CN113321692B - 一种阿霉素前药及其制备方法和应用 - Google Patents

一种阿霉素前药及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种阿霉素前药及其制备方法和应用，所述阿霉素前药为被反式环辛烯醇和6‑马来酰亚胺基己酰肼改性的阿霉素。所述制备方法包括：将反式环辛烯醇对硝基苯碳酸酯与阿霉素在溶剂中避光反应得到第一产物；再将6‑马来酰亚胺基己酰肼三氟乙酸盐与第一产物在溶剂中避光反应得到所述阿霉素前药。相比于阿霉素原药，本发明使用反式环辛烯醇在空间结构上钝化阿霉素的药物活性位点，能够显著降低对细胞的毒性，降低药物副作用；同时，以内源性血清白蛋白为药物载体，实现药物对肿瘤的靶向性。该阿霉素前药的制备方法操作简单，制备得到的阿霉素前药具备高化学纯度以及较高的收率。

Description

一种阿霉素前药及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，涉及一种阿霉素前药及其制备方法和应用，尤其涉及一种原位结合血清白蛋白且具有肿瘤靶向能力的阿霉素前药及其制备方法和应用。
背景技术
癌症化疗药物通常具有较大的毒副作用，这限制药物用量及其适用范围，进而导致癌症复发或转移。阿霉素(Doxorubicin,简称Dox，CAS:23214-92-8) 是一种临床上常用的抗肿瘤药物，由于阿霉素具有较高的化学毒性，没有细胞选择性，所以其药物副作用很大，通常导致其具有较窄的药物治疗窗口。前药策略是目前常用的药物改性方法之一，能够很好的用来提高药物的安全性。所谓前药策略，是指通过化学的方法，在原药基础上进行修饰使其失去生物学活性，并在特定刺激下释放出原药分子以达到药物作用的精确控制。
目前，前药的释放策略根据其反应原理不同，大致可以分为基于还原条件响应的前药释放策略、基于pH响应的前药释放策略、基于酶响应的前药释放策略和基于生物正交反应的前药释放策略。在这几种方法中，基于生物正交反应的前药激活策略能够高效特异性激活前药，具有非常好的发展前景。尤其是基于反式环辛烯醇(Trans-cyclooctene，TCO)和四嗪(Tetrazine)的逆电子需求的狄尔斯–阿尔德反应(Diels-Alder reaction)，其反应速度快、特异性强，可以较好地用于活体内前药的激活。
然而，目前小分子生物正交前药大都缺乏肿瘤靶向性，无法真正实现药物分子在肿瘤内的精确控制。因此，开发一种具有肿瘤靶向性的生物正交前药分子是非常有必要的。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种阿霉素前药及其制备方法和应用，尤其提供一种原位结合血清白蛋白且具有肿瘤靶向能力的阿霉素前药及其制备方法和应用。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种阿霉素前药，所述阿霉素前药为被反式环辛烯醇和6-马来酰亚胺基己酰肼改性的阿霉素。
本发明所涉及的阿霉素前药的改性单元为反式环辛烯醇(TCO)和6-马来酰亚胺基己酰肼(6-Maleimidohexanehydrazide Trifluoroacetate，简称EMCH， CAS：151038-94-7)。一方面，改性后的阿霉素前药由于药物活性位点(-NH2) 被反式环辛烯醇修饰，故阿霉素前药能够显著降低原药阿霉素的毒性，降低药物副作用；另一方面，改性后的阿霉素前药分子结构中马来酰亚胺基团能够与血清白蛋白上巯基发生快速化学加成反应，进而前药注射到体内后被负载到血清白蛋白上，白蛋白可以通过主被动靶向机制选择性地富集在肿瘤内，使得前药能够靶向肿瘤组织；再一方面，肿瘤微酸环境可以使阿霉素前药分子结构中的腙键断裂，进而释放反式环辛烯醇修饰的阿霉素(TCO-Dox)，被释放的 TCO-Dox可以与四嗪化合物发生快速特异性的生物正交剪切反应，TCO-Dox被快速特异性激活并释放原药Dox，最终实现选择性杀伤肿瘤细胞。
优选地，所述反式环辛烯醇包括剪切型反式环辛烯醇轴向异构体和/或剪切型反式环辛烯醇平面异构体，所述阿霉素前药的结构如式(Ⅰ)和/或式(Ⅱ) 所示的结构：
Figure BDA0002395641240000031
上述如式(Ⅰ)和式(Ⅱ)的化合物在本发明中分别被命名为剪切型TCO 轴向异构体-Dox-EMCH(简称：：TCOdax-Dox-EMCH)或剪切型TCO平面异构体-Dox-EMCH(简称：TCOdeq-Dox-EMCH)。
