CN113354545B - 一种焦磷酸盐及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种焦磷酸盐及其制备方法。本发明提供了一种N,N‑二异丙基乙胺焦磷酸盐；其中，N,N‑二异丙基乙胺与焦磷酸的摩尔比为(1.5～2.0)：1。该焦磷酸盐的结构新颖，使用其的核苷三磷酸的制备方法的收率较高、副产物较少、适于工业化生产。

Description

一种焦磷酸盐及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种焦磷酸盐及其制备方法。
背景技术
核苷三磷酸作为一类重要的物质，已被广泛用于DNA测序，PCR扩增，核酸类药物和生物检测试剂盒中。目前，只有少数核苷三磷酸可以通过生物发酵的方法获得，大部分核苷三磷酸是通过化学合成制得的，目前主要有两种合成核苷三磷酸的方法：
第一种是利用非活性磷试剂与核苷反应，生成非活性的反应中间体，然后与活性磷试剂反应，生成核苷三磷酸产物(如下左侧所示)，由于这种方法反应时间过长，副产物较多，反应收率较低(5％)，因此这类方法已逐渐被淘汰。
第二种方法是利用活性磷试剂与核苷反应，生成活性磷中间体，活性磷中间体再与非活性磷试剂反应，生成核苷三磷酸产物(如下右侧所示)，该方法与第一种合成方法相比，反应时间短，副产物较少，反应收率有较大提高(30％)。
Figure BDA0002403240050000021
P*＝活性磷；x＝1,2,3；y＝0,1,2,x+y＝3
因而，开发高效的核苷三磷酸的合成方法变得十分迫切。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是现有的焦磷酸盐的种类单一，为此，本发明提供了一种焦磷酸盐及其制备方法，该焦磷酸盐的结构新颖，使用其的核苷三磷酸的制备方法的收率较高、副产物较少、适于工业化生产。
本发明提供了一种N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐；其中，(以离子形式存在的)N,N-二异丙基乙胺与(以离子形式存在的)焦磷酸的摩尔比为(1.5～2.0)：1。
所述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐中，所述的(以离子形式存在的)N,N-二异丙基乙胺与所述的(以离子形式存在的)焦磷酸的摩尔比可为(1.5～1.83)：1或(1.83～2)：1，又可为(1.83～1.9)：1。
所述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐的结构可如式1所示：
Figure BDA0002403240050000022
本发明还提供了一种N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐的制备方法，其包括下述步骤：在溶剂中，将N,N-二异丙基乙基胺和焦磷酸进行成盐反应，得到N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐即可；其中，所述的N,N-二异丙基乙胺(原料)与所述的焦磷酸(原料)的摩尔比大于等于1.5：1。
在所述的成盐反应中，所述的溶剂可为成盐反应常规使用的溶剂，例如水和醇类溶剂，又例如“水和醇类溶剂，所述的水与所述的醇类溶剂的体积比为(25～35)：13”，还例如“水和醇类溶剂，所述的水与所述的醇类溶剂的体积比为30：13”。所述的醇类溶剂可为成盐反应常规使用的醇类溶剂，例如乙醇。
在所述的成盐反应中，当所述的溶剂为水和醇类溶剂时，所述的焦磷酸和所述的水的质量体积比可为1g：(30mL～100mL)，还可为1g：37.5mL。
在所述的成盐反应中，当所述的溶剂为水和醇类溶剂时，所述的焦磷酸和所述的水可以以焦磷酸水溶液的形式投料。
在所述的成盐反应中，当所述的溶剂为水和醇类溶剂时，所述的焦磷酸和所述的醇类溶剂的质量体积比可为1g：(10mL～100mL)，还可为1g：16.3mL。
在所述的成盐反应中，当所述的溶剂为水和醇类溶剂时，所述的N,N-二异丙基乙基胺和所述的醇类溶剂可以以N,N-二异丙基乙基胺醇溶液的形式投料。
