CN113397175A - 一种刺参低聚肽交联微胶囊及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种刺参低聚肽交联微胶囊及其制备方法和应用，本发明采用透明质酸钠、变性淀粉和麦芽糊精等作为交联剂，先制得交联芯材和交联功能壁材，之后又对交联芯材和交联功能壁材分别进行前后两步交联包埋，使得微胶囊获得了由内到外结构依次为交联芯材‑基础性壁材前包埋‑交联功能壁材后包埋的三维架构，该三维架构结构更加稳固，因而本发明制备得到的刺参低聚肽交联微胶囊其抵抗外界环境的能力显著提升，所以其不仅口服生物利用度得到提高，而且货架期得到延长；此外，由于刺参低聚肽被包埋起来了，所以该微胶囊还极大改善了刺参低聚肽的感官风味特性。

Description

一种刺参低聚肽交联微胶囊及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及一种微胶囊及其制备方法和应用，具体涉及一种刺参低聚肽交联微胶囊及其制备方法和应用，属于生物肽微囊化技术领域。
背景技术
海参同人参、燕窝、鱼翅齐名，被列为八大珍品之一。海参体内含有海参多肽、海参多糖、脂肪酸、海参皂苷、维生素、脑苷脂等活性组分。其中，海参多肽具有延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤、抗凝血等生物活性，具有较高的药用价值和医用价值。
然而，在医药领域，海参多肽的应用却受到了诸多限制，具体如下：
（1）海参多肽直接口服时，易受低值胃酸和胃肠道内酶的降解作用，导致在这种环境下的生物活性几乎绝大部分甚至全部丧失，口服生物利用度很低；
（2）海参多肽和多数功能活性肽一样稳定性较差，易受氧气、温度、湿度等环境因素的影响而失活，严重影响活力持续性，货架期较短；
（3）海参多肽和多数生物肽一样在感官上会呈现出腥和苦的特性，人群接受度较低。
因此，如何提高海参低聚肽的口服生物利用度，如何延长海参低聚肽的货架期，以及如何脱去海参低聚肽的苦腥味道，都是目前亟待解决的问题。
发明内容
为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种口服生物利用度较高、货架期较长、风味良好的刺参低聚肽交联微胶囊及其制备方法和应用。
为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
一种刺参低聚肽交联微胶囊的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）制备交联芯材：按质量比1~3：1~2：1称取刺参低聚肽、透明质酸钠和交联剂A的稀溶液，将刺参低聚肽和透明质酸钠混合均匀，在持续搅拌下加入交联剂A的稀溶液，振荡交联，制得交联芯材；
（2）制备交联功能壁材：将基础性壁材A的稀溶液与功能性壁材银耳多糖和椰子油提取物按质量比2：1~4：1~3混合均匀，振荡交联，制得交联功能壁材；
（3）基础性壁材前包埋处理：将交联芯材按质量比1~2：1~3添加至基础性壁材B的稀溶液中，混合均匀，得到基础性壁材B与交联芯材的混合溶液，持续搅拌，将混合溶液滴入到交联剂B的稀溶液当中，直至混合物质地逐渐硬化，经无菌水洗涤后得到一级交联微胶囊；
（4）交联功能壁材后包埋处理：将一级交联微胶囊按质量比1：1~2与交联功能壁材混合，然后使用胶体磨进行剪切乳化处理，之后使用高压均质机进行均质处理，随后将混合物冷冻干燥，得到二级交联微胶囊，即刺参低聚肽交联微胶囊。
前述的刺参低聚肽交联微胶囊的制备方法，其特征在于，在步骤（1）中，前述刺参低聚肽选用的是分子量为200~500Da的刺参低聚肽；前述透明质酸钠选用的是分子量为8.02×104~4.01×106的透明质酸钠。
前述的刺参低聚肽交联微胶囊的制备方法，其特征在于，在步骤（1）中，前述交联剂A选用的是氯化镁、氯化钡或变性淀粉，其稀溶液的质量浓度为0.5~1.5%；在步骤（3）中，前述交联剂B选用的是氯化钙，其稀溶液的质量浓度为0.5~2%。
