CN113301902A - 非酒精性脂肪肝病患者的纤维化的治疗和抑制 - Google Patents

Abstract

本发明涉及纤维化包括肝纤维化的治疗、抑制和减少。更特别地，本发明提供了可用于治疗和抑制纤维化紊乱、与非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)相关的肝纤维化状况的组合物和方法，采取了具有有利的全身性暴露的剂量的3β‑花生酰氨基‑7α,12α‑二羟基‑5β‑胆烷‑24‑酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐的使用。

Description

非酒精性脂肪肝病患者的纤维化的治疗和抑制

发明领域

本发明涉及3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)的单位剂型及其在治疗和/或抑制纤维化中的用途。

发明背景

Aramchol^TM是花生酸(arachidic acid)和3-氨基胆酸的酰胺缀合物，其有效地降低肝脂肪含量，以及改善与脂肪肝病相关的代谢参数。它是下调硬脂酰CoA 1型去饱和酶的口服、肝靶向的脂肪酸-胆汁酸缀合物。它属于合成脂肪酸/胆汁酸缀合物(FABAC)的家族，并且正被开发为用于脂肪肝病和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的潜在疾病改善治疗。

Aramchol^TM被化学命名为3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(或(4R)-4-((3S,5S,7R,10S,12S,13R,17R)-7,12-二羟基-3-二十烷酰氨基-10,13-二甲基十六氢-1H-环戊二烯并[a]菲-17-基)戊酸，(IUPAC名称))，并且由以下化学结构表示：

Aramchol^TM、其制备工艺及其用途在U.S.6,384,024、U.S.6,395,722、U.S.6,589,946、U.S.7,501,403、U.S.8,110,564、U.S.2012/0214872和WO 2009/060452中公开。

纤维化

纤维性结缔组织的形成是由于损伤或炎症引起的组织损害后正常愈合过程的一部分。在该过程期间，包括巨噬细胞在内的活化免疫细胞刺激成纤维细胞的增殖和活化，这进而使结缔组织沉积。然而，结缔组织的异常或过度产生可能导致纤维材料的积累，使得其干扰组织的正常功能。纤维化生长可以增殖并且侵入健康的周围组织，即使在原始的损伤愈合后也是如此。这种在修复性过程或反应性过程中出现的过度结缔组织的异常形成被称为纤维化。

在生理学上，纤维化的作用是使结缔组织沉积，这可以消除基础器官或组织的结构和功能。受细胞外基质(ECM)蛋白质的病理性积累限定，纤维化导致受影响组织的瘢痕化和增厚，这干扰正常的器官功能。在多种状况中，纤维化组织的形成以异常大量的胶原的沉积为特征。胶原的合成也与许多其他病理学状况有关。例如，与原发性纤维化或继发性纤维化相关的临床状况和紊乱，诸如系统性硬化症、移植物抗宿主病(GVHD)、肺纤维化和自身免疫性紊乱，通过结缔组织的过度产生来辨别，结缔组织的过度产生导致正常组织结构和功能的破坏。这些疾病最佳地可以用细胞功能干扰来解释，其主要表现是过度的胶原合成和沉积。胶原在纤维化中的作用已经促使人们试图开发抑制其积累的药物。

肝纤维化

肝的纤维化，在本文中也被称为肝纤维化，可能由各种类型的慢性肝损伤引起，特别是在涉及炎性组分的情况下。自限性急性肝损伤(例如，急性甲型病毒性肝炎)，即使当为暴发性的时，也不一定扭曲支架结构，并且因此尽管肝细胞损失，通常也不引起纤维化。然而，诸如慢性酒精中毒、营养不良、血色素沉着病和暴露于毒物、毒素或药物的因素可能导致因暴露于肝毒性化学物质而引起的慢性肝损伤和肝纤维化。手术或其他形式的与机械性胆道梗阻相关的损伤引起的肝瘢痕化也可能导致肝纤维化。

纤维化本身不一定是有症状的，然而它可以导致门静脉高血压的发展，在门静脉高血压中瘢痕化使通过肝的血流扭曲；或者导致肝硬化的发展，在肝硬化中瘢痕化导致正常肝结构的破坏和肝功能障碍。这些病状中的每一种的程度决定了肝纤维化紊乱的临床表现。例如，先天性肝纤维化影响门静脉分支，这很大程度上保留了薄壁组织。结果是门静脉高血压伴有肝细胞功能的保留。

治疗

已经报告了开发用于治疗多种紊乱的抗纤维化剂的尝试。然而，治疗在慢性损伤或反复损伤数月或数年后形成的已建立的纤维化仍然是挑战。在其初始阶段，如果病因是可逆的(例如，随着病毒清除)，肝纤维化可能消退。因此，大多数可用的治疗选择被设计为去除肝损伤的基础，诸如通过消除慢性病毒性肝炎中的乙型肝炎病毒或丙型肝炎病毒，在酒精性肝病中戒酒，去除重金属诸如在血色素沉着病中去除铁或在威尔逊氏病中去除铜，以及在胆道梗阻中使胆管减压。

旨在逆转纤维化的治疗通常对长期使用而言毒性太大(例如皮质类固醇、青霉胺)，或者没有已证明的功效(例如秋水仙碱)。水飞蓟素存在于奶蓟中，是受欢迎的用于治疗肝纤维化的替代药物，显示是安全的但缺乏功效。

潜在的治疗剂

已经报告了开发用于治疗肝病的特定抗纤维化剂的尝试。例如，美国专利第8,729,046号涉及用于使用核酸或核酸类似物的组合来治疗组织纤维化包括肝纤维化的方法。特别地，核酸或其类似物靶向miR23b簇的微小RNA。U.S.6,562,829公开了用于治疗肝纤维化的组合物以及使用和制造该组合物的方法，该组合物包含喹唑啉酮衍生物，优选地包含常山酮(Halofuginone)。U.S.8,858,954涉及用于预防和治疗肝纤维化或非酒精性脂肪肝病的药物组合物，其包含以重量计50％至90％的冬虫夏草(Cordyceps sinensis)菌丝体粉末和以重量计10％至50％的浓缩黄芪(astragalus)粉末。

美国公开第2015/359805号涉及可以用于治疗胆汁淤积性紊乱的法尼醇X受体(FXR)调节剂，特别是其中C6含有乙基并且C24羧基基团被转化为硫酸酯基团的胆汁酸衍生物。建议治疗的紊乱中包括酒精性肝病、活体供体移植肝再生、先天性肝纤维化、胆总管结石和肉芽肿性肝病。U.S.2014/187633涉及治疗和/或预防非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和/或原发性胆汁性肝硬化的方法，该方法包括向有相应需要的受试者施用包含二十碳五烯酸或其衍生物的药物组合物。作为修饰的胆汁酸的FXR激动剂，奥贝胆酸处于对于原发性胆汁性肝硬化的III期临床试验中。该药物的使用已经被报告通常与诸如瘙痒的副作用相关。

熊去氧胆酸(UDCA，Ursodiol)是对于原发性胆汁性肝硬化最常用的治疗。它是作为肠细菌代谢副产物的次级胆汁酸中的一种。该药物被认为有助于减少胆汁淤积并且改善血液测试结果(肝功能测试)。然而，它对症状具有最小限度的作用，并且其是否改善预后是有争议的。为了缓解由在循环中的胆汁酸(正常将被肝去除)引起的发痒，可以给原发性胆汁性肝硬化患者开消胆胺(胆汁酸螯合剂)。该剂可以有助于吸收肠中的胆汁酸来消除而不是重新进入血流。替代剂包括司坦唑醇、纳曲酮和利福平。

奥贝胆酸(OCA，Ocaliva)是半合成胆汁酸类似物，其正在经历针对特定的肝和胃肠道状况的2期和3期研究中的开发。FDA于2016年5月27日授予Ocaliva加速批准，用于与熊去氧胆酸(UDCA)组合在对UDCA反应不足的成人中治疗原发性胆汁性胆管炎(PBC)，或作为单一疗法在无法耐受UDCA的成人中治疗原发性胆汁性胆管炎。此外，NASH患者中的2期试验表明，施用OCA减少肝炎症和纤维化的标志物，并且增加胰岛素敏感性。

WO 2014/197738和WO 2016/094570涉及小分子化合物，其公开为肌成纤维细胞转分化和活化的抑制剂。建议用于治疗尤其是脂肪肝的药物和组合在例如WO 2016/112305和EP2632925(乙酰CoA羧化酶抑制剂)以及WO 2016/154258(双重PPARδ/γ激动剂)中公开。一些公开的化合物被建议与多种其他药物组合使用。

许多患者对纤维化紊乱的可用的治疗没有反应，并且长期治疗受到毒性和副作用的限制。因此，仍然需要开发旨在减少纤维化特别是肝纤维化的治疗形式。开发用于已建立的肝硬化和门静脉高血压以及用于减轻纤维化的安全且有效的治疗将是非常有益的。

发明概述

脂肪酸胆汁酸缀合物

脂肪酸胆汁盐缀合物，也被称为脂肪酸胆汁酸缀合物(FABAC)，是可以用于改善与胆汁酸或胆固醇代谢相关的状况的合成分子家族。FABAC被认为降低血液胆固醇浓度，降低肝脂肪水平以及溶解胆结石(Gilat等人,Hepatology 2003；38:436-442；和Gilat等人,Hepatology 2002；35:(597-600)。FABAC包括3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸，也称为Aramchol^TM。

美国专利6,384,024、6,395,722、6,589,946公开了某些FABAC以及其在溶解胆汁中的胆固醇胆结石和治疗动脉硬化中的用途。美国专利7,501,403、8,975,246以及8,110,564中公开了这些和另外的FABAC，其用于治疗脂肪肝、降低血液胆固醇水平和治疗高血糖症、糖尿病、胰岛素抵抗以及肥胖。FABAC的另外的治疗用途在Safadi等人(ClinGastroenterol Hepatol.2014年12月；12(12):2085-91)中以及在WO 2015/019358和WO2015/019359中公开。WO 2015/083164中公开了某些FABAC的胺盐。

本发明涉及纤维化包括肝纤维化的治疗、抑制和减少。更特别地，本发明的实施方案提供了可用于治疗和抑制纤维化紊乱、与非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)相关的肝纤维化状况的组合物和方法，采取了3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐的使用。在其他实施方案中，预期由接触肝毒性化学物质或由机械性梗阻引起的肝纤维化状况的治疗和抑制。本发明提供用于治疗患有肝纤维化的人类受试者的肝纤维化的方法，该方法包括向受试者施用每日剂量的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐，以便提供所述Aramchol^TM的全身性暴露，其中平均AUC_0-12在约40,000ng/ml.h至约90,000ng/ml.h之间。在一些实施方案中，平均AUC_0-12为约55,000ng/mL.h。

本发明还提供用于治疗患有肝纤维化的人类受试者的肝纤维化的方法，该方法包括向受试者施用每日剂量的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐，以便提供所述Aramchol^TM的全身性暴露，其中平均AUC_0-24在约80,000ng/ml.h至约180,000ng/ml.h之间。

在一些实施方案中，平均AUC_0-24为约110,000ng/mL.h。

本发明还提供用于治疗患有肝纤维化的人类受试者的肝纤维化的方法，该方法包括向受试者施用每日剂量的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐，以便提供所述Aramchol^TM的全身性暴露，其中每24h的C_平均在约3000ng/ml至约7000ng/ml之间。

在一些实施方案中，所述每24h的C_平均为约4500ng/mL。

在一种实施方案中，本发明提供用于治疗患有肝纤维化的人类受试者的肝纤维化的方法，该方法包括向受试者施用在400mg和900mg之间的每日剂量的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐，所述剂量以每日至少两次的剂量方案施用，从而治疗所述受试者的肝纤维化。在另一种实施方案中，每日剂量量为600mg或800mg。在另一种实施方案中，每次施用的剂量为300mg或400mg。在另一种实施方案中，Aramchol^TM每日剂量为600mg，并且其每日施用两次，其中每次施用的剂量为300mg。在另一种实施方案中，每12小时向受试者施用300mg的Aramchol^TM。在另一种实施方案中，人类受试者患有非酒精性脂肪肝病(NAFLD)。在另一种实施方案中，人类受试者具有至少1的气球样变评分。在另一种实施方案中，人类受试者具有至少1的炎症评分。在另一种实施方案中，人类受试者具有至少1的脂肪变性评分。在另一种实施方案中，人类受试者具有至少1的气球样变评分、至少1的炎症评分和至少1的脂肪变性评分。在另一种实施方案中，人类受试者患有II型糖尿病或前驱糖尿病。在另一种实施方案中，人类受试者患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。在另一种实施方案中，人类受试者未患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。

