CN113350490B

CN113350490B - 椰油酰水解胶原钾在制备促进人皮肤修复的药膏或药膏贴中的应用

Info

Publication number: CN113350490B
Application number: CN202110618496.9A
Authority: CN
Inventors: 王璞
Original assignee: Shanghai Youren Biotechnology Co ltd
Current assignee: Shanghai Youren Biotechnology Co ltd
Priority date: 2021-06-03
Filing date: 2021-06-03
Publication date: 2022-12-30
Anticipated expiration: 2041-06-03
Also published as: CN113350490A

Abstract

本发明提供了椰油酰水解胶原钾在制备促进人皮肤修复的药膏或药膏贴中的应用，以及由椰油酰水解胶原钾制备的药膏或药膏贴，所述药膏贴包括药膏贴载体和附着于所述药膏贴载体表面的所述药膏层，所述药膏层采用所述药膏。采用上述技术方案后，椰油酰水解胶原钾能够促进原代成纤维细胞的增殖，让皮肤从原代细胞开始重生，能够从根源上解决皮肤损伤问题，从而在促进伤口愈合的同时降低皮肤愈合后无疤痕的几率较高。

Description

椰油酰水解胶原钾在制备促进人皮肤修复的药膏或药膏贴中的应用

技术领域

本发明涉及皮肤医学治疗技术领域，尤其涉及椰油酰水解胶原钾在制备促进人皮肤修复的药膏或药膏贴中的应用及由其制备的药膏和药膏贴。

背景技术

长痘、外伤、切割伤和烧伤等均可能会引起疤痕的产生。疤痕的本质是一种不具备正常皮肤组织结构及生理功能的，失去正常组织活力的、异常的、不健全的组织。疤痕不仅破坏了体表美，还可妨碍相关组织或器官的生理功能，甚至导致畸形，在进行疤痕医学修复的时候，应当进行适当的医学干预。

众所周知，人的皮肤分为表皮层、真皮层和皮下层。其中，真皮层是位于表皮层和皮下层之间的皮肤层，可以保持皮肤的紧致和弹性。正常真皮中的细胞包括成纤维细胞(也称为纤维母细胞)，组织细胞及肥大细胞等。皮结缔组织的胶原纤维和弹性纤维互相交织在一起，埋于基质内。而胶原纤维，弹性纤维和基质都是由成纤维母细胞分泌产生的。成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞负责制造大部分的皮肤胶原纤维，触发受损皮肤的修复。而成纤维细胞数量的增多有助于伤口愈合过程中毛囊的形成，进而降低皮肤愈合后落下疤痕的几率。

因此，现有技术中需要一种在促进伤口愈合的同时降低皮肤愈合后落下疤痕的几率的简单有效的技术方案。

发明内容

为了克服现有技术中缺少一种在促进伤口愈合同时降低皮肤愈合后落下疤痕的几率的简单有效的技术方案的技术缺陷，本发明的第一个目的在于提供能够促进人皮肤修复的药膏或药膏贴，其特征在于，所述药膏包括椰油酰水解胶原钾，所述药膏贴包括药膏贴载体和附着于所述药膏贴载体表面的所述药膏层，所述药膏层采用所述药膏。

所述椰油酰水解胶原钾能够促进人皮肤中的人原代皮肤成纤维细胞的增殖。

进一步地，所述载体为纱布、纸张或无纺布。

进一步地，所述药膏的剂型为乳膏。

进一步地，所述药膏还包括辅料，所述辅料选自去离子水、山梨醇、己二醇、卡波姆、黄原胶、对羟基苯乙酮、角鲨烷、缓释乳化剂、单异硬质酸甘油酯、甘油、透明质酸钠、蜂蜡中的任一种或两种以上。

进一步地，所述药膏进一步包括抗坏血酸磷酸酯镁。椰油酰水解胶原钾单独具有显著的促进胶原蛋白生成的效果，但当与抗坏血酸磷酸酯镁共同使用时，能够起到协同作用，从而进一步促进皮肤修复。

进一步地，所述药膏的制备方法包括：

将3-8％山梨醇、0.05-1％卡波姆、黄原胶、0.5-10％缓释乳化剂、1-10％甘油、0.05-0.5％透明质酸钠混合得到水溶性混合物，然后将水溶性混合物加热至70度搅拌均匀无颗粒，即为水相；