前述的刺参低聚肽交联微胶囊的制备方法，其特征在于，在步骤（2）中，前述基础性壁材A选用的是麦芽糊精，其稀溶液的质量浓度为2.5~5%；在步骤（3）中，前述基础性壁材B选用的是海藻酸钠，其稀溶液的质量浓度为1~3%。
前述的刺参低聚肽交联微胶囊的制备方法，其特征在于，在步骤（1）和步骤（2）中，振荡交联的温度为35~45℃，转速为300~400r/min，时间为2~4h。
前述的刺参低聚肽交联微胶囊的制备方法，其特征在于，在步骤（2）中，银耳多糖采用水酶解醇沉法制备得到，具体过程如下：
将银耳烘干后粉碎得到银耳粉，将银耳粉与净化水混合得到混悬液，向混悬液中添加混悬液质量0.1~0.3%的复合生物酶1得到混合溶液1，其中，复合生物酶1由葡聚糖酶和果胶酶以质量比1：1~3混合组成，将混合溶液1先水解，然后升温灭酶，之后离心得到上清液，将上清液减压浓缩得到浓缩液，用体积浓度为75~90%的乙醇溶液对浓缩液进行醇沉，最后冷冻干燥得到银耳多糖。
前述的刺参低聚肽交联微胶囊的制备方法，其特征在于，在步骤（2）中，前述椰子油提取物采用水酶法制备得到，具体过程如下：
将新鲜的椰肉切片并加水打浆得到椰浆，向椰浆中加入椰浆质量0.1~0.3%的复合生物酶2得到混合溶液2，其中，复合生物酶2由纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶按质量比1~2：1~2：1~3：1~2：1~2混合组成，将混合溶液2先水解，然后水浴灭酶活，之后离心得到游离油、乳状液、水解液和椰子粕，将乳状液再次离心得到游离油，将两次得到的游离油合并，并冷冻干燥得到椰子油提取物。
前述的刺参低聚肽交联微胶囊的制备方法，其特征在于，在步骤（4）中，前述胶体磨的转速为10000~15000r/min，剪切乳化处理时间为15~30min；前述高压均质机的压力为30~50MPa，均质1~3次；冷冻干燥条件为-15~-20℃冷冻干燥1~3h。
一种刺参低聚肽交联微胶囊，其特征在于，由前述的制备方法制备而成，其可应用在奶制品、功能食品、保健品、益生菌制品以及护肤品中。
本发明的有益之处在于：
（1）本发明采用透明质酸钠、变性淀粉和麦芽糊精等作为交联剂，先制得交联芯材和交联功能壁材，之后又对交联芯材和交联功能壁材分别进行前后两步交联包埋，使得微胶囊获得了由内到外结构依次为交联芯材-基础性壁材前包埋-交联功能壁材后包埋的三维架构，该三维架构结构更加稳固，因而本发明制备得到的刺参低聚肽交联微胶囊其抵抗外界环境的能力显著提升，所以其不仅口服生物利用度得到提高，而且货架期得到延长；此外，由于刺参低聚肽被包埋起来了，所以该微胶囊还极大改善了刺参低聚肽的感官风味特性。
（2）本发明采用银耳多糖和椰子油提取物作为功能性壁材，因此制备得到的刺参低聚肽交联微胶囊具有抗氧化、增强免疫力、改善胃肠机能等作用，赋予了产品新的营养功能，加之其具有良好的溶解性和流动性，故可应用在奶制品、功能食品、保健品、益生菌制品以及护肤品中。
（3）本发明制备得到的微胶囊经两步包埋层次性高，使得低聚肽芯材获得了高度保护，所以其有效降低了刺参低聚肽等生物活性成分的挥发性、吸湿性和反应性，增加了产品在不利环境条件下的稳定性，并能在预定的条件下提供包埋材料在肠道中的递送释放。
（4）本发明制备得到的微胶囊两层壁材具有良好的水溶性和功能性，所以其芯材和壁材能够在肠道环境中快速均匀扩散释放，在利于肠道直接吸收的同时，可使肠道微生物以银耳多糖和椰子油提取物等为底物进行发酵并产生有益代谢产物，进而促进肠道益生菌增殖、提高肠道益生菌代谢活性，这是十分有助于促进和维持肠道健康的。
附图说明
图1是微胶囊的吸湿性测定结果图；
图2是微胶囊在模拟胃液中的释放情况图；
图3是微胶囊在模拟肠液中的释放情况图。
具体实施方式
本发明所使用的原料均为商品，其中：
（1）刺参低聚肽：购于中科海洋微生物产业技术研究院（山东）有限公司，为食品级；
（2）透明质酸钠：购于华熙生物科技有限公司，食品级；
（3）海藻酸钠：购于天津市江天化工技术有限公司，食品级；
（4）麦芽糊精：购于济南鑫垚化工有限公司，食品级；
（5）变性淀粉：购于广州健科生物科技有限公司，食品级；
