CN113402322A - 一种富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂及其制备方法 - Google Patents

一种富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂及其制备方法，属于农用微生物技术领域。本发明微生物菌剂包括以下原料制备而成，硒盐0.15‑0.3份、活化糖醇10‑30份、中量元素30‑50份、黄腐酸10‑15份、微量元素4‑8份、微生物发酵液3‑5份、水50‑100份。其中活化糖醇、黄腐酸、微生物菌剂，三者相互配合鳌合作用明显，共同促进作物对于中微量元素和硒元素的吸收，大幅提升作物产量、品质，同时本发明液体生物菌剂，还可促进土壤团粒结构形成，活化板结土壤，增强土壤保水保肥能力，有效提高肥料养分利用率，长期使用对环境无危害，具有广阔的经济效益和社会效益。

Description

一种富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂及其制备方法
技术领域
本发明属于农用微生物技术领域，具体涉及一种富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂及其制备方法。
背景技术
硒是人体必需的微量元素，人体缺硒可引起某些重要器官的功能失调，导致许多严重疾病发生。低硒或缺硒人群通过适量补硒不但能够预防肿瘤、肝病等的发生，而且可以提高机体免疫能力，维护心、肝、肺、胃等重要器官正常功能，预防老年性心、脑血管疾病的发生。富硒作物作为一类健康食品，市场前景广阔。
微量元素大多数是植物体内促进光合作用、呼吸作用以及物质转化作用等的“酶”或“辅酶”的组成部分，在植物体内非常活跃。当土壤中缺乏某种中微量元素时，植物会出现“缺乏病症”，是农作物产量减少，品质下降，在这种情况下施用微量元素肥料，往往会收到极为明显的增收效果。
然而目前的富硒和补充微量元素的方法，基本是通过添加有机硒、无机硒的方式，然而直接添加有机无机硒，作物对硒的利用率极低，很难转换为作物体内真正有效的硒；微量元素的添加一种是各类金属无机盐的形式加入，一种是通过螯合剂鳌合后加入。
EDTA等化学螯合剂，虽然螯合性能较好，但因不能被作物吸收利用和难以降解，使用不当易对作物造成伤害，在农业领域很难得到应用。黄腐酸作为微量元素的有机螯合剂有着优越条件，如天然易取、活性基团多、安全环保、物美价廉等，目前市售产品多为黄腐酸螯合中微量元素，然而黄腐酸与中微量元素的螯合受到腐植酸分子量和官能团等性质的影响，直接使用黄腐酸螯合中微量元素复配过程易产生沉淀，且影响植物对中微量元素的吸收。而微量元素吸收效果又会影响到硒的吸收，因此，如何促进作物对于微量元素的利用而又最大程度作物本身的硒含量，对农作物增产具有重要意义。
发明内容
本发明一方面要解决目前现有技术中黄腐酸鳌合微量元素效果不佳的问题，另一方面要解决作物对微量元素以及硒元素的吸收和利用的问题，提供一种富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂及其制备方法，同时解决上述问题。
为实现上述技术目的，本发明所采用的技术方案为：
一种富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂，包括以下原料制备而成，硒盐0.15-0.3份、活化糖醇10-30份、中量元素30-50份、黄腐酸10-15份、微量元素4-8份、微生物发酵液3-5份、水50-100份。
进一步的，所述硒盐为硒酸钠、亚硒酸钠、硒酸钾、亚硒酸钾中的一种或几种。
进一步的，所述活化糖醇的制备方法为：将糖醇和聚谷氨酸溶液按照10g：100ml的比例加入到容器中，加热到40-50℃搅拌至完全溶解后冷却至室温，得活化糖醇，聚谷氨酸溶液的质量浓度为50％。
进一步的，所述糖醇为甘露醇、山梨醇、木糖醇、麦芽糖醇中的一种或几种。
进一步的，所述中量元素为钙盐和镁盐。
进一步的，所述微量元素为铁、锰、铜、锌、硼、钼中的至少一种微量元素的无机盐。
进一步的，所述微生物发酵液的制备方法为：将兔隐球酵母和枯草芽孢杆菌分别接种于LB固体培养基上，25-28℃恒温培养5-8h得种子液，再按照1％接种量将种子液分别接种于LB液体培养基中，往复式摇床150r·min-1，28℃恒温培养12h，培养至菌含量均为O.D600≈2.0，然后按照1:1的体积比混合得到微生物发酵菌液。
更进一步的，所述LB培养基的组成为：胰蛋白胨20g、酵母提取物5g、NaCl 5g、蒸馏水1000mL，pH值7.2—7.4，121℃灭菌19min，固体培养基另加琼脂粉10g
进一步的，所述兔隐球酵母为CGMCC 2.5648，所述枯草芽孢杆菌为CGMCC 1.14985。
