CN113416350B - 一种乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒的制备方法 - Google Patents

一种乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种乳清蛋白‑ε‑聚赖氨酸‑阿拉伯胶纳米颗粒的制备方法，利用谷氨酰胺转氨酶的交联作用将乳清蛋白修饰到ε‑聚赖氨酸‑阿拉伯胶纳米颗粒表面，整个制备方法及制备过程简单快捷，乳清蛋白来源广泛，纳米颗粒制备周期短、分散性好、产率高；对ε‑聚赖氨酸起到了保护作用，减少了其因环境因素造成的活性损失，提高了其生物利用率，并且纳米颗粒具备控制释放的能力，能够延长ε‑聚赖氨酸的抗菌效果；有效增强了纳米颗粒的乳化功能，并且在制备过程中不添加化学乳化剂，绿色安全，使所制备抗菌剂应用潜能进一步扩大。

Description

一种乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒的制备方法
技术领域
本发明涉及一种乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒的制备方法，属于纳米颗粒制备技术领域。
背景技术
蛋白质常被用作多糖载体表面的包衣材料，以提高其物理稳定性。多糖-蛋白质复合物纳米颗粒可以用来稳定脂质底物，从而封装生物活性化合物。由蛋白质修饰后的纳米颗粒作为递送系统，具有易于控制的大小和表面特征，受控释放和受控的颗粒降解的优点。乳清蛋白来源于牛奶，具有成本低、生物安全、生物相容性、生物降解性和水溶性等优点，使乳清蛋白成为包裹生物活性物质的理想原料，可以用来掩盖不良风味或提高生物活性物质的利用率。乳清蛋白因其多种功能特性(包括乳化和起泡特性，凝胶化和热稳定性)而广泛用于食品系统中。谷氨酰胺转氨酶能够对蛋白质进行酶法改性，同时也能催化多糖与蛋白质糖基化反应的进行，是一种绿色健康的改性方式。谷氨酰胺转氨酶通过分子间ε-赖氨酸共价交联，这是从所述γ-羟胺基团上赖氨酸，形成在谷氨酰胺和ε-氨基促进蛋白质的聚集。
目前针对利用蛋白质修饰纳米颗粒，以提高其稳定性、增加其功能特性的方法也有报道。如许沙沙.蛋白质—多糖自组装纳米凝胶基药物递送系统构建与表征[D].华中农业大学,2013；沈雪.乳清蛋白的超声改性及其包埋体系的应用研究[D].吉林大学,2017；兰秋雨等.蛋白质糖基化改性方法和产物验证方法研究进展[J].食品与机械,2019,35(02):202-207；专利CN111034850A、CN111034850A和CN108617916A等。但未见有利用谷氨酰胺转氨酶的交联作用，制备乳清蛋白包被的多糖纳米颗粒的报道。本发明均采用绿色、安全的原材料，通过低成本、简单易操作的制备方法提高ε-聚赖氨酸的稳定性。
发明内容
本发明的目的就是针对上述现有问题，提供一种乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒的制备方法，不仅保证了纳米颗粒中ε-聚赖氨酸的包封率，也可以提高ε-聚赖氨酸的稳定性和生物活性。
本发明的目的是这样实现的：一种乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)原料制备：取ε-聚赖氨酸、阿拉伯胶和乳清蛋白粉末，ε-聚赖氨酸、阿拉伯胶溶解、过滤后稀释制得ε-聚赖氨酸、阿拉伯胶稀释液，乳清蛋白粉末溶解、过滤后稀释制得乳清蛋白稀释液；
(2)ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒制备：取步骤(1)中ε-聚赖氨酸、阿拉伯胶稀释液在磁力搅拌器上混合搅拌1h，随后进行90℃水浴加热3h，在500w功率下进行超声10min，得到离子交联-热诱导的ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒溶液；
(3)乳清蛋白混合：取步骤(1)中乳清蛋白稀释液，与步骤(2)中纳米颗粒溶液混合均匀，得到第一混合溶液；
(4)酶交联：取步骤(3)中第一混合溶液，加入谷氨酰胺转氨酶，酶活力为500U/g，制得乳清蛋白包被的纳米颗粒溶液；
(5)灭酶：取步骤(4)制备的乳清蛋白包被的纳米颗粒溶液加热至90-100℃，并保温5-15分钟，得到第二混合溶液；
(6)超声：取步骤(5)中的第二混合溶液，超声破碎制得纳米颗粒溶液；
(7)干燥：取步骤(6)制备的超声后的纳米颗粒溶液，喷雾干燥或冷冻干燥，即得所述乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒产品。
所述步骤(1)中采用水进行稀释，所述水选自超纯水，稀释液浓度为10mg/mL。
所述步骤(2)中ε-聚赖氨酸与阿拉伯胶浓度比为1:4，ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒溶液pH为5。
所述步骤(3)中所添加的乳清蛋白稀释液与纳米颗粒溶液中的ε-聚赖氨酸浓度比为1:1～5:1。
所述步骤(4)中谷氨酰胺转氨酶添加量为第一混合溶液的1％～5％，温度为5℃～15℃，pH为5～7。
