CN113368119A - Corilagin在制备治疗烧伤烫伤的药物中的应用 - Google Patents

Corilagin在制备治疗烧伤烫伤的药物中的应用 Download PDF

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CN113368119A CN202110588862.0A CN202110588862A CN113368119A CN 113368119 A CN113368119 A CN 113368119A CN 202110588862 A CN202110588862 A CN 202110588862A CN 113368119 A CN113368119 A CN 113368119A
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杨仁华
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Abstract

本发明公开了一种Corilagin在制备治疗烧伤烫伤的药物中的应用。所述的Corilagin为Corilagin单体或Corilagin盐中的一种或两种的组合。所述的Corilagin外用通过抑制炎症介质的产生及释放减轻创面炎症反应而减少烧伤烫伤创面细菌的生长。Corilagin(8g/kg)通过通过抑制炎症介质的产生及释放减轻创面炎症反应而减少烧(烫)伤创面细菌的生长；同时上调PDGF‑BB及PDGFR‑β的蛋白和基因表达水平，使其表达高峰提前，从而缩短大鼠的脱痂和长毛时间，提高创面的愈合率。Corilagin对烧(烫)伤具有明显的治疗作用，甚至优于临床一线药物1％磺胺嘧啶银的疗效。

Description

Corilagin在制备治疗烧伤烫伤的药物中的应用
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种Corilagin在制备治疗烧伤烫伤的药物中的应用。
背景技术
烧(烫)伤作为一种急性皮肤损伤，临床上以中小面积，Ⅱ°烧伤患者居多。皮肤是人体最大、最易损伤的组织器官，Ⅱ°烧(烫)伤后常因不恰当治疗使创面延迟或过度修复，造成患者较高的伤残率。因此，如何对Ⅱ°烧(烫)伤创面进行及时有效的处理是所有烧伤科医生所共同面对的难题。现代烧伤医学对烧烫伤患者的治疗，局部外用抗菌药物主要是抗生素及银盐等化学药物覆盖创面，以达到保护残存上皮岛、促进创面愈合的目的，但近年来细菌耐药等问题的凸显使化学药物在Ⅱ°烧(烫)伤创面的治疗中独木难支。另外，多项研究发现，中药及复方制剂作用靶点多、作用机制多样，可弥补化学药物的诸多不足，但对于大多中药物的安全性和有效性的研究还不够深入。因此在中医药领域进行合理有效的探索成为当前Ⅱ°烧(烫)伤创面研究的热点之一。因此，无论从基础研究还是从临床应用角度，寻找疗效肯定、不良反应较少的干预治疗烧烫伤的局部外用药物是十分必要和迫切的。
传统中医及中药制剂治疗烧烫伤有着丰富的经验和悠久的历史。柯里拉京(Corilagin，β-1-o-galloy l-3，6-(R)-hexahydroxydiphenoyl-d-glucose，1-酰-3，6六羟基联苯二甲酰基葡萄糖，图1)，是从叶下珠、蜜柑草、龙眼等多种天然植物中提取的水溶性多酚类有效单体化合物。目前研究表明，Corilagin具有抗炎、抗病毒、抗氧化及抗肿瘤等多种生物学活性，但是关于Corilagin抗烧(烫)伤创面的作用却鲜有报道。本发明前期研究显示，Corilagin能降低血管平滑肌细胞中NF-κB的蛋白及mRNA表达；Corilagin还能下调巨噬细胞中炎症疾病标志物CRP的蛋白及mRNA表达，提示Corilagin在防治烧(烫)伤方面具有进一步深入研究的价值。