（6）银耳：购于福建康旺食品有限公司，食品级；
（7）椰子：购于烟台市芳华园农贸市场，食品级；
（8）复合生物酶A1、A2、B1、B2、C1、C2：购于南宁东恒化道生物科技有限责任公司，食品级；
（9）无水乙醇：购于天津市江天化工技术有限公司。
介绍上述原料的来源是为了使本领域的技术人员能够更好地理解本发明，但并不对本发明作任何限制，其它企业生产的上述原料也可以用于本发明。
以下结合附图和具体实施例对本发明作具体的介绍。
一、制备刺参低聚肽交联微胶囊
实施例1：制备刺参低聚肽交联微胶囊A
刺参低聚肽交联微胶囊A的制备方法具体包括以下步骤：
1、制备交联芯材
按质量比1：1：1称取分子量为200Da的刺参低聚肽、分子量为8.02×104的透明质酸钠和质量浓度为0.5%的氯化镁（交联剂）溶液，先将刺参低聚肽和透明质酸钠混合均匀，然后在持续搅拌下加入氯化镁溶液，最后于35℃、300r/min振荡交联2h，制得交联芯材。
2、制备功能性壁材
（1）制备银耳多糖
采用水酶解醇沉法制备银耳多糖，具体过程如下：
将银耳烘干后粉碎至60目得到银耳粉，将银耳粉与净化水按质量比1：30混合得到混悬液，向混悬液中添加混悬液质量0.1%的复合生物酶A1得到混合溶液A1，其中，复合生物酶A1由葡聚糖酶和果胶酶以质量比1：1混合组成，将混合溶液A1先于55℃水解4h，然后升温至85℃灭酶10min，之后3500r/min离心10min得到上清液，将上清液减压浓缩得到浓缩液，用体积浓度为75%的乙醇溶液对浓缩液进行醇沉，乙醇溶液与浓缩液的体积比为3：1，最后于-20℃冷冻干燥1h得到银耳多糖。
（2）制备椰子油提取物
采用水酶法制备椰子油提取物，具体过程如下：
将成熟的椰子去除椰衣、椰汁、椰壳和种皮得到新鲜的椰肉。将新鲜的椰肉切片，按照1：1的质量比加水打浆得到椰浆，向椰浆中加入椰浆质量0.1%的复合生物酶A2得到混合溶液A2，其中，复合生物酶A2由纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶以质量比1：1：1：1：1混合组成，将混合溶液A2先于50℃水解12h，然后90℃水浴灭酶活15min，之后4500r/min离心15min得到游离油、乳状液、水解液和椰子粕，将乳状液再次以4500r/min离心15min得到游离油，将两次得到的游离油合并，并于-20℃冷冻干燥1h得到椰子油提取物。
3、制备交联功能壁材
将质量浓度为2.5%的麦芽糊精（基础性壁材）溶液与步骤2制备得到的银耳多糖和椰子油提取物（功能性壁材）按质量比2：1：1混合均匀，35℃、300r/min振荡交联2h，制得交联功能壁材（后包埋交联材料）。
4、基础性壁材前包埋处理
将步骤1制备得到的交联芯材按质量比1：1添加至质量浓度为1%的海藻酸钠（基础性壁材）溶液中，混合均匀，得到海藻酸钠与交联芯材的混合溶液，持续搅拌，将混合溶液滴入到质量浓度为0.5%的氯化钙（交联剂）溶液当中，直至混合物质地逐渐硬化，经无菌水洗涤后得到一级交联微胶囊。
5、交联功能壁材后包埋处理
将步骤4制备得到的一级交联微胶囊按质量比1：1与步骤3制备得到的交联功能壁材混合，然后使用胶体磨10000r/min处理15min剪切乳化，之后使用高压均质机30MPa均质1次，随后将混合物于-20℃冷冻干燥1h，得到二级交联微胶囊，即刺参低聚肽交联微胶囊。
实施例2: 制备刺参低聚肽交联微胶囊B
刺参低聚肽交联微胶囊B的制备方法具体包括以下步骤：
1、制备交联芯材
按质量比2：1：1称取分子量为350Da的刺参低聚肽、分子量为6.02×105的透明质酸钠和质量浓度为1%的变性淀粉（交联剂）溶液，先将刺参低聚肽和透明质酸钠混合均匀，然后在持续搅拌下加入变性淀粉溶液，最后于40℃、400r/min振荡交联3h，制得交联芯材。
2、制备功能性壁材
（1）制备银耳多糖
采用水酶解醇沉法制备银耳多糖，具体过程如下：
