CN113390988A - 一种基于溶剂效应的从石榴皮提取废弃物中快速回收安石榴苷的方法 - Google Patents

一种基于溶剂效应的从石榴皮提取废弃物中快速回收安石榴苷的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种基于溶剂效应的从石榴皮提取废弃物中快速回收安石榴苷的方法，该方法基于溶剂效应，以甲醇水、乙腈水或甲酸水为分散溶剂，将石榴皮提取物在沉淀前处理过程中产生的沉淀（即石榴皮提取废弃物）分散，再进样至反相色谱柱上进行分离；通过控制进样溶剂的体积和洗脱强度，以及流动相的洗脱强度，在分离过程中形成溶剂效应。大极性的安石榴苷在溶剂峰处快速洗脱出来，而小极性的杂质保留在反相色谱柱上，从而达到分离的效果。该方法可将安石榴苷含量为12%的石榴皮废弃物快速纯化为安石榴苷含量范围为18‑40%的富含安石榴苷的组分。本发明所述方法简单快速，纯化效率高，为石榴皮提取物中沉淀前处理所得石榴皮提取废弃物的回收利用提供了有力支撑。

Description

一种基于溶剂效应的从石榴皮提取废弃物中快速回收安石榴 苷的方法
技术领域
本发明涉及一种基于溶剂效应的从石榴皮提取废弃物中快速回收安石榴苷的方法，该方法基于液相色谱溶剂效应的产生特点，可以实现将极性相差较大的化合物进行快速分离，并用于从石榴皮提取废弃物中快速富集安石榴苷，从而为石榴皮的高值化综合利用提供有力支撑。
背景技术
液相色谱是近代兴起发展起来的一种高效分离手段，目前在生物制药等领域获得了广泛的应用。在液相色谱的使用过程中，溶剂效应是一个常见的负面问题。在色谱分离过程中，当进样溶剂的洗脱强度高于流动相时，部分样品在进样后可能无法在色谱柱上有效保留，而在死体积处直接流出。除溶剂洗脱强弱的差别外，溶剂效应的强弱通常还和化合物本身的性质有关。化合物在色谱柱上的保留越小，其在分离过程中溶剂效应越强。在色谱分离分析的过程中，应当尽可能地避免溶剂效应。然而，在一个需要纯化的体系中，当化合物间的极性差异非常大时，就可以通过极性差异的控制来实现化合物溶剂效应的强弱，从而实现化合物的分离。
石榴是一种经济作用价值较高的水果，其干燥果皮简称石榴皮，具有涩肠止泻，止血，驱虫之功效。常用于久泻，久痢，便血，脱肛，崩漏，带下，虫积腹痛。石榴皮中富含多酚类化合物，具有较强的抗氧化、抗炎以及抗菌作用。在石榴皮多酚中，安石榴苷为其中的主要有效成分。目前，对石榴皮的综合利用主要是通过提取、大孔树脂纯化或反相色谱纯化的方式对其中的安石榴苷进行富集。所得提取物中化合物的组成复杂，化合物极性分布广，需要进行溶剂沉淀、离心等前处理。在对石榴皮提取物中进行水溶解沉淀前处理的过程中，所产生的沉淀中残留着大量的安石榴苷。由于沉淀的水溶性和分散性较差，且安石榴苷的含量相对石榴皮提取物较低，将沉淀中的安石榴苷快速富集出来难度较大。为了提高石榴皮的综合利用附加值，开发一种可将石榴皮提取物沉淀法处理过程中产生的沉淀中残留安石榴苷快速回收的方法是十分必要的。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种基于溶剂效应的从石榴皮提取废弃物中快速回收安石榴苷的方法，该方法基于溶剂效应，以甲醇水、乙腈水或甲酸水为分散溶剂，将石榴皮提取物在沉淀法前处理过程中产生的沉淀(即石榴皮提取废弃物)分散，再进样至反相色谱柱上进行分离；通过控制进样溶剂的体积和洗脱强度，以及流动相的洗脱强度，在分离过程中形成溶剂效应。大极性的安石榴苷在溶剂峰处快速洗脱出来，而小极性的杂质保留在反相色谱柱上，从而达到分离的效果。本发明所述方法简单快速，纯化效率高，为石榴皮提取物中沉淀法前处理所得石榴皮提取废弃物的回收利用提供了一种有效的方法。
本发明所述的一种基于溶剂效应的从石榴皮废弃物中快速回收安石榴苷的方法，按下列步骤进行：
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加10-20倍量浓度为40％乙醇，在温度71-85℃条件下提取1-3次，每次1-3小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附3-12小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用2-5倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮多酚提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，所得沉淀加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加甲酸至甲酸体积分数为10％-35％，或添加甲醇至甲醇体积分数为20％-30％，或添加乙腈至乙腈体积分数为15％-25％，所得溶液待用；
c、取反相C18色谱柱，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比1:99-15:85的甲醇-0.1％甲酸水为流动相，或以体积比1:99-12:88的乙腈-0.1％甲酸水为流动相，或以体积比1:99-12:88的四氢呋喃-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在10℃-45℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比1:99-15:85的甲醇-0.1％甲酸水为流动相，或以体积比1:99-12:88的乙腈-0.1％甲酸水为流动相，或以体积比1:99-12:88的四氢呋喃-0.1％甲酸水为流动相，控制柱温在10℃-45℃，流速为600mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量。
步骤b中添加甲酸至甲酸体积分数为30％-35％。
本发明所述的一种基于溶剂效应的从石榴皮提取废弃物中快速回收安石榴苷的方法，该方法中的石榴皮多酚提取物是按ZL201310648219.8《一种具有抗菌消炎脱臭的漱口液及其制备方法和用途》中方法获得石榴皮多酚提取物，具体操作：
取石榴皮粉碎成粗粉，加10-20倍量浓度为40％乙醇，在温度71-85℃条件下提取1-3次，每次1-3小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附3-12小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用2-5倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物。
本发明所述的一种基于溶剂效应的从石榴皮提取废弃物中快速回收安石榴苷的方法，该方法首次基于液相色谱的溶剂效应，在反相C18色谱柱上将大极性的安石榴苷从复杂的石榴皮提取物在前处理过程中的产生的沉淀中快速分离出来。该方法简单有效，可为提高石榴皮的综合利用附加值提供新思路。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步详细阐述本发明。
实施例1
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加10倍量浓度为40％乙醇，在温度71℃条件下提取1次，3小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附3小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用2倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，沉淀，将所得沉淀废弃物加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加甲酸至甲酸体积分数为10％，所得溶液待用；另取经沉淀后的，冷冻干燥后的固体粉末，经高效液相色谱法测定粉末中安石榴苷含量为12％；
c、取反相C18色谱柱(250mm×150mm，10μm)，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比15:85的甲醇-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在30℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比15:85的甲醇-0.1％甲酸水为流动相，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末15g，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量为34％。
实施例2