在所述的成盐反应中，所述的N,N-二异丙基乙胺(原料)与所述的焦磷酸(原料)的摩尔比可为(1.5～10.0)：1，又可为(1.5～3.0)：1，还可为(2.0～3.0)：1。
在所述的成盐反应中，(产物N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐中的，以离子形式存在)N,N-二异丙基乙胺与(产物N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐中的，以离子形式存在)焦磷酸的摩尔比可为(1.5～2.0)：1，又可为(1.5～1.83)：1或(1.83～2)：1，还可为(1.83～1.9)：1。
在所述的成盐反应中，所述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐的结构可如式1所示：
Figure BDA0002403240050000041
所述的成盐反应的操作可为本领域成盐反应常规的操作，例如：各物料混合后，除去所述的溶剂，冻干即得。
所述的混合步骤可以在搅拌下进行。
所述的除去溶剂可通过本领域常规的方式除去，例如旋转蒸发。
所述的冻干的温度可为本领域常规的冻干温度，例如-80℃。
所述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐的制备方法还可进一步包括下述步骤：在水中，将物质X进行阳离子交换反应，得到所述的焦磷酸即可；所述的物质X为焦磷酸碱金属盐或焦磷酸碱金属盐水合物；
在所述的阳离子交换反应中，所述的焦磷酸碱金属盐可为焦磷酸钠。
在所述的阳离子交换反应中，所述的焦磷酸碱金属盐水合物可为十水焦磷酸钠。
在所述的阳离子交换反应中，所述的物质X与所述的水的摩尔体积比可为1mol：(5.4L～54L)，还可为1mol：6.7L。
所述的阳离子交换反应使用的填料可以为Dowex 50WX8氢型。
本发明还提供了一种N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐，其按照上述的方法制得。
本发明还提供了一种上述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐作为磷试剂的应用。
所述的应用中，所述的磷试剂可为非活性磷试剂。
所述的应用中，所述的磷试剂的底物可为
Figure BDA0002403240050000042
其中，R1为羟基保护基；R2为
Figure BDA0002403240050000051
Figure BDA0002403240050000052
R2-1、R2-2、R2-3、R2-4、R2-5和R2-6独立地为氢或氨基保护基。
所述的应用中，所述的羟基保护基可为核苷领域常规的羟基保护基，例如
Figure BDA0002403240050000053
所述的应用中，所述的氨基保护基可独立地为核苷领域常规的氨基保护基，例如苯甲酰基、乙酰基或异丙酰基。
所述的应用中，所述的R2可为
Figure BDA0002403240050000054
Figure BDA0002403240050000055
Figure BDA0002403240050000061
所述的应用中，R1可为
Figure BDA0002403240050000062
R2可为
Figure BDA0002403240050000063
Figure BDA0002403240050000064
所述的应用中，所述的磷试剂的底物可为
Figure BDA0002403240050000065
本发明还提供了一种组合物，其由N,N-二异丙基乙基胺和焦磷酸组成。
在所述的组合物中，所述的N,N-二异丙基乙胺与所述的焦磷酸的摩尔比可为(1.5～2.0)：1，又可为(1.5～1.83)：1或(1.83～2)：1，还可为(1.83～1.9)：1。
在所述的组合物中，所述的组合物可为用作磷试剂的组合物。
在所述的组合物中，所述的组合物可为用作非活性磷试剂的组合物。
在所述的组合物中，当所述的组合物为用作磷试剂的组合物时，所述的磷试剂的底物可为
Figure BDA0002403240050000071
其中，R1为羟基保护基；R2为
Figure BDA0002403240050000072