将银耳烘干后粉碎至80目得到银耳粉，将银耳粉与净化水按质量比1：40混合得到混悬液，向混悬液中添加混悬液质量0.2%的复合生物酶B1得到混合溶液B1，其中，复合生物酶B1由葡聚糖酶和果胶酶以质量比1：2混合组成，将混合溶液B1先于56℃水解5h，然后升温至88℃灭酶15min，之后3500r/min离心10min得到上清液，将上清液减压浓缩得到浓缩液，用体积浓度为80%的乙醇溶液对浓缩液进行醇沉，乙醇溶液与浓缩液的体积比为2：1，最后于-18℃冷冻干燥1.5h得到银耳多糖。
（2）制备椰子油提取物
采用水酶法制备椰子油提取物，具体过程如下：
将成熟的椰子去除椰衣、椰汁、椰壳和种皮得到新鲜的椰肉。将新鲜的椰肉切片，按照1：2的质量比加水打浆得到椰浆，向椰浆中加入椰浆质量0.2%的复合生物酶B2得到混合溶液B2，其中，复合生物酶B2由纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶按照2：1：2：1：2的质量比混合组成，将混合溶液B2先于55℃水解13h，然后93℃水浴灭酶活15min，之后4800r/min离心18min得到游离油、乳状液、水解液和椰子粕，将乳状液再次以4800r/min离心18min得到游离油，将两次得到的游离油合并，并于-18℃冷冻干燥1.5h得到椰子油提取物。
3、制备交联功能壁材
将质量浓度为3.5%的麦芽糊精（基础性壁材）溶液与步骤2制备得到的银耳多糖和椰子油提取物（功能性壁材）按质量比2：4：3混合均匀，40℃、400r/min振荡交联3h，制得交联功能壁材。
4、基础性壁材前包埋处理
将步骤1制备得到的交联芯材按质量比2：1添加至质量浓度为2%的海藻酸钠（基础性壁材）溶液中，混合均匀，得到海藻酸钠与交联芯材的混合溶液，持续搅拌，将混合溶液滴入到质量浓度为1%的氯化钙（交联剂）溶液当中，直至混合物质地逐渐硬化，经无菌水洗涤后得到一级交联微胶囊。
5、交联功能壁材后包埋处理
将步骤4制备得到的一级交联微胶囊按质量比1：2与步骤3制备得到的交联功能壁材混合，然后使用胶体磨13000r/min处理20min剪切乳化，之后使用高压均质机40MPa均质3次，随后将混合物于-18℃冷冻干燥2h，得到二级交联微胶囊，即刺参低聚肽交联微胶囊。
实施例3: 制备刺参低聚肽交联微胶囊C
刺参低聚肽交联微胶囊C的制备方法具体包括以下步骤：
1、制备交联芯材
按质量比3：2：1称取分子量为500Da的刺参低聚肽、分子量为4.01×106的透明质酸钠和质量浓度为1.5%的氯化钡（交联剂）溶液，先将刺参低聚肽和透明质酸钠混合均匀，然后在持续搅拌下加入氯化钡溶液，最后于43℃、350r/min振荡交联4h，制得交联芯材。
2、制备功能性壁材
（1）制备银耳多糖
采用水酶解醇沉法制备银耳多糖，具体过程如下：
将银耳烘干后粉碎至100目得到银耳粉，将银耳粉与净化水按质量比1：50混合得到混悬液，向混悬液中添加混悬液质量0.3%的复合生物酶C1得到混合溶液C1，其中，复合生物酶C1由葡聚糖酶和果胶酶以质量比1:3混合组成，将混合溶液C1先于55℃水解6h，然后升温至95℃灭酶15min，之后4000r/min离心20min得到上清液，将上清液减压浓缩得到浓缩液，用体积浓度为90%的乙醇溶液对浓缩液进行醇沉，乙醇溶液与浓缩液的体积比为5：2，最后于-15℃冷冻干燥2h得到银耳多糖。
（2）制备椰子油提取物
采用水酶法制备椰子油提取物，具体过程如下：
将成熟的椰子去除椰衣、椰汁、椰壳和种皮得到新鲜的椰肉。将新鲜的椰肉切片，按照1：3的质量比加水打浆得到椰浆，向椰浆中加入椰浆质量0.3%的复合生物酶C2得到混合溶液C2，其中，复合生物酶C2由纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶按照1：2：3：2：1的质量比混合组成，将混合溶液C2先于58℃水解14h，然后95℃水浴灭酶活15min，之后5000r/min离心20min得到游离油、乳状液、水解液和椰子粕，将乳状液再次以5000r/min离心20min得到游离油，将两次得到的游离油合并，并于-15℃冷冻干燥2h得到椰子油提取物。
3、制备交联功能壁材
将质量浓度为5%的麦芽糊精（基础性壁材）溶液与步骤2制备得到的银耳多糖和椰子油提取物（功能性壁材）按质量比2：1：1混合均匀，43℃、450r/min振荡交联4h，制得交联功能壁材。
