tendo ainda L858R, EGFR com mutação L792X na região do éxon 20 tendo ainda L858R, o EGFR com mutação L718X na região do éxon 18 tendo ainda a mutação L861Q, o EGFR com mutação L792X na região do éxon 20 tendo ainda L861Q, o EGFR com mutação L718X na região do éxon 18 tendo ainda G719X, o EGFR com mutação L792X na região do éxon 20 tendo ainda G719X, o EGFR com mutação L718X na região do éxon 18, tendo ainda E709X, o EGFR com mutação L792X na região do éxon 20 tendo ainda E709X, o EGFR com mutação L718X na região do éxon 18 tendo ainda mutação de inserção do éxon 20, e o EGFR com mutação L792X na região do éxon 20 tendo ainda mutação de inserção do éxon 20. Entre estes estão preferivelmente o EGFR com mutação L718X na região do éxon 18 tendo ainda mutação de deleção do éxon

19, o EGFR com mutação L792X na região do éxon 20 tendo ainda mutação de deleção do éxon 19, o EGFR com mutação L718X na região do éxon 18 tendo ainda L858R, e o EGFR com mutação L792X na região do éxon 20 tendo ainda L858R.

[0068] Além disso, o EGFR com mutação resistente ao tratamento do éxon 18 e/ou éxon 20 pode ainda ter mutação T790M, além da mutação de deleção do éxon 19 descrita acima, L858R, L861Q, G719X, E709X, e mutação de inserção do éxon 20. O T790M é uma mutação de resistência adquirida na região do éxon 20. Sabe-se que o T790M é gerado pelo uso de inibidores de EGFR existentes. A aquisição do T790M costuma diminuir os efeitos dos fármacos existentes em relação aos pacientes com tumor maligno.

[0069] Na presente invenção, os exemplos incluem o EGFR com mutação L718X na região do éxon 18 tendo mutação de deleção do éxon 19 tendo ainda a mutação T790M, o EGFR com mutação L792X na região do éxon 20 tendo mutação de deleção do éxon 19 tendo ainda a mutação T790M, o EGFR com mutação L718X na região do éxon 18 tendo L858R tendo ainda a mutação T790M, o EGFR com mutação L792X na região do éxon 20 tendo L859R tendo ainda a mutação T790M, o EGFR com mutação L718X na região do éxon 18 tendo L861Q tendo ainda a mutação T790M, o EGFR com mutação L792X na região do éxon 20 tendo L861Q tendo ainda a mutação T790M, o EGFR com mutação L718X na região do éxon 18 tendo G719X tendo ainda a mutação T790M, o EGFR com mutação L792X na região do éxon 20 tendo G719X tendo ainda a mutação T790M, o EGFR com mutação L718X na região do éxon 18, tendo E709X tendo ainda a mutação T790M, o EGFR com mutação L792X na região do éxon 20 tendo E709X tendo ainda a mutação T790M, o EGFR com mutação L718X na região do éxon 18 tendo mutação de inserção do éxon 20 tendo ainda a mutação T790M, e o EGFR com mutação L792X na região do éxon

20 tendo mutação de inserção do éxon 20 tendo ainda a mutação T790M. Entre estes estão preferivelmente o EGFR com mutação L718X na região do éxon 18 tendo mutação de deleção do éxon 19 tendo ainda a mutação T790M, o EGFR com mutação L792X na região do éxon 20 tendo mutação de deleção do éxon 19 tendo ainda a mutação T790M, o EGFR com mutação L718X na região do éxon 18 tendo L858R tendo ainda a mutação T790M, e o EGFR com mutação L792X na região do éxon 20 tendo L858R tendo ainda a mutação T790M.

[0070] Entre os EGFRs com as mutações compostas acima, o EGFR com mutação L718Q na região do éxon 18, o EGFR com mutação L792F na região do éxon 20, o EGFR com mutação L792H e o EGFR com mutação L792Y são particularmente preferíveis.

[0071] Na presente invenção, o método de detecção de mutações no EGFR expressado por um paciente com tumor maligno não é particularmente limitado, na medida em que o método é capaz de detectar as mutações e podem ser usados quaisquer métodos de detecção conhecidos.

