CN113398052A - 一种酵母发酵滤液与天然植物提取物的皮肤清洁组合物的制备方法与应用 - Google Patents

一种酵母发酵滤液与天然植物提取物的皮肤清洁组合物的制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种酵母发酵滤液与天然植物提取物的皮肤清洁组合物的制备方法与应用，属于化妆品技术领域，通过菌种活化、筛选、扩培、发酵、灭菌、收集滤液等步骤，运用微生物发酵技术，发酵过后的产物滤液在富含氨基酸、多肽、矿物质以及各种维生素等多种发酵活性成分的同时，复配无患子提取物、芦荟提取物、绿茶提取物、欧洲七叶树籽提取物、皂角提取物、薰衣草提取物、金缕梅提取物，有着较强的清洁作用，对皮肤刺激小，能够起到一定的抗菌祛痘的功效，同时保湿效果显著。本发明能够有效解决单独的提取物效果差，效果不能完全发挥的问题，具有更好的清洁、保湿效果。

Description

一种酵母发酵滤液与天然植物提取物的皮肤清洁组合物的制 备方法与应用
技术领域
本发明涉及化妆品技术领域，尤其涉及一种酵母发酵滤液与天然植物提取物的皮肤清洁组合物的制备方法与应用。
背景技术
人体的皮肤不停地通过皮脂腺和汗腺分泌皮脂和汗液，皮肤的角质也不断地进行着更新换代，再加上暴露在外界的皮肤极易粘附各种刺激物、致敏物、微生物及灰尘、污垢，可堵塞毛囊孔、汗腺口，因此经常清洗皮肤非常重要。
清洗还可促进皮肤血液循环，增进皮肤和身心健康。如果不及时清洗，将影响皮肤的新陈代谢，或使皮肤产生过敏反应，甚至造成皮肤感染。因此，清洁皮肤对于皮肤的护养和保健极为重要。
现有技术中将多种植物提取液进行复配形成的皮肤清洁组合物，在若干种提取液的复配过程中可能出现各项液体之间混合不充分的问题，且复配中间并没有使用相关的混合介质，导致其复合液不能将各组分的效果较好的结合，不能充分发挥各组分的效果。
发明内容
为克服现有技术中的存在的皮肤清洁组合物的结合效果差，效果不能完全发挥的问题，提出了一种酵母发酵滤液与天然植物提取物的皮肤清洁组合物的制备方法。
本发明的技术方案是：一种酵母发酵滤液与天然植物提取物的皮肤清洁组合物的制备方法，包括以下步骤：
S1，菌种活化：将冻存的酵母菌种经过解冻后置于培养基中，在pH值范围5.0～6.0、发酵温度25～35℃、摇床速度200～250rpm、发酵时间24～36小时的发酵条件下进行活化培养；
S2，菌种优化：将步骤S1中的活化后菌液稀释，挑选生长情况较好的酵母菌于麦芽汁培养基上，以获得单菌落；
S3，菌种扩培：将步骤S2筛选的优质菌落接种到液体培养基中进行扩大培养，得到发酵好的酵母菌菌液；
S4，正式发酵阶段：配制浓度为葡萄糖20g/L、蛋白胨20g/L、酵母膏10g/L、琼脂20g/L的混合液，接入步骤S3所得的酵母菌液5～10％；在pH值范围5.0～6.0、发酵温度25～35℃、摇床速度200～250rpm的条件下发酵2～3d；
S5，收集滤液：发酵结束后，90～100℃灭菌出料，冷却至室温，将所得到的发酵产物离心得到上清液；
S6，将无患子提取物、芦荟提取物、绿茶提取物、欧洲七叶树籽提取物、皂角提取物、薰衣草提取物、金缕梅提取物以及酵母发酵滤液加热到60～65℃搅拌溶解；皮肤清洁组合中按以下组份进行复配：包括10～15％无患子提取物、5～10％的芦荟提取物、10～15％的绿茶提取物、5～10％的欧洲七叶树籽提取物、1～5％的皂角提取物、1～5％的薰衣草提取物、5～10％的金缕梅提取物以及剩余组分为酵母发酵滤液；
S7，添加防腐剂：将最终所得的混合液按照占混合液总质量0.8～1.5％的比例添加防腐剂。