4、基础性壁材前包埋处理
将步骤1制备得到的交联芯材按质量比2：3添加至质量浓度为3%的海藻酸钠（基础性壁材）溶液中，混合均匀，得到海藻酸钠与交联芯材的混合溶液，持续搅拌，将混合溶液滴入到质量浓度为2%的氯化钙（交联剂）溶液当中，直至混合物质地逐渐硬化，经无菌水洗涤后得到一级交联微胶囊。
5、交联功能壁材后包埋处理
将步骤4制备得到的一级交联微胶囊按质量比1：1与步骤3制备得到的交联功能壁材混合，然后使用胶体磨15000r/min处理30min剪切乳化，之后使用高压均质机50MPa均质3次，随后将混合物于-15℃冷冻干燥3h，得到二级交联微胶囊，即刺参低聚肽交联微胶囊。
实施例4（对比例1）：制备刺参低聚肽交联微胶囊D
刺参低聚肽交联微胶囊D的制备方法与刺参低聚肽交联微胶囊B的制备方法（实施例2）基本相同，不同之处仅在于：芯材不作交联化处理。
刺参低聚肽交联微胶囊D的芯材的制备方法具体如下：按质量比2：1称取分子量为350Da的刺参低聚肽、分子量为6.02×105的透明质酸钠，将刺参低聚肽与透明质酸钠混合均匀，制得混合芯材。
其余步骤与实施例2相同，不再赘述。
实施例5（对比例2）：制备刺参低聚肽交联微胶囊E
刺参低聚肽交联微胶囊E的制备方法与刺参低聚肽交联微胶囊B的制备方法（实施例2）基本相同，不同之处仅在于：直接采用水提法制备功能性壁材银耳多糖和椰子油提取物，而不进行微生物酶解处理。
采用水提法制备功能性壁材银耳多糖的操作具体如下：将银耳烘干后粉碎至80目得到银耳粉，将银耳粉与净化水的按质量比1：40混合得到混悬液，将混悬液3500r/min离心10min得到上清液，将上清液减压浓缩得到浓缩液，用体积浓度为80%的乙醇溶液对浓缩液进行醇沉，乙醇溶液与浓缩液对体积比为2：1，最后于-18℃冷冻干燥1.5h，得到银耳多糖。
采用水提法制备功能性壁材椰子油提取物的操作具体如下：将新鲜的椰肉切片，按照1：2的质量比加水打浆得到椰浆，将椰浆4800r/min离心10min得到游离油、乳状液、水解液和椰子粕，将乳状液再次以4800r/min离心10min得到游离油，将两次得到的游离油合并，并于-18℃冷冻干燥1.5h得到椰子油提取物。
其余步骤与实施例2相同，不再赘述。
实施例6（对比例3）：制备刺参低聚肽交联微胶囊F
刺参低聚肽交联微胶囊F的制备方法与刺参低聚肽交联微胶囊B的制备方法（实施例2）基本相同，不同之处仅在于：直接将功能性壁材银耳多糖和椰子油提取物按质量比1：2混合作为后包埋材料，而不作交联处理。
其余步骤与实施例2相同，不再赘述。
实施例7（对比例4）：制备刺参低聚肽交联微胶囊G
刺参低聚肽交联微胶囊G的制备方法与刺参低聚肽交联微胶囊B的制备方法（实施例2）基本相同，不同之处仅在于：不进行基础性壁材前包埋处理，而是将交联芯材直接与交联功能壁材进行后包埋处理。
操作具体如下：将交联芯材按质量比1：2与交联功能壁材混合，然后使用胶体磨13000r/min处理20min剪切乳化，之后使用高压均质机40MPa均质3次，随后将混合物于-18℃冷冻干燥2h即得到刺参低聚肽交联微胶囊G。
其余步骤与实施例2相同，不再赘述。
实施例8（对比例5）：制备刺参低聚肽交联微胶囊H
刺参低聚肽交联微胶囊H的制备方法与刺参低聚肽交联微胶囊B的制备方法（实施例2）基本相同，不同之处仅在于：只进行一次基础性壁材前包埋处理，而不进行交联功能壁材后包埋处理。
基础性壁材前包埋处理的操作具体如下：将交联芯材按质量比2：1添加至质量浓度为2%的海藻酸钠（基础性壁材）溶液中，混合均匀，得到海藻酸钠与交联芯材的混合溶液，持续搅拌，将混合溶液滴入到质量浓度为1%的氯化钙（交联剂）溶液当中，直至混合物质地逐渐硬化，经无菌水洗涤后即得到刺参低聚肽交联微胶囊H。
其余步骤与实施例2相同，不再赘述。
实施例9（对比例6）：制备刺参低聚肽交联微胶囊I
刺参低聚肽交联微胶囊I的制备方法与刺参低聚肽交联微胶囊B的制备方法（实施例2）基本相同，不同之处仅在于：芯材和功能性壁材均不作交联化处理，而是将刺参低聚肽直接进行两次包埋处理。