上述剪切型反式环辛烯醇轴向异构体和/或剪切型反式环辛烯醇平面异构体其结构如下所示：
Figure BDA0002395641240000032
第二方面，本发明提供一种如上所述的阿霉素前药的制备方法，所述制备方法包括：
(1)将反式环辛烯醇对硝基苯碳酸酯与阿霉素在溶剂中避光反应得到第一产物(TCO-Dox)；
(2)再将6-马来酰亚胺基己酰肼三氟乙酸盐与第一产物在溶剂中避光反应得到所述阿霉素前药(TCO-Dox-EMCH)。
本发明所涉及的阿霉素前药的制备方法操作简单，制备得到的阿霉素前药具备高化学纯度以及较高的收率。本发明阿霉素前药使用的改性单元反式环辛烯醇能够在空间结构上钝化阿霉素的药物活性位点，降低药物副作用，同时利用白蛋白载体提高药物的肿瘤靶向性，并且前药在肿瘤内能够快速特异性激活，实现安全有效的抗肿瘤效果。
优选地，步骤(1)所述溶剂包括甲醇、四氢呋喃或二甲基甲酰胺中的任意一种或至少两种的组合；所述至少两种的组合例如甲醇和四氢呋喃的组合、四氢呋喃和二甲基甲酰胺的组合、甲醇和二甲基甲酰胺的组合等，其他任意的组合方式均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，步骤(1)所述避光反应在碱的存在下进行。
优选地，所述碱包括三乙胺、N,N-二异丙基乙胺或吡啶中的任意一种或至少两种的组合；所述至少两种的组合例如三乙胺和N,N-二异丙基乙胺的组合、 N,N-二异丙基乙胺和吡啶的组合、三乙胺和吡啶的组合等，其他任意的组合方式均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述碱与阿霉素的摩尔比不小于1:1，例如1:1、2:1、3:1、4:1、 5:1、6:1、10:1、12:1或15:1等，范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述，优选为(1-4):1。
优选地，步骤(1)所述反式环辛烯醇对硝基苯碳酸酯与阿霉素的摩尔比小于1:1，例如0.05:1、0.1:1、0.2:1、0.3:1、0.4:1、0.5:1、0.6:1、0.8:1或0.9:1 等，范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述，优选为 (0.2-0.9):1。
优选地，步骤(1)所述避光反应的温度为0-50℃，例如0℃、10℃、20℃、 40℃或50℃等，范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述避光反应的时间为0-96h但不包括0，例如1h、5h、10h、24h、48h或96h等，范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，步骤(1)所述反式环辛烯醇对硝基苯碳酸酯由4-硝基苯酚氯甲酯与反式环辛烯醇反应制备得到。
优选地，所述反应在碱的存在下进行。
优选地，所述碱包括三乙胺和/或吡啶。
优选地，所述碱与4-硝基苯酚氯甲酯的摩尔比为(1-2):1，例如1:1、1.2:1、 1.5:1、1.6:1、1.8:1或2:1等，范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述，优选为1:1。
优选地，所述反式环辛烯醇与4-硝基苯酚氯甲酯的摩尔比为(1-2):1，例如 1:1、1.2:1、1.5:1、1.6:1、1.8:1或2:1等，范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述，优选为1:1。
优选地，所述反应的溶剂包括四氢呋喃、乙醚或甲基叔丁基醚中的任意一种或至少两种的组合；所述至少两种的组合例如四氢呋喃和乙醚的组合、乙醚和甲基叔丁基醚的组合、四氢呋喃和甲基叔丁基醚的组合等，范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述反应的温度为25-35℃，例如25℃、28℃、30℃、31℃、 32℃、33℃、34℃或35℃等，范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述反应的时间为12-48h，例如12h、15h、20h、24h、30h、 36h、42h或48h等，范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，步骤(2)所述避光反应在酸的存在下进行。
