CN113412804A - 一种中华绒螯蟹幼蟹存活力的判断方法 - Google Patents

一种中华绒螯蟹幼蟹存活力的判断方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种中华绒螯蟹幼蟹存活力的判断方法，涉及现代农业产业河蟹养殖领域；本发明公开的一种中华绒螯蟹幼蟹存活力的判断方法，通过分析中华绒螯蟹在盐度胁迫下的应激表现和渗透压调节情况，从而判断中华绒螯蟹幼蟹存活力。本发明建立的中华绒螯蟹幼蟹存活力的判断方法具有极好的可靠性，节约了幼蟹至成蟹阶段的养殖资源，同时根据存活力的判断结果进行优胜劣汰，可以有效提高中华绒螯蟹育肥后成蟹的产品品质。

Description

一种中华绒螯蟹幼蟹存活力的判断方法
技术领域
本发明涉及现代农业产业河蟹养殖领域，特别是涉及一种中华绒 螯蟹幼蟹存活力的判断方法。
背景技术
中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)因其螯足掌部内外缘密生绒 毛而得名。淡水蟹种原产于中国，广泛分布于中国东部沿海的溪流和 河流中，因其味道鲜美，营养价值高，深受广大消费者喜爱。
中华绒螯蟹越冬后的一龄蟹种至成蟹是育肥生长的关键时期，此 阶段需要密切观察幼蟹的活力，因其幼蟹个头小、体表稚嫩，难以判 断幼蟹活力，目前养殖户往往采用“以量取胜”，让幼蟹自然淘汰， 不仅浪费了幼蟹至成蟹阶段的养殖资源，更极大的影响育肥后成蟹的 产品品质。因此，亟需一种对中华绒螯蟹幼蟹的存活力判断方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种中华绒螯蟹幼蟹存活力的判断方法，以 解决上述现有技术存在的问题。
为实现上述目的，本发明提供一种中华绒螯蟹幼蟹存活力的判断 方法，包括以下步骤：
(1)对中华绒螯蟹幼蟹进行随机抽样；
(2)将步骤(1)中的抽样幼蟹平均分三组，分别放入盐度8‰、 16‰和32‰的水体中饲养；
(3)饲养结束后测定所述抽样幼蟹组织匀浆上清液中的Na+浓 度、Cl–浓度、超氧化物歧化酶活力和碱性磷酸酶活力；
(4)根据幼蟹抗盐度能力表与幼蟹非特异性免疫能力表对待测 所述抽样幼蟹进行评分，分别获得抗盐度分数和非特异性免疫能力分 数；
所述幼蟹抗盐度能力表为：
Figure BDA0003176607150000021
所述幼蟹非特异性免疫能力表为：
Figure BDA0003176607150000031
(5)将步骤(4)获得抗盐度分数和非特异性免疫能力分数对照 活力强度划分表对待测幼蟹进行存活力的判断，所述活力强度划分表 为：
Figure BDA0003176607150000032
Figure BDA0003176607150000041
进一步的，所述随机抽样的抽样比例为所有幼蟹总重量的1‰ -3‰。
进一步的，步骤(2)中所述盐度8‰、16‰和32‰的水体的制 备方法为：使用盐卤和曝气后的自来水，采用逐步增盐法调配为所述 盐度8‰、16‰和32‰的水体。
进一步的，步骤(2)中所述饲养的条件为：盐度8‰、16‰和 32‰的水体pH为7-8,溶解氧>5mg/L，总氨氮<0.5mg/L。
进一步的，中华绒螯蟹幼蟹组织匀浆、离心后得到步骤(3)中 所述幼蟹组织匀浆上清液。
本发明公开了以下技术效果：本发明通过分析中华绒螯蟹在盐度 胁迫下的应激表现和渗透压调节情况，从而判断中华绒螯蟹幼蟹存活 力。本发明建立的中华绒螯蟹幼蟹存活力的判断方法具有极好的可靠 性，节约了幼蟹至成蟹阶段的养殖资源，同时根据存活力的判断结果 进行优胜劣汰，可以有效提高中华绒螯蟹育肥后成蟹的产品品质。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面 将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描 述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来 讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他 的附图。
图1为实施例1中幼蟹在不同盐度的水体中的成活率变化结果；