刺参低聚肽交联微胶囊I的制备方法操作具体如下：将刺参低聚肽按质量比2：1添加至质量浓度为2%的海藻酸钠（基础性壁材）溶液中，混合均匀，得到海藻酸钠与刺参低聚肽的混合溶液，持续搅拌，将混合溶液滴入到质量浓度为1%的氯化钙（交联剂）溶液当中，直至混合物质地逐渐硬化，经无菌水洗涤后得到一级交联微胶囊；按质量比1：2：2将前面制备得到的一级交联微胶囊与银耳多糖、椰子油提取物混合，然后使用胶体磨13000r/min处理20min剪切乳化，之后使用高压均质机40MPa均质3次，随后将混合物于-18℃冷冻干燥2h，得到二级交联微胶囊，即刺参低聚肽交联微胶囊I。
其余步骤与实施例2相同，不再赘述。
二、测定刺参低聚肽交联微胶囊的包埋率
测定方法具体如下：
（1）取样品 0.2g，用冷蒸馏水反复冲洗，洗液定容至 10ml，洗液中的肽的含量即为样品表面肽的含量，对照品操作如上；
（2）取样品 0.2g，用50℃蒸馏水溶解并定容至 10ml，溶解液中的肽的含量即为微胶囊总刺参低聚肽（以下简称微胶囊总低聚肽）的含量。
包埋率计算公式如下：
微胶囊表面肽含量(g)=样品表面肽含量(g)—对照品表面肽含量(g)
微胶囊中肽含量(g)=微胶囊总低聚肽含量(g)—微胶囊表面肽含量(g)
包埋率(%)=(微胶囊中肽含量/加入的刺参低聚肽含量)×100%
经计算，实施例1至实施例9中的刺参低聚肽交联微胶囊的包埋率分别如下：
实施例1 实施例2 实施例3 实施例4 实施例5 实施例6 实施例7 实施例8 实施例9
包埋率（%） 68.21 69.3 69.24 58.16 51.2 53.5 58.71 55.4 58.23
由上表可知，实施例1、实施例2和实施例3制备得到的刺参低聚肽交联微胶囊的包埋率均在68%以上，显著高于实施例4至实施例9制备得到的刺参低聚肽交联微胶囊的包埋率。
由此可以看出，采用交联芯材与功能性壁材进行前后两次交联包埋的方式对刺参低聚肽微囊化处理具有较好的效果。
三、测试刺参低聚肽交联微胶囊的吸湿性
实验方法：将实施例1、实施例2和实施例3以及更具有代表性的实施例8（对比例5）和实施例9（对比例6）制备得到的刺参低聚肽交联微胶囊分别暴露于80％相对湿度、温度为25℃的密闭容器中，每隔6h测量一次水分增加量，连续测量24h，其中，实施例1、实施例2、实施例3制备得到的刺参低聚肽交联微胶囊为实验组，实施例8（对比例5）和实施例9（对比例6）制备得到的刺参低聚肽交联微胶囊为对照组。
微胶囊的吸湿性表示为干重的百分比，测量结果见图1。
由图1可以看出，在80％相对湿度环境下存储24h后，实验组的刺参低聚肽交联微胶囊的水分含量显著低于对照组的刺参低聚肽交联微胶囊的水分含量。也就是说，实验组的刺参低聚肽交联微胶囊的吸湿性增幅较低。
由此可以得出以下结论：实验组的刺参低聚肽交联微胶囊可以延长刺参低聚肽的货架期。
四、刺参低聚肽交联微胶囊分散性和掩味对比试验
1、分散性试验
试验方法：称取样品5g，溶于70℃、50mL去离子水中，在恒温磁力搅拌器上以350r/min转速搅拌，记录从搅拌开始到微粒粉全部分散所需时间；重复试验3次，以平均值作为分散时间（s）。
计算公式：
ST＝（t1+t2+t3）/3
式中，ST-分散时间；t1-第一次分散时间；t2-第二次分散时间；t3-第三次分散时间。
分散时间越短表明微粒粉在温水中越不易结团，越能够快速的在水中均匀扩散。
2、掩味试验
试验方法：选择能够明确分辨异味的20名健康志愿者，用水漱口后，取实施例1至实施例9制备得到的刺参低聚肽交联微胶囊微粒粉末各25g，加入200mL、70℃温水中冲泡成混悬液，将适量混悬液含在口中并保持30s，然后吐出并漱口，立即记录口感，其中：
0分为无异味；
1分为有轻微异味，口感可接受；
2分为有明显异味，口感较差；
3分为较大异味，口感很差；
4分为有强烈异味，无法忍受。
分散性和掩味对比试验结果见下表：
分散时间 掩味评分
实施例1 8s 2
实施例2 8s 1
实施例3 7s 1
实施例4 7s 3
实施例5 9s 2
实施例6 7s 3
实施例7 7s 3
实施例8 6s 3
实施例9 8s 2
由上表可以明显看出：