在另一种实施方案中，该方法还包括受试者的NAFLD没有如由活动度(NAS)评分所定义的恶化。在另一种实施方案中，该方法还包括受试者的脂肪变性、活动度和纤维化(SAF)活动度评分没有恶化。在另一种实施方案中，该方法还包括减少所述受试者中的肝脂肪。在另一种实施方案中，该方法还包括改善受试者的脂肪变性。在另一种实施方案中，该方法还包括改善受试者的气球样变。在另一种实施方案中，该方法还包括NAFLD消退(resolution)。在另一种实施方案中，该方法还包括NAFLD消退而没有纤维化的恶化。在另一种实施方案中，该方法还包括纤维化的减少而没有NAFLD恶化。在另一种实施方案中，该方法还包括降低所述受试者中的ALT水平。在另一种实施方案中，该方法还包括降低所述受试者中的AST水平。在另一种实施方案中，该方法还包括降低所述受试者中的HbAlc水平。在另一种实施方案中，该方法还包括受试者没有进展为肝硬化。在另一种实施方案中，该方法还包括抑制非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和/或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的进展。在另一种实施方案中，人类受试者患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，并且该方法还包括抑制所述受试者的NASH的进展。在另一种实施方案中，人类受试者患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，并且该方法还包括受试者中的NASH消退。

在一种实施方案中，本发明提供用于抑制患有非酒精性脂肪肝病且具有零的纤维化评分的人类受试者的肝纤维化发展的方法，该方法包括向受试者施用在400mg和900mg之间的每日剂量的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐，所述剂量以每日至少两次的剂量方案施用，从而抑制所述受试者的肝纤维化的发展。在另一种实施方案中，每日剂量量为600mg或800mg。在另一种实施方案中，每次施用的剂量为300mg或400mg。在另一种实施方案中，Aramchol^TM每日剂量为600mg，并且其每日施用两次，其中每次施用的剂量为300mg。在另一种实施方案中，每12小时向受试者施用300mg的Aramchol^TM。在另一种实施方案中，人类受试者具有至少4、至少5、至少6或至少7的NAFLD活动度(NAS)评分。在另一种实施方案中，人类受试者具有至少1的气球样变评分。在另一种实施方案中，人类受试者具有至少1的炎症评分。在另一种实施方案中，人类受试者具有至少1的脂肪变性评分。在另一种实施方案中，人类受试者具有至少1的气球样变评分、至少1的炎症评分和至少1的脂肪变性评分。在另一种实施方案中，人类受试者患有II型糖尿病或前驱糖尿病。在另一种实施方案中，人类受试者患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。在另一种实施方案中，人类受试者未患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。

在另一种实施方案中，该方法还包括受试者的NAFLD没有如由活动度(NAS)评分所定义的恶化。在另一种实施方案中，该方法还包括受试者的脂肪变性、活动度和纤维化(SAF)活动度评分没有恶化。在另一种实施方案中，该方法还包括减少所述受试者中的肝脂肪。在另一种实施方案中，该方法还包括改善受试者的脂肪变性。在另一种实施方案中，该方法还包括改善受试者的气球样变。在另一种实施方案中，该方法还包括NAFLD消退。在另一种实施方案中，该方法还包括NAFLD消退而没有纤维化的恶化。在另一种实施方案中，该方法还包括纤维化的减少而没有NAFLD恶化。在另一种实施方案中，该方法还包括降低所述受试者中的ALT水平。在另一种实施方案中，该方法还包括降低所述受试者中的AST水平。在另一种实施方案中，该方法还包括降低所述受试者中的HbAlc水平。在另一种实施方案中，该方法还包括受试者没有进展为肝硬化。在另一种实施方案中，该方法还包括抑制非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和/或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的进展。在另一种实施方案中，人类受试者患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，并且该方法还包括抑制所述受试者的NASH的进展。在另一种实施方案中，人类受试者患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，并且该方法还包括受试者中的NASH消退。

在一种实施方案中，本发明提供用于治疗患有纤维化的人类受试者的除肝纤维化之外的纤维化的方法，该方法包括向受试者施用在400mg和900mg之间的每日剂量的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐，所述剂量以每日至少两次的剂量方案施用，从而治疗所述受试者的纤维化，其中所述纤维化由选自由以下组成的组的因素引起：肺纤维化、心脏纤维化、肾纤维化、皮肤纤维化、眼纤维化、粘膜纤维化、中枢神经系统纤维化、骨或骨髓纤维化、内分泌器官纤维化、胃肠系统纤维化、纵隔纤维化、纤维蛋白形成后纤维化、增生性纤维化、腹膜后纤维化、胰腺纤维化或与自身免疫性疾病相关的纤维化。

在另一种实施方案中，根据本发明的方法还包括施用治疗有效量的药物组合物，该药物组合物包含至少一种选自由以下组成的组的化合物：

a)二十碳五烯酸乙酯(EPA-E)、二十碳五烯酸(EPA)及其药学上可接受的酰胺、盐、酯和磷脂；

b)单独的或与一种或更多种另外的治疗剂组合的乙酰CoA羧化酶(ACC)的抑制剂；

c)盐酸吡格列酮或对映异构体纯的富含氘的吡格列酮；

d)过氧化物酶体增殖物活化受体(PPAR)δ和γ双重激动剂；和

e)血管紧张素II受体拮抗剂、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、胱天蛋白酶抑制剂、组织蛋白酶B抑制剂、CCR2趋化因子拮抗剂、CCR5趋化因子拮抗剂、氯通道刺激剂、胆固醇增溶剂、二酰基甘油O-酰基转移酶1(DGAT1)抑制剂、二肽基肽酶IV(DPPIV)抑制剂、法尼醇X受体(FXR)激动剂诸如奥贝胆酸和Px-104、FXR/TGR5双重激动剂、半乳糖凝集素-3抑制剂诸如LIPC-1010和GR-MD-02、胰高血糖素样肽(GLPI)激动剂、谷胱甘肽前体、丙型肝炎病毒NS3蛋白酶抑制剂、HMG CoA还原酶抑制剂、11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD I)抑制剂、IL-1β拮抗剂、IL-6拮抗剂、IL-10激动剂、IL-17拮抗剂、回肠钠胆汁酸协同转运蛋白抑制剂、瘦素类似物、5-脂氧合酶抑制剂、LPL基因刺激剂、赖氨酰氧化酶同源物2(LOXL2)抑制剂、PDE3抑制剂、PDE4抑制剂、磷脂酶C(PLC)抑制剂、PPARα激动剂、PPARγ激动剂诸如罗格列酮和吡格列酮、二甲双胍、己酮可可碱、维生素E、硒、ω-3脂肪酸和甜菜碱、PPAR8激动剂、Rho相关蛋白激酶2(ROCK2)抑制剂、钠葡萄糖转运蛋白-2(SGLT2)抑制剂、硬脂酰CoA去饱和酶I抑制剂、甲状腺激素受体β激动剂、肿瘤坏死因子α(TNFα)配体抑制剂、转谷氨酰胺酶抑制剂、转谷氨酰胺酶抑制剂前体、PTPib抑制剂、ASKI抑制剂和血管粘附蛋白-1抑制剂诸如PXS4728A、二甲双胍、GR-MD-02、半胱胺酒石酸氢盐、simtuzumab、emricasan、GFT-505、CER-002、KD3010、KD3020、MBX8025、LUM002、RP-103和cenicriviroc。

附图简述

图1.通过宏观评价证明Aramchol^TM对肝硬化的作用。图1A-盐水对照；图1B-10周期间每周两次用TAA(20mg/100gr体重)的处理；图1C-用TAA和Aramchol^TM 1mg/kg的处理；图1D-用TAA和Aramchol^TM 5mg/kg的处理。

图2.通过显微评价(在Masson Goldner染色后)证明Aramchol^TM对肝纤维化的作用。图2A-平均纤维化评分(TAA-黑色，Aramchol^TM-白色，OCA-灰色)；图2B-代表性样品(仅TAA-左图；TAA和Aramchol^TM 1mg/kg-中图；TAA和Aramchol^TM 5mg/kg-右图)。

图3.描绘Aramchol^TM对LX-2人类肝星状细胞中COL1A1表达的作用。“对照S1、对照S2和对照S3”代表三个单独实验中的对照(经盐水处理的细胞)；“A S1、A S2和A S3”代表这些实验中经Aramchol^TM处理的细胞的结果。

图4.描绘Aramchol^TM对LX-2人类肝星状细胞中PPAR-γ表达的作用。“对照S1、对照S2和对照S3”代表三个单独实验中的对照(经盐水处理的细胞)；“A S1、A S2和A S3”代表这些实验中经Aramchol^TM处理的细胞的结果。

图5.描绘与DMSO对照相比，Aramchol^TM对由LX-2人类肝星状细胞产生胶原的作用。

图6.描绘Aramchol^TM对0.1MCD饮食中肝脂肪变性的作用。图6A-使用苏丹III的组织学染色；图6B-经苏丹III染色的细胞的定量。

图7.描绘Aramchol^TM对0.1MCD饮食中巨噬细胞活化和浸润的作用。图7A-组织学染色-F4/80和CD64；图7B-F4/80和CD64阳性细胞的定量。

图8.描绘Aramchol^TM对0.1MCD饮食中纤维化的作用(组织学-天狼星红)。图8A-使用天狼星红的组织学染色；图8B-经天狼星红染色的细胞的定量。

图9.使用来自0.1MCD小鼠的肝提取物描绘Aramchol^TM对胶原产生的作用。

图10A和图10B描绘Aramchol^TM对0.1MCD小鼠肝生化的作用。图10A-对照(灰色)和经Aramchol^TM处理(黑色)的0.1MCD小鼠的肝中代谢物的定量；图10B-相关肝生化途径的示意图。

图11描绘在健康志愿者中100mg、300mg和900mg剂量相对于30mg剂量的生物利用度。在跨30mg-900mg的范围，健康志愿者中相对的口服生物利用度随着增加的剂量而降低。

图12A和图12B描绘按研究分组的AUC与剂量(图12A)和AUC/剂量与剂量(图12B)。以圆形表示的对于IIb期研究的AUC是由在D84观察到的C_最小*24h估计的。

图13A描绘预测浓度与观察浓度(直线代表剂量水平和研究)。图13B描绘给药后的预测浓度-时间与观察浓度-时间(圆形＝观察到的，实线＝模型)。图13C描绘数据和模型参数。

图14A是使用患者在300mg QD的观察数据拟合的模型参数(图14B)模拟的300mgBID剂量的血浆暴露(T_延迟是吸收的延迟；V/F是中心房室的体积除以生物利用度；C1/F是从房室的清除率除以生物利用度；并且Ka是吸收入房室的速率)。

图15A和图15B呈现使用患者在300mg QD的观察数据拟合的模型参数(图15B)模拟的600mg QD剂量的血浆暴露(图15A)，其中从健康志愿者中在300mg和900mg之间的非线性暴露估计的生物利用度降低75％(导致更高的V/F和C1/F)，(T_延迟是吸收延迟；V/F是中心房室的体积除以生物利用度；C1/F是从房室中的清除率除以生物利用度；并且Ka是吸收入房室的速率)。

图16A和图16B描绘接受400mg、600mg剂量的Aramchol^TM和安慰剂的人类受试者中肝脂肪的减少。图16A是肝脂肪相对于基线的平均绝对变化；图16B是MRI响应者分析：相对于基线减少≥5％的绝对变化。肝脂肪与安慰剂相比显著降低。减少≥5％的绝对变化显示出剂量响应模式。

图17A和图17B描绘接受400mg、600mg剂量的Aramchol^TM和安慰剂的人类受试者中气球样变的减少。图17A是气球样变改善(≥1分)；并且图17B是研究结束时的气球样变0。Aramchol^TM 600mg展示了对气球样变的统计学上显著的作用。

图18A和图18B描绘在接受400mg、600mg剂量的Aramchol^TM和安慰剂的人类受试者中展示的NASH消退而没有纤维化的恶化。图18A是NASH消退而没有纤维化的恶化；并且图18B是NASH消退。显著更多的用Aramchol^TM 600mg处理的患者以剂量响应模式显示出NASH消退而没有纤维化的恶化。