所述步骤(6)中超声条件为500w、5～10min，超声3～5s，间隔3～5s。
所述步骤(7)中喷雾干燥的条件为：进风温度120～180℃，出风温度55～85℃；冷冻干燥的条件为：-22-18℃、100-200Pa。
本发明结合合理、使用方便，通过本发明，提供的一种乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒的制备方法，相对于现有技术，本发明方法具有以下优点：
1.本发明利用谷氨酰胺转氨酶的交联作用将乳清蛋白修饰到ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒表面，整个制备方法及制备过程简单快捷，乳清蛋白来源广泛，纳米颗粒制备周期短、分散性好、产率高。
2.本发明通过乳清蛋白包被ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒，对ε-聚赖氨酸起到了保护作用，减少了其因环境因素造成的活性损失，提高了其生物利用率，并且纳米颗粒具备控制释放的能力，能够延长ε-聚赖氨酸的抗菌效果。
3.本发明充分利用谷氨酰胺转氨酶的交联特性，有效增强了纳米颗粒的乳化功能，并且在制备过程中不添加化学乳化剂，绿色安全，使所制备抗菌剂应用潜能进一步扩大。
综上，本发明提供一种乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒的制备方法，不仅保证了纳米颗粒中ε-聚赖氨酸的包封率，也可以提高ε-聚赖氨酸的稳定性和生物活性。本发明利用谷氨酰胺转氨酶的交联作用将乳清蛋白修饰到ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒表面，整个制备方法及制备过程简单快捷，乳清蛋白来源广泛，纳米颗粒制备周期短、分散性好、产率高；对ε-聚赖氨酸起到了保护作用，减少了其因环境因素造成的活性损失，提高了其生物利用率，并且纳米颗粒具备控制释放的能力，能够延长ε-聚赖氨酸的抗菌效果；有效增强了纳米颗粒的乳化功能，并且在制备过程中不添加化学乳化剂，绿色安全，使所制备抗菌剂应用潜能进一步扩大。
附图说明
图1为纳米颗粒的缓释分析。
图2为液体样品形态；
其中：(a)ε-聚赖氨酸,(b)阿拉伯胶,(c)乳清蛋白,(d)ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒,(e)乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒。
图3为纳米颗粒的透射电镜图；
其中，A为放大26500倍；B为放大46000倍。
图4为纳米颗粒的圆二色谱图。
其中，(a)、(b)、(c)、(d)分别为不同TG酶作用时间制备的纳米颗粒。
图5为纳米颗粒对菌株生长的影响。
图6为样品吸湿状态变化；
其中，a1为ε-聚赖氨酸吸湿12h状态图，a2为ε-聚赖氨酸吸湿24h状态图，a3为ε-聚赖氨酸吸湿36h状态图，a4为ε-聚赖氨酸吸湿48h状态图，b1为乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒吸湿12h状态图，b2为乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒吸湿24h状态图，b3为乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒吸湿36h状态图，b4为乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒吸湿48h状态图。
图7为pH对纳米颗粒残留率、粒径、PDI的影响；
其中，(a)纳米颗粒中ε-聚赖氨酸的残留率，(b)纳米颗粒的粒径、PDI；
图8为鱼肉储藏期间菌落总数的变化。
图9为鱼肉储藏期间脂肪氧化的变化。
图10为鱼肉储藏期间硬度的变化。
具体实施方法
下面通过具体实施例对本发明所述的技术方案给予进一步详细的说明。
实施例1
一种乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒的制备方法，具体包括如下步骤：
(1)原料制备：取ε-聚赖氨酸、阿拉伯胶和乳清蛋白粉末，溶解、过滤后制得稀释液备用；
(2)ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒制备：取ε-聚赖氨酸、阿拉伯胶稀释液在磁力搅拌器上混合搅拌1h，随后进行90℃水浴加热3h，在500w功率下进行超声10min，得到离子交联-热诱导的ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒溶液。
(3)乳清蛋白混合：取乳清蛋白稀释液，与ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒溶液混合均匀，添加添加的乳清蛋白溶液与纳米颗粒溶液中的ε-聚赖氨酸浓度比为1:1，温度为15℃，pH为7。
(4)酶交联：取混合溶液，加入5％谷氨酰胺转氨酶，酶活力为500U/g，制得乳清蛋白包被的纳米颗粒溶液。