[0072] A amostra usada na detecção da mutação do EGFR não é particularmente limitada, desde que a amostra seja uma amostra biológica isolada de um paciente com tumor maligno, em particular, uma amostra obtida de um paciente com tumor maligno e contendo células tumorais malignas. Exemplos de amostras biológicas incluem fluidos corporais (por exemplo, sangue, urina, etc), tecidos, os seus extratos e as culturas dos tecidos obtidos. O método de obtenção de uma amostra biológica pode ser adequadamente selecionado em função do tipo de amostra biológica.

[0073] A amostra biológica é preparada por ser adequadamente tratada de acordo com o método de medição. Além disso, o reagente compreendendo um primer ou uma sonda usada para a detecção pode ser preparado por um método convencional, de acordo com o método de medição usado.

[0074] Em uma modalidade da presente invenção, uma etapa para detectar a presença da mutação da presente invenção no EGFR expressado por um paciente com tumor maligno pode ser realizada antes da administração de um agente antitumoral ao paciente com tumor maligno.

[0075] Um tumor maligno pode incluir dois ou mais tipos diferentes de células tumorais malignas. Além disso, podem ser gerados dois ou mais tumores malignos em um único paciente. Portanto, um único paciente pode ter mutações diferentes do EGFR (por exemplo, a mutação do éxon 18 é a mutação L718Q e L718V do éxon 18; e a mutação do éxon 20 é L792F, L792H, L792Y, L792R, L792V e L792P da mutação do éxon 20; entretanto, não há limitação a elas) ao mesmo tempo.

[0076] O agente antitumoral da presente invenção compreende, como ingrediente ativo, (S)-N-(4-amino-6-metil-5-(quinolin-3-il)-8,9- dihidropirimido [5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida (composto (A))) ou um sal deste. O composto (A) é representado pela seguinte fórmula química.

[0077] Fórmula química I

[0078] O método para produzir o composto da presente invenção é explicado abaixo.

[0079] O composto A da presente invenção pode ser produzido, por exemplo, através do método de produção revelado em WO2015/025936A1, os métodos descritos nos Exemplos, e similares.

No entanto, o método de produção do composto da presente invenção não se limita a estes exemplos de reação.

[0080] Quando o composto A da presente invenção tiver isômeros como isômeros ópticos, estereoisômeros e tautômeros, qualquer um dos isômeros e suas misturas será incluído no escopo do composto da presente invenção, salvo especificação em contrário. Por exemplo, quando o composto da presente invenção tiver isômeros ópticos, misturas racêmicas e isômeros ópticos separados de uma mistura racêmica também são incluídos no escopo do composto da presente invenção, salvo especificação em contrário.

[0081] Os sais do composto A se referem a quaisquer sais farmaceuticamente aceitáveis; exemplos incluem sais de adição de base e sais de adição de ácido.

[0082] Exemplos de sais de adição de base incluem sais de metais alcalinos, como sais de sódio e sais de potássio; sais de metais alcalinos terrosos, como sais de cálcio e sais de magnésio; sais de amônio; sais de aminas orgânicas, como sais de trimetilamina, sais de trietilamina, sais de diciclohexilamina, sais de etanolamina, sais de dietanolamina, sais de trietanolamina, sais de procaína e sais de N,N'- dibenziletilenodiamina.

[0083] Exemplos de sais de adição de ácido incluem sais ácidos inorgânicos, como cloretos, sulfatos, nitratos, fosfatos e percloratos; sais ácidos orgânicos como acetatos, formatos, maleatos, fumaratos, tartratos, citratos, ascorbatos e trifluoroacetatos; e sulfonatos como metanossulfonatos, isetionatos, benzenosulfonatos e p- toluenosulfonatos.

[0084] O composto da presente invenção ou seus sais também abrange os seus profármacos. Um profármaco refere-se a um composto que pode ser convertido no composto da presente invenção ou a um sal deste através de uma reação com uma enzima, ácido gástrico, ou semelhante, em condições fisiológicas in vivo, ou seja, um composto que pode ser convertido para o composto da presente invenção ou um sal deste por oxidação enzimática, redução, hidrólise ou similares; ou um composto que possa ser convertido para o composto da presente invenção ou um sal deste por hidrólise ou por outros produtos semelhantes com ácido gástrico ou similares. Além disso, o profármaco pode ser um composto que pode ser convertido no composto da presente invenção ou um sal deste em condições fisiológicas, como as descritas em “Iyakuhin no Kaihatsu [Development of Pharmaceuticals],” Vol. 7, Molecular Design, publicado em 1990 por Hirokawa Shoten Co., pp. 163-198. Descrição da doença