临床上通常采用Ⅲ度四分法判断烧伤创面深度。Ⅱ°烧伤可达真皮乳头层，造成大量皮肤附件损伤及坏死组织附着，破坏皮肤的防御功能。作为一种急性皮肤损伤，创面愈合过程主要包括3个阶段：炎症期，增殖修复期，再塑型期。各个阶段相互交叉、重叠，并涉及多种炎症细胞、生长因子和细胞外基质等成分的共同参与，其中，包括血小板源生长因子(platelet derived growth factor，PDGF)、成纤维细胞生长因子-2(fibroblast growthfactor-2，FGF-2)等烧伤相关的生长因子。PDGF家族有两个主要成员：PDGF和VEGF，它们有相似的结构，但结合不同的受体，如受体
Figure BDA0003088676700000021
识别PDGF-BB，介导成纤维细胞的趋向性。在炎症早期，炎症反应能促使PDGF和FGF-2等生长因子的合成和分泌并参与到对创面愈合过程的调控。在增殖修复期，成纤维细胞、血管内皮细胞和表皮角质形成细胞等分泌大量的PDGF，VEGF等细胞因子，这些细胞因子对创面组织的再上皮化、肉芽组织的增生等促进创面皮肤修复及瘢痕形成等方面具有极其重要的作用。已有研究证明：PDGF及受体基因表达与创面修复存在密切关系，而且作为正因子参与创面修复过程，促进瘢痕的形成、改变伤口愈合的进度，并控制纤维化形成。
在过去的二十年中，已经开发了许多烧伤动物模型来阐明烧伤的病理生理学进展，但鉴于各种烧伤模型的制约性和局限性，烧伤模型的病理变化和临床实际烧伤的患者病程进展差别较大。
发明内容
本发明目的在于克服现有技术的不足，而提供了一种Corilagin在制备治疗烧伤烫伤的药物中的应用。
为了解决现有技术的问题，本发明提供了如下技术方案：本发明Corilagin在制备治疗烧伤烫伤的药物中的应用。
进一步地，所述的Corilagin为Corilagin单体或Corilagin盐中的一种或两种的组合。
进一步地，所述的Corilagin外用通过抑制炎症介质的产生及释放减轻创面炎症反应而减少烧伤烫伤创面细菌的生长。
更进一步地，所述的Corilagin通过上调PDGF-BB及PDGFR-β的蛋白和基因表达水平，使其表达高峰提前。
进一步地，所述的Corilagin能缩短大鼠的脱痂和长毛时间，提高创面的愈合率。
进一步地，所述的Corilagin应用于治疗烧伤烫伤给药后7天的保护作用。
更进一步地，所述的Corilagin应用于治疗烧伤烫伤给药后21天的保护作用。
本发明所述的Corilagin在制备具有治疗和保健作用的口服液、注射剂、片剂、丸剂、分散剂、胶囊剂、软胶囊、滴丸、颗粒剂、溶液、悬浮剂、乳剂、微囊剂或医用敷料材料中的应用。
有益效果：本发明公开了Corilagin在制备用于治疗烧伤烫伤的药物中的新用途。
经过多次实验探索，本发明用明火烧伤建立大鼠Ⅱ°烧伤模型，此模型病理变化过程更接近于临床实际Ⅱ°烧伤患者的病程进展。为了阐明本发明治疗方案对烧伤愈合过程的有效性，在不同时间点(0，7，21天)检测了创面愈合标志物PDGF-BB及其受体PDGFR-β的蛋白和基因表达水平的变化。
结果证实，Corilagin(8g/kg)能明显促进烧(烫)伤皮肤创面愈合，其机制是Corilagin通过抑制炎症介质的产生及释放减轻创面炎症反应而减少烧(烫)伤创面细菌的生长；同时上调PDGF-BB/PDGFR-β轴的蛋白和基因表达水平，使其表达高峰提前，从而缩短大鼠的脱痂和长毛时间，提高创面的愈合率。Corilagin对烧烫伤具有明显的治疗作用，甚至优于临床一线药物1％磺胺嘧啶银(10g/kg)的疗效，可以用于制备烧(烫)伤的预防和/或治疗药物。本发明充分挖掘传统医学在防治疾病中的重要应用，为临床上烧(烫)的治疗寻找了一条新途径。
本发明以与烧伤烫伤密切相关的PDGF-BB及PDGFR-β等关键分子为靶标，研究和分析了Corilagin对大鼠Ⅱ°烧伤模型中上述分子靶标的影响，并相互对比论证；深入研究Corilagin在体内对PDGF-BB及PDGFR-β的调控作用及其分子机制。本发明研究结果证实，Corilagin外用能明显促进烧(烫)伤皮肤创面的愈合，其机制是Corilagin(8g/kg)通过抑制炎症介质的产生及释放减轻创面炎症反应而减少烧(烫)伤创面细菌的生长；同时上调PDGF-BB及PDGFR-β的蛋白和基因表达水平有关，使其表达高峰提前，从而缩短大鼠的脱痂和长毛时间，提高创面的愈合率。