按照上述技术方案，所述步骤S1中的酵母菌选用酿酒酵母菌，培养基是用麦芽汁培养基；所述步骤S4中添加的酵母菌液为8％，发酵温度为29℃，发酵时间为2d，混合物是置于带有搅拌装置的发酵罐中发酵，搅拌速度为200～250r/min，搅拌时间为：每隔1小时搅拌20分钟；所述步骤S5中的灭菌温度是90℃，灭菌时间是30min，经过离心得到上清液；所述步骤S7添加的防腐剂为1,2-己二醇和对羟基苯乙酮。
按照上述技术方案，所述的无患子提取物，是将无患子粉碎，以75～95％乙醇为溶剂提取两次，其中第一次料液比为1:2～5，提取温度为60～80℃，提取时间为12～24h，过滤后滤渣第二次料液比为1:1～5，合并两次滤液，加入2～5％粉末活性炭搅拌1小时脱色，0.5um纸板过滤去除活性炭得到滤液,在65～80℃浓缩掉乙醇得到浓缩液，加入1/3量的二氯甲烷与浓缩液混匀静置分层保留上层液，重复三次，加入蒸馏水调节含固量为25％，再加入1/8乙醇，75℃浓缩掉乙醇与二氯甲烷，得到无患子提取物。
按照上述技术方案，所述的芦荟提取物，是将芦荟粉碎，加入蒸馏水作为溶剂，且料液比为1:20～40，浸泡30min后调节pH为4.5，加酶量0.2％～0.4％、果胶酶与纤维素酶配比1∶2～5，酶解温度30～70℃、酶解时间20～60min；将提取液真空过滤，取滤液并真空旋转蒸发至体积约10mL，然后加入5倍体积的无水乙醇，混合均匀，置于4℃冰箱静置12h，再将其在3000r/min转速下离心10min，取沉淀加蒸馏水充分溶解过滤后即为芦荟提取物。
按照上述技术方案，所述的绿茶提取物，是将绿茶粉碎，加入30～70％乙醇作为溶剂，且料液比为1:10～20，浸泡30min后调节pH为4.8，加酶量0.2％～0.4％、果胶酶与纤维素酶配比1∶2～5，酶解温度30～70℃、酶解时间20～60min；将提取液真空过滤，取滤液并真空旋转蒸发至密度为1.01～1.20g/mL，即得绿茶提取物。
按照上述技术方案，所述的欧洲七叶树籽提取物，是将欧洲七叶树籽粉碎后以75％～85％乙醇为溶剂，其中料液比为1:10～15，超声波提取45～75min，过滤，D101大孔吸附树脂分离纯化得到提取物，其中进样速度、洗脱剂浓度和洗脱速度分别是2～4ml/min，60～80％乙醇，0.5～2ml/min，得到欧洲七叶树籽提取物。
按照上述技术方案，所述的皂角提取物，是将皂角粉碎后，以蒸馏水作为溶剂，其中料液比为1:10～20，高温提取12～20h，过滤得到皂角提取物。
按照上述技术方案，所述的薰衣草提取物，将薰衣草花穗以50％～80％乙醇为溶剂，其中料液比为1:20～50，超声波提取20～60min，温度为50～60℃，过滤，75℃浓缩至密度为1.01～1.20g/mL，得到薰衣草提取物。
按照上述技术方案，所述的金缕梅提取物，是将金缕梅粉碎后，以60％～90％乙醇为溶剂，其中料液比为1:10～40，超声波提取20～60min，温度为50～60℃，过滤，75℃浓缩至密度为1.01～1.20g/mL，得到金缕梅提取物。
一种酵母发酵滤液与天然植物提取物的皮肤清洁组合物，可应用于洁面泡沫、沐浴露等化妆品产品上。
本发明的技术方案，运用微生物发酵技术，发酵过后的产物滤液在富含氨基酸、多肽、矿物质以及各种维生素等多种发酵活性成分的同时，通过多种植物提取物中共同作用，增强了单一提取物的清洁效果，并且同时具备保湿、抗炎祛痘等作用，并且通过将其进行加热搅拌溶解，将各组分进行有效的结合。
附图说明
图1是一种具有抗敏修复功效的护肤组合物的制备方法的流程图；
图2是实施例1对皮肤油脂清除率；
图3是实施例2对皮肤油脂清除率；
图4是实施例3对皮肤油脂清除率。
具体实施方式