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加15倍量浓度为40％乙醇，在温度75℃条件下提取2次，每次1小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附5小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用3倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过100目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮多酚提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，沉淀，将所得沉淀废弃物加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加甲酸至甲酸体积分数为35％，所得溶液待用；另取经沉淀后的废弃物，冷冻干燥后的固体粉末，经高效液相色谱法测定粉末中安石榴苷含量为12％；
c、取反相C18色谱柱(250mm×150mm，10μm)，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比1:99的甲醇-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在30℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比1:99的甲醇-0.1％甲酸水为流动相，控制柱温在20℃，流速为600mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末25g，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量为33％。
实施例3
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加18倍量浓度为40％乙醇，在温度78℃条件下提取3次，每次1小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附8小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用4倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，沉淀，将所得沉淀废弃物加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加甲酸至甲酸体积分数为20％，所得溶液待用；另取经沉淀后废弃物，冷冻干燥后的固体粉末，经高效液相色谱法测定粉末中安石榴苷含量为12％；
c、取反相C18色谱柱(250mm×150mm，10μm)，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比10:90的甲醇-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在30℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比10:90的甲醇-0.1％甲酸水为流动相，控制柱温在35℃，流速为600mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末22g，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量为40％。
实施例4
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加20倍量浓度为40％乙醇，在温度85℃条件下提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附10小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用5倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，沉淀，将所得沉淀废弃物加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加甲酸至甲酸体积分数为15％，所得溶液待用；另取经沉淀后的废弃物，冷冻干燥后的固体粉末，经高效液相色谱法测定粉末中安石榴苷含量为12％；
c、取反相C18色谱柱(250mm×150mm，10μm)，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比1:99的乙腈-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在10℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比1:99的乙腈-0.1％甲酸水为流动相，控制柱温在10℃，流速为600mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末15g，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量为20％。
实施例5
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加10倍量浓度为40％乙醇，在温度85℃条件下提取3次，每次1小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附12小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用3倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，沉淀，将所得沉淀废弃物加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加甲酸至甲酸体积分数为30％，所得溶液待用；另取经沉淀后的废弃物，冷冻干燥后的固体粉末，经高效液相色谱法测定粉末中安石榴苷含量为12％；
c、取反相C18色谱柱(250mm×150mm，10μm)，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比12:88的乙腈-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在20℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比12:88的乙腈-0.1％甲酸水为流动相，控制柱温在20℃，流速为600mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末25g，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量为30％。
实施例6
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加12倍量浓度为40％乙醇，在温度74℃条件下提取2次，每次3小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附7小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用5倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，沉淀，将所得沉淀废弃物加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加甲酸至甲酸体积分数为25％，所得溶液待用；另取经沉淀后的废弃物，冷冻干燥后的固体粉末，经高效液相色谱法测定粉末中安石榴苷含量为12％；
c、取反相C18色谱柱(250mm×150mm，10μm)，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比10:90的乙腈-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在45℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比10:90的乙腈-0.1％甲酸水为流动相，控制柱温在45℃，流速为600mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末22g，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量为35％。
实施例7
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加10倍量浓度为40％乙醇，在温度80℃条件下提取1次，3小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附4小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用2倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，沉淀，将所得沉淀废弃物加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加甲酸至甲酸体积分数为12％，所得溶液待用；另取经沉淀后的废弃物，冷冻干燥后的固体粉末，经高效液相色谱法测定粉末中安石榴苷含量为12％；