附图说明
下面将结合附图进一步说明，附图中：
图1为本发明Corilagin的化学结构式图；
图2为大鼠Ⅱ°烧伤后皮肤的组织学变化(HE，80×)图；a：大鼠正常皮肤组织；b：大鼠深Ⅱ°烧伤的皮肤组织。
图3为Corilagin加速Ⅱ°烧伤愈合的愈合(n＝6)图；注:A:模型组，Corilagin高剂量组和磺胺嘧啶银组大鼠分别于3，7，14，21，31天创面愈合观察；B:用直方图量化0，3，7，14，21，31天的创面大小；与同一天的其他组相比，*P<0.05，(n＝6)；
图4为Western blot检测各组大鼠皮肤组织PDGF-BB/PDGFR-β蛋白表达图；A，B，C，分别是烧伤实验第0，7，21天皮肤组织中PDGF-BB/PDGFR-β的蛋白表达电泳；a.空白对照组；b.病理模型组；c.Corilagin低剂量组(2g/kg)；d.Corilagin高剂量组(8g/kg)；e.磺胺嘧啶银阳性对照组。
具体实施方式
通过以下实施例进一步详细说明本发明，但应注意本发明范围并不受这些实施例的任何限制。
实施例1
本发明Corilagin在制备治疗烧伤烫伤的药物中的应用。
所述的Corilagin为Corilagin单体或Corilagin盐中的一种或两种的组合。
所述的Corilagin外用通过抑制炎症介质的产生及释放减轻创面炎症反应而减少烧伤烫伤创面细菌的生长。
所述的Corilagin通过上调PDGF-BB及PDGFR-β的蛋白和基因表达水平，使其表达高峰提前。
所述的Corilagin能缩短大鼠的脱痂和长毛时间，提高创面的愈合率。
所述的Corilagin应用于治疗烧伤烫伤给药后7天的保护作用。
所述的Corilagin应用于治疗烧伤烫伤给药后21天的保护作用。
本发明所述的Corilagin在制备具有治疗和保健作用的口服液、注射剂、片剂、丸剂、分散剂、胶囊剂、软胶囊、滴丸、颗粒剂、溶液、悬浮剂、乳剂、微囊剂或医用敷料材料中的应用。
试验例1
Corilagin，购自中国药品生物制品检定所，分子量634.46，纯度99.5％，为黄褐色粉状物，无臭，避光干燥保存。
本发明所述的Corilagin用于治疗烧伤烫伤的实验。
1.Ⅱ°烧伤模型的复制，给药及取材
动物健康成年雄性SD大鼠144只，体重250g-320g购自上海斯莱克实验动物有限公司[实验动物合格证号：SCXK(沪)2003-0003]。
分组144只雄性SD大鼠随机分为空白对照组，病理模型组，Corilagin低剂量组(2g/kg)、高剂量组(8g/kg)和1％磺胺嘧啶银阳性对照组(10g/kg)，24只/组。
造模烧伤前饲养大鼠一周，于实验前24小时在大鼠的脊柱两侧，左右对称，用15％的Na2S脱毛，面积为2×4cm2。实验当日，通过腹腔注射3％的戊巴比妥钠(0.1mL/80g)麻醉。除正常组动物外，其余各组动物麻醉后将大鼠固定在实验台上，用自制烧伤石棉网烧伤模具固定烧伤区域，然后将混合烧伤燃料(配方：普通汽油25mL，95％酒精60g，松香60g，生胶6g)均匀涂抹在预烧伤皮肤上，每只大鼠约0.6mL，点火后燃烧15秒钟后以湿布将火焰迅速扑灭，复制大鼠Ⅱ°烧伤模型。Ⅱ°烧伤的病理特征是皮肤表皮层和真皮浅层均遭损伤，真皮浅层部分细胞可见肿胀变性造成大量皮肤附件损伤及坏死组织附着。
给药及取材烧伤后2小时内分组给药，模型组涂抹5％的羧甲基纤维素钠空白基质，Corilagin组分别给创面涂搽低、高剂量的Corilagin制剂，阳性对照组涂搽1％磺胺嘧啶银软膏。每天给药一次，连续28天，同时分别于0，7，21天的同一时间点，对烧伤创面行皮肤取样，取材后尽快缝合创面。于治疗后3d、7d、21d各组分别用咽拭子涂抹整个创面取创面分泌物，注射用水8ml浸泡，待行创面细菌培养、计数。
2.观察指标和检测方法
(1)HE染色皮肤组织常规脱水包埋，制备5μm的切片，经苏木精-伊红染色后于显微镜下观察皮肤组织的病理学变化，烧伤后每组随机观察3例创面，每张切片随机选5个高倍视野。