[0085] Exemplos específicos de tumores alvo na presente invenção incluem, entre outros, câncer de cabeça e pescoço, câncer gastrointestinal (câncer de esôfago, câncer de estômago, câncer duodenal, câncer do fígado, câncer biliar (por exemplo, câncer da vesícula biliar e dos ductos biliares), câncer pancreático, câncer colorretal (por exemplo, câncer do cólon e câncer retal), câncer do pulmão (por exemplo, câncer do pulmão de células não pequenas, câncer do pulmão de células pequenas e mesotelioma), câncer de mama, câncer genital (câncer de ovário, câncer uterino (por exemplo, câncer de colo do útero e câncer de endométrio), câncer urológico (por exemplo, câncer de rim, câncer de bexiga, câncer de próstata e tumor testicular), tumor hematopoiético (por exemplo, leucemia, linfoma maligno e mieloma múltiplo), osteossarcoma, sarcoma de tecido mole, câncer de pele, tumor cerebral, e assim por diante. Exemplos preferíveis incluem câncer de pulmão, câncer de mama, câncer de cabeça e pescoço, tumor cerebral, câncer uterino, câncer gastrointestinal, tumor hematopoiético e câncer de pele. O câncer de pulmão é particularmente preferível.

[0086] Quando o composto da presente invenção ou um sal deste for usado como agente farmacêutico, um carreador farmacêutico pode ser adicionado, se necessário, formando assim uma forma de dosagem adequada de acordo com os objetivos de prevenção e tratamento. Exemplos da forma de dosagem incluem preparações orais, injeções, supositórios, pomadas, adesivos e similares. As preparações orais são preferíveis. Tais formas de dosagem podem ser formadas pelos métodos convencionalmente conhecidos pelos versados na técnica.

[0087] Como carreador farmaceuticamente aceitável, vários materiais carreadores orgânicos e inorgânicos convencionais usados como materiais de preparação podem ser misturados como excipiente, aglutinante, desintegrador, lubrificante ou corante em preparações sólidas, ou como solvente, agente solubilizante, agente de suspensão, agente isotonizante, tampão, ou agente calmante em preparações líquidas. Além disso, aditivos de preparação farmacêutica, como antissépticos, antioxidantes, corantes, edulcorantes e estabilizadores podem também ser usados, se necessário.

[0088] As preparações sólidas orais são preparadas do seguinte modo. Após a adição de um excipiente opcionalmente com um excipiente, aglutinante, desintegrador, lubrificante, corante, agente de mascaramento de sabor ou agente flavorizante, etc, ao composto da presente invenção, a mistura resultante é formulada em comprimidos, comprimidos revestidos, grânulos, pós, cápsulas, ou similares, por métodos comuns.

[0089] Exemplos de excipientes incluem lactose, sacarose, D- manitol, glicose, amido, carbonato de cálcio, caulim, celulose microcristalina e anidrido ácido silíco. Exemplos de aglutinantes incluem água, etanol, 1-propanol, 2-propanol, xarope simples, glicose líquida, α- amido líquido, gelatina líquida, D-manitol, carboximetilcelulose, celulose de hidroxipropil, amido de hidroxipropil, celulose de metil, celulose de etil, goma laca, fosfato de cálcio, polivinilpirrolidona e assim por diante. Exemplos de disintegradores incluem amido seco, alginato de sódio, ágar em pó, hidrogenocarbonato de sódio, carbonato de cálcio, sulfato de lauril de sódio, monoglicerídeo de ácido esteárico, lactose e assim por diante. Exemplos de lubrificantes incluem talco purificado, estearato de sódio, estearato de magnésio, bórax, polietilenoglicol e assim por diante. Exemplos de colorantes incluem óxido de titânio, óxido de ferro, e similares. Exemplos de agentes de mascaramento de sabor ou flavorizantes incluem sacarose, casca de laranja amarga, ácido cítrico, ácido tartárico e similares.

[0090] Quando uma preparação líquida para a administração oral é preparada, um agente de mascaramento de sabor, um tampão, um estabilizador, um agente flavorizante, e similares podem ser adicionados ao composto da presente invenção; e a mistura resultante pode ser formulada em uma preparação líquida oral, xarope, elixir, etc., de acordo com um método ordinário.