以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
如图1所示，一种酵母发酵滤液与天然植物提取物的皮肤清洁组合物的制备方法，包括以下步骤：
步骤S1，菌种活化：将冻存的酵母菌种经过解冻后置于培养基中，在pH值范围5.5、发酵温度28℃、摇床速度210rpm、发酵时间24小时的发酵条件下进行活化培养。
步骤S2，菌种优化：将步骤S1中的活化后菌液稀释，挑选生长情况较好的酵母菌于麦芽汁培养基上，以获得单菌落。
步骤S3，菌种扩培：将步骤S2筛选的优质菌落接种到液体培养基中进行扩大培养，得到发酵好的酵母菌菌液。
步骤S4，正式发酵阶段：配制浓度为葡萄糖20g/L、蛋白胨20g/L、酵母膏10g/L、琼脂20g/L的混合液，接入步骤S3所得的酵母菌液8％；在pH值5.5、发酵温度28℃、摇床速度210rpm的条件下发酵2d。
步骤S5，收集滤液：发酵结束后，90℃灭菌出料，冷却至室温，将所得到的发酵产物离心得到上清液。
步骤S6，酵母发酵滤液与天然植物提取物的皮肤清洁组合物按以下组份进行复配：包括10％无患子提取物、5％的芦荟提取物、10％的绿茶提取物、5％的欧洲七叶树籽提取物、1％的皂角提取物、1％的薰衣草提取物、5％的金缕梅提取物以及酵母发酵滤液。
步骤S7，添加防腐剂：将最终所得的混合液按照质量分数，添加0.5％的1,2-己二醇和0.4％的对羟基苯乙酮作为防腐剂。
本实施例中，所述步骤S1中的酵母菌选用酿酒酵母菌，培养基是用麦芽汁培养基；所述步骤S4中添加的酵母菌液为8％，发酵温度为29℃，发酵时间为2d，混合物是置于带有搅拌装置的发酵罐中发酵，搅拌速度为200r/min，搅拌时间为：每隔1小时搅拌20分钟；所述步骤S5中的灭菌温度是90℃，灭菌时间是30min，经过离心得到上清液；所述步骤S7添加的防腐剂为1,2-己二醇和对羟基苯乙酮。
本实施例中，所述的无患子提取物，是将无患子粉碎，以75％乙醇为溶剂提取两次，其中第一次料液比为1:2，提取温度为60℃，提取时间为24h，过滤后滤渣第二次料液比为1:1，合并两次滤液，加入2％粉末活性炭搅拌1小时脱色，0.5um纸板过滤去除活性炭得到滤液,在65℃浓缩掉乙醇得到浓缩液，加入1/3量的二氯甲烷与浓缩液混匀静置分层保留上层液，重复三次，加入蒸馏水调节含固量为25％，再加入1/8乙醇，75℃浓缩掉乙醇与二氯甲烷，得到无患子提取物。
本实施例中，所述的芦荟提取物，是将芦荟粉碎，加入蒸馏水作为溶剂，且料液比为1:20，浸泡30min后调节pH为4.5，加酶量0.2％％、果胶酶与纤维素酶配比1∶5，酶解温度30℃、酶解时间20min；将提取液真空过滤，取滤液并真空旋转蒸发至体积约10mL，然后加入5倍体积的无水乙醇，混合均匀，置于4℃冰箱静置12h，再将其在3000r/min转速下离心10min，取沉淀加蒸馏水充分溶解过滤后即为芦荟提取物。
本实施例中，所述的绿茶提取物，是将绿茶粉碎，加入30～70％乙醇作为溶剂，且料液比为1:10，浸泡30min后调节pH为4.8，加酶量0.2％％、果胶酶与纤维素酶配比1∶2，酶解温度30℃、酶解时间20min；将提取液真空过滤，取滤液并真空旋转蒸发至密度为1.01g/mL，即得绿茶提取物。
本实施例中，所述的欧洲七叶树籽提取物，是将欧洲七叶树籽粉碎后以75％～85％乙醇为溶剂，其中料液比为1:10，超声波提取45min，过滤，D101大孔吸附树脂分离纯化得到提取物，其中进样速度、洗脱剂浓度和洗脱速度分别是2ml/min，60％乙醇，0.5ml/min，得到欧洲七叶树籽提取物。
本实施例中，所述的皂角提取物，是将皂角粉碎后，以蒸馏水作为溶剂，其中料液比为1:10，高温提取12h，过滤得到皂角提取物。