优选地，所述酸包括三氟乙酸。
优选地，所述酸与6-马来酰亚胺基己酰肼三氟乙酸盐的摩尔比小于1:1，例如0.05:1、0.1:1、0.2:1、0.3:1、0.4:1、0.5:1、0.6:1、0.8:1或0.9:1等，范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述，优选为(0.2-0.9):1。
优选地，步骤(2)所述溶剂包括甲醇、四氢呋喃或二甲基甲酰胺中的任意一种或至少两种的组合；所述至少两种的组合例如甲醇和四氢呋喃的组合、四氢呋喃和二甲基甲酰胺的组合等，其他任意的组合均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，步骤(2)所述6-马来酰亚胺基己酰肼三氟乙酸盐与第一产物的摩尔比小于1:1，例如0.05:1、0.1:1、0.2:1、0.3:1、0.4:1、0.5:1、0.6:1、0.8:1或 0.9:1等，范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述，优选为 (0.2-0.9):1。
优选地，步骤(2)所述避光反应的温度为0-50℃，例如0℃、10℃、20℃、 40℃或50℃等，范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，步骤(2)所述避光反应的时间为0-100h但不包括0，例如1h、5 h、10h、24h、48h、72h或100h等，范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
作为本发明的优选技术方案，所述阿霉素前药的制备方法具体包括以下步骤：
(1)将摩尔比为(1-2):1的反式环辛烯醇与4-硝基苯酚氯甲酯溶解于溶剂中，碱存在下，其中碱与4-硝基苯酚氯甲酯的摩尔比为(1-2):1，25-35℃反应 12-48h得到反式环辛烯醇对硝基苯碳酸酯；
(2)将摩尔比小于1:1的反式环辛烯醇对硝基苯碳酸酯与阿霉素溶解于溶剂中，碱存在下，其中碱与反式环辛烯醇对硝基苯碳酸酯的摩尔比不小于1:1， 0-50℃避光反应0-96h得到第一产物(TCO-Dox)；
(3)将摩尔比小于1:1的6-马来酰亚胺基己酰肼三氟乙酸盐与TCO-Dox 溶解于溶剂中，酸存在下，其中酸与6-马来酰亚胺基己酰肼三氟乙酸盐的摩尔比小于1:1，0-50℃避光反应0-100h得到所述阿霉素前药(TCO-Dox-EMCH)。
第三方面，本发明提供如上所述的阿霉素前药的溶剂化物、多晶型体、异构体或药学上可接受的盐。
本发明所涉及的阿霉素前药的溶剂化物、多晶型体、异构体或药学上可接受的盐均在本发明的保护范围内。
第四方面，本发明提供一种具有抗肿瘤作用的联合用药物组合物，所述联合用药物组合物包括第一组分和第二组份；所述第一组份为如上所述的阿霉素前药或其溶剂化物、多晶型体、异构体、药学上可接受的盐；所述第二组份为前药激活四嗪化合物。
优选地，所述联合用药物组合物还包括药剂学上可接受药用辅料中的任意一种或至少两种的组合。本发明所涉及的药物组合物可单独给药也可以与辅料搭配做成适当的剂型进行给药，所述辅料包括稀释剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、乳化剂、助溶剂、增溶剂、渗透压调节剂、表面活性剂、pH调节剂、抗氧剂、抑菌剂或缓冲剂中的任意一种或至少两种的组合。所述至少两种的组合例如稀释剂和粘合剂的组合、润湿剂和崩解剂的组合、增溶剂和渗透压调节剂的组合等，其他任意的组合方式便不在此一一赘述。
所述药物组合物可以为单一的复方制剂形式，也可以为两种单独的制剂的组合；当为两种单独的制剂的组合时，其用药方式可以为同时施用，也可以为依次施用或者两种交替施用。
本发明通过评估阿霉素前药TCO-Dox-EMCH和前药激活开关四嗪化合物 NapK(Tz)FYp在体内的药代动力学曲线，得出了动力学控制的给药方式，确定了其应用于抗肿瘤药物时的具体应用方式。