图19A和图19B描绘在接受400mg、600mg剂量的Aramchol^TM和安慰剂的人类受试者中展示的纤维化改善和进展为肝硬化。图19A描绘纤维化改善(≥1期)而没有NASH的恶化；并且图19B描绘进展为肝硬化。更多的患者以剂量响应模式显示出纤维化改善而没有NASH的恶化。用Aramchol^TM 600mg的情况下，较少的患者进展为肝硬化。

图20A和图20B描绘如在接受400mg、600mg剂量的Aramchol^TM和安慰剂的人类受试者中展示的Aramchol^TM对ALT和AST水平的影响。图20A描绘ALT水平相对于基线的变化(U/L)；并且图20B描绘AST水平相对于基线的变化(U/L)。与安慰剂相比，400mg剂量和600mg剂量都以剂量响应的方式显著降低受试者中的ALT、AST水平。

图21A和图21B描绘Aramchol^TM如何下调HSC中的SCD-1mRNA和纤维化基因(fibrogenic gene)并且上调PPARγmRNA。基于RT-PCR(N＝3)*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。

图22A和图22B描绘Aramchol^TM如何下调HSC中的SCD-1。图22A和图22B分别描绘用Aramchol^TM处理持续24hr或48hr的HSC中下调的SCD-1蛋白的蛋白质印迹和密度测定。(N＝3)*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。

图23描绘通过RNASeq证实用Aramchol^TM处理48hr之后，纤维化基因和SCD-1mRNA的下调以及PPARγmRNA的上调。胆固醇流出调节蛋白ABCA1也被上调。

图24描绘在处理48小时之后，Aramchol^TM不影响原代小鼠肝细胞中的PPARγmRNA表达。(N＝3)*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。

图25A和图25B描绘Aramchol^TM如何下调HSC中的胆固醇生物合成和胶原形成。LX-2细胞在处理24小时(图25A)或48小时(图25B)之后的基因集(Gene Set)富集分析。

发明详述

脂肪酸胆汁酸缀合物(FABAC)

根据本发明的实施方案，本发明的组合、组合物、方法和包装可以包含呈其游离酸形式的Aramchol^TM。根据本发明的实施方案，Aramchol^TM呈其盐形式。盐可以是基于胺的盐。基于胺的盐可以选自由葡甲胺、赖氨酸和氨丁三醇盐组成的组。

本发明的其他实施方案涉及采取了脂肪酸胆汁酸缀合物(FABAC)或其盐的使用的组合物、方法和包装。根据一些实施方案，FABAC具有式I：

W-X-G (I)

其中G表示胆汁酸或其胆汁盐基团；W表示一个或两个具有6个-22个碳原子的脂肪酸基团；并且X表示选自由杂原子、直接C-C键和C＝C键组成的组的键合成员；每种可能性代表本发明单独的实施方案。

根据一些实施方案，键合成员选自由以下组成的组：NH、P、S、O和直接C-C或C＝C键；每种可能性代表本发明单独的实施方案。根据一些实施方案，键合成员是NH。

根据一些实施方案，所述一个或两个脂肪酸基团中的每一个是选自由以下组成的组的脂肪酸的基团：二十烷醇酸(arachidylic acid)、硬脂酸、山嵛酸、棕榈酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸和油酸；每种可能性代表本发明单独的实施方案。根据一些实施方案，所述一个或两个脂肪酸基团是二十烷醇酸的基团；每种可能性代表本发明单独的实施方案。

根据一些实施方案，W表示两个脂肪酸基团，每个独立地包含6个-22个碳原子；并且其中每个所述脂肪酸基团独立地结合于键合成员X，该键合成员X选自由杂原子、直接C-C键和C＝C键组成的组。根据一些实施方案，W表示单个脂肪酸基团。

根据一些实施方案，胆汁酸选自由以下组成的组：胆酸、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸、去氧胆酸、石胆酸以及其衍生物；每种可能性代表本发明单独的实施方案。在另一种实施方案中，胆汁酸是胆酸、鹅去氧胆酸或去氧胆酸。在另一种实施方案中，胆汁酸不是熊去氧胆酸和石胆酸。根据一些实施方案，胆汁酸是胆酸。

适应症。

本发明部分地基于以下令人惊讶的发现：Aramchol^TM独立于其对脂肪肝和脂肪变性报告的活性而发挥了有效的抗纤维化作用，并且在多种实验模型中减少和抑制纤维化的发展。特别地，在体内硫代乙酰胺(TAA)模型中，用Aramchol^TM(5mg/kg)处理显著抑制了毒素诱导的肝硬化、坏死和肝纤维化的发展。还发现Aramchol^TM出乎意料地优于奥贝胆酸(OCA)，奥贝胆酸在测试实验条件下没有引起这些参数的统计学上显著的降低。此外，Aramchol^TM经由PPARγ上调而显著减少LX-2人类肝星状细胞中的COL1A1表达。令人惊讶地，Aramchol^TM被发现在逆转已建立的纤维化和减少胶原的产生特别是在星状细胞中产生的方面是有效的。

因此，独立于Aramchol^TM对患有NAFLD的受试者中的肝代谢报告的活性，本文令人惊讶地发现Aramchol^TM在治疗新患者群体和患者亚群方面是有效的，诸如在治疗尚未发展纤维化的患有NAFLD或NASH的患者方面是有效的。此外，发现Aramchol^TM在以下方面是有效的：治疗非肝纤维化和以环境和/或免疫病因学的纤维化为特征的各种状况、患有NAFLD或NASH的患者的肝纤维化，治疗患有NAFLD或NASH和晚期纤维化(即2期或3期纤维化)的患者的肝纤维化，治疗患有肝硬化(即4期纤维化)的患有NAFLD或NASH的患者的肝纤维化，治疗由接触药物、毒素或手术引起的肝纤维化并且特别是缓解肝硬化，治疗纤维化而没有NAFLD或NASH的恶化，治疗纤维化而没有进展为肝硬化。本发明有利地提供了对这些新患者群体的治疗，具有增强的功效和/或安全性以及最小化的副作用。

在多种实施方案中，纤维化可以是肺纤维化(例如，特发性肺纤维化、弥漫性间质性肺纤维化、胸膜纤维化和与哮喘相关的纤维化、纤维性发育不良、囊性纤维化)、心脏纤维化(例如心内膜心肌纤维化和与心血管疾病相关的纤维化)、肾纤维化(例如与肾衰竭相关)、皮肤纤维化(例如瘢痕疙瘩)、眼纤维化、粘膜纤维化、中枢神经系统纤维化、骨或骨髓纤维化、内分泌器官(例如胰腺)纤维化、胃肠系统纤维化、纵隔纤维化、纤维蛋白形成后纤维化、增生性纤维化、腹膜后纤维化、胰腺纤维化、与自身免疫性疾病(例如系统性红斑狼疮(SLE)、舍格伦综合征(Sjogren syndrome)或伴有硬皮病的弥漫性系统性硬化症)相关的纤维化。

例如，心内膜心肌纤维化是特发性类型的心肌病，其在非洲各地流行且在其他地区罕见，特征是心脏肥大，伴有可以延伸至涉及内心肌的密集白色纤维组织的心内膜显著增厚，以及充血性心力衰竭。

特发性肺纤维化(例如弥漫性特发性间质性纤维化、弥漫性间质性肺纤维化)是肺泡壁的慢性炎性进行性纤维化，伴有稳定的进行性呼吸困难，导致缺氧或右心衰竭引起的死亡。大多数病例具有未知来源，尽管有些被认为是由尘肺病、过敏性肺炎、硬皮病和其他疾病引起的。

纵隔纤维化的特征是纵隔上部中硬的白色纤维组织的发展，有时阻塞空气通道和大血管；也被称为纤维化或纤维性纵隔炎。

胸膜纤维化的特征是胸膜的纤维化，使得肺的部分或全部变为被不可扩张的纤维组织的斑块或厚层覆盖。更广泛纤维化的形式被称为纤维胸。

纤维蛋白形成后纤维化发生在纤维蛋白已经沉积的组织中。

增生性纤维化指的是在原始的致病因素已经停止作用之后，纤维要素(fibrouselements)继续增殖的状况。

腹膜后纤维化(奥蒙德病(Ormond disease)，输尿管周围纤维化)的特征是纤维组织在腹膜后间隙沉积，这产生不明确的腹部不适，并且经常引起输尿管阻塞，伴随由此导致的肾盂积水和受损的肾功能，这可能导致肾衰竭。

在多种实施方案中，本发明提供用于抑制患有非酒精性脂肪肝病并且具有零的纤维化评分的受试者的肝纤维化发展的方法，该方法包括向受试者施用每日大于300mg的Aramchol^TM或其药学上可接受的盐，从而抑制所述受试者的肝纤维化发展。在多种实施方案中，被治疗的人类受试者患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。在一些实施方案中，Aramchol^TM每日剂量在约400mg和900mg之间。在一些实施方案中，Aramchol^TM以每日至少两次的剂量方案施用。在一些实施方案中，向受试者施用的每次Aramchol^TM剂量为300mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg、850mg或900mg，每日一次、两次或三次；每一种代表根据本发明单独的实施方案。在一种实施方案中，向受试者施用Aramchol^TM，每日两次，以每次300mg的剂量。在一种实施方案中，向受试者施用Aramchol^TM，每日三次，以每次300mg的剂量。在一种实施方案中，向受试者施用Aramchol^TM，每日两次，以每次400mg的剂量。在一种实施方案中，向受试者施用Aramchol^TM，每日三次，以每次400mg的剂量。

本发明还提供用于治疗患有肝纤维化的人类受试者的肝纤维化的方法，该方法包括向受试者施用每日大于300mg的Aramchol^TM或其药学上可接受的盐，从而治疗所述受试者的肝纤维化。在实施方案中，被治疗的人类受试者患有非酒精性脂肪肝病(NAFLD)。在实施方案中，被治疗的人类受试者患有非酒精性脂肪肝病(NAFLD)。在实施方案中，被治疗的人类受试者患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。在一些实施方案中，Aramchol^TM每日剂量在约400mg和900mg之间。在一些实施方案中，Aramchol^TM以每日至少两次的剂量方案施用。在一些实施方案中，向受试者施用的每次Aramchol^TM剂量为300mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg、850mg或900mg，每日一次、两次或三次；每一种代表根据本发明单独的实施方案。在一种实施方案中，向受试者施用Aramchol^TM，每日两次，以每次300mg的剂量。在一种实施方案中，向受试者施用Aramchol^TM，每日三次，以每次300mg的剂量。在一种实施方案中，向受试者施用Aramchol^TM，每日两次，以每次400mg的剂量。在一种实施方案中，向受试者施用Aramchol^TM，每日三次，以每次400mg的剂量。

在多种实施方案中，本发明提供用于治疗受试者的纤维化的方法。

在多种实施方案中，纤维化不是肝纤维化。

本发明还提供用于治疗患有肝纤维化的人类受试者的肝纤维化的方法，该方法包括向受试者施用每日大于300mg的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐，从而治疗所述受试者的肝纤维化。

药物的暴露和吸收受到其生物利用度的限制，生物利用度通常由药物的溶解度和渗透性决定。本文基于建模和模拟证明，Aramchol^TM的两剂量方案(BID)预期增加药物的生物利用度并因此增加其暴露，Aramchol^TM的两剂量方案即给定量的Aramchol^TM(例如，600mg)以两个剂量(即，每次300mg)施用，每天两次，而不是每天一次的单个剂量(即，600mg)。因此，建议拆分Aramchol^TM的剂量将对受试者有益。因此，根据本发明，以分剂量方案向受试者施用每日量的Aramchol^TM，分剂量方案包括但不限于：两剂量方案(每日两次，BID)、三剂量方案(每日三次，TID)、四剂量方案或五剂量方案。

因此，本发明提供用于治疗患有肝纤维化的人类受试者的肝纤维化的方法，该方法包括向受试者施用100mg、300mg、400mg、600mg或900mg的每日剂量的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐，从而治疗所述受试者的肝纤维化。在一些实施方案中，Aramchol^TM每日剂量在约400mg和900mg之间。在一些实施方案中，Aramchol^TM以每日至少两次的剂量方案施用。在一些实施方案中，向受试者施用的每次Aramchol^TM剂量为300mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg、850mg或900mg，每日一次、两次或三(3)次；每一种代表根据本发明单独的实施方案。在又一实施方案中，每日两次施用300mg剂量的Aramchol^TM。在又一实施方案中，每日两次施用400mg剂量的Aramchol^TM。在又一实施方案中，每日三次施用300mg剂量的Aramchol^TM。