将0.5-3％己二醇、0.1-1％对羟基苯乙酮、0.5-20％角鲨烷、0.1-5％单异硬质酸甘油酯、1-10％蜂蜡混合得到油溶性混合物，加热油溶性混合物至70℃，搅拌至均匀无颗粒，即为油相；

将水相加入油相中，油相：水相的质量比为5-45：55-95，均质，搅拌乳化完全，保温70℃，0.5小时，降温至30℃，并加入5-10％椰油酰水解胶原钾和1-5％抗坏血酸磷酸酯镁，余量为去离子水，搅拌均匀即可出料，检测合格即得所述乳膏。

本发明的第二个目的在于提供椰油酰水解胶原钾在制备上述药膏或药膏贴中的应用。

进一步地，所述载体为纱布、纸张或无纺布。

进一步地，所述药膏的剂型为乳膏。

进一步地，所述药膏进一步包括抗坏血酸磷酸酯镁。

采用了上述技术方案后，与现有技术相比，具有以下有益效果：

本申请将椰油酰水解胶原钾应用于制备促进人皮肤修复的药膏或药膏贴中，椰油酰水解胶原钾能够促进原代成纤维细胞的增殖，让皮肤从原代细胞开始重生，能够从根源上解决皮肤损伤问题，从而在促进伤口愈合的同时降低皮肤愈合后无疤痕的几率高，皮肤伤口的整体修复情况较好。

附图说明

图1为椰油水解胶原钾样品对人原代皮肤成纤维细胞活力的影响，**p<0.01；

图2为椰油水解胶原钾样品对人原代皮肤成纤维细胞划痕修复的影响；

图3为样品对人原代皮肤成纤维细胞划痕修复的影响，所有样品组和正常组相比，*p<0.05,**p<0.01；

图4为椰油酰水解胶原钾和抗坏血酸磷酸酯镁协同促进胶原蛋白生成的柱状图。

具体实施方式

以下结合附图与具体实施例进一步阐述本发明的优点。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。

这里将详细地对示例性实施例进行说明，其示例表示在附图中。下面的描述涉及附图时，除非另有表示，不同附图中的相同数字表示相同或相似的要素。以下示例性实施例中所描述的实施方式并不代表与本公开相一致的所有实施方式。相反，它们仅是与如所附权利要求书中所详述的、本公开的一些方面相一致的装置和方法的例子。

实施例1探究椰油水解胶原钾样品对人原代皮肤成纤维细胞划痕修复的影响

1.实验材料和制备

1.1细胞和试剂

人原代皮肤成纤维细胞和培养基采购美国Sciencell公司，普通96孔板，6孔板采购自Corning，CCK-8细胞活力检测试剂盒采购自日本同仁生物，TGF-β采购自R&DSystems。

1.2主要设备

细胞培养箱(Thermo Fisher)，生物安全柜(Labconco)，酶标仪(Thermo Fisher)，显微镜。

1.3样品准备

本次检测共计1个样品，其具体信息见下表：

表1测试样品信息

样品名称	样品编号	样品准备	保存条件
				椰油酰水解胶原钾	YR	培养基稀释后过滤	4℃

2.实验方法

2.1人原代皮肤成纤维细胞活力测试

人原代皮肤成纤维细胞(HDF)在含5％二氧化碳、37℃的培养条件下，利用ScienCell公司的培养基正常培养。细胞长到90％密度时，将其按照2x10⁴/ml密度接种于96孔板，贴壁48h后，加入不同浓度的样品处理24h，随后按照说明书加入CCK-8试剂孵育2h，在450nm处测量吸光度。

细胞活力％＝样品组OD值/正常组OD值x100％

2.2人原代皮肤成纤维细胞划痕实验

HDFs在含5％二氧化碳、37℃的培养条件下用完全培养基培养，培养完成后细胞悬浮液密度调整到1×10⁵个/mL接种于12孔细胞板中，贴壁48h后用针头在细胞层上造出一条划痕，用PBS清洗细胞碎片，加入待测活性物(检测2个浓度)，以TGF-β为阳性对照，24h后观察细胞层划痕的愈合作用，从而判断活性物对皮肤成纤维细胞增殖功能的促进作用。