本实施例中，所述的薰衣草提取物，将薰衣草花穗以60％乙醇为溶剂，其中料液比为1:20，超声波提取20，温度为50℃，过滤，75℃浓缩至密度为1.01g/mL，得到薰衣草提取物。
本实施例中，所述的金缕梅提取物，是将金缕梅粉碎后，以60％％乙醇为溶剂，其中料液比为1:10，超声波提取20min，温度为50℃，过滤，75℃浓缩至密度为1.01g/mL，得到金缕梅提取物。
实施例2
如图1所示，一种酵母发酵滤液与天然植物提取物的皮肤清洁组合物的制备方法，包括以下步骤：
步骤S1，菌种活化：将冻存的酵母菌种经过解冻后置于培养基中，在pH值范围5.8、发酵温度34℃、摇床速度240rpm、发酵时间36小时的发酵条件下进行活化培养。
步骤S2，菌种优化：将步骤S1中的活化后菌液稀释，挑选生长情况较好的酵母菌于麦芽汁培养基上，以获得单菌落。
步骤S3，菌种扩培：将步骤S2筛选的优质菌落接种到液体培养基中进行扩大培养，得到发酵好的酵母菌菌液。
步骤S4，正式发酵阶段：配制浓度为葡萄糖20g/L、蛋白胨20g/L、酵母膏10g/L、琼脂20g/L的混合液，接入步骤S3所得的酵母菌液10％；在pH值5.8、发酵温度34℃、摇床速度240rpm的条件下发酵3d。
步骤S5，收集滤液：发酵结束后，90℃灭菌出料，冷却至室温，将所得到的发酵产物离心得到上清液。
步骤S6，酵母发酵滤液与天然植物提取物的皮肤清洁组合物按以下组份进行复配：包括15％无患子提取物、10％的芦荟提取物、15％的绿茶提取物、5％的欧洲七叶树籽提取物、5％的皂角提取物、1％的薰衣草提取物、5％的金缕梅提取物以及酵母发酵滤液。
步骤S7，添加防腐剂：将最终所得的混合液按照质量分数，添加0.8％的1,2-己二醇和0.3％的对羟基苯乙酮作为防腐剂。
本实施例中，所述步骤S1中的酵母菌选用酿酒酵母菌，培养基是用麦芽汁培养基；所述步骤S4中添加的酵母菌液为8％，发酵温度为29℃，发酵时间为2d，混合物是置于带有搅拌装置的发酵罐中发酵，搅拌速度为250r/min，搅拌时间为：每隔1小时搅拌20分钟；所述步骤S5中的灭菌温度是90℃，灭菌时间是30min，经过离心得到上清液；所述步骤S7添加的防腐剂为1,2-己二醇和对羟基苯乙酮。
本实施例中，所述的无患子提取物，是将无患子粉碎，以95％乙醇为溶剂提取两次，其中第一次料液比为1:5，提取温度为80℃，提取时间为24h，过滤后滤渣第二次料液比为1:5，合并两次滤液，加入5％粉末活性炭搅拌1小时脱色，0.5um纸板过滤去除活性炭得到滤液,在80℃浓缩掉乙醇得到浓缩液，加入1/3量的二氯甲烷与浓缩液混匀静置分层保留上层液，重复三次，加入蒸馏水调节含固量为25％，再加入1/8乙醇，75℃浓缩掉乙醇与二氯甲烷，得到无患子提取物。
本实施例中，所述的芦荟提取物，是将芦荟粉碎，加入蒸馏水作为溶剂，且料液比为1:40，浸泡30min后调节pH为4.5，加酶量0.4％、果胶酶与纤维素酶配比1∶5，酶解温度70℃、酶解时间60min；将提取液真空过滤，取滤液并真空旋转蒸发至体积约10mL，然后加入5倍体积的无水乙醇，混合均匀，置于4℃冰箱静置12h，再将其在3000r/min转速下离心10min，取沉淀加蒸馏水充分溶解过滤后即为芦荟提取物。
本实施例中，所述的绿茶提取物，是将绿茶粉碎，加入70％乙醇作为溶剂，且料液比为1:20，浸泡30min后调节pH为4.8，加酶量0.4％、果胶酶与纤维素酶配比1∶5，酶解温度70℃、酶解时间60min；将提取液真空过滤，取滤液并真空旋转蒸发至密度为1.20g/mL，即得绿茶提取物。