图2为实施例1中幼蟹组织上清液在不同盐度的水体中SOD、ACP、 AKP和PO的活力变化结果，其中a为SOD，b为ACP，c为AKP，d为 PO。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方 案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部 分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普 通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例， 都属于本发明保护的范围。
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结 合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
本发明所使用的材料、仪器及试剂如无特殊说明，均可由商业途 径获得；所使用的实验方法如无特殊说明，均为本领域常规实验方法。
实施例1中华绒螯蟹幼蟹的存活力判断方法的建立
步骤一：对幼蟹苗种进行抽样，基于不同盐度水体下测定活力强 度相关参数(组织上清液渗透压、离子浓度、非特异性免疫酶活)。
步骤(1)：对同批幼蟹进行随机抽样，抽样比例为每批幼蟹重量 的1‰-3‰。具体为从上海海洋大学崇明基地选选取规格整齐、体无 外伤、肢体健全的幼蟹900只。
步骤(2):使用盐卤和曝气后的自来水，采用逐步增盐法调配为盐 度8‰、16‰、32‰的水体。
步骤(3):设置每个盐度胁迫水体3个平行组,步骤(1)抽样幼蟹 均分放入每组水体中，进行饲养48h,确保过程中水体pH为7-8,溶解 氧>5mg/L，总氨氮<0.5mg/L。
步骤(4):饲养结束后，从每个平行组中随机选取健康且腹肢完整 的幼蟹30只置于冰盒中麻醉15-20min,用蒸馏水漂洗2次,吸水 纸擦干蟹体表水分，称量各平行组的幼蟹重量，精确到0.001g。按 照质量(g)：体积(mL)比＝1：9的比例,加入9倍体积的无离子水,经组织匀浆机12000r/min、4℃研磨制成10％的匀浆液。随后将制好的 匀浆液在4000r/min、4℃条件下离心3min,吸取上清液再在4℃、 10000g/min条件下离心20min,吸取上清液,置于-80℃冰箱中备 用。步骤(5)：采用南京建成生物工程研究所的相关试剂盒测定血清 的超氧化物歧化酶(SOD)、酚氧化酶(PO)、酸性磷酸酶(ACP)和 碱性磷酸酶(AKP)活力。取血清测定血清渗透压；用超纯水将血清 稀释2倍后分别测定K+、Na+、Cl–、Ca2+浓度。
步骤二：建立幼蟹活力强度划分
幼蟹活力强度划分基于急性盐度胁迫对幼蟹的渗透压调节和非 特异性免疫酶的研究。
由图1可以看出，河蟹组织上清液渗透压浓度随水体盐度升高呈 上升趋势。32‰组血清渗透压显著高于0、8‰和16‰组(P<0.05)，0、 8‰和16‰组之间差异不显著(P>0.05)。随着实验水体盐度升高,河
表1 中华绒螯蟹幼蟹组织匀浆渗透压和Na+、Cl–、K+、Ca2+浓度
Figure BDA0003176607150000071
选取血淋巴离子浓度Na+、Cl–浓度作为幼蟹活力强度划分的指标 之一，设置幼蟹抗盐度能力表(表2)。
表2 幼蟹抗盐度能力表
Figure BDA0003176607150000072
Figure BDA0003176607150000081
随着盐度的升高，河蟹组织上清液中SOD、ACP、AKP和PO的活力水平 总体呈现先下降后上升，最后趋于稳定的趋势(图2)，8‰组活性最低， 显著低于16‰和32‰组(P<0.05)。选取非特异性免疫酶SOD和AKP作为幼 蟹活力强度划分的指标之一，设置幼蟹非特异性免疫能力表(表3)。
表3 幼蟹非特异性免疫能力表
Figure BDA0003176607150000082
Figure BDA0003176607150000091
综合建立幼蟹活力强度划分如表4所示：
表4 活力强度划分
Figure BDA0003176607150000092
根据表1-2获得待测样本的幼蟹抗盐度能力与幼蟹非特异性免 疫能力测定结果，再与活力强度划分表(表4)进行比较，判定幼蟹 活力情况。
实施例2
2019年3月，在上海海洋大学实验基地开展急性盐度胁迫对中 华绒螯蟹幼蟹渗透压调节和免疫力的研究，从上海海洋大学崇明基地 3个培育池塘选取规格整齐、体无外伤、肢体健全的幼蟹各1000只， 经过暂养后，利用实施例1的方法对中华绒螯蟹幼蟹进行存活力判 断，具体为：
(1)对上海海洋大学崇明基地3个培育池塘随机抽样规格整齐、 体无外伤、肢体健全的各100只幼蟹。
(2)使用盐卤和曝气后的自来水，采用逐步增盐法调配为盐度 0‰、8‰、16‰、32‰的水体。
(3)设置每个盐度胁迫水体3个平行组,步骤(1)抽样幼蟹均分 放入每组水体中，进行饲养48h,确保过程中水体pH保持在7-8,溶解 氧>5mg/L，总氨氮<0.5mg/L。