愈合率＝(初始划痕面积–愈合后划痕面积)/初始划痕面积x100％

2.3统计方法

所有结果以Mean±标准差表示，用one-way ANOVA进行统计分析，*p<0.05，**p<0.01。

3.实验结果

3.1椰油水解胶原钾样品对人原代皮肤成纤维细胞活力的影响

实验结果显示，用不同浓度的椰油水解胶原钾样品处理HDFs细胞24h后，在其高浓度0.1％和0.05％，对细胞活力有明显促进作用(图1，p<0.01)，在0.02％及以下对HDFs细胞活力没有影响。因此，我们分别选取0.1％和0.05％作为安全浓度进行后续划痕实验。

表2.椰油水解胶原钾样品对人原代皮肤成纤维细胞活力的影响原始数据

3.2椰油水解胶原钾样品对人原代皮肤成纤维细胞划痕修复的影响

实验结果显示，成纤维细胞造划痕后用不同浓度的样品分别处理24h，与正常组相比，阳性对照TGF-β能明显促进细胞愈合(p<0.01)，其愈合率达到80.44％(图2和图3)。用0.1％的样品在处理HDFs细胞后，未见促进细胞划痕的愈合。结果显示0.05％的样品能有效促进划痕修复，其愈合率达到77.95％，显著高于正常组62.47％(图2和图3，p<0.01)。

表3.椰油水解胶原钾样品对人原代皮肤成纤维细胞划痕修复的影响原始数据

4.结论

椰油水解胶原钾浓度在0.05％时能有效促进人原代皮肤成纤维细胞划痕修复，其24h愈合率为77.95％，具有促进人原代皮肤成纤维细胞增殖的功效，让皮肤从原代细胞开始重生，能够从根源上解决皮肤损伤问题。

实施例2探究椰油酰水解胶原钾和抗坏血酸磷酸酯镁协同作用的细胞试验

一、试验方法

1.将正常人真皮成纤维细胞以2.5x10⁴细胞/孔的密度接种到96孔板中，使用DMEM培养基(1000mg/L葡萄糖)和5％胎牛血清；

2.预培养24h后，分别使用含有待测样品的培养基处理细胞，并分为六个试验组，分别为：对照组(不添加VCPMg(即抗坏血酸磷酸酯镁)和YR(即椰油酰水解胶原钾))、0.003％YR、0.000025％VCPMg、0.000050％VCPMg、0.003％YR+0.000025％VCPMg、0.003％YR+0.000050％VCPMg；

3.样品处理48h后，收集培养上清液体；

4.使用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定细胞蛋白浓度；

5.采用ELISA法定量分析胶原蛋白含量，计算每个蛋白的胶原生成量，其中ELISA法包括以下步骤：

(1)ELISA板中加入100μL I型胶原，37℃孵育1h；

(2)洗净后加入阻断缓冲液，37℃孵育1h；

(3)将培养上清与抗-胶原抗体混合，37℃孵育1h；

(4)将2号Elisa板洗净后，将3号孵育后的混合样品加入酶联免疫吸附吸附板，37℃孵育1h；

(5)洗净后加入链霉亲和素-辣根过氧化酶(Streptavidin-HRP)37℃孵育1h；

(6)洗净后，加入显色液，置于暗室室温孵育20分钟；

(7)加入停止液并在450nm处测量吸光度。

二、试验结果

试验结果如图4所示，椰油酰水解胶原钾单独具有显著的促进胶原蛋白生成的效果，但证实当与抗坏血酸磷酸酯镁共同使用时，能够起到协同作用，从而进一步促进皮肤修复。

实施例3使用椰油酰水解胶原钾制备乳膏和乳膏贴

1.使用椰油酰水解胶原钾制备乳膏

试验材料：椰油酰水解胶原钾；抗坏血酸磷酸酯镁；以及辅料(辅料包括去离子水、山梨醇、己二醇、卡波姆、黄原胶、对羟基苯乙酮、角鲨烷、缓释乳化剂、单异硬质酸甘油酯、甘油、透明质酸钠和蜂蜡)。