Figure BDA0002403240050000073
R2-1、R2-2、R2-3、R2-4、R2-5和R2-6独立地为氢或氨基保护基。
所述的组合物中，所述的羟基保护基可为核苷领域常规的羟基保护基，例如
Figure BDA0002403240050000074
所述的组合物中，所述的氨基保护基可独立地为核苷领域常规的氨基保护基，例如苯甲酰基、乙酰基或异丙酰基。
所述的组合物中，所述的R2可为
Figure BDA0002403240050000075
Figure BDA0002403240050000081
所述的组合物中，R1可为
Figure BDA0002403240050000082
R2可为
Figure BDA0002403240050000083
Figure BDA0002403240050000084
Figure BDA0002403240050000091
所述的组合物中，所述的磷试剂的底物可为
Figure BDA0002403240050000092
本发明还提供了一种组合物，其由N,N-二异丙基乙基胺、焦磷酸和乙腈组成。
在所述的组合物中，所述的N,N-二异丙基乙胺与所述的焦磷酸的摩尔比可为(1.5～2.0)：1，又可为(1.5～1.83)：1或(1.83～2)：1，还可为(1.83～1.9)：1。
在所述的组合物中，所述的(N,N-二异丙基乙胺与所述的焦磷酸的质量)、与、所述的乙腈的体积比可为1g：(5mL～50mL)，又可为1g：7mL。
在所述的组合物中，所述的组合物可为用作磷试剂的组合物。
在所述的组合物中，所述的组合物可为用作非活性磷试剂的组合物。
在所述的组合物中，当所述的组合物为用作磷试剂的组合物时，所述的磷试剂的底物可为
Figure BDA0002403240050000101
其中，R1为羟基保护基；R2为
Figure BDA0002403240050000102
Figure BDA0002403240050000103
R2-1、R2-2、R2-3、R2-4、R2-5和R2-6独立地为氢或氨基保护基。
所述的组合物中，所述的羟基保护基可为核苷领域常规的羟基保护基，例如
Figure BDA0002403240050000104
所述的组合物中，所述的氨基保护基可独立地为核苷领域常规的氨基保护基，例如苯甲酰基、乙酰基或异丙酰基。
所述的组合物中，所述的R2可为
Figure BDA0002403240050000105
Figure BDA0002403240050000106
Figure BDA0002403240050000111
所述的组合物中，R1可为
Figure BDA0002403240050000112
R2可为
Figure BDA0002403240050000113
Figure BDA0002403240050000114
所述的组合物中，所述的磷试剂的底物可为
Figure BDA0002403240050000121
本发明还提供了一种如式3所示的核苷三磷酸的制备方法，其包括下述步骤：在溶剂中，在保护气体和碱的存在下，将上述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐与化合物2进行成环反应，得到化合物3即可；
Figure BDA0002403240050000122
其中，R1为羟基保护基；
R2为
Figure BDA0002403240050000123
R2-1、R2-2、R2-3、R2-4、R2-5和R2-6独立地为氢或氨基保护基。
在所述的成环反应中，所述的羟基保护基可为核苷领域常规的羟基保护基，例如
Figure BDA0002403240050000124
在所述的成环反应中，所述的氨基保护基可独立地为核苷领域常规的氨基保护基，例如苯甲酰基、乙酰基或异丙酰基。
在所述的成环反应中，所述的R2可为
Figure BDA0002403240050000125
Figure BDA0002403240050000131
在所述的成环反应中，R1可为
Figure BDA0002403240050000132
可为
Figure BDA0002403240050000133
Figure BDA0002403240050000134