c、取反相C18色谱柱(250mm×150mm，10μm)，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比1:99的四氢呋喃-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在15℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比1:99的四氢呋喃-0.1％甲酸水为流动相，控制柱温在15℃，流速为600mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量。
实施例8
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加14倍量浓度为40％乙醇，在温度75℃条件下提取2次，每次1小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附6小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用3倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，沉淀，将所得沉淀废弃物加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加甲酸至甲酸体积分数为25％，所得溶液待用；另取经沉淀后的废弃物，冷冻干燥后的固体粉末，经高效液相色谱法测定粉末中安石榴苷含量为12％；
c、取反相C18色谱柱(250mm×150mm，10μm)，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比10:90的四氢呋喃-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在40℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比10:90的四氢呋喃-0.1％甲酸水为流动相，控制柱温在40℃，流速为600mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量。
实施例9
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加18倍量浓度为40％乙醇，在温度71℃条件下提取3次，每次1小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附6小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用5倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，沉淀，将所得沉淀废弃物加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加甲酸至甲酸体积分数为30％，所得溶液待用；另取经沉淀后的废弃物，冷冻干燥后的固体粉末，经高效液相色谱法测定粉末中安石榴苷含量为12％；
c、取反相C18色谱柱(250mm×150mm，10μm)，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比12:88的四氢呋喃-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在30℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比12:88的四氢呋喃-0.1％甲酸水为流动相，控制柱温在30℃，流速为600mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量。
实施例10
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加14倍量浓度为40％乙醇，在温度82℃条件下提取2次，每次3小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附6小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用4倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮多酚提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，沉淀，将所得沉淀废弃物加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加乙腈至乙腈体积分数为15％，所得溶液待用；另取经沉淀后的废弃物，冷冻干燥后的固体粉末，经高效液相色谱法测定粉末中安石榴苷含量为12％；
c、取反相C18色谱柱(250mm×150mm，10μm)，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比15:85的甲醇-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在30℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比15:85的甲醇-0.1％甲酸水为流动相，控制柱温在30℃，流速为600mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末17g，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量为22％。
实施例11
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加17倍量浓度为40％乙醇，在温度77℃条件下提取1次，3小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附10小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用5倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物
b、称取石榴皮多酚提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，沉淀，将所得沉淀废弃物加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加乙腈至乙腈体积分数为25％，所得溶液待用；另取经沉淀后的废弃物，冷冻干燥后的固体粉末，经高效液相色谱法测定粉末中安石榴苷含量为12％；
c、取反相C18色谱柱(250mm×150mm，10μm)，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比1:99的甲醇-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在10℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比1:99的甲醇-0.1％甲酸水为流动相，控制柱温在10℃，流速为600mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末28g，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量为30％。
实施例12
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加20倍量浓度为40％乙醇，在温度71℃条件下提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附12小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用2倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，沉淀，将所得沉淀废弃物加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加乙腈至乙腈体积分数为20％，所得溶液待用；另取经沉淀后的废弃物，冷冻干燥后的固体粉末，经高效液相色谱法测定粉末中安石榴苷含量为12％；
c、取反相C18色谱柱(250mm×150mm，10μm)，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比10:90的甲醇-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在35℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比10:90的甲醇-0.1％甲酸水为流动相，控制柱温在35℃，流速为600mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末25g，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量为35％。
实施例13