在多种实施方案中，被治疗的人类受试者患有非酒精性脂肪肝病(NAFLD)。

在多种实施方案中，被治疗的人类受试者患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。

在多种实施方案中，人类受试者患有NAFLD但未患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。在多种实施方案中，人类受试者具有至少4的NAFLD活动度(NAS)评分。在多种实施方案中，人类受试者具有至少5、至少6或至少7的NAFLD活动度(NAS)评分。在多种实施方案中，人类受试者具有至少1的气球样变评分、至少1的炎症评分和至少1的脂肪变性评分。在多种实施方案中，人类受试者患有气球样变。在其他实施方案中，人类受试者具有高水平的ALT、AST、HbAlc或其任何组合。在其他实施方案中，患有纤维化的人类受试者已经进展为肝硬化。

在多种实施方案中，人类受试者患有(NASH)。在多种实施方案中，人类受试者具有至少4的NAFLD活动度(NAS)评分。在多种实施方案中，人类受试者具有至少5、至少6或至少7的NAFLD活动度(NAS)评分。在多种实施方案中，人类受试者具有至少1的气球样变评分、至少1的炎症评分和至少1的脂肪变性评分。在多种实施方案中，人类受试者患有气球样变。在其他实施方案中，人类受试者具有高水平的ALT、AST、HbAlc或其任何组合。在其他实施方案中，患有纤维化的人类受试者已经进展为肝硬化。

在多种实施方案中，人类受试者患有NAFLD但未患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。

在多种实施方案中，人类受试者患有II型糖尿病或前驱糖尿病。前驱糖尿病要求以下3个标准之一：空腹血糖>100mg/dl(5.5mmol/l)或75g OGTT后的2hPG>140mg/dl(7.8mmol/l)或HbA1c>5.7％。可以根据研究者的自行决定重复HbA1c。

在多种实施方案中，受试者的肝纤维化为2期、3期或4期纤维化。在多种实施方案中，受试者的肝纤维化为1期纤维化。在多种实施方案中，受试者的肝纤维化为1a期、1b期或1c期纤维化。

在多种实施方案中，人类受试者具有高脂肪和高卡路里的饮食。如本文使用的，高脂肪、高卡路里饮食含有每天至少4000卡路里，其中约50％来自脂肪。在多种实施方案中，人类受试者抵抗生活方式干预。在多种实施方案中，人类受试者抵抗饮食干预。在多种实施方案中，人类受试者初次进行Aramchol^TM治疗。在多种实施方案中，受试者初次进行NAFLD治疗。

本发明还涉及纤维化特别是肝纤维化的治疗和减少。本发明提供了可用于治疗肝硬化、门静脉高血压和由接触肝毒性化学物质或由机械性梗阻引起的肝纤维化状况的组合物和方法。根据本发明的组合物和方法采取了3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐的使用。

在一个方面中，提供用于治疗有相应需要的受试者的肝纤维化的方法，所述肝纤维化是由接触肝毒性化学物质或由机械性梗阻引起的，所述方法包括向受试者施用有效量的Aramchol^TM或其药学上可接受的盐，从而治疗所述受试者的肝纤维化。

在另一个方面中，提供用于治疗有相应需要的受试者的肝纤维化的方法，该方法包括向受试者施用有效量的Aramchol^TM或其药学上可接受的盐，条件是纤维化与除了非酒精性肝病和非酒精性脂肪性肝炎以外的紊乱相关。

在另一个方面中，提供用于治疗或抑制有相应需要的受试者的选自由肝硬化和门静脉高血压组成的组的紊乱的方法，该方法包括向受试者施用有效量的Aramchol^TM或其药学上可接受的盐。

在另一个方面中，提供治疗或抑制有相应需要的受试者的纤维化疾病或状况的方法，该方法包括向受试者施用有效量的Aramchol^TM或其药学上可接受的盐，从而治疗或抑制受试者的疾病或状况，其中所述疾病或状况选自由以下组成的组：酒精性肝病、病毒性肝炎、寄生虫性肝炎、药物诱导的肝炎、毒素诱导的肝炎、原发性胆汁性肝硬化和先天性肝纤维化。

为FABAC治疗建议的已知适应症包括美国专利6,384,024、6,395,722、6,589,946、7,501,403、8,110,564和8,975,246中公开的适应症，如本文所详述，并且在实施方案中明确排除。在一些实施方案中，将通过本发明的方法治疗的受试者未患有另外的医学状况。

此外，根据本发明的方面，提供用于治疗有相应需要的受试者的肝纤维化的方法，所述肝纤维化是由接触肝毒性化学物质或由机械性梗阻引起的，所述方法包括向受试者施用有效量的Aramchol^TM或其药学上可接受的盐，从而治疗所述受试者的肝纤维化。

根据本发明的实施方案，肝纤维化由选自由以下组成的组的因素引起：慢性酒精中毒、营养不良、血色素沉着病、被动性充血、暴露于毒物或毒素、暴露于药物、免疫反应、遗传决定的对某种物质的敏感和感染。

在其他实施方案中，肝纤维化由选自由以下组成的组的因素引起：病毒性肝炎、梅毒和寄生虫感染。在特定的实施方案中，所述寄生虫感染选自由曼氏血吸虫(Schistosomiasis mansoni)和日本血吸虫(S.japonica)组成的组。在另一种特定的实施方案中，病毒性肝炎与慢性丙型肝炎感染相关。

根据本发明的另一种实施方案，提供用于治疗受试者的肝纤维化的方法，该方法包括向受试者施用有效量的Aramchol^TM或其药学上可接受的盐，条件是纤维化与除了非酒精性肝病和非酒精性脂肪性肝炎以外的紊乱相关。

在多种实施方案中，受试者未被诊断患有脂肪肝。在某些实施方案中，纤维化与选自由自身免疫性肝炎、贮积症(storage)或代谢性肝紊乱、先天性肝纤维化、感染、原发性胆汁性肝硬化和原发性硬化性胆管炎组成的组的紊乱相关；每种可能性代表本发明单独的实施方案。在特定的实施方案中，纤维化与先天性肝纤维化相关，先天性肝纤维化是肝发育紊乱，其特点是形成不规则的纤维组织宽带，该纤维组织宽带含有由无序末端胆管形成的多个囊肿，这导致血管缩窄和门静脉高血压。

与以肝纤维化(贮积症或代谢性肝紊乱)为特征的贮积症或代谢异常相关的疾病的非限制性实例包括α1-抗胰蛋白酶缺乏、铜贮积病(例如，威尔逊氏病)、果糖血症、半乳糖血症、糖原贮积病(特别是III型、IV型、VI型、IX型和X型)、铁过载综合征(血色素沉着病)、脂质异常(例如，戈谢病(Gaucher disease))、过氧化物酶体紊乱(例如，泽尔韦格综合征(Zellweger syndrome))和酪氨酸血症；每种可能性代表本发明单独的实施方案。

以肝纤维化为特征的感染的非限制性实例包括细菌感染(例如，布鲁氏菌病)、寄生虫感染(例如，包虫病)和病毒感染(例如，病毒性肝炎，包括但不限于慢性乙型或丙型肝炎)；每种可能性代表本发明单独的实施方案。在特定的实施方案中，感染是慢性丙型肝炎感染。

根据又一实施方案，纤维化与接触肝毒性化学物质相关，肝毒性化学物质包括但不限于酒精、胺碘酮、氯丙嗪、异烟肼、甲氨蝶呤、甲基多巴、酚丁(oxyphenisatin)和甲苯磺丁脲；每种可能性代表本发明单独的实施方案。在特定的实施方案中，所述物质是酒精。

根据另外的实施方案，纤维化与机械性梗阻相关，例如由于先前的肝手术引起的瘢痕化。

在另一种实施方案中，紊乱与肝星状细胞中的COL1A1和/或PPAR-γ失调相关。在特定的实施方案中，所述紊乱与所述受试者的肝星状细胞中的COL1A1上调和PPAR-γ下调相关。

在另一个方面中，提供用于治疗或抑制有相应需要的受试者的选自由肝硬化和门静脉高血压组成的组的紊乱的方法，该方法包括向受试者施用有效量的Aramchol^TM或其药学上可接受的盐。

在另一种实施方案中，所述纤维化表现为门静脉高血压和/或肝硬化。在特定的实施方案中，所述纤维化表现为肝硬化。

在一种实施方案中，紊乱是肝硬化。在另一种实施方案中，所述紊乱是门静脉高血压。根据一些实施方案，本发明的方法有利地提供了对肝硬化和/或门静脉高血压的现有状况的治疗。因此，根据一些实施方案，所述方法包括确定所述受试者是否患有肝硬化和/或门静脉高血压，以及向患有肝硬化和/或门静脉高血压的受试者施用所述Aramchol^TM或其药学上可接受的盐。根据其他实施方案，所述肝硬化和/或门静脉高血压与本文所描述的紊乱相关；每种可能性代表本发明单独的实施方案。

在其他实施方案中，方法用于抑制或预防肝硬化和/或门静脉高血压的症状。根据各种特定实施方案，方法用于抑制或预防门静脉高血压的症状，包括但不限于静脉曲张出血、腹水和门体静脉脑病。在其他特定的实施方案中，方法用于抑制或预防肝硬化的症状，包括但不限于肝功能不全和致死性肝衰竭；每种可能性代表本发明单独的实施方案。

在多种实施方案中，本发明提供治疗或抑制有相应需要的受试者的纤维化疾病或状况的方法，该方法包括向受试者施用有效量的Aramchol^TM或其药学上可接受的盐，从而治疗或抑制受试者的疾病或状况，其中所述疾病或状况选自由以下组成的组：酒精性肝病、病毒性肝炎、寄生虫性肝炎、药物诱导的肝炎、毒素诱导的肝炎、原发性胆汁性肝硬化和先天性肝纤维化。在另一种实施方案中，所述疾病或状况选自由酒精性肝病、寄生虫性肝炎、药物诱导的肝炎和毒素诱导的肝炎组成的组；每种可能性代表本发明单独的实施方案。在另一种实施方案中，所述疾病或状况是慢性的。在一些实施方案中，Aramchol^TM每日剂量在约400mg和900mg之间。在一些实施方案中，Aramchol^TM以每日至少两次的剂量方案施用。在一些实施方案中，向受试者施用的每次Aramchol^TM剂量为300mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg、850mg或900mg，每日一次、两次或三(3)次；每一种代表根据本发明单独的实施方案。

1.1.施用和剂型

根据一些实施方案，待施用的化合物(例如Aramchol^TM)呈包含治疗有效量的所述化合物中的至少一种的组合物(被称为本发明的组合物)的形式。如本文使用的，术语“有效量”意指能够减少和/或减轻如本文所描述的紊乱或症状的化合物的量。当然，根据本发明施用的化合物的特定剂量将由病例周围的特定情况决定，特定情况包括，例如，施用的化合物、施用途径、受试者的生理学状态以及被治疗的状况的严重程度。

本发明提供包含大于300mg的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)的药物，其用于向人类受试者施用，人类受试者包括上文所述的任何人类受试者。

在多种实施方案中，药物包含大于350mg的Aramchol^TM。在多种实施方案中，药物包含在350mg和1200mg之间的Aramchol^TM。在多种实施方案中，药物包含400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg、1100mg或1200mg的Aramchol^TM。在多种实施方案中，药物包含在400mg和1100mg之间、或在500mg和1000mg之间、或在600mg和900mg之间的Aramchol^TM。在多种实施方案中，药物包含400mg或600mg的Aramchol^TM。

在多种实施方案中，药物每日施用。在一些实施方案中，药物每日剂量在约400mg和900mg之间。在一些实施方案中，药物以每日至少两次的剂量方案施用。在多种实施方案中，药物以每次100mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg或900mg的剂量每日一次(QD)、每日两次(BID)或每日三次(TID)施用；每一种代表根据本发明单独的实施方案。在多种实施方案中，药物每日一次(QD)施用。在其他实施方案中，药物每日两次(BID)施用。在多种实施方案中，药物每日三次(TID)施用。

本发明还提供了3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)，其用于以大于300mg的每日剂量向人类受试者施用。在一些实施方案中，药物每日剂量在约400mg和900mg之间。在一些实施方案中，药物以每日至少两次的剂量方案施用。在多种实施方案中，药物以每次100mg、150mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg、850mg或900mg的剂量每日一次(QD)、每日两次(BID)或每日三次(TID)施用；每一种代表根据本发明单独的实施方案。在多种实施方案中，每日剂量为600mg，并且以300mg每次剂量的剂量量每日两次(BID)施用药物。在多种实施方案中，每日剂量为900mg，并且以300mg每次剂量的剂量量每日三次(TID)施用药物。在多种实施方案中，每日剂量为800mg，并且以400mg每次剂量的剂量量每日两次(BID)施用药物。在多种实施方案中，人类受试者是上文所述的任何人类受试者。