具体地，在应用时，15mg/Kg前药TCO-Dox-EMCH在注入体内后，经过一段时间的血液循环，实现药物在肿瘤内的富集并酸响应释放TCO-Dox，在不同时间内通过LC-MS测定肿瘤中TCO-Dox的含量，绘制出阿霉素前药的药代动力学曲线；同时，50mg/Kg前药激活开关NapK(Tz)FYp在注入体内后通过血液循环进入肿瘤，通过酶催化超分子自组装(Enzyme-instructed supramolecular self-assembly，EISA)进行富集，在不同时间内通过LC-MS测定肿瘤中 NapK(Tz)FYp的含量，绘制出前药激活开关的药代动力学曲线；通过药代动力学曲线的分析，确定的给药方式为尾静脉注射15mg/Kg前药 TCO-Dox-EMCH，24h后尾静脉注射50mg/Kg前药激活开关NapK(Tz)FYp，在小鼠模型上实现了良好的抗肿瘤效果。
第五方面，本发明提供一种如上所述的阿霉素前药、如上所述的阿霉素前药的溶剂化物、多晶型体、异构体、药学上可接受的盐或如上所述的联合用药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
第六方面，本发明还提供一种能够高效地、肿瘤特异性地激活阿霉素前药的激活开关四嗪化合物NapK(Tz)FYp，其能够特异性靶向进入肿瘤细胞，通过酶催化超分子自组装进行富集，能够在肿瘤内快速特异性激活本发明所涉及的前药，其可参照相关专利文献201910218267.0中涉及的方法进行制备，示例性地可以为：通过固相合成法合多肽NapKFYp，将摩尔比为1.2:1的NapKFYp与 Tz-NHS溶于二甲基甲酰胺中，添加N,N-二异丙基乙胺，其中N,N-二异丙基乙胺与Tz-NHS的摩尔比为2:1，25℃反应24h，得到NapK(Tz)FYp。将制得的NapK(Tz)FYp进行提纯得到精制产品，其结构如下所示：
Figure BDA0002395641240000091
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明所涉及的阿霉素前药TCO-Dox-EMCH相比于阿霉素原药Dox，通过使用反式环辛烯醇能够在空间结构上钝化Dox的药物活性位点，能够显著降低对细胞的毒性，减降低药物副作用。同时，以血清白蛋白为药物载体，实现药物对肿瘤的靶向性。
(2)本发明所涉及的阿霉素前药改性单元明确，当前药富集于肿瘤细胞后，辅助注射前药激活开关四嗪NapK(Tz)FYp，会发生快速特异性的生物正交剪切反应，能够在肿瘤细胞内快速特异性激活阿霉素。
(3)本发明提供了阿霉素前药TCO-Dox-EMCH药代动力学控制的给药方式，在肿瘤模型上表现出良好的肿瘤抑制能力。
(4)本发明提供的阿霉素前药的制备方法操作简单，制备得到的阿霉素前药具备高化学纯度以及较高的收率，收率可达到80％以上。
附图说明
图1是实施例1制得的阿霉素前药的核磁表征图；
图2是实施例3制得的前药激活开关NapK(Tz)FYp的核磁表征图；
图3是实施例3制得的前药激活开关NapK(Tz)FYp的质谱表征图；
图4是阿霉素前药在血液、肝脏、肿瘤中的分布情况统计结果图；
图5是前药激活开关NapK(Tz)FYp在血液、肝脏、肿瘤中的分布情况统计图；
图6是阿霉素前药联合前药激活开关对肿瘤体积影响的统计结果图；
图7是阿霉素前药联合前药激活开关对小鼠体重影响的统计结果图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
实施例1
本实施例提供一种阿霉素前药——剪切型TCO轴向异构体-Dox-EMCH (TCOdax-Dox-EMCH)，其结构如下所示：
Figure BDA0002395641240000101
具体反应式如下所示：
Figure BDA0002395641240000111
(1)将摩尔比为1.2:1的剪切型TCO轴向异构体(TCOdax)与4-硝基苯酚氯甲酯溶于四氢呋喃中，添加吡啶，其中吡啶与4-硝基苯酚氯甲酯的摩尔比为 1:1，30℃反应24h得到剪切型TCO轴向异构体对硝基苯碳酸酯；
(2)将摩尔比为0.8:1的反式环辛烯醇对硝基苯碳酸酯与阿霉素在二甲基甲酰胺中，添加三乙胺，其中三乙胺与反式环辛烯醇对硝基苯碳酸酯的摩尔比为3:1，25℃避光反应48h得到TCOdax-Dox；
(3)将摩尔比为0.9:1的6-马来酰亚胺基己酰肼三氟乙酸盐与TCOdax-Dox 溶解在甲醇中，添加三氟乙酸，其中三氟乙酸与6-马来酰亚胺基己酰肼三氟乙酸盐的摩尔比为0.6:1，25℃避光反应12h得到所述阿霉素前药 TCOdax-Dox-EMCH；