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加20倍量浓度为40％乙醇，在温度71℃条件下提取1次，2小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附7小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用5倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，沉淀，将所得沉淀废弃物加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加乙腈至乙腈体积分数为15％，所得溶液待用；另取经沉淀后的废弃物，冷冻干燥后的固体粉末，经高效液相色谱法测定粉末中安石榴苷含量为12％；
c、取反相C18色谱柱(250mm×150mm，10μm)，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比1:99的乙腈-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在40℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比1:99的乙腈-0.1％甲酸水为流动相，控制柱温在30℃，流速为600mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末5g，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量为18％。
实施例14
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加10倍量浓度为40％乙醇，在温度85℃条件下提取3次，每次2小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附3小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用5倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，沉淀，将所得沉淀废弃物加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加乙腈至乙腈体积分数为20％，所得溶液待用；另取经沉淀后的废弃物，冷冻干燥后的固体粉末，经高效液相色谱法测定粉末中安石榴苷含量为12％；
c、取反相C18色谱柱(250mm×150mm，10μm)，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比12:88的乙腈-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在20℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比12:88的乙腈-0.1％甲酸水为流动相，控制柱温在20℃，流速为600mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末19g，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量为28％。
实施例15
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加15倍量浓度为40％乙醇，在温度75℃条件下提取2次，每次3小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附12小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用2倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，沉淀，将所得沉淀废弃物加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加乙腈至乙腈体积分数为25％，所得溶液待用；另取经沉淀后的废弃物，冷冻干燥后的固体粉末，经高效液相色谱法测定粉末中安石榴苷含量为12％；
c、取反相C18色谱柱(250mm×150mm，10μm)，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比5:95的乙腈-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在45℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比5:95的乙腈-0.1％甲酸水为流动相，控制柱温在45℃，流速为600mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末29g，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量为29％。
实施例16
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加10倍量浓度为40％乙醇，在温度85℃条件下提取3次，每次3小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附12小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用2倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，沉淀，将所得沉淀废弃物加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加乙腈至乙腈体积分数为17％，所得溶液待用；另取经沉淀后的废弃物，冷冻干燥后的固体粉末，经高效液相色谱法测定粉末中安石榴苷含量为12％；
c、取反相C18色谱柱(250mm×150mm，10μm)，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比1:99的四氢呋喃-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在18℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比1:99的四氢呋喃-0.1％甲酸水为流动相，控制柱温在27℃，流速为600mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量。
实施例17
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加10倍量浓度为40％乙醇，在温度71℃条件下提取2次，每次1小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附5小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用4倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，沉淀，将所得沉淀废弃物加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加乙腈至乙腈体积分数为23％，所得溶液待用；另取经沉淀后的废弃物，冷冻干燥后的固体粉末，经高效液相色谱法测定粉末中安石榴苷含量为12％；
c、取反相C18色谱柱(250mm×150mm，10μm)，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比10:90的四氢呋喃-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在38℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比10:90的四氢呋喃-0.1％甲酸水为流动相，控制柱温在38℃，流速为600mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量。
实施例18
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加20倍量浓度为40％乙醇，在温度71℃条件下提取1次，2小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附10小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用5倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，沉淀，将所得沉淀废弃物加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加乙腈至乙腈体积分数为20％，所得溶液待用；另取经沉淀后的废弃物，冷冻干燥后的固体粉末，经高效液相色谱法测定粉末中安石榴苷含量为12％；