在多种实施方案中，Aramchol^TM的每日剂量大于350mg。在多种实施方案中，Aramchol^TM的每日剂量在350mg和1200mg之间。在多种实施方案中，Aramchol^TM的每日剂量为400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg、1100mg或1200mg；每一种代表根据本发明单独的实施方案。在多种实施方案中，Aramchol^TM的每日剂量在400mg和1100mg之间，或在500mg和1000mg之间，或在600mg和900mg之间。在多种实施方案中，Aramchol^TM的每日剂量为每日400mg或600mg。在多种实施方案中，Aramchol^TM的每日剂量为600mg，以每次300mg的两个剂量施用。在多种实施方案中，Aramchol^TM的每日剂量为600mg，以每次200mg的三个剂量施用。在多种实施方案中，Aramchol^TM的每日剂量为900mg，以每次300mg的三个剂量施用。在多种实施方案中，Aramchol^TM的每日剂量为800mg，以每次400mg的两个剂量施用。在多种实施方案中，Aramchol^TM的每日剂量为600mg，以每次300mg的两个剂量施用，一次在早上且一次在晚上。

可以使用任何合适的途径向受试者施用本发明的药物或Aramchol^TM。

根据一些实施方案，合适的施用途径可以是全身途径。根据一些实施方案，施用是全身施用。根据一些实施方案，组合物被配制用于全身施用。

根据另一种实施方案，全身施用是通过肠途径。根据另一种实施方案，通过肠途径施用是口服施用。根据一些实施方案，组合物被配制用于口服施用。

因此，本发明提供用于通过向受试者施用Aramchol^TM来治疗本申请中所述的受试者的方法，其中每日向受试者施用至少350mg的Aramchol^TM。在多种实施方案中，每日向受试者施用在350mg和1200mg之间的Aramchol^TM。在多种实施方案中，每日向受试者施用400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg、1100mg或1200mg的Aramchol^TM。在多种实施方案中，每日向受试者施用在400mg和1100mg之间、或在500mg和1000mg之间、或在600mg和900mg之间的Aramchol^TM。在多种实施方案中，每日向受试者施用400mg或600mg的Aramchol^TM。在多种实施方案中，方法包括每日一次、两次或三次以约150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg的量施用Aramchol^TM；每一种代表根据本发明单独的实施方案。在一些实施方案中，Aramchol^TM每日剂量在约400mg和900mg之间。在一些实施方案中，Aramchol^TM以每日至少两次的剂量方案施用。在多种实施方案中，方法包括每日两次以约150mg至约600mg的量施用Aramchol^TM。在多种实施方案中，方法包括每日两次以约200mg至约450mg的量施用Aramchol^TM。在多种实施方案中，方法包括每日两次以300mg的量施用Aramchol^TM。在多种实施方案中，以每次300mg的两个剂量每日向受试者施用600mg。在多种实施方案中，以每次200mg的三个剂量每日向受试者施用600mg。在多种实施方案中，以每次300mg的两个剂量每日向受试者施用600mg，每12hr一个剂量。

在多种实施方案中，药物或Aramchol^TM在早上、下午或晚上施用。在多种实施方案中，药物或Aramchol^TM在早上和晚上施用。在多种实施方案中，每12小时施用药物或Aramchol^TM。在多种实施方案中，每8小时施用药物或Aramchol^TM。

在多种实施方案中，药物或Aramchol^TM与餐食同时或在餐食的30分钟内施用。

在多种实施方案中，餐食是早餐、午餐或晚餐。在多种实施方案中，餐食是早餐和晚餐。在多种实施方案中，餐食是早餐、午餐和晚餐。

在多种实施方案中，餐食是高脂肪餐。高脂肪餐是其中约500卡路里至600卡路里为脂肪卡路里的餐食。

在多种实施方案中，餐食是高卡路里餐。高卡路里餐是约800卡路里至1000卡路里的餐食。

在多种实施方案中，药物或Aramchol^TM与水一起施用。在多种实施方案中，药物或Aramchol^TM与至少100mL或至少200mL的水一起施用。

在多种实施方案中，Aramchol^TM在至少52周、至少72周、至少96周、至少2年、至少3年或至少4年的过程中施用。

本发明还涉及治疗有效量的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐用于抑制患有非酒精性脂肪肝病且具有零的纤维化评分的人类受试者的肝纤维化发展的用途，包括向受试者施用每日大于300mg的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐，从而抑制所述受试者的肝纤维化发展。在一些实施方案中，Aramchol^TM每日剂量在约400mg和900mg之间。在一些实施方案中，Aramchol^TM以每日至少两次的剂量方案施用。在多种实施方案中，Aramchol^TM以每次100mg、150mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg、850mg或900mg的剂量每日一次(QD)、每日两次(BID)或每日三次(TID)施用；每一种代表根据本发明单独的实施方案。在多种实施方案中，每日剂量为600mg，并且以300mg每次剂量的剂量量每日两次(BID)施用Aramchol^TM。在多种实施方案中，每日剂量为900mg，并且以300mg每次剂量的剂量量每日三次(TID)施用Aramchol^TM。在多种实施方案中，每日剂量为800mg，并且以400mg每次剂量的剂量量每日两次(BID)施用Aramchol^TM。

本发明还提供了3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐，用于抑制患有非酒精性脂肪肝病且具有零的纤维化评分的人类受试者的肝纤维化发展，包括向受试者施用每日大于300mg的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐，从而用于抑制患有非酒精性脂肪肝病且具有零的纤维化评分的人类受试者的肝纤维化发展，包括向受试者施用每日大于300mg的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐，从而抑制所述受试者的肝纤维化发展。在一些实施方案中，Aramchol^TM每日剂量在约400mg和900mg之间。在一些实施方案中，Aramchol^TM以每日至少两次的剂量方案施用。在多种实施方案中，Aramchol^TM以每次100mg、150mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg、850mg或900mg的剂量每日一次(QD)、每日两次(BID)或每日三次(TID)施用；每一种代表根据本发明单独的实施方案。在多种实施方案中，每日剂量为600mg，并且以300mg每次剂量的剂量量每日两次(BID)施用Aramchol^TM。在多种实施方案中，每日剂量为900mg，并且以300mg每次剂量的剂量量每日三次(TID)施用Aramchol^TM。在多种实施方案中，每日剂量为800mg，并且以400mg每次剂量的剂量量每日两次(BID)施用Aramchol^TM。

本发明还提供了药物，其包含3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐，用于抑制患有非酒精性脂肪肝病且具有零的纤维化评分的人类受试者的肝纤维化发展，包括向受试者施用每日大于300mg的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐，从而用于抑制患有非酒精性脂肪肝病且具有零的纤维化评分的人类受试者的肝纤维化发展，包括向受试者施用每日大于300mg的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐，从而抑制所述受试者的肝纤维化发展。在一些实施方案中，Aramchol^TM每日剂量在约400mg和900mg之间。在一些实施方案中，Aramchol^TM以每日至少两次的剂量方案施用。在多种实施方案中，Aramchol^TM以每次100mg、150mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg、850mg或900mg的剂量每日一次(QD)、每日两次(BID)或每日三次(TID)施用；每一种代表根据本发明单独的实施方案。在多种实施方案中，每日剂量为600mg，并且以300mg每次剂量的剂量量每日两次(BID)施用Aramchol^TM。在多种实施方案中，每日剂量为900mg，并且以300mg每次剂量的剂量量每日三次(TID)施用Aramchol^TM。在多种实施方案中，每日剂量为800mg，并且以400mg每次剂量的剂量量每日两次(BID)施用Aramchol^TM。

本发明提供药物包装，其包括a)3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐；以及b)用于以下的使用说明：抑制患有非酒精性脂肪肝病且具有零的纤维化评分的人类受试者的肝纤维化发展，包括向受试者施用每日大于300mg的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐，从而抑制所述受试者的肝纤维化发展。在一些实施方案中，Aramchol^TM每日剂量在约400mg和900mg之间。在一些实施方案中，Aramchol^TM以每日至少两次的剂量方案施用。在多种实施方案中，Aramchol^TM以每次100mg、150mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg、850mg或900mg的剂量每日一次(QD)、每日两次(BID)或每日三次(TID)施用；每一种代表根据本发明单独的实施方案。在多种实施方案中，每日剂量为600mg，并且以300mg每次剂量的剂量量每日两次(BID)施用Aramchol^TM。在多种实施方案中，每日剂量为900mg，并且以300mg每次剂量的剂量量每日三次(TID)施用Aramchol^TM。在多种实施方案中，每日剂量为800mg，并且以400mg每次剂量的剂量量每日两次(BID)施用Aramchol^TM。

根据一些实施方案，口服施用以硬明胶胶囊或软明胶胶囊、丸剂、胶囊、片剂(包括包衣片剂)、糖衣丸、酏剂、悬浮液、液体、凝胶、浆料或糖浆的形式及其控制释放形式。因此，本发明提供以片剂、胶囊或液体形式施用Aramchol^TM的方法。

用于口服施用的合适载体是本领域众所周知的。用于口服使用的组合物可以使用固体赋形剂制备，任选地研磨所得到的混合物，并且根据需要在添加合适的助剂之后加工颗粒混合物，以获得片剂或糖衣丸芯。合适的赋形剂的非限制性实例包括填充剂，诸如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇，纤维素制品，诸如玉米淀粉、小麦淀粉、稻米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素和羧甲基纤维素钠，和/或生理学上可接受的聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。

如果需要，可以添加崩解剂，诸如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或海藻酸或其盐，诸如海藻酸钠。用于以分配器使用的例如明胶的胶囊和药筒可以配制为含有化合物和合适的粉末基质诸如乳糖或淀粉的粉末混合物。

用于口服施用的固体剂型包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在这样的固体剂型中，活性化合物与至少一种惰性的药学上可接受的载体诸如蔗糖、乳糖或淀粉混合。按照常规，这样的剂型还可以包含除惰性稀释剂以外的另外的物质，例如，润滑剂。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可以包含缓冲剂。片剂和丸剂可以另外地用肠溶包衣制备。如本文使用的，术语“肠溶包衣”指的是控制消化系统内组合物吸收位置的包衣。用于肠溶包衣的材料的非限制性实例是脂肪酸、蜡、植物纤维或塑料。

用于口服施用的液体剂型还可以包含辅料，诸如润湿剂、乳化剂和悬浮剂以及增甜剂、调味剂和增香剂。

根据一些实施方案，明确排除用脂肪酸诸如二十碳五烯酸乙酯、二十碳五烯酸及其酰胺、盐和磷脂的伴随治疗(concomitant treatment)。在其他实施方案中，排除用胆汁酸诸如熊去氧胆酸和石胆酸的伴随治疗。在其他实施方案中，排除用维生素D受体激动剂、乙酰CoA羧化酶抑制剂、双重PPARδ/γ激动剂和肌成纤维细胞转分化和活化的抑制剂的伴随治疗。根据有利的实施方案，Aramchol^TM或其药学上可接受的盐用作唯一的活性成分。

根据一些实施方案，组合物在延长的时间段内以若干剂量施用，直至达到了足够的反应。

如本文所公开的，发现Aramchol^TM是出乎意料地有效的治疗剂，即使当在缺乏辅助疗法时作为单一治疗剂使用时，也能够逆转已建立的纤维化并且用于抑制纤维化的发展以及减少肝硬化和星状细胞中的胶原合成。因此，根据本发明方法的有利实施方案，Aramchol^TM或其药学上可接受的盐作为唯一的活性成分施用。在另一种实施方案中，受试者为人类。

在本发明方法的另一种实施方案中，口服施用Aramchol^TM。在本发明方法的另一种实施方案中，Aramchol^TM呈Aramchol^TM游离酸的形式。在本发明方法的另一种实施方案中，Aramchol^TM呈基于胺的盐的形式。在某些特定的实施方案中，盐是葡甲胺、赖氨酸或氨丁三醇Aramchol^TM盐；每种可能性代表本发明单独的实施方案。