更进一步的，本发明兔隐球酵母(Cryptococcus cuniculi)，购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(China General Microbiological Culture Collection Center,CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2016年4月20日，保藏编号：CGMCC 2.5648。
更进一步的，本发明枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(China General Microbiological Culture Collection Center,CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2014年12月10号，保藏编号：CGMCC 1.14985。
一种富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂的制备方法，包括一下步骤：
(1)将糖醇和聚谷氨酸溶液按照10g：100ml的比例加入到容器中，加热到40-50℃搅拌至完全溶解后冷却至室温，得活化糖醇；
(2)按重量份将活化糖醇、黄腐酸依次加入水中，将溶液温度维持在60-100℃，搅拌至完全溶解，得混合物A；
(3)按重量份将中量元素、微量元素加入到混合物A中，将溶液温度维持在60-100℃，匀速搅拌10-30分钟，得到混合物B；
(4)按重量份将硒盐加入到混合物B中，将溶液温度维持在60-100℃，匀速搅拌10-30分钟，冷却至室温，得到混合物C；
(5)按重量份最后加入微生物发酵菌液，室温搅拌均匀，得成品。
中微量营养元素对作物生长发育十分重要，一旦缺乏就会导致作物产量、品质下降。例如，钙是植物细胞壁和细胞间层主要成分，能使作物器官和个体具有一定的强度。
铁(Fe)是细胞色素、血红素、铁氧还蛋白及多种酶的重要组分，在植物体内起传递电子的作用，是叶绿素合成中必不可少的物质。植物缺铁症状：在植物体内不易移动，缺铁时首先表现在幼叶上。表现为脉间失绿，严重时整个幼叶呈黄白色，缺铁常在高PH土壤中发生。
锰是叶绿体的成分，促进种子发育和幼苗早期生长，对光合作用和蛋白质的形成有重要作用。植物缺锰症状：症状从新叶开始，叶片脉间失绿，叶脉仍为绿色，叶片上出现褐色或灰色斑点，逐渐连成条状，严重时叶色失绿并坏死。
锌(Zn)是多种酶的组分和活化剂，已发现80多种含锌酶，参与生长素的合成。植物缺锌症状：老组织先出现缺锌时生长素含量下降，植物生长受阻，节间缩短,叶片扩展受抑制，表现为小叶簇生，称为小叶病或簇叶病。玉米缺锌出现白条症。
钼(Mo)是需要量最少的必需元素。MoO42-是硝酸还原酶、固氮酶的组成成分；是黄嘌吟脱氢酶及脱落酸合成中的某些氧化酶的成分，豆科植物根瘤菌的固氮特别需要钼,固氮酶是由铁蛋白和铁钼蛋白组成的。植物缺钼症状：新叶畸形，有斑点。散布于叶片上。生长不良，植株矮小，豆科植物缺钼会影响固氮，荚粒不饱满。
但中微量元素易与硫、磷元素等结合生成沉淀，不易加入到肥料基础体系中。在肥料生产过程中，为了解决元素共存问题，常采用螯合剂对中微量元素进行螯合处理。化学类螯合剂如乙二胺四乙酸等物质，会对土壤环境存在较大的危害，而黄腐酸、糖醇等有机螯合剂，鳌合过程易产生沉淀鳌合效果差，作物利用率低。
本发明针对目前的问题，提供一种复配鳌合中微量元素的微生物制剂。
首先通过聚谷氨酸活化糖醇，作为第一鳌合剂，再加入黄腐酸作为补充螯合剂，活化后的糖醇更易与中微量元素形成小分子有机螯合物，使中微量元素最大程度地以氨基酸和糖醇螯合物的形式存在并转移到植物体内，而黄腐酸作为补充螯合剂，一方面鳌合中微量元素，另一方面可以溶解无机硒盐。
其次，微生物发酵液中兔隐球酵分泌的活性物质，可有效缓解金属元素与金属元素，金属元素和硒元素之间的部分拮抗作用，可以促进中微量元素的吸收，同时可以促进黄腐酸溶解的无机硒盐转化为易被作为吸收的有机硒，提升作物本体的硒含量，而添加的枯草芽孢杆菌还可以提升作物的抗病能力，提升作物产量。
活化糖醇、黄腐酸、微生物菌剂，三者相互配合鳌合作用明显，共同促进作物对于中微量元素和硒元素的吸收，大幅提升作物产量、品质和抗病能力，同时本发明液体生物菌剂，还可促进土壤团粒结构形成，活化板结土壤，增强土壤保水保肥能力，有效提高肥料养分利用率，长期使用对环境无危害，具有广阔的经济效益和社会效益。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的技术方案做进一步说明，但不限于此。
实施例1
一种富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂，包括以下原料制备而成，硒盐0.15份、活化糖醇10份、中量元素30份、黄腐酸10份、微量元素4份、微生物发酵液3份、水50份。
进一步的，所述硒盐为硒酸钠。
