CN102659740B - 一种从杜仲叶中提取槲皮素的方法 - Google Patents

Abstract

一种从杜仲叶中提取槲皮素的方法，以杜仲叶为原料，粉碎过筛后用醇溶液回流提取、浓缩、分离并进行酸水解得槲皮素粗品，再将所述槲皮素粗品进行纯化得槲皮素。本发明以杜仲叶为原料，采用醇溶液回流提取、浓缩、分离，经过酸水解得槲皮素粗品，经纯化得槲皮素，所用试剂种类少，毒性小，工艺简单，操作方便，且所得槲皮素纯度高，不仅降低了生产成本，而且提高了槲皮素质量，具有工业化意义，便于推广应用。

Description

一种从杜仲叶中提取槲皮素的方法

技术领域

本发明涉及提取槲皮素的方法，具体涉及一种从杜仲叶中提取槲皮素的方法。

背景技术

槲皮素，又名槲皮黄素、栎精，是一种具有多种生物活性的黄酮类化合物。近些年的研究表明，槲皮素具有较好的祛痰、止咳、平喘作用，可用于治疗慢性支气管炎。此外，槲皮素还有降低血压、减小毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉、增加冠脉血流量、抗肿瘤、抗血小板聚集、抗氧化、预防和减少糖尿病发生等作用，对冠心病、糖尿病及高血压具有辅助治疗作用。槲皮素还可以作为治疗前列腺癌的主要辅助药物，是众多黄酮类化合物中活性最高的化合物之一。

目前槲皮素主要是以银杏叶和芦丁为原料来提取制备。

杜仲又名思仙、丝棉树，属于我国特有科杜仲科，分布于陕西、河南、湖北、湖南、四川、云南、贵州、浙江、甘肃等省，是我国传统的名贵药材，主要以树皮入药。但是杜仲生长缓慢，取材困难，且皮剥树死。研究发现，杜仲的叶和皮具有基本相同的化学成分和药理作用。杜仲叶中主要含环烯醚萜苷类、黄酮类及酚酸类等成分，特别是绿原酸和黄酮的含量远高于杜仲皮。文献“杜仲叶黄酮类化合物的研究”中公开了一种以杜仲叶为原料提取槲皮素的方法，该方法所得提取物经过正丁醇萃取后，需要依次经过D-101大孔吸附树脂柱、硅胶柱、Sephadex LH-20柱分离方可得到槲皮素。文献“杜仲叶绿原酸总黄酮的分离纯化及检测”中公开了一种以杜仲叶为原料提取槲皮素的方法，该方法所得杜仲叶粗提物需要依次经过NKA-II大孔吸附树脂、聚酰胺树脂和Sephadex LH-20分离纯化，才可得到槲皮素组分。这两种方法均需要使用多种分离材料，且工艺复杂，工序繁多。

发明内容

本发明的目的在于提供一种工艺简单、操作方便的从杜仲叶中提取槲皮素的方法，解决现有技术工艺复杂，工序繁多，成本高的问题。

本发明的目的是这样实现的，一种从杜仲叶中提取槲皮素的方法，其特征在于：以杜仲叶为原料，粉碎过筛后用醇溶液提取并进行酸水解得槲皮素粗品，再将所述槲皮素粗品进行纯化得槲皮素。

所述提取为在所述原料中加甲醇或乙醇溶液进行回流提取，其比例为1kg原料/8-12L甲醇或乙醇，将所得提取液减压浓缩至无醇味，加水分散，再加入大孔吸附树脂柱吸附，并依次用水和乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇。

所述甲醇或乙醇的体积浓度为70％～90％。

所述大孔吸附树脂为D-101、AB-8和NKA-II中的一种。

所述洗脱用的水为8～12BV去离子水。

所述洗脱用的乙醇为5～8BV体积浓度为60％～80％的乙醇。

所述酸水解为在经大孔吸附树脂吸附，乙醇洗脱后的浓缩液中加入质量浓度为2％～4％的酸调节溶液PH值达到2～3，然后加热至80℃～90℃进行水解并再浓缩。

所述酸为硫酸、盐酸和磷酸中的一种。

所述纯化为将所述槲皮素粗品用无水甲醇回流溶解、结晶并干燥。

本发明具有如下有益效果，本发明以杜仲叶为原料，采用醇溶液回流提取，大孔吸附树脂分离，酸水解得槲皮素粗品，经纯化得槲皮素，所用试剂种类少，毒性小，工艺简单，操作方便，且所得槲皮素纯度高，不仅降低了生产成本，而且提高了槲皮素质量，具有工业化意义，便于推广应用。

具体实施方式

下述实施例中槲皮素的纯度测定采用《中国药典》2010版高效液相色谱法。具体方法如下：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4％磷酸(50∶50)为流动相；检测波长为360nm，理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500。

对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥过夜的槲皮素对照品，加甲醇制成每1mL含30μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取杜仲叶中粉约1g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷回流提取2小时，弃去溶剂，固体部分挥干，加甲醇回流提取4小时，提取液蒸干，残渣加甲醇-25％盐酸溶液(4∶1)混合液25mL，加热回流30分钟，放冷，转移至50mL量瓶中，并加甲醇至刻度，摇匀，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，计算槲皮素的含量。