（1）在分散性上：实施例1、实施例2和实施例3制备得到的刺参低聚肽交联微胶囊，由于经过前后两次交联包埋，与实施例4至实施例9制备得到的刺参低聚肽交联微胶囊相比，在水中的扩散速度偏慢，但偏差基本不大。这表明：经过前后两次交联包埋的刺参低聚肽及其壁材具有较好的分散性，便于人体消化分解。
（2）在掩味效果上：实施例1、实施例2和实施例3制备得到的刺参低聚肽交联微胶囊，由于经过前后两次交联包埋，与实施例4至实施例9制备得到的刺参低聚肽交联微胶囊相比，掩味评分较低。这表明：经过前后两次交联包埋的刺参低聚肽具有良好的风味提升。
五、刺参低聚肽交联微胶囊的体外模拟释放试验
在体外模拟释放实验中，微胶囊先在胃内停留3h左右，随后转移到小肠中被吸收。
模拟胃液的配制：取 800ml 蒸馏水，加入约 1.6ml 盐酸，搅拌均匀后加入 10g胃蛋白酶，搅拌均匀后稀释至1L，调节pH至1.2 待用。
模拟肠液的配制：取500mL蒸馏水，加入6.8g磷酸二氢钾，溶解后用质量浓度为4%的氢氧化钠溶液调节pH至6.8，蒸馏水稀释至1L，100℃灭菌15min，冷却后加入10g 胰蛋白酶混合均匀待用。
刺参低聚肽交联微胶囊释放率的测定方法：
分别称取实施例2和实施例9（对比例6）制备得到的刺参低聚肽交联微胶囊，加入500m L温度为37℃的模拟胃液中保温释放，转速为100r/min，于0h、0.1h、0.5h、lh、2h、3h定时取样，取样体积为5m L，同时补加模拟胃液5m L，释放的肽含量采用福林-酚法测定。
将经过上述模拟胃液作用后的微胶囊与模拟胃液分离并水洗，然后加入到500mL温度为37℃的模拟肠液中保温释放，转速100r/min，于0min、5min、10min、15min、20min定时取样，取样体积为5m L，同时补加模拟肠液5m L，释放的肽含量采用福林-酚法测定。
模拟胃液中释放率（%）=（模拟胃液中释放的肽含量/加入的微胶囊质量×刺参低聚肽百分含量）×100%
模拟肠液中释放率（%）=（模拟肠液中释放的肽含量/加入的微胶囊质量×刺参低聚肽百分含量）×100%+模拟胃液中释放率
实施例2和实施例9（对比例6）制备得到的刺参低聚肽交联微胶囊在模拟胃液中的释放情况见图2。
实施例2和实施例9（对比例6）制备得到的刺参低聚肽交联微胶囊在模拟肠液中的释放情况见图3。
由图2可以看出，在模拟胃液中，实施例2和实施例9（对比例6）制备得到的刺参低聚肽交联微胶囊在胃液中的积累的释放率分别为31.2%、35.6%。这说明：刺参低聚肽的交联微胶囊对刺身低聚肽本身具有一定的保护作用，但因为微胶囊的基础性壁材与功能性壁材在酸环境中还是会受到破坏，所以会先释放一部分低聚肽，结合数据发现，实施例2制备得到的刺参低聚肽交联微胶囊其保护能力高于实施例9制备得到的刺参低聚肽交联微胶囊。
由图3可以看出，在模拟肠液中，实施例2和实施例9（对比例6）制备得到的刺参低聚肽交联微胶囊在较短的时间内释放率分别达到了77.6%、82.2%。这说明：以交联芯材与功能性壁材等经前后两次交联包埋制备得到的刺参低聚肽交联微胶囊在模拟肠液中的缓释效果较好。
综合图2和图3可以得出以下结论：刺参低聚肽的交联微胶囊有利于提高刺参低聚肽的口服生物利用度。
综上，本发明实施例1、实施例2和实施例3制备得到的刺参低聚肽交联微胶囊不仅货架期延长，而且风味得到了很好的提升，更重要的是口服生物利用度得到了提高。
正因为本发明实施例1、实施例2和实施例3制备得到的刺参低聚肽交联微胶囊具有上述优势，并且其因采用银耳多糖和椰子油提取物作为功能性壁材，而具有抗氧化、增强免疫力和改善胃肠机能等作用，赋予了产品新的营养功能，加之其具有良好的溶解性和流动性，所以其可以应用在奶制品、功能食品、保健品、益生菌制品以及护肤品中。
需要说明的是，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无法对所有的实施方式予以穷举。凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。

Claims (10)