(2)细菌计数和ELISA分别取创面分泌物15μL在9cm血平板(中国蓝琼脂+血琼脂)及麦康凯平皿上均匀划线，在37℃电热恒温培养箱孵育24h，菌落计数，运用细菌鉴定仪根据革兰染色镜检及生化鉴定；解冻组织匀浆标本，按照ELISA试剂盒说明书以ELISA法测定IL-2，IL-8，TNF-α水平，分别以ng·L-1，ng·L-1，pg·mL-1表示。
(3)伤口面积的测量用伤口闭合率来表示仔猪的伤口愈合率，追踪测量创面面积。然后将实际值转换为百分比值，以伤时伤口大小为80％。每隔7天使用透明图表标记监测伤口大小的渐进性变化。使用计算机软件(Media Cybernetics Inc，USA，IPP 6.0)测量创面面积。创面收缩率以创面缩小百分率表示，公式为：创面闭合率(％)＝(A0-An)/A0×80，其中A0和An分别为初始创面(第0天)和第n天的创面面积。
(4)Western blot检测每个创面取样2g后，直接放入-80℃冰箱保存，检测PDGF-BB及PDGFR-β蛋白的表达。用RIPA蛋白裂解液400μL，反复吹打破碎细胞，于4℃，12 000r/min离心8min后，取上清液。采用BCA法测定各组细胞的蛋白浓度后，加入4×蛋白上样缓冲液适量，于80℃煮沸变性8min。配制8％分离胶，取变性后的蛋白进行SDS-PAGE电泳(先于80V下电泳30min，再于120V下电泳1.5h)，湿法转膜(恒流：250mA，时间：1.5h)，转膜后加入PDGF-BB及PDGFR-βantibody(1:800)，次日洗膜后加入辣根酶标记山羊抗兔IgG(1:2000)。孵育1h后ECL发光3min，用Amersham Imager600系统采集图像。实验重复三次，采用ImageJ软件将测得的各组灰度值与对应的内参值比较得出蛋白相对表达量。
(5)实时荧光定量PCR法(RT-PCR)检测每个创面取样2g，将组织浸入RAN保护液中，4-8℃冰箱中保存24h，然后转入-80℃冰箱保存，检测PDGF-BB及PDGFR-β的mRNA的表达，严格按照说明书操作，抽提总RNA。cDNA的合成：用Thermo的反转录试剂盒，配制总体积20μL转录的反应体系合成cDNA，保存于-80℃。测定抽提总RNA的浓度和质量。实时定量PCR检测：配制总体积20μL。配制反应体系，用实时荧光定量PCR仪进行反应，反应条件：预变性95℃，40s，变性95℃，15s，退火、延伸60℃，35s，40个循环，每个样品重复检测3次。根据公式计算，每个样本的相对mRNA表达水平＝2-△Ct，△Ct＝目的基因Ct值-β-actin Ct值，并将获得的数据进行统计。引物设计软件Primer 5.0，由硕擎科技有限公司合成。
PDGF-BB(18bp):(Forward)5'-CATCGAGCCAAGACACCTCA-3'，
(Reverse)5'-AGTGCCTTCTTGTCATGGGT-3'
PDGFR-β(154bp):(Forward)5'-TGTCATGGGTAC-3'，
(Reverse)5'-TGTCATGGGTAC-3'；
β-actin(115bp):(Forward)5'-AGGCCAACCGTGAAAAGATG-3'
(Reverse)5'-ATGCCAGTGGTACGACCAGA-3
3实验结果
3.1HE染色结果和深Ⅱ°烧伤模型的大体观察
空白对照组动物皮肤组织结构层次清楚，基底层细胞排列整齐，呈立方形。表皮真皮完整，未见充血、水肿，皮肤附属器健在；模型组动物烧伤可见皮肤表皮层和真皮浅层均遭损伤，大量炎症细胞聚集、浸润、迁移，表皮与真皮层呈现明显水肿和水泡，真皮浅层部分细胞可见肿胀变性造成大量皮肤附件损伤及坏死组织附着，病理切片证实Ⅱ°烧伤模型复制成功，见图2。
3.2细菌计数和ELISA结果
(1)创面细菌培养及计数模型对照组在治疗后第3d出现细菌生长，老鹳草素、磺胺嘧啶银治疗组于治疗后第7d出现细菌生长。治疗后第7、21天，与模型对照组比较，Corilagin高剂量组和磺胺嘧啶银治疗组细菌计数显著减少(p＜0.05)，见表1。各组创面3，7，21d细菌计数比较(n＝8)如表1所示：(2)创面病原菌分布模型对照组在治疗后第7、21天病原菌分布情况行统计分析。各组创面细菌以金黄色葡萄糖球菌和铜绿假单胞菌检出率为最高，治疗后第7天与第21天相比，模型对照组上述菌株检出率升高；而Corilagin高剂量组和磺胺嘧啶银组则下降，见表2。各组创面7，21d创面病原菌分布情况如表2所示：