1.2.患者结果

根据多种实施方案，本发明提供用于治疗患有肝纤维化的人类受试者的肝纤维化的方法，该方法包括向受试者施用每日大于300mg的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐，从而治疗所述受试者的肝纤维化。在一些实施方案中，Aramchol^TM每日剂量在约400mg和900mg之间。在一些实施方案中，Aramchol^TM以每日至少两次的剂量方案施用。在多种实施方案中，Aramchol^TM以每次100mg、150mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、700mg、750mg、800mg、850mg或900mg的剂量每日一次(QD)、每日两次(BID)或每日三次(TID)施用；每一种代表根据本发明单独的实施方案。在多种实施方案中，每日剂量为600mg，并且以300mg每次剂量的剂量量每日两次(BID)施用Aramchol^TM。在多种实施方案中，每日剂量为900mg，并且以300mg每次剂量的剂量量每日三次(TID)施用Aramchol^TM。在多种实施方案中，每日剂量为800mg，并且以400mg每次剂量的剂量量每日两次(BID)施用Aramchol^TM。

在多种实施方案中，根据本发明的方法还包括减少所述受试者中的肝脂肪。

在多种实施方案中，根据本发明的方法还包括改善受试者的脂肪变性。

在多种实施方案中，根据本发明的方法还包括减少受试者的气球样变。

在多种实施方案中，根据本发明的方法还包括所述受试者中的NAFLD消退。在其他实施方案中，根据本发明的方法还包括所述受试者中的NASH消退。

在多种实施方案中，根据本发明的方法还包括NAFLD消退而没有纤维化的恶化。在多种实施方案中，根据本发明的方法还包括纤维化的减少而没有NAFLD恶化。在多种实施方案中，根据本发明的方法还包括NASH消退而没有纤维化的恶化。在多种实施方案中，根据本发明的方法还包括纤维化的减少而没有NASH恶化。

在多种实施方案中，根据本发明的方法还包括降低所述受试者中的ALT水平。

在多种实施方案中，根据本发明的方法还包括降低所述受试者中的AST水平。

在多种实施方案中，根据本发明的方法还包括降低所述受试者中的HbAlc水平。

在多种实施方案中，根据本发明的方法还包括受试者没有进展为肝硬化。

在多种实施方案中，根据本发明的方法还包括抑制非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和/或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的进展。

在多种实施方案中，根据本发明的方法还包括上文提及的适应症和/或症状的任何组合。

在多种实施方案中，治疗受试者包括受试者的NAFLD活动度(NAS)评分没有恶化。

在实施方案中，治疗受试者包括受试者的脂肪变性、活动度和纤维化(SAF)活动度评分没有恶化。

在多种实施方案中，治疗受试者包括受试者的纤维化评分没有恶化。

在多种实施方案中，没有恶化是从Aramchol^TM的施用开始52周、65周、72周或96周没有恶化。

在多种实施方案中，没有恶化是从Aramchol^TM的施用开始2年、3年或4年没有恶化。

在多种实施方案中，治疗受试者包括改善受试者的NAFLD活动度(NAS)评分。

在多种实施方案中，受试者在Aramchol^TM的施用开始时的NAS评分为至少4，并且受试者的NAS评分的改善为至少2分的改善。

在多种实施方案中，治疗受试者包括受试者的脂肪变性、活动度和纤维化(SAF)活动度评分的改善。

在多种实施方案中，受试者在Aramchol^TM的施用开始时的SAF活动度评分为至少4，并且受试者的SAF活动度评分的改善为至少2分的改善。

在多种实施方案中，治疗受试者包括改善受试者的纤维化评分。

在多种实施方案中，受试者的纤维化评分的改善为1级或大于1级的改善。在多种实施方案中，改善是从Aramchol^TM的施用开始52周、65周、72周或96周的改善。

在多种实施方案中，改善是从Aramchol^TM的施用开始2年、3年或4年的改善。

在多种实施方案中，治疗纤维化包括抑制非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的进展。在多种实施方案中，抑制纤维化包括抑制非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的进展。

在多种实施方案中，抑制NAFLD的进展包括预防进展，或相对于未用Aramchol^TM治疗的患者减少的进展。

在多种实施方案中，人类受试者患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，并且治疗包括抑制NASH的进展。

在多种实施方案中，抑制NASH的进展包括预防进展，或相对于未用Aramchol^TM治疗的患者减少的进展。

在多种实施方案中，治疗包括预防从非酒精性脂肪肝病(NAFLD)到NASH的进展。

在多种实施方案中，改善进展是从Aramchol^TM的施用开始2周、4周、8周、24周、40周、52周、65周、72周或96周的进展。

在多种实施方案中，改善进展是从Aramchol^TM的施用开始2年、3年或4年的进展。

在多种实施方案中，人类受试者患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，并且治疗包括受试者中的NASH消退。

在多种实施方案中，NASH消退包括人类受试者具有0的气球样变评分和0或1的炎症评分。

在多种实施方案中，治疗包括从Aramchol^TM的施用开始52周、72周或96周受试者中的NASH消退。

在多种实施方案中，治疗包括从Aramchol^TM的施用开始2年、3年或4年受试者中的NASH消退。

在多种实施方案中，治疗包括相对于Aramchol^TM的施用开始时的水平，受试者中的肝甘油三酯的水平的降低。

在多种实施方案中，治疗包括受试者中的肝甘油三酯与水的比率相对于Aramchol^TM的施用开始时的比率的降低。

在多种实施方案中，肝甘油三酯与水的比率降低大于10％。

在多种实施方案中，肝甘油三酯与水的比率降低10％至40％。

在多种实施方案中，肝甘油三酯与水的比率降低15％至35％。

在多种实施方案中，肝甘油三酯与水的比率降低20％至30％。

在多种实施方案中，根据本发明的方法包括：相对于Aramchol^TM的施用开始时的水平或比率，在受试者中

a.血红蛋白A1C或HOMA-IR的水平的降低；

b.纤维蛋白原、CK-18、C反应蛋白(CRP)、TNFα、IL 6和纤维化测试(NFS)的水平的降低；

c.瘦素与脂联素的比率的降低；或者

d.脂联素的水平的增加。

在多种实施方案中，根据本发明的方法还包括：

a.人类受试者的体重相对于在Aramchol^TM的施用开始时的人类受试者的体重的减少；

b.人类受试者的腰围相对于在Aramchol^TM的施用开始时的人类受试者的腰围的减少；或者

c.人类受试者的脂肪肝指数相对于在Aramchol^TM的施用开始时的人类受试者的脂肪肝指数的减少。

在多种实施方案中，减少或增加是从Aramchol^TM的施用开始2周、4周、8周、24周、40周、52周、65周、72周或96周的减少或增加。

在多种实施方案中，减少或增加是从Aramchol^TM的施用开始2年、3年或4年的减少或增加。

在另一种实施方案中，根据本发明的方法施用Aramchol^TM或其药学上可接受的盐抑制肝星状细胞中的胶原合成(例如COL1A1表达)。在另一种实施方案中，根据本发明的方法施用Aramchol^TM或其药学上可接受的盐增强了肝星状细胞中的PPAR-γ表达。

本发明还提供了本发明的药物或Aramchol^TM，其中所述药物或Aramchol^TM有效地防止受试者中的NASH的恶化。

在多种实施方案中，药物或Aramchol^TM有效地防止受试者中的纤维化的恶化。

本发明还提供了本发明的药物或Aramchol^TM，其中被施用该药物或Aramchol^TM的人类受试者患有纤维化，并且其中该药物或Aramchol^TM有效地改善人类受试者的纤维化评分。

在多种实施方案中，药物或Aramchol^TM有效地改善人类受试者的NAFLD活动度(NAS)评分。

在多种实施方案中，药物或Aramchol^TM有效地使人类受试者的NAFLD活动度(NAS)评分改善至少2分。

在多种实施方案中，药物或Aramchol^TM有效地改善人类受试者的脂肪变性、活动度和纤维化(SAF)活动度评分。

在多种实施方案中，药物或Aramchol^TM有效地改善人类受试者的脂肪变性、活动度和纤维化(SAF)活动度评分至少2分。

在多种实施方案中，药物或Aramchol^TM有效地使人类受试者的NASH消退。

在多种实施方案中，使NASH消退包括使气球样变减少到0的评分，并且使炎症减少到0或1的评分。

在多种实施方案中，药物或Aramchol^TM从施用开始2周、4周、8周、24周、40周、52周、65周、72周或96周，或2年、3年或4年是有效的。

在多种实施方案中，相对于施用开始时的水平，药物或Aramchol^TM有效地降低受试者中的肝甘油三酯的水平。

在多种实施方案中，相对于施用开始时的比率，药物或Aramchol^TM有效地降低受试者中的肝甘油三酯与水的比率。

在多种实施方案中，相对于施用开始时的比率，药物或Aramchol^TM有效地使受试者中的肝甘油三酯与水的比率降低至少10％。

在多种实施方案中，相对于施用开始时的比率，药物或Aramchol^TM有效地使受试者中的肝甘油三酯与水的比率降低10％和40％之间。

在多种实施方案中，相对于施用开始时的比率，药物或Aramchol^TM有效地使受试者中的肝甘油三酯与水的比率降低15％和35％之间。

在多种实施方案中，相对于施用开始时的比率，药物或Aramchol^TM有效地使受试者中的肝甘油三酯与水的比率降低20％和30％之间。

在多种实施方案中，药物或Aramchol^TM对以下方面有效：相对于施用开始时的水平或比率，在受试者中

a.降低血红蛋白A1C或HOMA-IR的水平；

b.降低纤维蛋白原、CK-18、C反应蛋白(CRP)、TNFα、IL 6和纤维化测试(NFS)的水平；

c.降低瘦素与脂联素的比率；或者

d.增加脂联素的水平。

在多种实施方案中，药物或Aramchol^TM对以下方面有效：

a.相对于施用开始时人类受试者的体重，减少人类受试者的体重；

b.相对于施用开始时人类受试者的腰围，减少人类受试者的腰围；或者

c.相对于施用开始时人类受试者的脂肪肝指数，减少人类受试者的脂肪肝指数。

在多种实施方案中，药物或Aramchol^TM从施用开始2周、4周、8周、24周、40周、52周、65周、72周或96周，或2年、3年或4年是有效的。

本发明涉及治疗有效量的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐用于治疗和抑制纤维化紊乱、与非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)相关的肝纤维化状况的用途。

本发明提供3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐，用于治疗和抑制纤维化紊乱、与非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)相关的肝纤维化状况。

本发明提供包含3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐的药物，用于治疗和抑制纤维化紊乱、与非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)相关的肝纤维化状况。

本发明提供药物包装，其包括a)3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐；和b)用于以下的使用说明：使用Aramchol^TM治疗和抑制纤维化紊乱、与非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)相关的肝纤维化状况。

联合疗法

C-C基序趋化因子受体CCR5参与了导致AIDS的病毒HIV进入细胞的过程。CCR5受体拮抗剂是一类拮抗CCR5受体的小分子。因此，该受体的拮抗剂是进入抑制剂，并且在治疗HIV感染中具有潜在的治疗应用。C-C趋化因子受体2型(CCR2)是人类中由CCR2基因编码的蛋白质。该基因编码单核细胞趋化蛋白-1(CCL2)受体的两种同种型，单核细胞趋化蛋白-1是趋化因子，其特异性介导细胞诸如单核细胞和巨噬细胞的趋化性。Cenicriviroc((S,E)-8-(4-(2-丁氧基乙氧基)苯基)-1-异丁基-N-(4-(((1-丙基-1H-咪唑-5-基)甲基)亚磺酰基)苯基)-1,2,3,4-四氢苯并[b]氮杂环辛四烯-5-甲酰胺，CAS号497223-25-3)是CCR2受体和CCR5受体两者的抑制剂。

在本发明的多种实施方案中，方法还包括施用治疗有效量的药物组合物，该药物组合物包含C-C趋化因子受体2型(CCR2)拮抗剂、C-C趋化因子受体5型(CCR5)拮抗剂、双重CCR2/CCR5拮抗剂，或其组合或药学上可接受的盐。

在多种实施方案中，CCR2拮抗剂选自由以下组成的组：双链RNA、拮抗CCR2与其配体结合的化合物、针对CCR2的中和抗体、对应于针对CCR2的中和抗体的配体、能够抑制CCR2的衍生自CCR2的序列的分离肽或其类似物、反义核酸、拮抗性微小RNA和酶促RNA分子。

在多种实施方案中，方法还包括向受试者施用CCR5拮抗剂和CCR2拮抗剂，或双重CCR2/CCR5拮抗剂。

在多种实施方案中，CCR2/CCR5双重拮抗剂是(S,E)-8-(4-(2-丁氧基乙氧基)苯基)-1-异丁基-N-(4-(((1-丙基-1H-咪唑-5-基)甲基)亚磺酰基)苯基)-1,2,3,4-四氢苯并[b]氮杂环辛四烯-5-甲酰胺(Cenicriviroc)或Cenicriviroc甲磺酸盐。