Figure BDA0002403240050000141
所述的成环反应中，所述的磷试剂的底物可为
Figure BDA0002403240050000142
在所述的成环反应中，所述的溶剂可为本领域该类成环反应常规的溶剂，例如乙腈和PO(OMe)3。当所述的溶剂为乙腈和PO(OMe)3时，所述的乙腈和所述的PO(OMe)3的体积比可为1：(1～10)，又可为1：1。
在所述的成环反应中，所述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐与所述的溶剂的摩尔体积比可为1mol：(4.3L～43L)，又可为1mol：6L。
在所述的成环反应中，所述的保护气体可为本领域该类成环反应常规的保护气体，例如氮气。
在所述的成环反应中，所述的碱可为本领域该类成环反应常规的碱，例如三乙胺。
在所述的成环反应中，所述的碱与所述的化合物2的摩尔比可为(4～20)：1，又可为5：1。
在所述的成环反应中，所述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐与所述的化合物2的摩尔比可为(1～10)：1，又可为2：1。
所述的成环反应的温度可为本领域该类成环反应常规的温度，例如-15℃～2℃，又例如0℃。
所述的成环反应的时间可为本领域该类成环反应常规的时间，例如1h～5h，又例如2h。
所述的如式3所示的核苷三磷酸的制备方法，还可进一步包括下述步骤：在溶剂中，在保护气体和碱的存在下，将化合物5与三氯氧磷进行取代反应，得到所述的化合物2即可；
Figure BDA0002403240050000151
在所述的取代反应中，所述的溶剂可为本领域该类取代反应常规的溶剂，例如PO(OMe)3。
在所述的取代反应中，所述的化合物5与所述的溶剂的质量体积比可为1mol：(3L～30L)，又可为1mol：6L。
在所述的取代反应中，所述的保护气体可为本领域该类取代反应常规的保护气体，例如氮气。
在所述的取代反应中，所述的碱可为本领域该类取代反应常规的碱，例如三乙胺。
在所述的取代反应中，所述的碱与所述的化合物5的摩尔比可为(2～10)：1，又可为2：1。
在所述的取代反应中，所述的三氯氧磷与所述的化合物5的摩尔比可为(1～10)：1，又可为5：1。
所述的取代反应的温度可为本领域该类取代反应常规的温度，例如-15℃～2℃，又例如0℃。
所述的取代反应的时间可为本领域该类取代反应常规的时间，例如0.5h～3h，又例如1h。
本发明还提供了一种如式4所示的核苷三磷酸的制备方法，其包括下述步骤：
(1)按照如上所述的如式3所示的核苷三磷酸的制备方法，制得化合物3；
(2)将步骤(1)制得的化合物3与三乙胺碳酸氢盐水溶液进行开环反应，得到化合物4即可；
Figure BDA0002403240050000161
本发明中，术语“活性”和“非活性”是相对的，举例而言，A进攻B，则A为活性底物，B为非活性底物。
在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：该焦磷酸盐的结构新颖，使用其的核苷三磷酸的制备方法的收率较高、副产物较少、适于工业化生产。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
实施例1焦磷酸盐的制备
首先，将阳离子树脂(Sigma 217492-500G，Dowex 50WX8氢型，500g)装到玻璃柱上，然后用100ml盐酸(36～38％)活化树脂，最后用水冲洗至中性，备用；
然后，取100g十水焦磷酸钠于水(1500ml)中，充分搅拌溶解；将溶解好的焦磷酸钠溶液加入到含阳离子树脂的玻璃柱中，收集流出液；之后，在冰浴中往流出液中滴加2倍摩尔量的DIPEA(溶解在650mL乙醇中)，搅拌半小时；然后利用旋转蒸发仪旋出多余的液体(水、乙醇等)；
最后，放入-80℃冰箱过夜，然后放入冷冻干燥机中-80℃冻干，得到淡黄色固体，收率75％。
取上述的淡黄色固体测量其氢谱、磷谱(另加三苯基膦为内标)，结果如下：
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.14～7.23(m,12.06H，三苯基膦的谱峰),3.38～3.45(m,0.94H，对应于DIPEA的出峰位置),2.82～2.87(m,0.94H，对应于DIPEA的出峰位置),1.19～1.25(m,7.07H，对应于DIPEA的出峰位置)；