(3)各组创面组织IL-2，IL-8，TNF-α水平比较治疗后3、7、21d，与模型对照组相比，Corilagin高剂量组和磺胺嘧啶银创面组织IL-2，IL-8，TNF-α水平均明显降低(P<0.05)，见表3。各组创面组织IL-2，IL-8，TNF-a水平比较(n＝8，x±s)如表3所示：
表1
Figure BDA0003088676700000071
Figure BDA0003088676700000081
注：与对照组相比1)p＜0.05
表2
Figure BDA0003088676700000082
表3
Figure BDA0003088676700000083
Figure BDA0003088676700000091
注：与对照组相比1)p＜0.05
3.3Corilagin加速烧伤创面的愈合
大鼠烧伤创面大体观察结果显示，在烧伤实验当天，平均创面面积为(8.036±0.125)cm2，各组间无显著性差异(P>0.05)。在第3天，所有组的创面均增大。第7天，治疗组创面面积明显小于模型组(P<0.05)，可能与创面愈合过程加快有关，尤其是Corilagin高剂量组，提示Corilagin对创面闭合率和上皮化有明显的促进作用。第14天，Corilagin高剂量组创面闭合率明显高于其他组，而模型组创面仍被大面积不均匀的焦痂覆盖。肉眼观察到老鹳草素高剂量组大鼠第21天长毛明显，创面结痂几乎完全清除。第31天，大鼠皮肤和毛发恢复完好，和正常大鼠无差异，见图3。
3.4Corilagin对大鼠Ⅱ°烧伤模型的促进作用
3.4.1愈合率、脱痂、长毛时间的统计分析
愈合率统计模型组分别与磺胺嘧啶银组和Corilagin高剂量组相比，磺胺嘧啶银组和Corilagin高剂量组创面愈合率明显提高，创面愈合时间亦见明显缩短，均呈现统计学差异显著性(P<0.05)。Corilagin高剂量组和磺胺嘧啶银组的愈合率相近，(P>0.05)。不同时间点各组别间愈合率比较
Figure BDA0003088676700000092
(％)(n＝6)如表4所示：
表4
Figure BDA0003088676700000101
注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01
3.4.2脱痂、长毛时间的统计分析模型组分别与磺胺嘧啶银组和Corilagin高剂量组相比，磺胺嘧啶银组和Corilagin高剂量组大鼠的脱痂和长毛时间均见缩短，均呈现统计学差异显著性(P<0.05)。磺胺嘧啶银组与Corilagin高剂量组比，两组结果未见统计学差异，(P>0.05)。不同组间脱痂和长毛时间差异比较
Figure BDA0003088676700000103
(天)如表5所示：
表5
Figure BDA0003088676700000102
注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01
3.5 WB和RT-PCR检测PDGF-BB，PDGFR-β的蛋白和mRNA表达变化
Western blot和RT-PCR结果显示，烧伤实验当天，各实验组均有少量PDGF-BB，PDGFR-β的蛋白和mRNA表达，各实验组间相比，均无显著的统计学差异(P>0.05)。烧伤后第7天，Corilagin高剂量组和磺胺嘧啶银组大鼠皮肤组织中PDGF-BB，PDGFR-β的蛋白和mRNA表达急剧增加，达到峰值，显著高于病理模型组(P＜0.001，P＜0.001)；Corilagin高剂量组和磺胺嘧啶银组组间相比，未见显著的统计学差异(P>0.05)，提示该两种药物缩短伤口愈合时间的治疗作用可能与上调生长因子的表达有关。烧伤后第21天，模型组的PDGF-BB，PDGFR-β蛋白和mRNA达到峰值；Corilagin高剂量组和磺胺嘧啶银组蛋白和mRNA的阳性表达继续下降，接近正常组水平(P>0.05，P>0.05)，而Corilagin高剂量组和磺胺嘧啶银组组间相比无显著的统计学差异(P>0.05)。