进一步的，所述活化糖醇的制备方法为：将糖醇和聚谷氨酸溶液按照10g：100ml的比例加入到容器中，加热到40-50℃搅拌至完全溶解后冷却至室温，得活化糖醇，聚谷氨酸溶液的质量浓度为50％。
进一步的，所述糖醇为甘露醇。
进一步的，所述中量元素为硝酸钙和硝酸镁。
进一步的，所述微量元素为硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、硼酸、七钼酸铵。
进一步的，所述微生物发酵液的制备方法为：将兔隐球酵母和枯草芽孢杆菌分别接种于LB固体培养基上，25℃恒温培养5h得种子液，再按照1％接种量将种子液分别接种于LB液体培养基中，往复式摇床150r·min-1，28℃恒温培养12h，培养至菌含量均为O.D 600≈2.0，然后按照1:1的体积比混合得到微生物发酵菌液。
更进一步的，所述LB培养基的组成为：胰蛋白胨20g、酵母提取物5g、NaCl 5g、蒸馏水1000mL，pH值7.2—7.4，121℃灭菌19min，固体培养基另加琼脂粉10g
进一步的，所述兔隐球酵母为CGMCC 2.5648，所述枯草芽孢杆菌为CGMCC 1.14985。
更进一步的，本发明兔隐球酵母(Cryptococcus cuniculi)，购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(China General Microbiological Culture Collection Center,CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2016年4月20日，保藏编号：CGMCC 2.5648。
更进一步的，本发明枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(China General Microbiological Culture Collection Center,CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2014年12月10号，保藏编号：CGMCC 1.14985。
一种富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂的制备方法，包括一下步骤：
(1)将糖醇和聚谷氨酸溶液按照10g：100ml的比例加入到容器中，加热到40℃搅拌至完全溶解后冷却至室温，得活化糖醇；
(2)按重量份将活化糖醇、黄腐酸依次加入水中，将溶液温度维持在60℃，搅拌至完全溶解，得混合物A；
(3)按重量份将中量元素、微量元素加入到混合物A中，将溶液温度维持在60℃，匀速搅拌10分钟，得到混合物B；
(4)按重量份将硒盐加入到混合物B中，将溶液温度维持在60℃，匀速搅拌10分钟，冷却至室温，得到混合物C；
(5)按重量份最后加入微生物发酵菌液，室温搅拌均匀，得成品。
实施例2
一种富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂，包括以下原料制备而成，硒盐0.2份、活化糖醇20份、中量元素40份、黄腐酸12份、微量元素6份、微生物发酵液4份、水80份。
进一步的，所述硒盐为硒酸钾。
进一步的，所述活化糖醇的制备方法为：将糖醇和聚谷氨酸溶液按照10g：100ml的比例加入到容器中，加热到50℃搅拌至完全溶解后冷却至室温，得活化糖醇，聚谷氨酸溶液的质量浓度为50％。
进一步的，所述糖醇为山梨醇。
进一步的，所述中量元素为硝酸钙和硝酸镁。
进一步的，所述微量元素为硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、硼酸、七钼酸铵。
进一步的，所述微生物发酵液的制备方法为：将兔隐球酵母和枯草芽孢杆菌分别接种于LB固体培养基上，28℃恒温培养8h得种子液，再按照1％接种量将种子液分别接种于LB液体培养基中，往复式摇床150r·min-1，28℃恒温培养12h，培养至菌含量均为O.D 600≈2.0，然后按照1:1的体积比混合得到微生物发酵菌液。
更进一步的，所述LB培养基的组成为：胰蛋白胨20g、酵母提取物5g、NaCl 5g、蒸馏水1000mL，pH值7.2—7.4，121℃灭菌19min，固体培养基另加琼脂粉10g
进一步的，所述兔隐球酵母为CGMCC 2.5648，所述枯草芽孢杆菌为CGMCC 1.14985。
更进一步的，本发明兔隐球酵母(Cryptococcus cuniculi)，购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(China General Microbiological Culture Collection Center,CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2016年4月20日，保藏编号：CGMCC 2.5648。