31P NMR(400MHz,CDCl3)δ:-5.41(s,29.72P，三苯基膦的谱峰),-10.71～-10.74(d,19.03P)。
由上可知，三苯基膦与淡黄色固体的氢面积比为12.06:8.95，三苯基膦与淡黄色固体的磷面积比为29.72:19.03，结合三苯基膦中磷和氢的数量比为1：15，可知淡黄色固体中磷和氢的数量比为1：17.39
Figure BDA0002403240050000171
进一步结合一个DIPEA分子中有19个氢，一个焦磷酸根离子中有2个磷，可知淡黄色固体中焦磷酸与DIPEA的数量比为1：1.83
Figure BDA0002403240050000181
因此，淡黄色固体为DIPEA焦磷酸盐，焦磷酸与DIPEA的比例近乎1：2，下述实施例用(DIPEA)2PPi表示(PPi为
Figure BDA0002403240050000182
)。
实施例2焦磷酸盐的制备
取20ml盐酸(36～38％，约为12mol/L)，稀释至240ml，加入到装有100g阳离子树脂(Sigma 217492-500G，Dowex 50WX8氢型)的玻璃柱中，活化树脂，最后用水冲洗至中性，备用；
然后，取20g十水焦磷酸钠于水(300ml)中，充分搅拌溶解；将溶解好的焦磷酸钠溶液加入到含阳离子树脂的玻璃柱中，收集流出液(pH<3，普通pH试纸检测)的组分；之后，在冰浴中往流出液中滴加1.5倍摩尔量的DIPEA(8.3g)和130mL乙醇，搅拌半小时；然后利用旋转蒸发仪旋出多余的液体(水、乙醇等)；
最后，放入-80℃冰箱过夜，然后放入冷冻干燥机中-80℃冻干，得到白色固体粉末。参照实施例1的方法鉴定，焦磷酸与DIPEA的比例近乎1：1.5。
实施例3焦磷酸盐的制备
取20ml盐酸(36～38％，约为12mol/L)，稀释至240ml，加入到装有100g阳离子树脂(Sigma 217492-500G，Dowex 50WX8氢型)的玻璃柱中，活化树脂，最后用水冲洗至中性(广式pH试纸检测)，备用；
然后，取20g十水焦磷酸钠于水(300ml)中，充分搅拌溶解；将溶解好的焦磷酸钠溶液加入到含阳离子树脂的玻璃柱中，收集流出液(pH<3，普通pH试纸检测)的组分；之后，在冰浴中往流出液中滴加3倍摩尔量的DIPEA(16.6g)和260mL乙醇，搅拌半小时；然后利用旋转蒸发仪旋出多余的液体(水、乙醇等)；
最后，放入-80℃冰箱过夜，然后放入冷冻干燥机中-80℃冻干，得到白色固体粉末。参照实施例1的方法鉴定，焦磷酸与DIPEA的数量比约为1：1.9。
应用实施例1核苷三磷酸的制备
Figure BDA0002403240050000191
在装有磁子的50mL两口圆底烧瓶中，加入已干燥过夜的3’-氰基乙烯氧基腺苷(1.00g，3.31mmol)和TEA(0.67g,6.62mmol)。用20ml干燥的PO(OMe)3溶解后，氮气置换三次。于冰浴中搅拌30分钟，充分冷却后，再将POCl3(2.51g,16.60mmol)缓慢滴加到反应体系中，然后维持在冰水浴中反应1小时。
另取100mL的干燥圆底烧瓶，加入实施例1制备的(DIPEA)2PPi(2.89g，6.62mmol)，并用20mL干燥的乙腈溶解。氮气置换三次后，冰浴中加入TEA(1.77g，17.50mmol)。后将上步制备的反应混合液在2-3分钟内滴加到反应体系中，滴加完毕后在冰水浴中反应2个小时。HPLC监测反应完成后，在冰浴中搅拌，利用1M TEAB淬灭反应，继续反应30分钟。
在下述条件下对淬灭后的反应液进行HPLC-MS分析(分析条件见表1)，HPLC中主要的峰如表2所示：
表1
Figure BDA0002403240050000192
Figure BDA0002403240050000201
流动相B：乙腈；流动相C：0.1M TEAB。
表2
峰序号 出峰时间/min 峰面积
1 11.593 96.27％
2 17.493 0.86％
3 22.827 1.31％
4 24.313 1.56％
表2中11.593min处的峰进行MS分析，其最强峰位于540.6～541.4，为