[0091] Quando um agente de injeção é preparado, um regulador de pH, um tampão, um estabilizador, um agente isotonizante, um anestésico local, e similares podem ser adicionados ao composto da presente invenção, e a mistura pode ser formulada em uma injeção subcutânea, intramuscular ou intravenosa de acordo com um método comum.

[0092] Exemplos do regulador de pH e do tampão usados aqui incluem citrato de sódio, acetato de sódio e fosfato de sódio. Exemplos do estabilizador incluem pirossulfito de sódio, EDTA, ácido tioglicólico e ácido tioláctico. Exemplos do anestésico local incluem cloridrato de procaína e cloridrato de lidocaína. Exemplos do agente isotonizante incluem cloreto de sódio, glicose, D-manitol e glicerol.

[0093] Quando um supositório é preparado, carreadores farmacêuticos aceitáveis conhecidos no campo relacionado, como polietilenoglicol, lanolina, manteiga de cacau e triglicerídeos de ácidos graxos; e, se necessário, os tensoativos como Tween 80 (marca registada) podem ser adicionados ao Composto A e a mistura resultante pode ser formulada em um supositório de acordo com um método comum.

[0094] Quando uma pomada é preparada, uma base, estabilizador, agente umectante, conservante e similares mais comumente usados, podem ser misturados no Composto A, conforme necessário; e a mistura obtida é misturada e formulada em uma pomada de acordo com um método comum.

[0095] Exemplos da base incluem parafina líquida, petrolato branco, cera de abelha branca, álcool octil dodecílico e parafina.

[0096] Exemplos de conservante incluem paraoxibenzoato de metila, paraoxibenzoato de etila e paraoxibenzoato de propila.

[0097] Quando um adesivo é preparado, a pomada descrita acima, creme, gel, pasta, ou semelhante, pode ser aplicado a um substrato comum de acordo com um método comum.

[0098] Exemplos de substratos incluem tecidos ou tecidos não tecidos, compreendendo algodão, fibras descontínuas ou fibras químicas, e podem também ser utilizadas películas ou folhas de espuma de cloreto de vinila macio, polietileno, poliuretano, etc.

[0099] A quantidade de Composto A a ser incorporada em cada uma dessas formas de unidade de dosagem depende da condição do paciente ao qual o composto é administrado, da sua forma de dosagem, etc. Em geral, no caso de um agente oral, a quantidade do composto é preferencialmente de 0,05 a 1000 mg por unidade de dosagem. No caso de uma injeção, a quantidade do composto é de preferência de 0,01 a 500 mg por unidade de dosagem e, no caso de um supositório, a quantidade do composto é de preferência de 1 a 1000 mg por unidade de dosagem.

[00100] Além disso, a dose diária do medicamento nessa forma de dosagem depende da condição, peso corporal, idade, sexo, etc., do paciente, e não pode ser generalizada. Normalmente, a dose diária para um adulto (peso corporal: 50 kg) do composto da presente invenção pode geralmente ser de 0,05 a 5000 mg, e de preferência 0,1 a 1000 mg; e é administrada preferencialmente em uma dose, ou em duas a três doses divididas, por dia.

[00101] A presente invenção também fornece um método para tratar um paciente com tumor maligno, compreendendo a etapa de administrar o Composto A ou um sal deste a um paciente com tumor maligno expressando EGFR com mutação resistente ao tratamento do éxon 18 e/ou éxon 20.

[00102] A presente invenção também fornece o Composto A ou um sal deste para tratar um paciente com tumor maligno expressando EGFR com mutação resistente ao tratamento do éxon 18 e/ou éxon 20.

[00103] A presente invenção também fornece o uso do Composto A ou de um sal deste para tratar um paciente com tumor maligno expressando EGFR com mutação resistente ao tratamento do éxon 18 e/ou éxon 20.

[00104] A presente invenção também fornece o uso do Composto A ou de um sal deste para a produção de um agente farmacêutico para o tratamento de um paciente com tumor maligno que expressa o EGFR com mutação resistente ao tratamento do éxon 18 e/ou éxon 20.

[00105] A presente invenção também fornece um método para predizer os efeitos terapêuticos da quimioterapia usando um agente antitumoral compreendendo, como ingrediente ativo, o Composto A ou sal deste em um paciente com tumor maligno, o método compreendendo as etapas (1) e (2) abaixo:

[00106] (1) uma etapa para detectar a presença ou ausência de mutação do gene EGFR contido em uma amostra biológica obtida do paciente; e

[00107] (2) uma etapa prever que a quimioterapia tem grande probabilidade de apresentar efeitos terapêuticos suficientes para o paciente quando os resultados da detecção na etapa (1) acharem que o gene EGFR tem mutação resistente ao tratamento do éxon 18 e/ou éxon 20.