更进一步的，本发明枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(China General Microbiological Culture Collection Center,CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2014年12月10号，保藏编号：CGMCC 1.14985。
一种富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂的制备方法，包括一下步骤：
(1)将糖醇和聚谷氨酸溶液按照10g：100ml的比例加入到容器中，加热到50℃搅拌至完全溶解后冷却至室温，得活化糖醇；
(2)按重量份将活化糖醇、黄腐酸依次加入水中，将溶液温度维持在100℃，搅拌至完全溶解，得混合物A；
(3)按重量份将中量元素、微量元素加入到混合物A中，将溶液温度维持在100℃，匀速搅拌30分钟，得到混合物B；
(4)按重量份将硒盐加入到混合物B中，将溶液温度维持在100℃，匀速搅拌30分钟，冷却至室温，得到混合物C；
(5)按重量份最后加入微生物发酵菌液，室温搅拌均匀，得成品。
实施例3
一种富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂，包括以下原料制备而成，硒盐0.3份、活化糖醇30份、中量元素50份、黄腐酸15份、微量元素8份、微生物发酵液5份、水100份。
进一步的，所述硒盐为硒酸钾、亚硒酸钾1:1混合。
进一步的，所述活化糖醇的制备方法为：将糖醇和聚谷氨酸溶液按照10g：100ml的比例加入到容器中，加热到40-50℃搅拌至完全溶解后冷却至室温，得活化糖醇，聚谷氨酸溶液的质量浓度为50％。
进一步的，所述糖醇为木糖醇。
进一步的，所述中量元素为硝酸钙和硝酸镁。
进一步的，所述微量元素为硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、硼酸、七钼酸铵。
进一步的，所述微生物发酵液的制备方法为：将兔隐球酵母和枯草芽孢杆菌分别接种于LB固体培养基上，28℃恒温培养8h得种子液，再按照1％接种量将种子液分别接种于LB液体培养基中，往复式摇床150r·min-1，28℃恒温培养12h，培养至菌含量均为O.D 600≈2.0，然后按照1:1的体积比混合得到微生物发酵菌液。
更进一步的，所述LB培养基的组成为：胰蛋白胨20g、酵母提取物5g、NaCl 5g、蒸馏水1000mL，pH值7.2—7.4，121℃灭菌19min，固体培养基另加琼脂粉10g
进一步的，所述兔隐球酵母为CGMCC 2.5648，所述枯草芽孢杆菌为CGMCC 1.14985。
更进一步的，本发明兔隐球酵母(Cryptococcus cuniculi)，购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(China General Microbiological Culture Collection Center,CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2016年4月20日，保藏编号：CGMCC 2.5648。
更进一步的，本发明枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(China General Microbiological Culture Collection Center,CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2014年12月10号，保藏编号：CGMCC 1.14985。
一种富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂的制备方法，包括一下步骤：
(1)将糖醇和聚谷氨酸溶液按照10g：100ml的比例加入到容器中，加热到50℃搅拌至完全溶解后冷却至室温，得活化糖醇；
(2)按重量份将活化糖醇、黄腐酸依次加入水中，将溶液温度维持在100℃，搅拌至完全溶解，得混合物A；
(3)按重量份将中量元素、微量元素加入到混合物A中，将溶液温度维持在100℃，匀速搅拌30分钟，得到混合物B；
(4)按重量份将硒盐加入到混合物B中，将溶液温度维持在100℃，匀速搅拌30分钟，冷却至室温，得到混合物C；
(5)按重量份最后加入微生物发酵菌液，室温搅拌均匀，得成品。
对比例1
一种富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂，包括以下原料制备而成，硒盐0.3份、糖醇30份、中量元素50份、黄腐酸15份、微量元素8份、微生物发酵液5份、水100份。
进一步的，所述硒盐为硒酸钾、亚硒酸钾1:1混合。
进一步的，所述糖醇为甘露醇、山梨醇、木糖醇、麦芽糖醇中的一种或几种。
进一步的，所述中量元素为硝酸钙和硝酸镁。