实施例1，一种从杜仲叶中提取槲皮素的方法，将杜仲叶去杂粉碎，过40目筛，取1Kg，加入10L80％乙醇溶液回流提取1.5h，抽滤液体，固体部分再加8L70％乙醇溶液提取1.5h，将所得提取液减压回收乙醇溶液得浓缩液；在该浓缩液中加4L水分散后，加入1L D-101大孔吸附树脂柱吸附，流速3L/h，吸附结束后，依次用12BV去离子水和5BV70％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，在浓缩液中加入质量浓度为2％的硫酸调节PH至2，加热至80℃水解，水解液浓缩至1/5体积，抽滤，所得固体物为槲皮素粗品6.9g。将槲皮素粗品用450mL无水甲醇回流溶解，放置析晶，结晶再分别用450mL无水甲醇回流溶解，放置析晶两次，滤出结晶，真空干燥即得槲皮素5.3g，纯度为88.3％。

实施例2，一种从杜仲叶中提取槲皮素的方法，将杜仲叶去杂粉碎，过40目筛，取1Kg，加入12L90％乙醇溶液回流提取1.5h，抽滤液体，固体部分再加10L80％乙醇溶液提取1.5h，提取液减压回收乙醇溶液。浓缩液加5L水分散后，加入1L NKA-II大孔吸附树脂柱吸附，流速2.5L/h，吸附结束后，依次用10BV去离子水和8BV60％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇。所得浓缩液中加入质量浓度为4％的盐酸调节溶液pH3，加热至90℃水解，水解液浓缩至1/5体积，抽滤，固体物为槲皮素粗品9.1g。将槲皮素粗品用550mL无水甲醇回流溶解，放置析晶，结晶再用450mL无水甲醇回流溶解，放置析晶，滤出结晶真空干燥即得槲皮素7.1g，纯度87.4％。

实施例3，一种从杜仲叶中提取槲皮素的方法，将杜仲叶去杂粉碎，过40目筛，取1Kg，加入12L80％甲醇溶液回流提取1.5h，抽滤液体，固体部分再加10L70％甲醇溶液提取1.5h，提取液减压回收乙醇溶液。浓缩液加5L水分散后，加入1L NKA-II大孔吸附树脂柱吸附，流速2L/h，吸附结束后，依次用8BV去离子水和6BV80％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇。浓缩液加入质量浓度为3％的磷酸调节溶液pH3，加热至90℃水解，水解液浓缩至1/6体积，抽滤，固体物为槲皮素粗品7.7g。将槲皮素粗品用500mL无水甲醇回流溶解，放置析晶，结晶再用400mL无水甲醇回流溶解，放置析晶，滤出结晶真空干燥即得槲皮素5.8g，纯度91.2％。

实施例4，一种从杜仲叶中提取槲皮素的方法，将杜仲叶去杂粉碎，过40目筛，取1Kg，加入10L80％甲醇溶液回流提取1.5h，抽滤液体，固体部分再分别加8L70％甲醇溶液提取两次，每次1.0h，将所得提取液减压回收乙醇溶液。浓缩液加4L水分散后，加入1L AB-8大孔吸附树脂柱吸附，流速1.5L/h，吸附结束后，依次用7BV去离子水和5BV70％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇。浓缩液加入质量浓度为2％的硫酸调节溶液pH2，加热至85℃水解，水解液浓缩至1/5体积，抽滤，固体物为槲皮素粗品8.5g。将槲皮素粗品用500mL无水甲醇回流溶解，放置析晶，结晶再用400mL无水甲醇回流溶解，放置析晶，滤出结晶真空干燥即得槲皮素6.4g，纯度90.3％。

实施例5，一种从杜仲叶中提取槲皮素的方法，将杜仲叶去杂粉碎，过40目筛，取1Kg，加入10L80％乙醇溶液回流提取1.5h，抽滤液体，固体部分再加8L80％乙醇溶液提取1.5h，提取液减压回收乙醇溶液。浓缩液加5L水分散后，加入1LAB-8大孔吸附树脂柱吸附，流速2L/h，吸附结束后，依次用11BV去离子水和7BV80％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇。浓缩液加入质量浓度为2％的盐酸调节溶液pH3，加热至90℃水解，水解液浓缩至1/6体积，抽滤，固体物为槲皮素粗品7.9g。将槲皮素粗品用450mL无水甲醇回流溶解，放置析晶，结晶再用450mL无水甲醇回流溶解，放置析晶，滤出结晶真空干燥即得槲皮素6.0g，纯度89.5％。

Claims (3)

1.一种从杜仲叶中提取槲皮素的方法，其特征在于：以杜仲叶为原料，粉碎过筛后用醇溶液提取并进行酸水解得槲皮素粗品，再将所述槲皮素粗品进行纯化得槲皮素；所述提取为在原料中加甲醇或乙醇溶液进行回流提取，其比例为1kg原料/8-12L甲醇或乙醇，将所得提取液减压浓缩至无醇味，加水分散，再加入大孔吸附树脂柱吸附，依次用水和乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇进行浓缩；所述酸水解为在经大孔吸附树脂吸附并用乙醇洗脱后的浓缩液中加入质量浓度为2%～4%的酸调节溶液pH值到2～3，然后加热至80℃～90℃进行水解并再浓缩；所述纯化为将所述槲皮素粗品用无水甲醇回流溶解、结晶并干燥。 

2.如权利要求1所述的从杜仲叶中提取槲皮素的方法，其特征在于：所述甲醇或乙醇溶液的体积浓度为70%～90%；所述大孔吸附树脂为D-101、AB-8和NKA-Ⅱ中的一种；所述洗脱用的水为8～12BV去离子水，所述洗脱用的乙醇为5～8BV体积浓度为60%～80%的乙醇。 

3.如权利要求2所述的从杜仲叶中提取槲皮素的方法，其特征在于：所述酸为硫酸、盐酸和磷酸中的一种。