Figure BDA0002403240050000202
的峰。
对比例1
Figure BDA0002403240050000211
在装有磁子的50mL两口圆底烧瓶中，加入已干燥过夜的3’-氰基乙烯氧基腺苷(1.00g，3.31mmol)和TEA(0.67g,6.62mmol)。用20ml干燥的PO(OMe)3溶解后，氮气置换三次。在冰浴中搅拌30分钟，充分冷却后，再将POCl3(2.51g,16.60mmol)缓慢滴加到反应体系中，然后维持在冰水浴中反应30分钟。
另取100mL的干燥圆底烧瓶，加入(Bu3N)2PPi(3.63g，6.62mmol)，并用20mL干燥的乙腈溶解。氮气置换三次后，冰浴中加入TEA(1.68g，16.60mmol)。后将上步制备的反应混合液在2-3分钟内滴加到反应体系中，滴加完毕后在冰水浴中反应2个小时。HPLC监测反应完成后，在冰浴中搅拌，利用1MTEAB(三乙胺碳酸氢盐)淬灭反应，继续反应30分钟。
在实施例1相同的条件下对淬灭后的反应液进行HPLC分析，HPLC中主要的峰如表3所示：
表3
峰序号 出峰时间/min 峰面积
1 11.800 39.57％
2 22.247 28.86％
3 25.640 31.31％
表3中11.800min处的峰为
Figure BDA0002403240050000221
的峰，但占比较低，副产物较多。

Claims (22)

1.一种N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐的制备方法，其特征在于，其包括下述步骤：
在水中，将物质X进行阳离子交换反应，得到所述的焦磷酸即可；所述的物质X为焦磷酸碱金属盐或焦磷酸碱金属盐水合物；
在溶剂中，将N,N-二异丙基乙基胺和焦磷酸进行成盐反应，得到N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐即可；
其中，所述的N,N-二异丙基乙胺与所述的焦磷酸的摩尔比为(1.5～3.0)：1，所述的N,N-二异丙基乙胺与所述的焦磷酸为原料；
在所述的阳离子交换反应中，所述的焦磷酸碱金属盐为焦磷酸钠；
在所述的阳离子交换反应中，所述的焦磷酸碱金属盐水合物为十水焦磷酸钠。
2.如权利要求1所述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐的制备方法，其特征在于，
在所述的成盐反应中，所述的溶剂为水和醇类溶剂；
和/或，所述的成盐反应为：各物料混合后，除去所述的溶剂，冻干即得。
3.如权利要求2所述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐的制备方法，其特征在于，在所述的成盐反应中，
所述的溶剂为水和醇类溶剂，所述的水与所述的醇类溶剂的体积比为(25～35)：13；
和/或，在所述的成盐反应中，当所述的溶剂为水和醇类溶剂时，所述的醇类溶剂为乙醇；
和/或，在所述的成盐反应中，当所述的溶剂为水和醇类溶剂时，所述的焦磷酸和所述的水的质量体积比为1g：(30mL～100mL)；
和/或，在所述的成盐反应中，当所述的溶剂为水和醇类溶剂时，所述的焦磷酸和所述的水以焦磷酸水溶液的形式投料；
和/或，在所述的成盐反应中，当所述的溶剂为水和醇类溶剂时，所述的焦磷酸和所述的醇类溶剂的质量体积比为1g：(10mL～100mL)；
和/或，在所述的成盐反应中，当所述的溶剂为水和醇类溶剂时，所述的N,N-二异丙基乙基胺和所述的醇类溶剂以N,N-二异丙基乙基胺醇溶液的形式投料；
和/或，当“所述的成盐反应为：各物料混合后，除去所述的溶剂，冻干即得”时，所述的混合步骤在搅拌下进行；
和/或，当“所述的成盐反应为：各物料混合后，除去所述的溶剂，冻干即得”时，所述的除去溶剂通过旋转蒸发除去；
和/或，当“所述的成盐反应为：各物料混合后，除去所述的溶剂，冻干即得”时，所述的冻干的温度为-80℃。
4.如权利要求3所述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐的制备方法，其特征在于，在所述的成盐反应中，所述的N,N-二异丙基乙胺与所述的焦磷酸的摩尔比为(1.5～1.83)：1或(1.83～2)：1；所述的N,N-二异丙基乙胺与焦磷酸的摩尔比为(1.5～2.0)：1。