(4)饲养结束后，从每个平行组中随机选取健康且腹肢完整的幼 蟹30只置于冰盒中麻醉15-20min,用蒸馏水漂洗2次,吸水纸擦 干蟹体表水分。用精度为0.001g的电子天平称量各平行组仔蟹重量。 按照质量(g)︰体积(mL)比＝1︰9的比例,加入9倍体积的无离子水, 经组织匀浆机12000r/min、4℃研磨制成10％的匀浆液。随后将制好 的匀浆液放入5mLEppendorf离心管中,经微型匀浆器(型号:T10B, 德国IKA公司生产)4000r/min、4℃条件下离心3min,吸取上清液 置入5mL Eppendorf离心管中,将所得上清液在4℃、10000g/min 条件下离心20min,吸出上清液转入10mL Eppendorf离心管中,置 于–80℃冰箱中备用。
步骤(5)采用南京建成生物工程研究所的相关试剂盒测定组织上 清液超氧化物歧化酶(SOD)和碱性磷酸酶(AKP)活力。取50μL组 织上清液用冰点渗透压测定仪(型号：OSMOMAT 030,德国Gonotec公 司生产)测定其渗透压,用超纯水将上清液稀释2倍后用电解质分析 仪(型号：K-Lite5,广东梅州康立高科有限公司生产)分别测定Na+、 和Cl–浓度。
将各测定结果与实施例1中表1的中华绒螯蟹幼蟹活力强度划分 表的内容进行比较，判断幼蟹存活力情况。判断结果如表5所示。
表5 幼蟹存活力情况判断结果
Figure BDA0003176607150000111
根据上述结果，将所有样本在常规养蟹条件下继续培养，2周后， 统计存活率。统计结果如表6所示。
表6 所有样本在常规养蟹条件下继续培养的存活率统计结果
培育池序号 活力强度判断结果 存活率
1号 活力一般 78.6％
2号 活力良好 95.7％
3号 活力较差 54.3％
由表5-6可知，抽样的幼蟹存活力判断结果与所有样本在常规养 蟹条件下继续培养的存活率统计结果一致，表明本发明建立的中华绒 螯蟹幼蟹存活力的判断方法具有极好的可靠性。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本 发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普 通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本 发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (5)

1.一种中华绒螯蟹幼蟹存活力的判断方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)对中华绒螯蟹幼蟹进行随机抽样；
(2)将步骤(1)中的抽样幼蟹平均分三组，分别放入盐度8‰、16‰和32‰的水体中饲养；
(3)饲养结束后测定所述抽样幼蟹组织匀浆上清液中的Na+浓度、Cl–浓度、超氧化物歧化酶活力和碱性磷酸酶活力；
(4)根据幼蟹抗盐度能力表与幼蟹非特异性免疫能力表对待测所述抽样幼蟹进行评分，分别获得抗盐度分数和非特异性免疫能力分数；
所述幼蟹抗盐度能力表为：
Figure FDA0003176607140000011
Figure FDA0003176607140000021
所述幼蟹非特异性免疫能力表为：
Figure FDA0003176607140000022
Figure FDA0003176607140000031
(5)将步骤(4)获得抗盐度分数和非特异性免疫能力分数对照活力强度划分表对待测幼蟹进行存活力的判断，所述活力强度划分表为：
Figure FDA0003176607140000032
2.根据权利要求1所述的中华绒螯蟹幼蟹存活力的判断方法，其特征在于：所述随机抽样的抽样比例为所有幼蟹总重量的1‰-3‰。
3.根据权利要求1所述的中华绒螯蟹幼蟹存活力的判断方法，其特征在于，步骤(2)中所述盐度8‰、16‰和32‰的水体的制备方法为：使用盐卤和曝气后的自来水，采用逐步增盐法调配为所述盐度8‰、16‰和32‰的水体。
4.根据权利要求1所述的中华绒螯蟹幼蟹存活力的判断方法，其特征在于，步骤(2)中所述饲养的条件为：盐度8‰、16‰和32‰的水体pH为7-8,溶解氧>5mg/L，总氨氮<0.5mg/L。
5.根据权利要求1所述的中华绒螯蟹幼蟹存活力的判断方法，其特征在于：中华绒螯蟹幼蟹组织匀浆、离心后得到步骤(3)中所述幼蟹组织匀浆上清液。
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