(4)将制得的TCOdax-Dox-EMCH进行提纯得到精制产品，产率为81.5％。
用1H-NMR法及电喷雾-质谱(ESI-MS)法分别对所制得的阿霉素前药进行表征，结果如下：
1H-NMR表征结果为：1H NMR(CDCl3,400MHz)δ(ppm):14.025-13.853(s, 1H),13.368-13.121(s,1H),10.475-10.109(s,1H),8.040-7.899(s,1H),7.819-7.646 (m,1H),7.493-7.308(m,1H),6.836-6.523(m,2H),5.879-5.632(m,1H), 5.632-5.385(m,2H),5.385-5.136(m,3H),4.837-4.574(m,2H),4.269-3.726(m, 6H),3.726-3.590(s,1H),3.590-3.369(m,2H),3.369-3.131(d,1H),3.050-2.805(m, 3H),2.673-2.479(m,1H),2.479-2.333(m,1H),2.333-2.253(m,1H),2.253-2.066 (m,1H),2.066-1.729(m,6H),1.729-1.482(m,6H),1.482-1.103(m,7H), 1.103-0.931(m,1H),0.789-0.604(m,1H)。核磁表征图如图1所示。
高分辨ESI-MS表征结果为：C46H54N4O15,902.36(m/z)；[M+Na]+： 925.34810,[M-H]-：901.35044(m/z)。
实施例2
本实施例提供一种阿霉素前药——剪切型TCO平面异构体-Dox-EMCH (TCOdeq-Dox-EMCH)，其结构如下所示：
Figure BDA0002395641240000121
具体反应式如下所示：
Figure BDA0002395641240000131
(1)将摩尔比为1.2:1的剪切型TCO平面异构体(TCOdeq)与4-硝基苯酚氯甲酯溶于四氢呋喃中，添加吡啶，其中吡啶与4-硝基苯酚氯甲酯的摩尔比为 1:1，30℃反应24h得到剪切型TCO平面异构体对硝基苯碳酸酯；
(2)将摩尔比为0.9:1的反式环辛烯醇对硝基苯碳酸酯与阿霉素在二甲基甲酰胺中，添加N,N-二异丙基乙胺，其中N,N-二异丙基乙胺与反式环辛烯醇对硝基苯碳酸酯的摩尔比为2:1，30℃避光反应36h得到TCOdeq-Dox；
(3)将摩尔比为0.8:1的6-马来酰亚胺基己酰肼三氟乙酸盐与TCOdeq-Dox 溶解在甲醇中，添加三氟乙酸，其中三氟乙酸与6-马来酰亚胺基己酰肼三氟乙酸盐的摩尔比为0.8:1，30℃避光反应24h得到所述阿霉素前药 TCOdeq-Dox-EMCH；
(4)将制得的TCOdeq-Dox-EMCH进行提纯得到精制产品，产率为85.5％。
实施例3
本实施例通过以下方法制备前药激活开关NapK(Tz)FYp，其结构如下所示：
Figure BDA0002395641240000141
具体反应式如下所示：
Figure BDA0002395641240000142
(1)将摩尔比为1.2:1的NapKFYp与Tz-NHS溶于二甲基甲酰胺中，添加 N,N-二异丙基乙胺，其中N,N-二异丙基乙胺与Tz-NHS的摩尔比为2:1，25℃反应24h得到NapK(Tz)FYp；
(2)将制得的前药激活开关NapK(Tz)FYp进行提纯得到精制产品，产率为 85.5％。
用1H-NMR法及电喷雾-质谱(ESI-MS)法分别对所制得的激活开关 NapK(Tz)FYp进行表征，结果如下：
1H-NMR表征结果为：1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ(ppm):8.39(d,2H), 8.22(m,2H),8.09(t,1H),7.97(d,1H),7.88-7.77(m,3H),7.71(s,1H),7.52(d,2H), 7.50-7.41(m,2H),7.39(d,1H),7.14(m,9H),4.54(m,1H),4.41(m,1H),4.19(m, 1H),3.65-3.57(m,2H),3.53(s,2H),3.04-2.86(m,8H),2.76(m,1H),1.59-1.50(m, 1H),1.49-1.41(m,1H),1.34(m,2H),1.24-1.12(m,2H).HRMS(m/z):calcd.for C47H49N8O10；found[M+H]+,917.3385；[M-H]-,915.3235。核磁图如图2所示。