在多种实施方案中，方法包括施用50mg至500mg的每日剂量的Cenicriviroc。在某些实施方案中，上文描述的方法包括施用10mg至200mg的每日剂量的Cenicriviroc。在某些实施方案中，方法包括施用50mg至500mg、50mg至400mg、50mg至300mg、50mg至200mg或100mg至200mg的每日剂量的Cenicriviroc。在某些实施方案中，上文描述的方法包括施用100mg-200mg的每日剂量的Cenicriviroc。在多种实施方案中，方法包括施用100mg或200mg的每日剂量的Cenicriviroc。

在一些实施方案中，方法还包括施用治疗有效量的药物组合物，该药物组合物包含至少一种选自由二十碳五烯酸乙酯(EPA-E)、二十碳五烯酸(EPA)及其药学上可接受的酰胺、盐、酯和磷脂组成的组的化合物。

在一些实施方案中，EPA-E或EPA可以占脂肪酸及其衍生物总量的以重量计至少40％。

在一些实施方案中，药物组合物包括

(Machida Pharmaceutical Co.，Ltd.，日本东京)、Lovaza^TM(GlaxoSmithKline，FL USA)、Omacor^TM(Pronova BiopharmaASA，挪威奥斯陆)、Lotriga^TM(Takeda Pharmaceutical Co.，Ltd.，日本大阪)、Vascepa^TM(Amarin Pharma Inc.，NJ USA)、Epanova^TM(Astra Zeneca Pharmaceuticals LP，德国威尔明顿)或Omtryg^TM(Trygg Pharma Inc.，VA USA)。

Lovaza^TM，ω-3酸乙酯，主要是二十碳五烯酸(EPA-约465mg)和二十二碳六烯酸(DHA-约375mg)的乙酯的组合，被指示作为饮食辅助以在患有严重(≥500mg/dL)高甘油三酯血症的成人患者中降低甘油三酯(TG)水平(Lovaza，食品和药品管理局批准标签(参考ID：3371921)[在线]，GlaxoSmithKline，2013)。

Lovaza^TM的推荐剂量和时间表为每日4g。每日剂量可以作为单个4克剂量(4粒胶囊)或作为两个2克剂量(每日两次给予2粒胶囊)服用。

在一些实施方案中，Lovaza^TM的施用包括每日4.0g、每日3.5g、每日3.0g、每日2.5g、每日2.0g、每日1.5g、每日1.0g或更少的Lovaza^TM。

Omacor^TM，ω-3-酸乙酯，主要是二十碳五烯酸(EPA-约465mg)和二十二碳六烯酸(DHA-约375mg)的乙酯的组合，是脂质调节剂。(参考ID：“FPL for approved NDA 21-654”)[在线]，Abbott Laboratories)。

Omacor^TM的推荐剂量和时间表为每日4g。每日剂量可以作为单个4g剂量(4粒胶囊)或作为两个2g剂量(每日两次给予2粒胶囊)服用。

在一些实施方案中，Omacor^TM的施用包括每日4.0g、每日3.5g、每日3.0g、每日2.5g、每日2.0g、每日1.5g、每日1.0g或更少的Omacor^TM。

Vascepa^TM，含有1克的二十碳五烯酸乙酯，即ω-3脂肪酸二十碳五烯酸(EPA)的乙酯，是脂质调节剂，被指示作为饮食辅助以在患有严重(≥500mg/dL)高甘油三酯血症的成人患者中降低甘油三酯(TG)水平(Vascepa^TM，食品和药品管理局批准标签(参考ID：3783357)[在线]，Amarin Pharmaceuticals，2012)。

Vascepa^TM的推荐剂量和时间表为每日4克，作为每日两次的2粒胶囊，与食物一起服用。

在一些实施方案中，Vascepa^TM的施用包括每日4.0g、每日3.5g、每日3.0g、每日2.5g、每日2.0g、每日1.5g、每日1.0g或更少的Vascepa^TM。

Epanova^TM，含有1克的鱼油衍生的游离脂肪酸，称为“ω-3-羧酸”，含有至少850mg的多不饱和脂肪酸，包括多种ω-3脂肪酸(二十碳五烯酸[EPA]和二十二碳六烯酸[DHA]是最丰富的)，是脂质调节剂，被指示作为饮食辅助以在患有严重(>500mg/dL)高甘油三酯血症的成人患者中降低甘油三酯(TG)水平(Epanova^TM，食品和药品管理局批准标签(参考ID：3501113)[在线]，AstraZeneca Pharmaceuticals，2014)。

Epanova^TM的推荐剂量和时间表是每日4克，作为每日两次的2克(2粒胶囊)，或每日一次的4克(4粒胶囊)服用。

在一些实施方案中，Epanova^TM的施用包括每日4.0g、每日3.5g、每日3.0g、每日2.5g、每日2.0g、每日1.5g、每日1.0g或更少的Epanova^TM。

Omtryg^TM，是ω-3脂肪酸的乙酯的组合，主要是二十碳五烯酸(EPA-约465mg)和二十二碳六烯酸(DHA-约375mg)的乙酯的组合，是脂质调节剂，被指示作为饮食辅助以在患有严重(≥500mg/dL)高甘油三酯血症的成人患者中降低甘油三酯(TG)水平(Omtryg^TM，食品和药品管理局批准标签(参考ID：3494935)[在线]，Trygg Pharma Inc.，2014)。

Omtryg^TM的推荐剂量和时间表是每日4克，作为每日两次的2克(2粒胶囊)，或每日一次的4克(4粒胶囊)服用。

在一些实施方案中，Omtryg^TM的施用包括每日4.0g、每日3.5g、每日3.0g、每日2.5g、每日2.0g、每日1.5g、每日1.0g或更少的Omtryg^TM。

上文列出的组合物描述于美国专利申请公开第2016/0213639号中，其全部内容通过引用并入。

在一些实施方案中，方法还包括单独施用或与一种或更多种另外的治疗剂组合施用治疗有效量的乙酰CoA羧化酶(ACC)抑制剂。

如本文一般使用的，“ACC抑制剂”意指降低乙酰CoA羧化酶活性的任何治疗剂。

合适的ACC抑制剂包括WO2013/071169A1，WO2014/182943A1，WO2014/182945A1，WO2014/182950A1和WO2014/182951A1中描述的那些，其中每一个的全部内容由此通过引用并入。

在一些实施方案中，ACC抑制剂是soraphen A。

在一些实施方案中，另外的治疗剂独立地选自由以下组成的组：血管紧张素II受体拮抗剂、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、胱天蛋白酶抑制剂、组织蛋白酶B抑制剂、CCR2趋化因子拮抗剂、CCR5趋化因子拮抗剂、氯通道刺激剂、胆固醇增溶剂、二酰基甘油O-酰基转移酶1(DGAT1)抑制剂、二肽基肽酶IV(DPPIV)抑制剂、法尼醇X受体(FXR)激动剂、FXR/TGR5双重激动剂、半乳糖凝集素-3抑制剂、胰高血糖素样肽(GLPI)激动剂、谷胱甘肽前体、丙型肝炎病毒NS3蛋白酶抑制剂、HMG CoA还原酶抑制剂、11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSDI)抑制剂、IL-1β拮抗剂、IL-6拮抗剂、IL-10激动剂、IL-17拮抗剂、回肠钠胆汁酸协同转运蛋白抑制剂、瘦素类似物、5-脂氧合酶抑制剂、LPL基因刺激剂、赖氨酰氧化酶同源物2(LOXL2)抑制剂、PDE3抑制剂、PDE4抑制剂、磷脂酶C(PLC)抑制剂、PPARα激动剂、PPARy激动剂、PPAR8激动剂、Rho相关蛋白激酶2(ROCK2)抑制剂、钠葡萄糖转运蛋白-2(SGLT2)抑制剂、硬脂酰CoA去饱和酶I抑制剂、甲状腺激素受体β激动剂、肿瘤坏死因子α(TNFα)配体抑制剂、转谷氨酰胺酶抑制剂、转谷氨酰胺酶抑制剂前体、PTPib抑制剂和ASKI抑制剂。

上文列出的组合物描述于PCT国际申请公开第WO 2016/112305号中，其全部内容通过引用并入。

在一些实施方案中，方法还包括施用治疗有效量的盐酸吡格列酮

或对映异构体纯的富含氘的吡格列酮。

如本文使用的，氘代吡格列酮在吡格列酮的手性中心富含氘，并且任选地在化合物的其他位置富含氘。此外，富含氘的吡格列酮以对映异构体纯的形式提供。

在一些实施方案中，富含氘的化合物具有至少75％的对映异构体过量的光学纯度。

的活性成分盐酸吡格列酮是噻唑烷二酮和过氧化物酶体增殖物活化受体(PPAR)γ的激动剂，被指示作为饮食和运动的辅助以在多种临床环境中改善患有2型糖尿病的成人中的血糖控制(

食品和药品管理局批准标签(参考ID：2983732)[在线]，Takeda Pharmaceuticals，2009-2011)。

的推荐剂量和时间表为15mg或30mg每日一次起始剂量。如果存在不充分的血糖控制，剂量可以以15mg的增量增加至最多45mg每日一次。

在一些实施方案中，

的施用包括15mg、16mg、17mg、18mg、19mg、20mg、25mg、30mg、35mg、40mg或45mg或更少的

上文列出的组合物描述于PCT国际申请公开第WO 2016/153948号中，其全部内容通过引用并入。

在一些实施方案中，方法还包括施用治疗有效量的过氧化物酶体增殖物活化受体(PPAR)δ和γ双重激动剂。

在一些实施方案中，δ活性大于γ活性，并且γ活性大于α活性。

在一些实施方案中，方法还包括施用治疗有效量的茚满乙酸及其衍生物，它们是双重PPARδ和γ激动剂。

示例性的另外的治疗剂可以包括但不限于与以下的组合：法尼醇X受体激动剂(诸如，奥贝胆酸和Px-104)、GR-MD-02、半胱胺酒石酸氢盐、simtuzumab、emricasan、GFT-505、CER-002、KD3010、KD3020、MBX8025、LUM002、RP-103、半乳糖凝集素-3阻滞剂(诸如LIPC-1010和GR-MD-02)、cenicriviroc、血管粘附蛋白-1抑制剂(诸如PXS4728A)、二甲双胍、PPARγ激动剂(诸如罗格列酮和吡格列酮)、二甲双胍、己酮可可碱、维生素E、硒、ω-3脂肪酸和甜菜碱。

上文列出的组合物描述于PCT国际申请公开第WO2016/154258号中，其全部内容通过引用并入。

上面提到的实施方案指的是若干种药物大体上同时在体内有效。若干种药物可以大体上同时施用，或者可以在不同时间施用，但同时对身体起作用。例如，这包括在Aramchol^TM在体内的作用大体上存在时，在之前或之后施用Aramchol^TM。

因此，在一些实施方案中，方法还包括施用治疗有效量的药物组合物，该药物组合物包含至少一种选自由以下组成的组的化合物：

二十碳五烯酸乙酯(EPA-E)、二十碳五烯酸(EPA)及其药学上可接受的酰胺、盐、酯和磷脂；

单独的或与一种或更多种另外的治疗剂组合的乙酰CoA羧化酶(ACC)的抑制剂；

盐酸吡格列酮或对映异构体纯的富含氘的吡格列酮；和

过氧化物酶体增殖物活化受体(PPAR)δ和γ双重激动剂。

在一些实施方案中，另外的治疗剂独立地选自由以下组成的组：血管紧张素II受体拮抗剂、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、胱天蛋白酶抑制剂、组织蛋白酶B抑制剂、CCR2趋化因子拮抗剂、CCR5趋化因子拮抗剂、氯通道刺激剂、胆固醇增溶剂、二酰基甘油O-酰基转移酶1(DGAT1)抑制剂、二肽基肽酶IV(DPPIV)抑制剂、法尼醇X受体(FXR)激动剂诸如奥贝胆酸和Px-104、FXR/TGR5双重激动剂、半乳糖凝集素-3抑制剂诸如LIPC-1010和GR-MD-02、胰高血糖素样肽(GLPI)激动剂、谷胱甘肽前体、丙型肝炎病毒NS3蛋白酶抑制剂、HMG CoA还原酶抑制剂、11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD I)抑制剂、IL-1β拮抗剂、IL-6拮抗剂、IL-10激动剂、IL-17拮抗剂、回肠钠胆汁酸协同转运蛋白抑制剂、瘦素类似物、5-脂氧合酶抑制剂、LPL基因刺激剂、赖氨酰氧化酶同源物2(LOXL2)抑制剂、PDE3抑制剂、PDE4抑制剂、磷脂酶C(PLC)抑制剂、PPARα激动剂、PPARγ激动剂诸如罗格列酮和吡格列酮、二甲双胍、己酮可可碱、维生素E、硒、ω-3脂肪酸和甜菜碱、PPAR8激动剂、Rho相关蛋白激酶2(ROCK2)抑制剂、钠葡萄糖转运蛋白-2(SGLT2)抑制剂、硬脂酰CoA去饱和酶I抑制剂、甲状腺激素受体β激动剂、肿瘤坏死因子α(TNFα)配体抑制剂、转谷氨酰胺酶抑制剂、转谷氨酰胺酶抑制剂前体、PTPib抑制剂、ASKI抑制剂和血管粘附蛋白-1抑制剂诸如PXS4728A、二甲双胍、GR-MD-02、半胱胺酒石酸氢盐、simtuzumab、emricasan、GFT-505、CER-002、KD3010、KD3020、MBX8025、LUM002、RP-103和cenicriviroc。