本实施例中，所述的欧洲七叶树籽提取物，是将欧洲七叶树籽粉碎后以85％乙醇为溶剂，其中料液比为1:15，超声波提取75min，过滤，D101大孔吸附树脂分离纯化得到提取物，其中进样速度、洗脱剂浓度和洗脱速度分别是4ml/min，80％乙醇，2ml/min，得到欧洲七叶树籽提取物。
本实施例中，所述的皂角提取物，是将皂角粉碎后，以蒸馏水作为溶剂，其中料液比为1:20，高温提取20h，过滤得到皂角提取物。
本实施例中，所述的薰衣草提取物，将薰衣草花穗以80％乙醇为溶剂，其中料液比为1:50，超声波提取60min，温度为60℃，过滤，75℃浓缩至密度为1.20g/mL，得到薰衣草提取物。
本实施例中，所述的金缕梅提取物，是将金缕梅粉碎后，以90％乙醇为溶剂，其中料液比为1:40，超声波提取60min，温度为60℃，过滤，75℃浓缩至密度为1.20g/mL，得到金缕梅提取物。
实施例3
如图1所示，一种酵母发酵滤液与天然植物提取物的皮肤清洁组合物的制备方法，包括以下步骤：
步骤S1，菌种活化：将冻存的酵母菌种经过解冻后置于培养基中，在pH值6.0、发酵温度25℃、摇床速度220rpm、发酵时间24小时的发酵条件下进行活化培养。
步骤S2，菌种优化：将步骤S1中的活化后菌液稀释，挑选生长情况较好的酵母菌于麦芽汁培养基上，以获得单菌落。
步骤S3，菌种扩培：将步骤S2筛选的优质菌落接种到液体培养基中进行扩大培养，得到发酵好的酵母菌菌液。
步骤S4，正式发酵阶段：配制浓度为葡萄糖20g/L、蛋白胨20g/L、酵母膏10g/L、琼脂20g/L的混合液，接入步骤S3所得的酵母菌液5％；在pH值6.0、发酵温度25℃、摇床速度220rpm的条件下发酵2d。
步骤S5，收集滤液：发酵结束后，90℃灭菌出料，冷却至室温，将所得到的发酵产物离心得到上清液。
步骤S6，酵母发酵滤液与天然植物提取物的皮肤清洁组合物(同实施例1的制备方法)按以下组份进行复配：包括15％无患子提取物、10％的芦荟提取物、15％的绿茶提取物、10％的欧洲七叶树籽提取物、5％的皂角提取物、5％的薰衣草提取物、10％的金缕梅提取物以及酵母发酵滤液。
步骤S7，添加防腐剂：将最终所得的混合液按照质量分数，添加1.0％的1,2-己二醇和0.2％的对羟基苯乙酮作为防腐剂。
效果实施例：
油脂清除率测定：
皮肤油脂测试可以准确地确定皮肤的类型,能进行量化的数值比较。油分测试采用世界公认的SEBUMETER法,基于光度计原理。以一种0.1mm厚的特殊消光胶带吸收人体皮肤上的油脂后,会变成一种半透明的胶带,其透光量会发生变化。吸收的油脂越多,透光量就会越大,即可测量出皮肤油脂的含量。
在25℃、一定相对湿度的环境中,测定洗面前四个选定区域皮肤的油脂含量,本清洁组合物洗面后在四处相同区域测定油脂含量,评价本清洁组合物的去油脂效果。
油脂清除率％＝(使用产品前皮肤油脂含量-使用产品后皮肤油脂含量)/使用产品前皮肤油脂含量×100％
图2为实施例1对皮肤油脂清除率。
图3为实施例2对皮肤油脂清除率。
图4为实施例3对皮肤油脂清除率。
图2到图4说明本皮肤清洁组合物有良好的去除油脂能力。
皮肤刺激试验：
试验原理：皮肤受到某些特定抗原刺激时，出现以生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的异常的特异性的免疫应答，也被称为变态反应。皮肤过敏反应的主要病理变化为通透性增加、皮肤毛细血管扩张、组织变性坏死等，会使皮肤出现瘙痒、发红、肿胀、脱屑等症状。