(5)灭酶：取制备的纳米颗粒加热至95℃，并保温15分钟。
(6)超声：取灭酶后的纳米颗粒溶液，超声破碎制得纳米颗粒溶液；
(7)干燥：取超声后的纳米颗粒溶液，在-18℃、200Pa条件下冷冻干燥成粉末，即得所述纳米颗粒产品。
实施例2
一种乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒的制备方法，具体包括如下步骤：
(1)原料制备：取ε-聚赖氨酸、阿拉伯胶和乳清蛋白粉末，溶解、过滤后制得稀释液备用；
(2)ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒制备：取ε-聚赖氨酸、阿拉伯胶稀释液在磁力搅拌器上混合搅拌1h，随后进行90℃水浴加热3h，在500w功率下进行超声10min，得到离子交联-热诱导的ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒溶液。
(3)乳清蛋白混合：取乳清蛋白稀释液，与ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒溶液混合均匀，添加添加的乳清蛋白溶液与纳米颗粒溶液中的ε-聚赖氨酸浓度比为3:1，温度为10℃，pH为6。
(4)酶交联：取混合溶液，加入3％谷氨酰胺转氨酶，酶活力为500U/g，制得乳清蛋白包被的纳米颗粒溶液。
(5)灭酶：取制备的纳米颗粒加热至100℃，并保持10min。
(6)超声：取灭酶后的纳米颗粒溶液，超声破碎制得纳米颗粒溶液；
(7)干燥：取超声后的纳米颗粒溶液，在进风温度120℃，出风温度55℃条件下喷雾干燥成粉末，即得所述纳米颗粒产品。
实施例3
一种乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒的制备方法，具体包括如下步骤：
(1)原料制备：取ε-聚赖氨酸、阿拉伯胶和乳清蛋白粉末，溶解、过滤后制得稀释液备用；
(2)ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒制备：取ε-聚赖氨酸、阿拉伯胶稀释液在磁力搅拌器上混合搅拌1h，随后进行90℃水浴加热3h，在500w功率下进行超声10min，得到离子交联-热诱导的ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒溶液。
(3)乳清蛋白混合：取乳清蛋白稀释液，与ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒溶液混合均匀，添加添加的乳清蛋白溶液与纳米颗粒溶液中的ε-聚赖氨酸浓度比为5:1，温度为5℃，pH为5。
(4)酶交联：取混合溶液，加入1％谷氨酰胺转氨酶，酶活力为500U/g，制得乳清蛋白包被的纳米颗粒溶液。
(5)灭酶：取制备的纳米颗粒加热至90℃，并保温5min。
(6)超声：取灭酶后的纳米颗粒溶液，超声破碎制得纳米颗粒溶液；
(7)干燥：取超声后的纳米颗粒溶液，在-18℃、200Pa条件下冷冻干燥成粉末，即得所述纳米颗粒产品。
对于不同实施例制得的乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒的各项指标进行检测，测得的各项技术指标如下：
一、乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒的理化指标测定；
(1)包封率：对于乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒将制备好的样品过0.22μm的膜，取少量样品加入到10KDa超滤管中，在4℃条件下，以8000g离心10min，得到滤过液。取滤过液0.2mL混入0.8mL 0.5mmol/L甲基橙溶液；30℃振荡30min，在OD＝465处测定吸光值；参照标准曲线y＝1.2588-1.84304x，R2＝0.99066(x为ε-聚赖氨酸浓度，y为吸光值)计算ε-聚赖氨酸含量。。
包封率(％)＝(C0-C1)/C0×100％。(1)
式中：C0是初始ε-聚赖氨酸浓度；C1是所测上清液ε-聚赖氨酸浓度。
包封率是评价包封物质质量好坏的重要指标，也是载体是否充分发挥包封性能的关键。结果如表1可知，乳清蛋白包被的纳米颗粒其包封率都在90％以上。
(2)采用ZEN3690纳米粒度分析仪进行粒径和多分散性指数(PDI)的测定。粒径和多分散性指数是反应纳米颗粒均匀性及其在食品工业中应用效果的重要指标。由表1可知，随着酶作用时间的延长，粒径逐渐增大，由205.6nm增加至481nm，而PDI在10min时为0.26，证明纳米颗粒仍具有较好的分散稳定性，而30min、60min时，其分散稳定性逐渐下降。
(3)采用荧光探针ANS测量蛋白质的表面疏水性，溶解度采用样品冻干复溶的方法测定。表面疏水性和溶解度结果如表1所示，表面疏水性在酶作用10min时最小，为52.2；溶解度在10min时达到最大值，为85.4％。
表1不同酶作用时间的样品包封率、粒径、PDI、表明疏水性、溶解度
Figure BDA0003123544830000081