制备方法：将辅料中的水溶性成分(3-8％山梨醇、0.05-1％卡波姆、黄原胶、0.5-10％缓释乳化剂、1-10％甘油、0.05-0.5％透明质酸钠)混合，加热至70度搅拌均匀无颗粒即为水相；将辅料中的油溶性成分(0.5-3％己二醇、0.1-1％对羟基苯乙酮、0.5-20％角鲨烷、0.1-5％单异硬质酸甘油酯、1-10％蜂蜡)混合，加热至70℃，搅拌至均匀无颗粒，即为油相；水相加入油相中(油相添加比例为5-45％；水相添加比例为55-95％)，均质，搅拌乳化完全，保温70℃0.5小时，降温至30℃，加入5-10％椰油酰水解胶原钾和1-5％抗坏血酸磷酸酯镁，去离子水为余量，搅拌均匀即可出料；检测合格，灌装包装。

上述各个成分的含量均为质量百分比含量，具体地，上述制备方法中各个成分的质量单位为：克。

2.使用椰油酰水解胶原钾制备乳膏贴

将上述制备得到的乳膏涂覆于常用乳膏贴载体(纱布、纸张或无纺布)的表面，或浸润常用乳膏贴载体(纱布、纸张或无纺布)，并封装于铝箔袋中，即可得到乳膏贴。

实施例4乳膏的临床修复效果

1.试剂：实施例3制备得到的乳膏；凡士林乳膏

2.试验方法：选择20例皮肤表皮痣切除术后患者，随机分为研究组和对照组各10例,所有病例切口均消毒缝合处理，研究组应用实施例3制备得到的乳膏涂抹于切口处，每日早中晚三次，对照组使用凡士林乳膏每日早中晚三次，观察两组患者皮肤切口愈合时间，以及切口是否出现疤痕和增生情况。

3.试验结果：切口愈合时间和切口修复情况的结果见表4和表5。研究组10例患者平均伤口愈合时间为(7.3±0.8)天，对照组患者平均伤口愈合时间为(8.7±1.2)天，两组患者间切口愈合时间差异，具有统计学意义(P＜0.05)。术后14天观察，研究组患者中切口出现疤痕及增生数为2例，对照组4例，两组差异有统计学意义(P＜0.05)。

综上，本申请制备得到的乳膏能够缩短皮肤切口愈合时间，并减少疤痕及增生情况，皮肤切口的修复结果较好。

表4研究组的切口愈合时间和切口修复情况

表5对照组的切口愈合时间和切口修复情况

应当注意的是，本发明的实施例有较佳的实施性，且并非对本发明作任何形式的限制，任何熟悉该领域的技术人员可能利用上述揭示的技术内容变更或修饰为等同的有效实施例，但凡未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何修改或等同变化及修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims

1.一种能够促进人皮肤修复的药膏或药膏贴，其特征在于，所述药膏包括椰油酰水解胶原钾，所述药膏贴包括药膏贴载体和附着于所述药膏贴载体表面的药膏层，所述药膏层采用所述药膏；所述药膏进一步包括抗坏血酸磷酸酯镁；所述药膏还包括辅料，所述辅料选自去离子水、山梨醇、己二醇、卡波姆、黄原胶、对羟基苯乙酮、角鲨烷、缓释乳化剂、单异硬质酸甘油酯、甘油、透明质酸钠和蜂蜡；所述药膏的剂型为乳膏；所述药膏的制备方法包括：将3-8%山梨醇、0.05-1%卡波姆、黄原胶、0.5-10%缓释乳化剂、1-10%甘油、0.05-0.5%透明质酸钠混合得到水溶性混合物，然后将水溶性混合物加热至70度搅拌均匀无颗粒，即为水相；将0.5-3%己二醇、0.1-1%对羟基苯乙酮、0.5-20%角鲨烷、0.1-5%单异硬质酸甘油酯、1-10%蜂蜡混合得到油溶性混合物，加热油溶性混合物至70℃，搅拌至均匀无颗粒，即为油相；将水相加入油相中，油相：水相的质量比为5-45：55-95，均质，搅拌乳化完全，保温70℃，0.5小时，降温至30℃，并加入5-10%椰油酰水解胶原钾和1-5%抗坏血酸磷酸酯镁，余量为去离子水，搅拌均匀即可出料，检测合格即得所述乳膏。

2.如权利要求1所述的能够促进人皮肤修复的药膏或药膏贴，其特征在于，所述载体为纱布、纸张或无纺布。

3.椰油酰水解胶原钾在制备如权利要求1-2任一项所述的药膏或药膏贴中的应用。