被测者用Finn Chamber在小臂进行皮肤斑贴试验(斑贴试验)。但是银屑病(牛皮癣)，湿疹(皮疹)患者或其他皮肤损伤，正处在怀孕、哺乳期或服用避孕药、抗组织胺等人群不能参与这项研究。在测试部位用70％的乙醇擦拭，干燥后，在芬兰小室中加入25-30μL的样品，在小臂区域固定芬兰小室，不要沾水。24h后除去贴片；用标记笔在试验部位做好标记，并在30min后，24h后的再次观察测试部位并详细记录测试人员信息。刺激程度根据((International Contact Dermatitis Research Group:ICDRG)的标准进行了分类，拆除贴片后30min后确定，24h后再次确定，根据皮肤反应国际接触性皮炎研究会判定标准(表1)判定后。再根据皮肤反应平均得分公式[表2]，估算平均得分，皮肤斑贴试验(斑贴试验)根据得分结果确定是否刺激。
[表1]国际接触性皮炎研究会((International Contact Dermatitis ResearchGroup:ICDRG)
判定标准：
Figure BDA0003182745940000101
- ± + ++ +++
Score 0 0.5 1 2 3
※皮肤反应判定标准
1)Negative(-)：无刺激
2)Double or slight reaction and erythema(±)；微刺激
微弱的勉强可见的轻微红斑
3)Erythema+Induration(+)；轻刺激
有明显的红斑，皮肤硬化
4)Erythema+Induration+Vesicle(++)；中刺激
红斑，硬化，有小泡
5)Erythema+Induration+Bullae(+++)；强刺激
红斑，硬化，有大泡
※皮肤反应平均得分Mean score计算公式
Figure BDA0003182745940000102
i＝除去贴片，在30min后，24h后的测试部位根据ICDRG判定标准所得各自分数的结果。标记erythema和edema两种反应,全部适用。
j＝除去贴片，30min后,24h后各自的皮肤有反应测试者人数，标记erythema和edema两种反应,全部适用。
[表2]皮肤斑贴试验(Patch test))结果
判定(Grade) MeanScore
无刺激(1) 0.00～0.75
微刺激(2) 0.76～1.50
轻刺激(3) 1.51～2.50
中刺激(4) 2.51～4.00
强刺激(5) 4.01
表1去除贴片30min后，皮肤状态
Figure BDA0003182745940000111
表2去除贴片24h后，皮肤状态
Figure BDA0003182745940000112
Figure BDA0003182745940000121
表1和表2的斑贴试验反应了本产品对于皮肤没有刺激，体现植物提取物的安全性。
保湿效果的检测：
皮肤角质层水合率试验
采用世界公认的Cornemeter法—电容法：基于水(81)和其他物质的介电常数(＜7)变化相当大，按照含水量的不同，适当形状的测量用电容器会随着皮肤的电容量的变化而变化，而皮肤的电容量又是在测量的范围内，这样就可以测量出皮肤的水分含量。电容量的测量方法比其他方法更优越，由于被测试皮肤和测试探头没有不自然的接触，几乎没有电流通过被测试皮肤，因此测试结果实际上不受极化效应和离子导电率的影响。仪器探头和皮肤中水分建立平衡过程中没有惯性，可以实现快速测量，这样同时也消除了活性皮肤对测量结果的影响。
实验方法：测试区域：手前臂内侧
试验前，受试者需要统一清洁前臂内侧，用干的面巾纸搽拭干净，清洁后在受试者前臂内侧做好测量区域标记，正式测试前应该在符合标准的房间内静坐至少30min，前臂暴露，呈测试状态放置，保持轻松。