二、缓释能力测定；
考察纳米颗粒中ε-聚赖氨酸在不同贮藏时间的释放情况，并以不同时间段溶液中的ε-聚赖氨酸浓度为考察指标。
结果如图1所示，经过乳清蛋白包被的-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒，缓释能力进一步增强，在198h时ε-聚赖氨酸释放率为42.6％
三、乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒的形态分析与透射电镜；
纳米颗粒样品形态分析采用肉眼观察的方法；
应用透射电子显微镜(TEM，Tecnai 12，Philips)观察纳米颗粒的微观结构。样品在100千伏加速电压下进行，样品用1.5％磷钨酸水溶液染色，将样品分散液滴在铜栅格上进行TEM观察。
纳米颗粒的PDI越小说明纳米颗粒分散性越好。如图2所示，样品分为ε-聚赖氨酸(a)、阿拉伯胶(b)、乳清蛋白(c)、ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒(d)、乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒(e)。乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒粒径为265.43nm，PDI为0.218。说明此乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒具有优良的均匀性和分散性。透射电镜可以观察到纳米粒子的结构形态。图3透射电镜可以看出，乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒分布均匀，呈现球形。
四、表征分析-圆二色光谱；
圆二色光谱(CD)是一种有效的技术来监测蛋白质与外源性物质发生相互作用之后的构象变化和蛋白质分子二级结构的变化。将样品使用J-810圆二色光谱仪进行扫描测定。扫描范围：190-240nm；扫描速度：中速；记录间隔：1nm；比色皿厚度：10nm，空白对照：超纯水。图4为不同TG酶作用时间制备的纳米颗粒的圆二色谱图，谷氨酰胺转氨酶的交联作用，改变了纳米颗粒中的蛋白二级结构，从而改善纳米颗粒的理化特性。
五、抗菌能力测试；
将沙门氏菌接种于LB液体培养基中，于37℃摇床200rpm条件下震荡培养24h，获取对数生长期的菌悬液。
细菌悬液在LB肉汤中稀释至浓度为5×105CFU/mL，加入纳米颗粒溶液，然后在37℃下孵育。分别在0h、2h、4h、6h、8h、10h、12h、14h、16h、18h、20h、22h和24h监测培养过程中细菌计数的变化。
测试结果如图5所示，当初始接种量为105CFU/mL时，游离ε-聚赖氨酸(ε-PL)、1/2MIC乳清蛋白/ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒(PGH-WPE)处理组，细菌开始生长；添加1、2MIC的乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒处理组在24h时，沙门氏菌仍然没有生长的迹象。表明乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒具有良好的抗菌活性。
六、吸湿能力测定；
恒温恒湿箱中调节温度25±1℃，相对湿度(RH)控制在60％。精确测量ε-聚赖氨酸、乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒，并加入称重瓶中。分别在放置后的12h、24h、36h、48h不同时间点将样品放入上述烘干机中测量质量。计算吸湿率：吸湿率(％)＝100×(Mn-M0)/M0。(2)
式中：Mn是放置恒温恒湿箱n小时后样品重量；M0是放置恒温恒湿箱前的重量。
表2为样品吸湿率变化
Figure BDA0003123544830000101
Figure BDA0003123544830000111
如图6和表2所示，随着时间的推移，ε-聚赖氨酸(ε-PL)吸收的水分越来越多，最终导致凝结现象的发生，由粉末状变成块状，吸湿率达到87％；乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒的吸湿率增长缓慢，在48h时，其吸湿率仅为5.45±0.47％。证明纳米颗粒的抗吸湿较好。
七、纳米颗粒稳定性、鱼肉保鲜能力测试；
(1)稳定性：调整纳米颗粒溶液的pH，测定其在不同pH条件下的残留率、粒径、PDI来反应纳米颗粒的稳定性。
由图7可知，随着pH由3逐渐变化至11，乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒中ε-聚赖氨酸的残留率也随着pH的升高而降低，在碱性条件下分别为78.9％、75.1％；PDI数据在各个pH在0.3左右，粒径变化区间为245.6～343.7nm。证明乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒在不同pH条件下，稳定性较好。