[00108] A presente invenção também fornece um método para tratar um paciente com tumor maligno, compreendendo as etapas (1) a (3) abaixo:

[00109] (1) uma etapa para detectar a presença ou ausência de mutação do gene EGFR contido em uma amostra biológica obtida do paciente; e

[00110] (2) uma etapa para prever que a quimioterapia usando um agente antitumoral compreendendo, como ingrediente ativo, (S)-N-(4- amino-6-metil-5-(quinolin-3-il)-8,9-dihidropirimido [5,4-b]indolizin-8- il)acrilamida ou um sal deste é altamente susceptível de apresentar efeitos terapêuticos suficientes em relação ao paciente quando os resultados da detecção na etapa (1) acharem que o gene EGFR tem mutação resistente ao tratamento do éxon 18 e/ou éxon 20.

[00111] (3) uma etapa de administração de (S)-N-(4-amino-6-metil- 5-(quinolin-3-il)-8,9-dihidropirimido [5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida ou um sal deste a um paciente que foi previsto com alta probabilidade de responder suficientemente à quimioterapia usando um agente antitumoral compreendendo, como um ingrediente ativo,(S)-N-(4- amino-6-metil-5-(quinolin-3-il)-8,9-dihidropirimido [5,4-b]indolizin-8- il)acrilamida ou um sal deste, na etapa (2).

[00112] A sequência de base do gene EGFR é conhecida publicamente. O número de acesso do GenBank da sequência de base do cDNA é NM_005228.4.

[00113] Os "efeitos terapêuticos" podem ser avaliados por efeitos de encolhimento tumoral, efeitos supressores de recidivas, efeitos prolongadores da vida e similares. Os efeitos supressores de recidivas podem ser demonstrados como o grau de extensão do período de não- recidiva ou o grau de melhora da taxa de recidiva; e os efeitos prolongadores da vida podem ser mostrados como o grau de sobrevida total ou o grau de extensão da mediana da sobrevida livre de progressão, ou similares. Os "efeitos terapêuticos suficientes" da quimioterapia usando um agente antitumoral compreendendo, como ingrediente ativo, um Composto A ou um sal deste significam, por exemplo, que esses efeitos terapêuticos superiores são obtidos pela administração do agente antitumoral, compreendendo, como ingrediente ativo, o Composto A ou um sal deste, como extensão do tempo de sobrevida, supressão da recidiva, e similares, em comparação com a não administração. Exemplos

[00114] A seguir, descreve-se a presente invenção em mais detalhes com referência ao seguinte Exemplo de teste. No entanto, a presente invenção não está limitada a esses Exemplos (Exemplos de teste). Exemplo de teste 1 Teste de eficácia do medicamento in vitro Resultados da avaliação da fosforilação intracelular no sistema de expressão forçado do EGFR mutante usando células HEK293 (atividade inibitória)

[00115] A atividade inibitória do alvo intracelular dos compostos foi avaliada com base nos seguintes índices: fosforilação intracelular do EGFR em um sistema de expressão forçado do EGFR mutante usando células HEK293 Jump-in (marca registrada) Grip (marca registrada) (Thermo Fisher Scientific Inc.) (também chamada de "células HEK293"). As células HEK293 foram mantidas em D-MEM com GlutaMAX (marca registrada)-I (alta glicose) (Thermo Fisher Scientific Inc.) que continha

FBS dialisado a 10%. As células HEK293 foram semeadas em cada poço de uma microplaca de fundo plano de 96 poços, de forma que a contagem de células por poço foi de 10.000, e incubadas em uma incubadora contendo gás CO2 a 5% a 37 °C durante a noite.

Em seguida, um vetor pcDNATM 6.2/V5-DEST codificando um gene humano EGFR (Del E746-A750 (doravante também chamado de "Ex19del"), Ex19del + T790M (o símbolo "+" indica que ambas as mutações estão contidas), Ex19del+T790M+L718Q, Ex19del+T790M+L792H, Ex19del+T790M+L792F, Ex19del+T790M+L792Y, L858R, L858R+T790M, L858R+T790M+L718Q, L858R+T790M+L792H, L858R+T790M+L792F ou L858R+T790M+L792Y) foram introduzidos, junto com o Opti-MEM (marca comercial) I (Thermo Fisher Scientific Inc.), usando um reagente de transfecção ViaFect (marca comercial) (Promega Corporation). As células foram incubadas novamente em uma incubadora contendo gás CO2 a 5% a 37 °C durante a noite.