1.一种刺参低聚肽交联微胶囊的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）制备交联芯材：按质量比1~3：1~2：1称取刺参低聚肽、透明质酸钠和交联剂A的稀溶液，将刺参低聚肽和透明质酸钠混合均匀，在持续搅拌下加入交联剂A的稀溶液，振荡交联，制得交联芯材；
（2）制备交联功能壁材：将基础性壁材A的稀溶液与功能性壁材银耳多糖和椰子油提取物按质量比2：1~4：1~3混合均匀，振荡交联，制得交联功能壁材；
（3）基础性壁材前包埋处理：将交联芯材按质量比1~2：1~3添加至基础性壁材B的稀溶液中，混合均匀，得到基础性壁材B与交联芯材的混合溶液，持续搅拌，将混合溶液滴入到交联剂B的稀溶液当中，直至混合物质地逐渐硬化，经无菌水洗涤后得到一级交联微胶囊；
（4）交联功能壁材后包埋处理：将一级交联微胶囊按质量比1：1~2与交联功能壁材混合，然后使用胶体磨进行剪切乳化处理，之后使用高压均质机进行均质处理，随后将混合物冷冻干燥，得到二级交联微胶囊，即刺参低聚肽交联微胶囊。
2.根据权利要求1所述的刺参低聚肽交联微胶囊的制备方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述刺参低聚肽选用的是分子量为200~500Da的刺参低聚肽；所述透明质酸钠选用的是分子量为8.02×104~4.01×106的透明质酸钠。
3.根据权利要求1所述的刺参低聚肽交联微胶囊的制备方法，其特征在于，在步骤（1）中，所述交联剂A选用的是氯化镁、氯化钡或变性淀粉，其稀溶液的质量浓度为0.5~1.5%；在步骤（3）中，所述交联剂B选用的是氯化钙，其稀溶液的质量浓度为0.5~2%。
4.根据权利要求1所述的刺参低聚肽交联微胶囊的制备方法，其特征在于，在步骤（2）中，所述基础性壁材A选用的是麦芽糊精，其稀溶液的质量浓度为2.5~5%；在步骤（3）中，所述基础性壁材B选用的是海藻酸钠，其稀溶液的质量浓度为1~3%。
5.根据权利要求1所述的刺参低聚肽交联微胶囊的制备方法，其特征在于，在步骤（1）和步骤（2）中，振荡交联的温度为35~45℃，转速为300~400r/min，时间为2~4h。
6.根据权利要求1所述的刺参低聚肽交联微胶囊的制备方法，其特征在于，在步骤（2）中，银耳多糖采用水酶解醇沉法制备得到，具体过程如下：
将银耳烘干后粉碎得到银耳粉，将银耳粉与净化水混合得到混悬液，向混悬液中添加混悬液质量0.1~0.3%的复合生物酶1得到混合溶液1，其中，复合生物酶1由葡聚糖酶和果胶酶以质量比1：1~3混合组成，将混合溶液1先水解，然后升温灭酶，之后离心得到上清液，将上清液减压浓缩得到浓缩液，用体积浓度为75~90%的乙醇溶液对浓缩液进行醇沉，最后冷冻干燥得到银耳多糖。
7.根据权利要求1所述的刺参低聚肽交联微胶囊的制备方法，其特征在于，在步骤（2）中，所述椰子油提取物采用水酶法制备得到，具体过程如下：
将新鲜的椰肉切片并加水打浆得到椰浆，向椰浆中加入椰浆质量0.1~0.3%的复合生物酶2得到混合溶液2，其中，复合生物酶2由纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶、中性蛋白酶和木瓜蛋白酶按质量比1~2：1~2：1~3：1~2：1~2混合组成，将混合溶液2先水解，然后水浴灭酶活，之后离心得到游离油、乳状液、水解液和椰子粕，将乳状液再次离心得到游离油，将两次得到的游离油合并，并冷冻干燥得到椰子油提取物。
8.根据权利要求1所述的刺参低聚肽交联微胶囊的制备方法，其特征在于，在步骤（4）中，所述胶体磨的转速为10000~15000r/min，剪切乳化处理时间为15~30min；所述高压均质机的压力为30~50MPa，均质1~3次；冷冻干燥条件为-15~-20℃冷冻干燥1~3h。
9.一种刺参低聚肽交联微胶囊，其特征在于，由权利要求1至8任意一项所述的制备方法制备而成。
10.权利要求9所述的刺参低聚肽交联微胶囊在奶制品、功能食品、保健品、益生菌制品以及护肤品中的应用。
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