(2)鱼肉保鲜能力；
通过测定鱼肉中微生物菌落总数的变化、鱼肉脂肪氧化的变化、鱼肉硬度的变化，确定鱼肉的腐败情况。鱼肉切成约2g的鱼块，储藏条件为4℃，实验组鱼块分别浸渍于1MICε-聚赖氨酸、纳米颗粒PGH和PGH-WPE溶液中，对照组浸渍于无菌水中。微生物菌落总数采用平板涂布计数，脂肪氧化利用比色法，硬度利用质构仪测定。
结果如图8所示，乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒(PGH-WPE)处理组其菌落总数在第9天时为6.32log CFU/g，而游离ε-聚赖氨酸处理组和对照组在第9天时菌落总数分别为7.9、11.3log CFU/g；如图9所示，第7天时，与对照组和游离ε-聚赖氨酸处理组相比，添加乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒(PGH-WPE)的处理组TBARS值分别下降0.43、0.32mg/kg，其鱼肉脂肪氧化的变化更加缓慢；如图10所示，添加乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒(PGH-WPE)的处理组，其鱼肉硬度在7天时硬度为182N，而对照组和游离ε-聚赖氨酸处理组此时硬度分别为100.7N、115.4N。证明离子交联-热诱导的ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒可以对鱼肉起到一定的防腐保鲜作用。证明乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒可以对鱼肉起到一定的防腐保鲜作用。

Claims (7)

1.一种乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）原料制备：取ε-聚赖氨酸粉末、阿拉伯胶粉末和乳清蛋白粉末，将ε-聚赖氨酸粉末溶解、过滤后稀释制得ε-聚赖氨酸稀释液；将阿拉伯胶粉末溶解、过滤后稀释制得阿拉伯胶稀释液；将乳清蛋白粉末溶解、过滤后稀释制得乳清蛋白稀释液；
（2）ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒制备：取步骤（1）中ε-聚赖氨酸稀释液、阿拉伯胶稀释液在磁力搅拌器上混合搅拌1 h，随后进行90℃水浴加热3 h，在500 w功率下进行超声10min，得到离子交联-热诱导的ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒溶液；
（3）乳清蛋白混合：取步骤（1）中乳清蛋白稀释液，与步骤（2）中纳米颗粒溶液混合均匀，得到第一混合溶液；
（4）酶交联：取步骤（3）中第一混合溶液，加入谷氨酰胺转氨酶，酶活力为500U/g，制得乳清蛋白包被的纳米颗粒溶液；
（5）灭酶：取步骤（4）制备的乳清蛋白包被的纳米颗粒溶液加热至90-100℃，并保温5-15分钟，得到第二混合溶液；
（6）超声：取步骤（5）中的第二混合溶液，超声破碎制得纳米颗粒溶液；
（7）干燥：取步骤（6）制备的超声后的纳米颗粒溶液，喷雾干燥或冷冻干燥，即得所述乳清蛋白/ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒产品。
2. 根据权利要求1所述的乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中采用水进行稀释，所述水选自超纯水，稀释液浓度为10 mg/mL。
3.根据权利要求1所述的乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中ε-聚赖氨酸与阿拉伯胶浓度比为1:4，ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒溶液pH为5。
4.根据权利要求1所述的乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中所添加的乳清蛋白稀释液与纳米颗粒溶液中的ε-聚赖氨酸浓度比为1:1~5:1。
5.根据权利要求1所述的乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中谷氨酰胺转氨酶添加量为第一混合溶液的1%~5%，温度为5℃~15℃，pH为5~7。
6. 根据权利要求1所述的乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述步骤（6）中超声条件为500 w、5~10 min，超声3~5 s，间隔3~5s。
7. 根据权利要求1所述的乳清蛋白-ε-聚赖氨酸-阿拉伯胶纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述步骤（7）中喷雾干燥的条件为：进风温度120~180℃，出风温度55~85℃；冷冻干燥的条件为：-22-18℃、100-200 Pa。
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