No dia seguinte, o Composto A, erlotinibe, afatinibe e osimertinibe (erlotinibe, afatinibe e osimertinibe podem ser, cada um, a seguir chamos de "compostos comparativos") foram dissolvidos individualmente em DMSO e diluídos com DMSO ou um meio.

As soluções foram então adicionadas individualmente a cada poço da placa de cultura das células, e as células foram incubadas em incubadora contendo gás CO2 a 5% a 37°C por 6 horas.

Após a incubação, as células foram imobilizadas com formalina neutra tamponada a 20% (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) e bloqueadas por um tampão de bloqueio Odyssey (marca comercial) (PBS) (M&S TechnoSystems Inc.). As células foram, então, reagidas com um anticorpo primário (coquetel de anticorpo EGFR # AHR5062 (Thermo Fisher Scientific Inc.) e um anticporpo receptor fosfo-EGFR (Tyr1068) # 2234L (CST)) diluído com um tampão de bloqueio Odyssey (marca comercial) (PBS) a 1/200, e as células foram deixadas em descanso de um dia para outro a 4°C. No dia seguinte, as células foram reagidas com um anticorpo secundário (IRDye 800CW Goat aRabbit # 926-32211 e IRDye 680RD Goat aMouse # 926-68070 (M&S TechnoSystems Inc.)) diluído com um tampão de bloqueio Odyssey (marca registrada) (PBS) a 1/800, e as células foram deixado em descanso à temperatura ambiente durante 1 hora. A intensidade de fluorescência (a seguir também chamada de "FI") foi detectada com um sistema de imagiologia por infravermelhos CLx Odyssey (marca comercial) (LI-COR Bioscience) em um comprimento de onda de fluorescência de 800 nm e 700 nm.

[00116] O valor obtido subtraindo o FI de um poço sem o anticorpo primário do FI detectado em um comprimento de onda de fluorescência de 800 nm ou 700 nm foi referido como FI (800, EGFR) - branco (para 800 nm) e FI (700, p-EGFR) - branco (para 700 nm). O valor obtido pela divisão de FI (700, p-EGFR) - branco de cada poço por FI (800, EGFR) - branco foi determinado como FI(p-EGFR/EGFR). A taxa de EGFR fosforilado foi calculada pela fórmula a seguir para determinar a concentração dos compostos de teste nos quais o EGFR foi fosforilado em 50% (IC50 (μM)). A Tabela 1 ilustra os resultados.

[00117] Taxa de EGFR fosforilada (%) = T/C × 100

[00118] T: FI (p-EGFR/EGFR) de um poço ao qual foi adicionado um composto de teste.

[00119] C: FI (p-EGFR/EGFR) de um poço ao qual não foi adicionado um composto de teste.

[00120] Como é mostrado na Tabela 1, o Composto A apresentou alta atividade inibitória contra a fosforilação intracelular do composto EGFR mutante contendo L718Q e L792X; e a atividade foi maior que a do erlotinibe, afatinibe e osimertinibe. Tabela 1

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Agente antitumoral para o tratamento de um paciente com tumor maligno expressando EGFR com pelo menos uma mutação selecionada do grupo que consiste na mutação L718X no éxon 18 e na mutação L792X no éxon 20, caracterizado pelo fato de que X representa um resíduo arbitrário de aminoácidos, o agente antitumoral compreendendo (S)-N-(4-amino-6-metil-5-(quinolina-3-il)-8,9- dihidropirimido[5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida (Composto (A)) ou um sal deste.

2. Agente antitumoral, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o EGFR tem ainda pelo menos uma mutação selecionada do grupo consistindo em mutação de deleção do éxon 19, L858R, L861Q, G719X, E709X, e mutação de inserção do éxon

20.

3. Agente antitumoral, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o EGFR tem ainda mutação T790M.

4. Agente antitumoral, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que a mutação L718X é a mutação L718Q.

5. Agente antitumoral, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que a mutação de L792X é L792H, L792F ou L792Y.