进一步的，所述微量元素为硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、硼酸、七钼酸铵。
进一步的，所述微生物发酵液的制备方法为：将兔隐球酵母和枯草芽孢杆菌分别接种于LB固体培养基上，28℃恒温培养8h得种子液，再按照1％接种量将种子液分别接种于LB液体培养基中，往复式摇床150r·min-1，28℃恒温培养12h，培养至菌含量均为O.D 600≈2.0，然后按照1:1的体积比混合得到微生物发酵菌液。
更进一步的，所述LB培养基的组成为：胰蛋白胨20g、酵母提取物5g、NaCl 5g、蒸馏水1000mL，pH值7.2—7.4，121℃灭菌19min，固体培养基另加琼脂粉10g
进一步的，所述兔隐球酵母为CGMCC 2.5648，所述枯草芽孢杆菌为CGMCC 1.14985。
更进一步的，本对比例兔隐球酵母(Cryptococcus cuniculi)，购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(China General Microbiological Culture Collection Center,CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2016年4月20日，保藏编号：CGMCC 2.5648。
更进一步的，本对比例枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(China General Microbiological Culture Collection Center,CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2014年12月10号，保藏编号：CGMCC 1.14985。
一种富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂的制备方法，包括一下步骤：
(1)按重量份将糖醇、黄腐酸依次加入水中，将溶液温度维持在100℃，搅拌至完全溶解，得混合物A；
(2)按重量份将中量元素、微量元素加入到混合物A中，将溶液温度维持在100℃，匀速搅拌30分钟，得到混合物B；
(3)按重量份将硒盐加入到混合物B中，将溶液温度维持在100℃，匀速搅拌30分钟，冷却至室温，得到混合物C；
(4)按重量份最后加入微生物发酵菌液，室温搅拌均匀，得成品。
本对比例，除不进行糖醇的活化外，其余均同实施例3。
对比例2
一种富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂，包括以下原料制备而成，硒盐0.3份、活化糖醇30份、中量元素50份、黄腐酸15份、微量元素8份、微生物发酵液5份、水100份。
进一步的，所述硒盐为硒酸钾、亚硒酸钾1:1混合。
进一步的，所述活化糖醇的制备方法为：将糖醇和聚谷氨酸溶液按照10g：100ml的比例加入到容器中，加热到40-50℃搅拌至完全溶解后冷却至室温，得活化糖醇，聚谷氨酸溶液的质量浓度为50％。
进一步的，所述糖醇为木糖醇。
进一步的，所述中量元素为硝酸钙和硝酸镁。
进一步的，所述微量元素为硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、硼酸、七钼酸铵。
进一步的，所述微生物发酵液的制备方法为：将枯草芽孢杆菌接种于LB固体培养基上，28℃恒温培养8h得种子液，再按照1％接种量将种子液接种于LB液体培养基中，往复式摇床150r·min-1，28℃恒温培养12h，培养至菌含量均为O.D 600≈2.0得到微生物发酵菌液。
更进一步的，所述LB培养基的组成为：胰蛋白胨20g、酵母提取物5g、NaCl 5g、蒸馏水1000mL，pH值7.2—7.4，121℃灭菌19min，固体培养基另加琼脂粉10g
更进一步的，本对比例枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(China General Microbiological Culture Collection Center,CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2014年12月10号，保藏编号：CGMCC 1.14985。
一种富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂的制备方法，包括一下步骤：
(1)将糖醇和聚谷氨酸溶液按照10g：100ml的比例加入到容器中，加热到50℃搅拌至完全溶解后冷却至室温，得活化糖醇；
(2)按重量份将活化糖醇、黄腐酸依次加入水中，将溶液温度维持在100℃，搅拌至完全溶解，得混合物A；
(3)按重量份将中量元素、微量元素加入到混合物A中，将溶液温度维持在100℃，匀速搅拌30分钟，得到混合物B；