c、取反相C18色谱柱(250mm×150mm，10μm)，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比12:88的四氢呋喃-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在10℃-45℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比12:88的四氢呋喃-0.1％甲酸水为流动相，控制柱温在10℃-45℃，流速为600mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量。
实施例19
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加18倍量浓度为40％乙醇，在温度78℃条件下提取3次，每次2小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附8小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用3倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，沉淀，将所得沉淀废弃物加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加甲醇至甲醇体积分数为20％，所得溶液待用；另取经沉淀后的废弃物，冷冻干燥后的固体粉末，经高效液相色谱法测定粉末中安石榴苷含量为12％；
c、取反相C18色谱柱(250mm×150mm，10μm)，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比1:99的甲醇-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在10℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比1:99的甲醇-0.1％甲酸水为流动相，控制柱温在10℃，流速为600mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末25g，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量为32％。
实施例20
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加12倍量浓度为40％乙醇，在温度81℃条件下提取1次，3小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附6小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用4倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，沉淀，将所得沉淀废弃物加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加甲醇至甲醇体积分数为25％，所得溶液待用；另取经沉淀后的废弃物，冷冻干燥后的固体粉末，经高效液相色谱法测定粉末中安石榴苷含量为12％；
c、取反相C18色谱柱(250mm×150mm，10μm)，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比15:85的甲醇-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在30℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比15:85的甲醇-0.1％甲酸水为流动相，控制柱温在30℃，流速为600mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末22g，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量为31％。
实施例21
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加20倍量浓度为40％乙醇，在温度78℃条件下提取2次，每次1小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附12小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用5倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，沉淀，将所得沉淀废弃物加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加甲醇至甲醇体积分数为30％，所得溶液待用；另取经沉淀后的废弃物，冷冻干燥后的固体粉末，经高效液相色谱法测定粉末中安石榴苷含量为12％；
c、取反相C18色谱柱(250mm×150mm，10μm)，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比10:90的甲醇-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在45℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比10:90的甲醇-0.1％甲酸水为流动相，控制柱温在45℃，流速为600mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末6g，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量为16％。
实施例22
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加10倍量浓度为40％乙醇，在温度85℃条件下提取3次，每次2小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附8小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用3倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，沉淀，将所得沉淀废弃物加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加甲醇至甲醇体积分数为20％，所得溶液待用；另取经沉淀后的废弃物，冷冻干燥后的固体粉末，经高效液相色谱法测定粉末中安石榴苷含量为12％；
c、取反相C18色谱柱(250mm×150mm，10μm)，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比1:99的乙腈-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在15，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比1:99的乙腈-0.1％甲酸水为流动相，控制柱温在15℃，流速为600mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末32g，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量为28％。
实施例23
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加12倍量浓度为40％乙醇，在温度77℃条件下提取2次，每次1小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附9小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用5倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，沉淀，将所得沉淀废弃物加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加甲醇至甲醇体积分数为23％，所得溶液待用；另取经沉淀后的废弃物，冷冻干燥后的固体粉末，经高效液相色谱法测定粉末中安石榴苷含量为12％；
c、取反相C18色谱柱(250mm×150mm，10μm)，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比12:88的乙腈-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在25℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比12:88的乙腈-0.1％甲酸水为流动相，控制柱温在25℃，流速为600mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末24g，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量为29％。
实施例24