6. Método de tratamento de um paciente com tumor maligno, caracterizado pelo fato de que compreende a etapa de administração do (S)-N-(4-amino-6-metil-5-(quinolin-3-il)-8,9-dihidropirimido [5,4- b]indolizin-8-il)acrilamida ou um sal deste para um paciente com tumor maligno expressando EGFR que tenha pelo menos uma mutação selecionada do grupo que consiste em mutação L718X no éxon 18 e mutação L792X no éxon 20.

7. (S)-N-(4-amino-6-metil-5-(quinolin-3-il)-8,9-dihidropirimido

[5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida ou um sal deste, caracterizado pelo fato de que é para tratar um paciente com tumor maligno expressando EGFR com pelo menos uma mutação selecionada do grupo consistindo em mutação L718X no éxon 18 e mutação L792X no éxon 20.

8. Uso do (S)-N-(4-amino-6-metil-5-(quinolin-3-il)-8,9- dihidropirimido [5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida ou um sal deste, caracterizado pelo fato de que é para um paciente com tumor maligno expressando EGFR que tenha pelo menos uma mutação selecionada do grupo que consiste em mutação L718X no éxon 18 e mutação L792X no éxon 20.

9. Uso do (S)-N-(4-amino-6-metil-5-(quinolin-3-il)-8,9- dihidropirimido [5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida ou um sal deste, caracterizado pelo fato de que é para a produção de um agente farmacêutico para tratar um paciente com tumor maligno expressando EGFR com pelo menos uma mutação selecionada do grupo consistindo em mutação L718X no éxon 18 e mutação L792X no éxon 20.

10. Composição farmacêutica compreendendo (S)-N-(4- amino-6-metil-5-(quinolin-3-il)-8,9-dihidropirimido[5,4-b]indolizin-8- il)acrilamida ou um sal deste e um carreador farmaceuticamente aceitável, caracterizado pelo fato de que é para tratar um paciente com tumor maligno expressando EGFR que tenha pelo menos uma mutação selecionada do grupo que consiste em mutação L718X no éxon 18 e mutação L792X no éxon 20, em que X representa um resíduo de aminoácidos arbitrário.

11. Método para predizer os efeitos terapêuticos da quimioterapia usando um agente antitumoral, caracterizado pelo fato de que compreende, como ingrediente ativo, (S)-N-(4-amino-6-metil-5- (quinolin-3-il)-8,9-dihidropirimido [5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida ou sal deste em um paciente com tumor maligno, o método compreendendo as etapas (1) e (2) abaixo:

(1) uma etapa para detectar a presença ou ausência de mutação do gene EGFR contido em uma amostra biológica obtida do paciente; e (2) uma etapa para prever que a quimioterapia é altamente susceptível de apresentar efeitos terapêuticos suficientes em relação ao paciente quando os resultados da detecção na etapa (1) encontrarem que o gene EGFR tem pelo menos uma mutação selecionada do grupo consistindo em mutação L718X no éxon 18 e a mutação L792X no éxon 20, em que X representa um resíduo de aminoácidos arbitrário.

12. Método para tratar um paciente com tumor maligno, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas (1) a (3) abaixo: (1) uma etapa para detectar a presença ou ausência de mutação do gene EGFR contido em uma amostra biológica obtida do paciente; (2) uma etapa para prever que a quimioterapia usando um agente antitumoral compreendendo, como ingrediente ativo, (S)-N-(4- amino-6-metil-5-(quinolin-3-il)-8,9-dihidropirimido [5,4-b]indolizin-8- il)acrilamida ou um sal deste é altamente susceptível de apresentar efeitos terapêuticos suficientes em relação ao paciente quando os resultados da detecção na etapa (1) encontrarem que o gene EGFR tem pelo menos uma mutação selecionada do grupo consistindo em mutação L718X no éxon 18 e a mutação L792X no éxon 20, em que X representa um resíduo de aminoácidos arbitrário; e (3) uma etapa de administração de (S)-N-(4-amino-6-metil- 5-(quinolin-3-il)-8,9-dihidropirimido [5,4-b]indolizin-8-il)acrilamida ou um sal deste a um paciente que foi previsto com alta probabilidade de responder suficientemente à quimioterapia usando um agente antitumoral compreendendo, como um ingrediente ativo,(S)-N-(4- amino-6-metil-5-(quinolin-3-il)-8,9-dihidropirimido [5,4-b]indolizin-8- il)acrilamida ou um sal deste, na etapa (2).