(4)按重量份将硒盐加入到混合物B中，将溶液温度维持在100℃，匀速搅拌30分钟，冷却至室温，得到混合物C；
(5)按重量份最后加入微生物发酵菌液，室温搅拌均匀，得成品。
本对比例，除微生物发酵液中不含兔隐球酵母外，其余均同实施例3。
对比例3
一种富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂，包括以下原料制备而成，硒盐0.3份、活化糖醇30份、中量元素50份、黄腐酸15份、微量元素8份、微生物发酵液5份、水100份。
进一步的，所述硒盐为硒酸钾、亚硒酸钾1:1混合。
进一步的，所述活化糖醇的制备方法为：将糖醇和聚谷氨酸溶液按照10g：100ml的比例加入到容器中，加热到40-50℃搅拌至完全溶解后冷却至室温，得活化糖醇，聚谷氨酸溶液的质量浓度为50％。
进一步的，所述糖醇为木糖醇。
进一步的，所述中量元素为硝酸钙和硝酸镁。
进一步的，所述微量元素为硫酸亚铁、硫酸锰、硫酸锌、硫酸铜、硼酸、七钼酸铵。
进一步的，所述微生物发酵液的制备方法为：将兔隐球酵母接种于LB固体培养基上，28℃恒温培养8h得种子液，再按照1％接种量将种子液接种于LB液体培养基中，往复式摇床150r·min-1，28℃恒温培养12h，培养至菌含量均为O.D 600≈2.0得到微生物发酵菌液。
更进一步的，所述LB培养基的组成为：胰蛋白胨20g、酵母提取物5g、NaCl 5g、蒸馏水1000mL，pH值7.2—7.4，121℃灭菌19min，固体培养基另加琼脂粉10g
进一步的，所述兔隐球酵母为CGMCC 2.5648。
更进一步的，本对比例兔隐球酵母(Cryptococcus cuniculi)，购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(China General Microbiological Culture Collection Center,CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2016年4月20日，保藏编号：CGMCC 2.5648。
一种富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂的制备方法，包括一下步骤：
(1)将糖醇和聚谷氨酸溶液按照10g：100ml的比例加入到容器中，加热到50℃搅拌至完全溶解后冷却至室温，得活化糖醇；
(2)按重量份将活化糖醇、黄腐酸依次加入水中，将溶液温度维持在100℃，搅拌至完全溶解，得混合物A；
(3)按重量份将中量元素、微量元素加入到混合物A中，将溶液温度维持在100℃，匀速搅拌30分钟，得到混合物B；
(4)按重量份将硒盐加入到混合物B中，将溶液温度维持在100℃，匀速搅拌30分钟，冷却至室温，得到混合物C；
(5)按重量份最后加入微生物发酵菌液，室温搅拌均匀，得成品。
本对比例，除微生物发酵液中不含枯草芽孢杆菌外，其余均同实施例3。
肥效试验
试验地点：山东省临沂市临沭县现代农业示范园，供试土壤理化性质见表1。
表1土壤理化性质
Figure BDA0003153685460000101
供试作物：番茄，品种为“普罗旺斯”
实验设计：共设7个处理，分别为实施例1-3、对比例1-3和空白对照
基肥(N︰P2O5︰K2O＝15：15：15)在种植前一次性施入，实施例、对比例液体菌剂根据番茄需肥特性于番茄苗期施入55％，盛花期施入30％，盛果期施入15％，总量为300L/hm2。
各处理重复3次，随机区组排列，共21个小区，小区之间铺设1m深的隔离膜，小区面积8平方米，番茄采用覆膜种植，1膜2管2行配置，株距65cm，理论株数5.2×104株/hm2。总灌水量2700m3/hm2，灌水8次，处理组菌剂随水施肥，每个处理均采用单独施肥罐，其他栽培管理措施参照当地大田。
测定项目与方法
果实收获后，取番茄果实的可食部分用清水冲洗，再用蒸馏水洗涤，最后用吸水纸吸干水分待用。取部分番茄果实测定可溶性固形物含量，另取一部分番茄果实测定维生素C及可溶性糖含量。剩余番茄在烘箱105℃杀青30min，于60℃恒温烘箱中烘干至恒质量，粉碎机粉碎，密封保存，用于测定果实中的各元素含量。
可溶性固形物含量采用折射仪法测定；维生素C含量采用2,6－二氯靛酚滴定法测定；可溶性糖含量采用蒽酮比色法测定。
Ca、Mg、Fe、Mn、Cu、Zn、Mo、Se元素测定:称取0.15g样品加入6mL HNO3、1mL HF和1mL H2O2，放在BHW-09A型恒温消解仪，120℃预消解30min，转入ETHOSA型微波消解仪中160℃消解1h左右，再放入BHW-09A型恒温消解仪160℃消解、赶酸至消煮液1mL左右，定容至45mL；用ICE3500原子吸收光谱仪测定Ca、Mg，用Nex ION350X电感耦合等离子体质谱仪测定Fe、Mn、Cu、Zn、Mo和Se元素。
通过生物富集系数(BCF)来衡量番茄的硒富集能力，即作物吸收硒元素能力的强弱。