实验中前臂内侧标记2×4cm2实验区域，同一手臂可同时标记多个区域，区域间隔2cm。测试产品和空白对照均随机分布在手前臂上，先测量各测试区域清洁后30min的空白值，然后按2.0±0.1mg样品/cm2的用量，使用乳胶指套将受试样均匀涂布于实验区内，涂抹后分别测量0.5h、1h、2h、4h受试区域和对照区域的皮肤水分含量。同一个志愿者的测量由同一个测量人员完成。
水合率＝(测试值-空白对照值)/空白对照值*100％
保湿效果的测试结果如下：
Figure BDA0003182745940000122
Figure BDA0003182745940000131
本产品同时还具有一定的保湿效果，但保湿效果持续时间仅为2h。
应用实施例：
(1)洁面泡沫
Figure BDA0003182745940000132
水工艺：
1.A相70℃加热搅拌溶解
2.将B相加入A相中，搅拌混合均匀
3.待降温至60℃，将C相加入其中，搅拌均匀
4.搅拌冷却至45℃即可
(2)沐浴露
Figure BDA0003182745940000133
Figure BDA0003182745940000141
1.A相1,2号原料先投入釜中，70℃搅拌溶解后A相其他原料依次依次投入
2.降温到65℃，B相依次投入釜中，搅拌溶解
3.降温到55℃，C相投入釜中，搅拌混匀
4.降温到50℃，D(提前配好)、E相依次投入釜中，搅拌混匀即可
本发明提供的皮肤清洁组合物的制备方法与应用，通过菌种活化、筛选、扩培、发酵、灭菌、收集滤液等步骤，运用微生物发酵技术，发酵过后的产物滤液在富含氨基酸、多肽、矿物质以及各种维生素等多种发酵活性成分的同时，复配无患子提取物、芦荟提取物、绿茶提取物、欧洲七叶树籽提取物、皂角提取物、薰衣草提取物、金缕梅提取物，有着较强的清洁作用，对皮肤刺激小，能够起到一定的抗菌祛痘的功效，同时保湿效果显著。本发明能够有效解决单独的提取物效果差，效果不能完全发挥的问题，具有更好的清洁、保湿效果。

Claims (10)

1.一种酵母发酵滤液与天然植物提取物的皮肤清洁组合物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1，菌种活化：将冻存的酵母菌种经过解冻后置于培养基中，在pH值范围5.0～6.0、发酵温度25～35℃、摇床速度200～250rpm、发酵时间24～36小时的发酵条件下进行活化培养；
S2，菌种优化：将步骤S1中的活化后菌液稀释，挑选生长情况较好的酵母菌于麦芽汁培养基上，以获得单菌落；
S3，菌种扩培：将步骤S2筛选的优质菌落接种到液体培养基中进行扩大培养，得到发酵好的酵母菌菌液；
S4，正式发酵阶段：配制浓度为葡萄糖20g/L、蛋白胨20g/L、酵母膏10g/L、琼脂20g/L的混合液，接入步骤S3所得的酵母菌液5～10％；在pH值范围5.0～6.0、发酵温度25～35℃、摇床速度200～250rpm的条件下发酵2～3d；
S5，收集滤液：发酵结束后，90～100℃灭菌出料，冷却至室温，将所得到的发酵产物离心得到上清液；
S6，按以下组份进行复配：10～15％无患子提取物、5～10％的芦荟提取物、10～15％的绿茶提取物、5～10％的欧洲七叶树籽提取物、1～5％的皂角提取物、1～5％的薰衣草提取物、5～10％的金缕梅提取物以及剩余组分为酵母发酵滤液；
S7，添加防腐剂：将最终所得的混合液按照占混合液总质量0.8～1.5％的比例添加防腐剂。
2.根据权利要求1所述的一种酵母发酵滤液与天然植物提取物的皮肤清洁组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中的酵母菌选用酿酒酵母菌，培养基是用麦芽汁培养基；所述步骤S4中添加的酵母菌液为8％，发酵温度为29℃，发酵时间为2d，混合物是置于带有搅拌装置的发酵罐中发酵，搅拌速度为200～250r/min，搅拌时间为：每隔1小时搅拌20分钟；所述步骤S5中的灭菌温度是90℃，灭菌时间是30min，经过离心得到上清液；所述步骤S7添加的防腐剂为1,2-己二醇和对羟基苯乙酮。