高分辨ESI-MS表征结果为：C47H49N8O10P，916.33(m/z)；[M+H]+：917.3385；[M-H]-：915.3235。质谱图如图3所示。
实验例4
将制得的剪切型TCO轴向异构体-Dox-EMCH(TCOdax-Dox-EMCH)前药注射到带有宫颈癌肿瘤的荷瘤小鼠体内，进行药代动力学研究，具体操作如下：
构建荷瘤小鼠模型，将宫颈癌细胞按注射到裸鼠(BALB/c-nu)皮下，置于标准动物房饲养，当肿瘤体积达到约200-300mm3的时候，按照标准方法进行分组，每组6只。每只小鼠通过尾静脉注射15mg/Kg的前药TCOdax-Dox-EMCH。分别在1h、2h、4h、24h、48h时从小鼠尾静脉取血，血液经高速离心、萃取等操作后，用UPLC-MS/MS检测血液中TCO-Dox含量；同时将小鼠处死后解剖获取肿瘤和肝脏，经过研磨、离心、萃取等操作，用UPLC-MS/MS检测肿瘤和肝脏内TCO-Dox含量，结果如图4所示。
由图4可以看出：相比血液和肝脏，前药在肿瘤内具有良好的富集能力，对肿瘤具有良好的靶向性。
实验例5
将制得的前药激活开关NapK(Tz)FYp注射到带有宫颈癌肿瘤的荷瘤小鼠体内，进行药代动力学研究，具体操作如下：
构建荷瘤小鼠模型，将宫颈癌细胞注射到裸鼠(BALB/c-nu)皮下，置于标准动物房饲养，当肿瘤体积达到约200-300mm3的时候，按照标准方法进行分组，每组6只。每只小鼠通过尾静脉注射50mg/Kg前药激活开关NapK(Tz)FYp。分别在1h、2h、4h、24h时从小鼠尾静脉取血，血液经高速离心、萃取等操作后，用UPLC-MS/MS检测血液中NapK(Tz)FYp含量；同时将小鼠处死后解剖获取肿瘤和肝脏，经过研磨、离心、萃取等操作，用UPLC-MS/MS检测肿瘤和肝脏内NapK(Tz)FYp含量，结果如图5所示。
由图5可以看出：相比血液和肝脏，前药激活开关NapK(Tz)FYp在肿瘤内具有良好的富集能力，对肿瘤具有良好的靶向性。
实验例6
将剪切型TCO轴向异构体-Dox-EMCH(TCOdax-Dox-EMCH)前药注射到带有宫颈癌肿瘤的荷瘤小鼠体内，辅助注射前药激活开关NapK(Tz)FYp，进行抗肿瘤研究。具体操作如下：
构建荷瘤小鼠模型，将宫颈癌细胞注射到裸鼠(BALB/c-nu)皮下，置于标准动物房饲养，当肿瘤体积达到约80-100mm3的时候，按照标准方法进行分组，每组6只。实验组每只小鼠通过尾静脉注射15mg/Kg的前药TCOdax-Dox-EMCH， 24h后通过尾静脉注射50mg/Kg的前药激活开关NapK(Tz)FYp；对照组1-4分别通过尾静脉注射生理盐水、50mg/Kg的前药激活开关NapK(Tz)FYp、15mg/Kg 的前药TCOdax-Dox-EMCH以及5mg/Kg的阿霉素。总共经过三轮治疗(第0、 3、6天给药)，每天检测小鼠肿瘤大小和体重，共观察14天。肿瘤体积变化情况和小鼠体重变化情况分别如图6和图7所示。
由图6可以看出：实验组显著抑制肿瘤生长，相比对照组1-4具有优异的肿瘤抑制效果；由图7可以看出：阿霉素前药相比于原药阿霉素，不会降低小鼠体重，说明阿霉素前药具有良好的生物安全性。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种阿霉素前药及其制备方法和应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

Claims (2)

1.一种具有抗肿瘤作用的联合用药物组合物，其特征在于，所述联合用药物组合物包括第一组分和第二组份；所述第一组份为阿霉素前药，结构如式I所示：
Figure FDA0003818112380000011
所述第二组份为前药激活四嗪化合物，结构如下所示：
Figure FDA0003818112380000012
2.如权利要求1所述的联合用药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
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