5.如权利要求3所述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐的制备方法，其特征在于，在所述的成盐反应中，所述的N,N-二异丙基乙胺与所述的焦磷酸的摩尔比为(1.5～1.83)：1或(1.83～2)：1。
6.如权利要求3所述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐的制备方法，其特征在于，在所述的成盐反应中，所述的N,N-二异丙基乙胺与所述的焦磷酸的摩尔比为(1.83～1.9)：1。
7.如权利要求3所述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐的制备方法，其特征在于，在所述的成盐反应中，所述的溶剂为水和醇类溶剂，所述的水与所述的醇类溶剂的体积比为30：13；
和/或，在所述的成盐反应中，当所述的溶剂为水和醇类溶剂时，所述的焦磷酸和所述的水的质量体积比为1g：37.5mL；
和/或，在所述的成盐反应中，当所述的溶剂为水和醇类溶剂时，所述的焦磷酸和所述的醇类溶剂的质量体积比为1g：16.3mL；
和/或，在所述的成盐反应中，所述的N,N-二异丙基乙胺与所述的焦磷酸的摩尔比为(2.0～3.0)：1，所述的N,N-二异丙基乙胺与所述的焦磷酸为原料。
8.如权利要求1所述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐的制备方法，其特征在于，所述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐，其结构如式1所示：
Figure FDA0004234739220000031
9.如权利要求1所述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐的制备方法，其特征在于，
在所述的阳离子交换反应中，所述的物质X与所述的水的摩尔体积比为1mol：(5.4L～54L)；
和/或，所述的阳离子交换反应使用的填料为Dowex 50WX8氢型。
10.如权利要求1所述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐的制备方法，其特征在于，在所述的阳离子交换反应中，所述的物质X与所述的水的摩尔体积比为1mol：6.7L。
11.如权利要求1～10中任一项所述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐的制备方法，其特征在于，在所述的成盐反应中，N,N-二异丙基乙胺与焦磷酸的摩尔比为(1.5～2.0)：1，所述的N,N-二异丙基乙胺为产物中的N,N-二异丙基乙胺，所述的焦磷酸为产物中的焦磷酸。
12.如权利要求1～10中任一项所述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐的制备方法，其特征在于，在所述的成盐反应中，N,N-二异丙基乙胺与焦磷酸的摩尔比为(1.5～1.83)：1或(1.83～2)：1，所述的N,N-二异丙基乙胺为产物中的N,N-二异丙基乙胺，所述的焦磷酸为产物中的焦磷酸。
13.如权利要求1～10中任一项所述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐的制备方法，其特征在于，在所述的成盐反应中，N,N-二异丙基乙胺与焦磷酸的摩尔比为(1.83～1.9)：1，所述的N,N-二异丙基乙胺为产物中的N,N-二异丙基乙胺，所述的焦磷酸为产物中的焦磷酸。
14.如权利要求1～10中任一项所述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐的制备方法，其特征在于，在所述的成盐反应中，所述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐的结构如式1所示：
Figure FDA0004234739220000041