3.根据权利要求1所述的一种酵母发酵滤液与天然植物提取物的皮肤清洁组合物的制备方法，其特征在于：所述的无患子提取物，是将无患子粉碎，以75～95％乙醇为溶剂提取两次，其中第一次料液比为1:2～5，提取温度为60～80℃，提取时间为12～24h，过滤后滤渣第二次料液比为1:1～5，合并两次滤液，加入2～5％粉末活性炭搅拌1小时脱色，0.5um纸板过滤去除活性炭得到滤液,在65～80℃浓缩掉乙醇得到浓缩液，加入1/3量的二氯甲烷与浓缩液混匀静置分层保留上层液，重复三次，加入蒸馏水调节含固量为25％，再加入1/8乙醇，75℃浓缩掉乙醇与二氯甲烷，得到无患子提取物。
4.根据权利要求1所述的一种酵母发酵滤液与天然植物提取物的皮肤清洁组合物的制备方法，其特征在于：所述的芦荟提取物，是将芦荟粉碎，加入蒸馏水作为溶剂，且料液比为1:20～40，浸泡30min后调节pH为4.5，加酶量0.2％～0.4％、果胶酶与纤维素酶配比1∶2～5，酶解温度30～70℃、酶解时间20～60min；将提取液真空过滤，取滤液并真空旋转蒸发至体积约10mL，然后加入5倍体积的无水乙醇，混合均匀，置于4℃冰箱静置12h，再将其在3000r/min转速下离心10min，取沉淀加蒸馏水充分溶解过滤后即为芦荟提取物。
5.根据权利要求1所述的一种酵母发酵滤液与天然植物提取物的皮肤清洁组合物的制备方法，其特征在于：所述的绿茶提取物，是将绿茶粉碎，加入30～70％乙醇作为溶剂，且料液比为1:10～20，浸泡30min后调节pH为4.8，加酶量0.2％～0.4％、果胶酶与纤维素酶配比1∶2～5，酶解温度30～70℃、酶解时间20～60min；将提取液真空过滤，取滤液并真空旋转蒸发至密度为1.01～1.20g/mL，即得绿茶提取物。
6.根据权利要求1所述的一种酵母发酵滤液与天然植物提取物的皮肤清洁组合物的制备方法，其特征在于：所述的欧洲七叶树籽提取物，是将欧洲七叶树籽粉碎后以75％～85％乙醇为溶剂，其中料液比为1:10～15，超声波提取45～75min，过滤，D101大孔吸附树脂分离纯化得到提取物，其中进样速度、洗脱剂浓度和洗脱速度分别是2～4ml/min，60～80％乙醇，0.5～2ml/min，得到欧洲七叶树籽提取物。
7.根据权利要求1所述的一种酵母发酵滤液与天然植物提取物的皮肤清洁组合物的制备方法，其特征在于：所述的皂角提取物，是将皂角粉碎后，以蒸馏水作为溶剂，其中料液比为1:10～20，高温提取12～20h，过滤得到皂角提取物。
8.根据权利要求1所述的一种酵母发酵滤液与天然植物提取物的皮肤清洁组合物的制备方法，其特征在于：所述的薰衣草提取物，将薰衣草花穗以50％～80％乙醇为溶剂，其中料液比为1:20～50，超声波提取20～60min，温度为50～60℃，过滤，75℃浓缩至密度为1.01～1.20g/mL，得到薰衣草提取物。
9.根据权利要求1所述的一种酵母发酵滤液与天然植物提取物的皮肤清洁组合物的制备方法，其特征在于：所述的金缕梅提取物，是将金缕梅粉碎后，以60％～90％乙醇为溶剂，其中料液比为1:10～40，超声波提取20～60min，温度为50～60℃，过滤，75℃浓缩至密度为1.01～1.20g/mL，得到金缕梅提取物。
10.一种酵母发酵滤液与天然植物提取物的皮肤清洁组合物的应用，其特征在于应用于洁面泡沫、沐浴露。
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