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加20倍量浓度为40％乙醇，在温度73℃条件下提取2次，每次2小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附9小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用4倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，沉淀，将所得沉淀废弃物加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加甲醇至甲醇体积分数为28％，所得溶液待用；另取经沉淀后的废弃物，冷冻干燥后的固体粉末，经高效液相色谱法测定粉末中安石榴苷含量为12％；
c、取反相C18色谱柱(250mm×150mm，10μm)，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比5:95的乙腈-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在35℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比5:95的乙腈-0.1％甲酸水为流动相，控制柱温在35℃，流速为600mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末35g，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量为29％。
实施例25
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加11倍量浓度为40％乙醇，在温度73℃条件下提取3次，每次1.5小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附4小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用5倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，沉淀，将所得沉淀废弃物加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加甲醇至甲醇体积分数为22％，所得溶液待用；另取经沉淀后的废弃物，冷冻干燥后的固体粉末，经高效液相色谱法测定粉末中安石榴苷含量为12％；
c、取反相C18色谱柱(250mm×150mm，10μm)，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比1:99的四氢呋喃-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在12℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比1:99的四氢呋喃-0.1％甲酸水为流动相，控制柱温在12℃，流速为600mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末15g，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量为32％。
实施例26
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加13倍量浓度为40％乙醇，在温度78℃条件下提取2次，每次1小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附4小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用2倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，沉淀，将所得沉淀废弃物加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加甲醇至甲醇体积分数为24％，所得溶液待用；另取经沉淀后的废弃物，冷冻干燥后的固体粉末，经高效液相色谱法测定粉末中安石榴苷含量为12％；
c、取反相C18色谱柱(250mm×150mm，10μm)，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比12:88的四氢呋喃-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在45℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比12:88的四氢呋喃-0.1％甲酸水为流动相，控制柱温在45℃，流速为600mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末23g，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量为34％。
实施例27
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加20倍量浓度为40％乙醇，在温度74℃条件下提取3次，每次3小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附12小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用2倍柱体积的60％乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，沉淀，将所得沉淀废弃物加水800mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加甲醇至甲醇体积分数为30％，所得溶液待用；另取经沉淀后的废弃物，冷冻干燥后的固体粉末，经高效液相色谱法测定粉末中安石榴苷含量为12％；
c、取反相C18色谱柱(250mm×150mm，10μm)，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比10:90的四氢呋喃-0.1％甲酸水为流动相，流速控制为600mL/min mL/min，平衡色谱柱15min，控制柱温在32℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比10:90的四氢呋喃-0.1％甲酸水为流动相，控制柱温在32℃，流速为600mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254nm和366nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末24g，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量为40％。

Claims (2)

1.一种基于溶剂效应的从石榴皮废弃物中快速回收安石榴苷的方法，其特征在于按下列步骤进行：
a、取石榴皮粉碎成粗粉，加10-20倍量浓度为40%乙醇，在温度71-85℃条件下提取1-3次，每次1-3小时，滤过，合并滤液减压回收乙醇，浓缩至每mL相当于生药0.15-0.2g的浓缩液；将浓缩液加入到已处理好的HPD300型大孔吸附树脂柱上，吸附3-12小时，先用去离子水冲洗至流出液颜色较淡时，再用2-5倍柱体积的60%乙醇洗脱，收集含醇洗脱液，回收乙醇，减压浓缩并真空干燥，粉碎，过80-120目筛，得到石榴皮多酚提取物；
b、称取石榴皮多酚提取物1096g，溶于8L水中，超声溶解，至于温度4℃冰箱中静置10h，倒出上清液，所得沉淀加水800 mL，超声分散成悬浊液，至于温度4℃冰箱中静置10h，取上清液，添加甲酸至甲酸体积分数为10%-35%，或添加甲醇至甲醇体积分数为20%-30%，或添加乙腈至乙腈体积分数为15%-25%，所得溶液待用；
c、取反相C18色谱柱，连接于中试制备液相色谱仪上，以体积比1:99-15:85的甲醇-0.1%甲酸水为流动相，或以体积比1:99-12:88的乙腈-0.1%甲酸水为流动相，或以体积比1:99-12:88的四氢呋喃-0.1%甲酸水为流动相，流速控制为600 mL/min ，平衡色谱柱15min，控制柱温在10℃-45℃，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254 nm和366 nm，待用；
d、将步骤b中所得溶液进样至步骤c中平衡好的色谱柱，以体积比1:99-15:85的甲醇-0.1%甲酸水为流动相，或以体积比1:99-12:88的乙腈-0.1%甲酸水为流动相，或以体积比1:99-12:88的四氢呋喃-0.1%甲酸水为流动相，控制柱温在10℃-45℃，流速为600 mL/min，以紫外检测器检测色谱信号，检测波长254 nm和366 nm，收集含有安石榴苷的组分，再将所得组分在温度50℃下通过旋转蒸发仪浓缩，将所得浓缩液通过冷冻干燥机干燥，得到固体粉末，并用高效液相色谱法测定其中安石榴苷的含量。
2.如权利要求1所述的一种基于溶剂效应的从石榴皮废弃物中快速回收安石榴苷的方法，其特征在于步骤b中添加甲酸至甲酸体积分数为30%-35%。
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