本发明提示，经Corilagin干预后，PDGF-BB，PDGFR-β的蛋白和mRNA的峰值表达提前，是否暗示“皮肤在烧伤创伤时，可见PDGF-BB，PDGFR-β的蛋白和mRNA的表达急剧增高，创面愈合恢复阶段，其蛋白和mRNA表达又开始下降”，这可能与用药组可以上调PDGF-BB，PDGFR-β的蛋白质和mRNA表达总量，从而加速伤口愈合有关。本发明研究数据证实，和模型组相比，Corilagin高剂量组的PDGF-BB，PDGFR-β的蛋白和mRNA表达峰值提前，这与大鼠的脱痂、长毛时间缩短、创面愈合率的提高是吻合的。
根据不同时间点Corilagin对烧伤大鼠肤组织PDGF-BB，PDGFR-β的影响，可证实Corilagin对烧伤创面的治疗作用是通过上调PDGF-BB，PDGFR-β的蛋白和mRNA的表达，而使炎症和细胞反应提前使创面的上皮化加速，最终促进创面提前愈合，见图3，4，和表6-11。且机体对Corilagin不良反应小，本发明充分挖掘传统医学在防治疾病中的重要应用，为临床上烧(烫)伤的治疗寻找了一条新途径。Corilagin对Ⅱ°烧伤大鼠模型PDGF-BB/PDGFR-β的蛋白表达的影响(0天)
Figure BDA0003088676700000114
如表6所示：
表6
Figure BDA0003088676700000111
与空白对照组相比较1)P＜0.05，2)P＜0.01；与模型组比较3)P＜0.05，4)P＜0.01(下表同)
Corilagin对Ⅱ°烧伤大鼠模型PDGF-BB/PDGFR-β的蛋白表达的影响(7天)
Figure BDA0003088676700000112
如表7所示：
表7
Figure BDA0003088676700000113
Figure BDA0003088676700000121
Corilagin对Ⅱ°烧伤大鼠模型PDGF-BB/PDGFR-β的蛋白表达的影响(21天)
Figure BDA0003088676700000122
如表8所示：
表8
Figure BDA0003088676700000123
Corilagin对Ⅱ°烧伤大鼠模型PDGF-BB/PDGFR-β的mRNA表达的影响2-△△Ct(0天)
Figure BDA0003088676700000124
如表9所示：
表9
Figure BDA0003088676700000125
与空白对照组相比较1)P＜0.05，2)P＜0.01；与模型组比较3)P＜0.05，4)P＜0.01(下表同)。Corilagin对Ⅱ°烧伤大鼠模型PDGF-BB/PDGFR-β的mRNA表达的影响2-△△Ct(7天)
Figure BDA0003088676700000126
如表10所示：
表10
Figure BDA0003088676700000127
Figure BDA0003088676700000131
与空白对照组相比较1)P＜0.05，2)P＜0.01；与模型组比较3)P＜0.05，4)P＜0.01(下表同)，Corilagin对Ⅱ°烧伤大鼠模型PDGF-BB/PDGFR-β的mRNA表达的影响2-△△Ct(21天)
Figure BDA0003088676700000132
如表11所示：
表11
Figure BDA0003088676700000133
本发明公开了Corilagin在制备用于治疗烧伤烫伤的药物中的新用途。
在过去的二十年中，已经开发了许多烧伤动物模型来阐明烧伤的病理生理学进展，但鉴于各种烧伤模型的制约性和局限性，烧伤模型的病理变化和临床实际烧伤的患者病程进展差别较大。经过多次实验探索，本发明用明火烧伤建立大鼠Ⅱ°烧伤模型，此模型病理变化过程更接近于临床实际Ⅱ°烧伤患者的病程进展。为了阐明本发明治疗方案对烧伤愈合过程的有效性，在不同时间点(0，7，21天)检测了创面愈合标志物PDGF-BB及其受体PDGFR-β的蛋白和基因表达水平的变化。