15.一种如式3所示的核苷三磷酸的制备方法，其特征在于，其包括下述步骤：在溶剂中，在保护气体和碱的存在下，将如权利要求1～10任一项所述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐与化合物2进行成环反应，得到化合物3即可；
Figure FDA0004234739220000042
其中，R1为羟基保护基；所述的羟基保护基为
Figure FDA0004234739220000043
所述的R2为
Figure FDA0004234739220000044
16.如权利要求15所述的如式3所示的核苷三磷酸的制备方法，其特征在于，
在所述的成环反应中，所述的溶剂为乙腈和PO(OMe)3；
和/或，在所述的成环反应中，所述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐与所述的溶剂的摩尔体积比为1mol：(4.3L～43L)；
和/或，在所述的成环反应中，所述的保护气体为氮气；
和/或，在所述的成环反应中，所述的碱为三乙胺；
和/或，在所述的成环反应中，所述的碱与所述的化合物2的摩尔比为(4～20)：1；
和/或，在所述的成环反应中，所述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐与所述的化合物2的摩尔比为(1～10)：1；
和/或，所述的成环反应的温度为-15℃～2℃；
和/或，所述的成环反应的时间为1h～5h。
17.如权利要求16所述的如式3所示的核苷三磷酸的制备方法，其特征在于，
在所述的成环反应中，当所述的溶剂为乙腈和PO(OMe)3时，所述的乙腈和所述的PO(OMe)3的体积比为1：(1～10)；
和/或，在所述的成环反应中，所述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐与所述的溶剂的摩尔体积比为1mol：6L；
和/或，在所述的成环反应中，所述的碱与所述的化合物2的摩尔比为5：1；
和/或，在所述的成环反应中，所述的N,N-二异丙基乙胺焦磷酸盐与所述的化合物2的摩尔比为2：1；
和/或，所述的成环反应的温度为0℃；
和/或，所述的成环反应的时间为2h。
18.如权利要求17所述的如式3所示的核苷三磷酸的制备方法，其特征在于，
在所述的成环反应中，当所述的溶剂为乙腈和PO(OMe)3时，所述的乙腈和所述的PO(OMe)3的体积比为1：1。
19.如权利要求15～18中任一项所述的如式3所示的核苷三磷酸的制备方法，其特征在于，其还进一步包括下述步骤：在溶剂中，在保护气体和碱的存在下，将化合物5与三氯氧磷进行取代反应，得到所述的化合物2即可；
Figure FDA0004234739220000061
20.如权利要求19所述的如式3所示的核苷三磷酸的制备方法，其特征在于，在所述的取代反应中，所述的溶剂为PO(OMe)3；
和/或，在所述的取代反应中，所述的化合物5与所述的溶剂的质量体积比为1mol：(3L～30L)；
和/或，在所述的取代反应中，所述的保护气体为氮气；
和/或，在所述的取代反应中，所述的碱为三乙胺；
和/或，在所述的取代反应中，所述的碱与所述的化合物5的摩尔比为(2～10)：1；
和/或，在所述的取代反应中，所述的三氯氧磷与所述的化合物5的摩尔比为(1～10)：1；
和/或，所述的取代反应的温度为-15℃～2℃；
和/或，所述的取代反应的时间为0.5h～3h。
21.如权利要求20所述的如式3所示的核苷三磷酸的制备方法，其特征在于，在所述的取代反应中，在所述的取代反应中，所述的化合物5与所述的溶剂的质量体积比为1mol：6L；
和/或，在所述的取代反应中，所述的碱与所述的化合物5的摩尔比为2：1；
和/或，在所述的取代反应中，所述的三氯氧磷与所述的化合物5的摩尔比为5：1；
和/或，所述的取代反应的温度为0℃；
和/或，所述的取代反应的时间为1h。
22.一种如式4所示的核苷三磷酸的制备方法，其特征在于，其包括下述步骤：
(1)按照如权利要求15～21中任一项所述的如式3所示的核苷三磷酸的制备方法，制得化合物3；
(2)将步骤(1)制得的化合物3与三乙胺碳酸氢盐水溶液进行开环反应，得到化合物4即可；
Figure FDA0004234739220000071
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