计算公式如下：
生物富集系数(％)＝生物体中的元素浓度/根系土中的元素浓度×100。
番茄产量测定
小区产量:果实成熟时按第1穗果至第3穗果分别称量，计算每一穗果平均单株产量和整株单株产量，最后折算每667m2产量。
表2番茄种植效果
Figure BDA0003153685460000111
从表中数据可以看出，本发明实施例所得番茄果实，无论是果实VC、可溶性糖等品质指标，还是矿质元素和硒元素的积累，均比少了活化手段的对比例1、改变了微生物组成的对对比例2-3要好，这可能是由于活化糖醇和黄腐酸的加入，共同促进了中微量元素的鳌合，而微生物发酵液的加入，在促进作物对硒元素和鳌合中微量元素的吸收外，其在土壤中大量繁殖产生的糖类物质与植物粘液及矿物胚体等结合在一起，能够改善土壤团粒结构，并分解有机物质和矿物质，释放出营养元素，同时形成腐殖质，能够提高土壤肥力，促进了根系向上的水分和对硒元素、微量元素的运输，形成一个良好的系统，从而促进地上和地下部的生长，整体上提升番茄的掺量和品质。本发明各原料协同作用，相互配合，共同实现了作物对于硒元素和中微量元素的高效吸收和利用。
需要说明的是，上述实施例仅仅是实现本发明的优选方式的部分实施例，而非全部实施例。显然，基于本发明的上述实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的其他所有实施例，都应当属于本发明保护的范围。

Claims (9)

1.一种富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂，其特征在于，包括以下原料制备而成，硒盐0.15-0.3份、活化糖醇10-30份、中量元素30-50份、黄腐酸10-15份、微量元素4-8份、微生物发酵液3-5份、水50-100份。
2.根据权利要求1所述富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂，其特征在于，所述硒盐为硒酸钠、亚硒酸钠、硒酸钾、亚硒酸钾中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂，其特征在于，所述活化糖醇的制备方法为：将糖醇和聚谷氨酸溶液按照10g：100ml的比例加入到容器中，加热到40-50℃搅拌至完全溶解后冷却至室温，得活化糖醇，聚谷氨酸溶液的质量浓度为50％。
4.根据权利要求3所述富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂，其特征在于，所述糖醇为甘露醇、山梨醇、木糖醇、麦芽糖醇中的一种或几种。
5.根据权利要求1所述富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂，其特征在于，所述中量元素为钙盐和镁盐。
6.根据权利要求1所述富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂，其特征在于，所述微量元素为铁、锰、铜、锌、硼、钼中的至少一种微量元素的无机盐。
7.根据权利要求1所述富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂，其特征在于，所述微生物发酵液的制备方法为：将兔隐球酵母和枯草芽孢杆菌分别接种于LB固体培养基上，25-28℃恒温培养5-8h得种子液，再按照1％接种量将种子液分别接种于LB液体培养基中，往复式摇床150r·min-1，28℃恒温培养12h，培养至菌含量均为O.D 600≈2.0，然后按照1:1的体积比混合得到微生物发酵菌液。
8.根据权利要求7所述富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂，其特征在于，所述兔隐球酵母为兔隐球酵母CGMCC2.5648，所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌CGMCC1.14985。
9.一种权利要求1-8任意一项所述富硒糖醇鳌合型中微量元素生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将糖醇和聚谷氨酸溶液按照10g：100ml的比例加入到容器中，加热到40-50℃搅拌至完全溶解后冷却至室温，得活化糖醇；
(2)按重量份将活化糖醇、黄腐酸依次加入水中，将溶液温度维持在60-100℃，搅拌至完全溶解，得混合物A；
(3)按重量份将中量元素、微量元素加入到混合物A中，将溶液温度维持在60-100℃，匀速搅拌10-30分钟，得到混合物B；
(4)按重量份将硒盐加入到混合物B中，将溶液温度维持在60-100℃，匀速搅拌10-30分钟，冷却至室温，得到混合物C；
(5)按重量份最后加入微生物发酵菌液，室温搅拌均匀，得成品。
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