本发明建立的大鼠Ⅱ°烧伤模型用Corilagin和磺胺嘧啶银治疗；于给药后0，7，21，d采用Western blot(WB)和实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测治疗后创面组织中PDGF-BB及PDGFR-β的蛋白和mRNA表达水平；治疗后第3，7，21天各组细菌培养并计数，分别按照酶联免疫吸附法测定创面组织中白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-8(IL-8)水平及肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平；宏观监测不同时间点皮肤创面愈合情况。
结果证实，Corilagin(8g/kg)能明显促进烧(烫)伤皮肤创面愈合，其机制是Corilagin通过抑制炎症介质的产生及释放减轻创面炎症反应而减少烧(烫)伤创面细菌的生长；同时上调PDGF-BB/PDGFR-β轴的蛋白和基因表达水平，使其表达高峰提前，从而缩短大鼠的脱痂和长毛时间，提高创面的愈合率。Corilagin对烧烫伤具有明显的治疗作用，甚至优于临床一线药物1％磺胺嘧啶银(10g/kg)的疗效，可以用于制备烧(烫)伤的预防和/或治疗药物。本发明充分挖掘传统医学在防治疾病中的重要应用，为临床上烧(烫)的治疗寻找了一条新途径。
本发明以与烧伤烫伤密切相关的PDGF-BB及PDGFR-β等关键分子为靶标，研究和分析了Corilagin对大鼠Ⅱ°烧伤模型中上述分子靶标的影响，并相互对比论证；深入研究Corilagin在体内对PDGF-BB及PDGFR-β的调控作用及其分子机制。本发明研究结果证实，Corilagin外用能明显促进烧(烫)伤皮肤创面的愈合，其机制是Corilagin(8g/kg)通过抑制炎症介质的产生及释放减轻创面炎症反应而减少烧(烫)伤创面细菌的生长；同时上调PDGF-BB及PDGFR-β的蛋白和基因表达水平有关，使其表达高峰提前，从而缩短大鼠的脱痂和长毛时间，提高创面的愈合率。
以上显示和描述了本发明基本原理、主要特征和本发明优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，本发明要求保护范围由所附的权利要求书、说明书及其等效物界定。

Claims (8)

1.Corilagin在制备治疗烧伤烫伤的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的Corilagin为Corilagin单体或Corilagin盐中的一种或两种的组合。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的Corilagin外用通过抑制炎症介质的产生及释放减轻创面炎症反应而减少烧伤烫伤创面细菌的生长。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于: 所述的Corilagin通过上调PDGF-BB及PDGFR-β的蛋白和基因表达水平，使其表达高峰提前。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于: 所述的Corilagin能缩短大鼠的脱痂和长毛时间，提高创面的愈合率。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的Corilagin应用于治疗烧伤烫伤给药后7天的保护作用。
7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的Corilagin应用于治疗烧伤烫伤给药后21天的保护作用。
8.权利要求1至7任一项所述的Corilagin在制备具有治疗和保健作用的口服液、注射剂、片剂、丸剂、分散剂、胶囊剂、软胶囊、滴丸、颗粒剂、溶液、悬浮剂、乳剂、微囊剂或医用敷料材料中的应用。
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