施用两种药物以治疗给定状况，诸如非酒精性脂肪肝病(NAFLD)，引发许多潜在的问题。两种药物之间的体内相互作用是复杂的。任何单一药物的作用与其吸收、分布和消除相关。当两种药物被引入体内时，每种药物可能影响另一种药物的吸收、分布和消除，并且因此改变另一种药物的作用。例如，一种药物可以抑制、活化或诱导参与消除另一种药物的代谢途径的酶的产生。(Guidance for Industry,1999)。因此，当施用两种药物来治疗相同的状况时，每种药物是否将补充、不影响或干扰另一种药物在人类受试者中的治疗活性是不可预测的。

不仅两种药物之间的相互作用可能影响每种药物的预期治疗活性，而且这种相互作用可能增加毒性代谢物的水平(Guidance for Industry,1999)。这种相互作用也可能增强或减轻每种药物的副作用。因此，在施用两种药物来治疗疾病时，每种药物的负面副作用谱将发生什么变化是不可预测的。

此外，难以准确地预测两种药物之间相互作用的效果何时将变得明显。例如，药物之间的代谢相互作用可能在第二药物的初始施用时、在两种药物已经达到稳态浓度之后或在药物中的一种终止时变得明显。(Guidance for Industry,1999)。

应当理解，在提供参数范围的情况下，本发明还提供该范围内的所有整数及其十分之一的数。例如，“0.2mg/kg/天-5mg/kg/天”是0.2mg/kg/天、0.3mg/kg/天、0.4mg/kg/天、0.5mg/kg/天、0.6mg/kg/天等直到5.0mg/kg/天的公开内容。

本文公开的每种实施方案被预期为适用于其他公开的实施方案中的每一种。因此，本文描述的各种要素的所有组合在本发明的范围内。

呈现以下实施例以便更全面地说明本发明的一些实施方案。然而，它们决不应被解释为限制本发明的宽范围。

实施例

下文提供实施例以有助于更完整地理解本发明。以下实施例说明了制造和实施本发明的示例性模式。然而，本发明的范围不限于这些实施例中公开的特定实施方案，这些实施例仅用于说明的目的。

实施例1-硫代乙酰胺(TAA)诱导的纤维化-肝硬化的模型

通过在10周期间每周两次腹膜内注射TAA(20mg/100gr体重)在Wistar大鼠中诱导肝纤维化。I.p.应用TAA导致肝小叶中心性坏死、升高的转氨酶活性和强的肝纤维化。处理组还包括共施用Aramchol^TM(口服1mg/kg或5mg/kg)或奥贝胆酸(OCA，5mg/kg)。还包括经盐水处理的大鼠(没有TAA施用)的对照组。然后处死大鼠，并且宏观观察以及在MassonGoldner染色后在显微镜下观察肝的肝硬化和坏死病变的征象。对每个样品确定以0-4的等级计算的纤维化评分，其中0指示无纤维化，并且4指示晚期纤维化和肝硬化。

如在图1-图2中可以观察到的，用Aramchol^TM(5mg/kg)处理显著预防了TAA诱导的纤维化。该处理以剂量依赖性方式显著降低了坏死和肝硬化的发展(图1)，以及组织中的纤维化评分和胶原分布(图2)。相比之下，OCA没有引起这些参数的统计学上显著的降低。

因此，令人惊讶地发现Aramchol^TM是有效的抗纤维化和抗肝硬化剂。还发现Aramchol^TM出乎意料地优于OCA并且提供肝纤维化的改善的、有效的治疗。

由TAA中毒引起的肝硬化和门静脉高血压可以最终导致急性肝衰竭和诸如肝性脑病的相关状况的发展，并且TAA模型也用于评价这些现象。因此，如本文所公开的，在一些实施方案中，Aramchol^TM也可以用于预防急性或致死性肝衰竭和/或肝性脑病或门体静脉脑病，例如毒素诱导的肝衰竭和/或肝性脑病。

实施例2-星状细胞中胶原合成的抑制

将LX2细胞(每孔150,000个细胞)铺在含有抗生素、谷氨酰胺和胎牛血清的DMEM培养基中。在孵育24小时之后，将培养基换成0％血清，并且孵育另外16小时的时间段。然后，添加Aramchol^TM(10mM)，并且24小时后用Trizol提取RNA。

令人惊讶地，如在图3和图4中可以观察到的，Aramchol^TM经由PPARγ上调减少了LX-2人类肝星状细胞中的COL1A1表达。

一致地，Aramchol^TM相对于DMSO对照显著下调了LX-2人类肝星状细胞中的胶原产生(图5)。同样，令人惊讶地发现Aramchol^TM有效地减少胶原的产生特别是在星状细胞中的产生。

实施例3-Aramchol^TM减少MCD饮食动物模型中已建立的纤维化

下文描述的研究使用0.1％甲硫氨酸和胆碱缺乏(0.1MCD)饮食的NASH小鼠模型来研究Aramchol^TM的作用机制及其对纤维化的潜在作用。

C57Bl/6被饲喂甲硫氨酸和胆碱缺乏(MCD)饮食和对照饮食，并且在4周之后处死。MCD饮食诱导转氨酶升高以及肝组织学特征的变化，其特征为脂肪变性、局部炎症、肝细胞坏死和纤维化。这些变化快速发生，并且与在人类NASH中观察到的那些在形态学上类似。在这项研究中，MCD饮食含有0.1％的甲硫氨酸，以使体重损失最小化和稳定化。在第二周结束时，在验证已建立的NASH之后，0.1MCD饲喂的小鼠通过灌胃口服用Aramchol^TM(5mg/Kg/天)或媒介物(每种条件下n＝10)进行处理。对照饮食饲喂的小鼠也用媒介物处理相同的持续时间(n＝10)。实验结束时，获得了血液和肝样品。实验设计示意图在下文示出：

来自本研究的结果显示：1)用Aramchol^TM处理显著下调肝中的脂肪变性(图6)；2)用Aramchol^TM处理显著下调/正常化肝中巨噬细胞的浸润和活化状态(图7)；3)用Aramchol^TM处理显著下调/正常化肝中的纤维化(图8)；4)Aramchol^TM显著下调肝中的胶原(图9)；和5)Aramchol^TM在0.1％MCD小鼠中显著上调谷胱甘肽并且提高GSH/GSSG比率(图10)。

此外，Aramchol^TM处理还降低了SCD1活性，这通过以下证明：SCD1表达、FA(16:1)/FA(16:0)比率和单不饱和FA(MUFA)总含量的显著降低，这导致肝的甘油二酯(DG)和TG含量降低。Aramchol^TM处理改善了氧化应激，如以下示出：GSH/GSSG比率(细胞氧化还原电位的生物标志物)的正常化，以及包括oxLA的总oxFA含量的显著降低，这与人类NASH中的肝损伤相关。

特定实施方案的前述描述将如此完全地揭示本发明的一般性，以致其他人可以通过应用现有知识容易地修改和/或调整这样的特定实施方案用于多种应用，而不进行过度的实验并且不脱离一般概念，并且因此，这样的调整和修改应当且意图被包含在公开的实施方案的等效物的含义和范围内。应当理解，本文中采用的措辞或术语是为了描述的目的而非限制的目的。用于实施多种公开的功能的手段、材料和步骤可以采取多种可选择的形式而不脱离本发明。

实施例4

(a)简要概述

这是多中心、IIb期、随机化、双盲、安慰剂对照的研究，其被设计为评估两种Aramchol^TM剂量在年龄18岁至75岁的受试者中的功效和安全性，受试者患有通过在进入研究前6个月的时间段内进行的肝活组织检查证实的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，具有超重或肥胖，以及患有前驱糖尿病或II型糖尿病。

(b)干预

药物：Aramchol^TM

受试者将被如下施用Aramchol^TM：

a.一片Aramchol^TM 400mg的片剂和一片Aramchol^TM的匹配安慰剂的片剂。

b.一片Aramchol^TM 400mg的片剂和一片Aramchol^TM 200mg的片剂。

c.两片Aramchol^TM匹配安慰剂的片剂。该片剂应在早上在早餐之后30min内用一杯水(250ml)口服。

在研究期间，允许受试者最多3个连续日不服用(omit)研究药物。

其他名称：安慰剂

(c)研究组

实验：Aramchol^TM 600mg

a.一片Aramchol^TM 400mg的片剂和一片Aramchol^TM 200mg的片剂。

b.干预：药物：Aramchol^TM

实验：Aramchol^TM 400mg

a.一片Aramchol^TM 400mg的片剂和一片Aramchol^TM的匹配安慰剂的片剂。

b.干预：药物：Aramchol^TM

安慰剂比较物：安慰剂

a.两片Aramchol^TM匹配安慰剂的片剂。

b.干预：药物：Aramchol^TM

(d)估计招募

240名

(e)纳入标准

年龄18岁至75岁的男性或女性。

BMI在25kg/m²至40kg/m²之间，或对于女性腰围在88cm至200cm之间，并且对于男性腰围在102cm至200cm之间。如果偏差超过上限，请咨询MRI中心，以确保机器适合于患者。

根据美国糖尿病协会(American Diabetes Association)，已知的II型糖尿病或前驱糖尿病。前驱糖尿病要求以下3个标准之一：空腹血糖>100mg/dl(5.5mmol/l)或75gOGTT后的2hPG>140mg/dl(7.8mmol/l)或HbA1c>5.7％。可以根据研究者的自行决定重复HbA1c。

在筛选期间或筛选访视前6个月内进行的诊断性肝活组织检查中组织学上证实的脂肪性肝炎，其由中心实验室对载玻片的读取证实。(脂肪变性≥1+炎症≥1+气球样变≥1)。4或更高的总活动度NAS评分。

如通过NMRS测量的，肝中5.5％或更高的肝脂肪浓度。

4或更高的活动度NAS评分的活组织检查。

正常的合成肝功能(血清白蛋白>3.2g/dl，INR 0.8-1.2，缀合胆红素<35μmol/L)。

了解研究的性质并且签署书面知情同意书。

具有生育潜力的女性在进入研究时的阴性妊娠测试。

具有生育潜力的女性在整个研究期间实施可靠的避孕(包括口服避孕药)，以及在进入研究时的阴性妊娠测试。

高血压患者必须在筛选前至少2个月内通过稳定剂量的抗高血压药物得到良好控制。

可以纳入先前用维生素E(>400IU/天)、多不饱和脂肪酸(>2g/天)或熊去氧胆酸或鱼油治疗的患者，条件是在诊断性肝活组织检查前至少3个月停止或至少维持稳定剂量至少3个月(并且在试验期间没有开始)。如果这些治疗剂量在活组织检查前稳定持续至少12个月，并且在整个研究中可以保持稳定，则允许这些治疗剂量。(小于上述量的剂量是允许的，没有清除期或稳定期限制)。

对于患有II型糖尿病的患者，必须控制血糖(糖基化血红蛋白A1c≤9％)，而在招募前的6个月期间，任何HbA1c变化不应超过1.5％。如果患者自我监测血糖，则允许使用抗糖尿病药物的治疗(排除16中提及的那些除外)。可以根据研究者的自行决定重复HbA1c。

排除标准

排除标准：

在随机化时患有除NASH以外的其他活动性(急性或慢性)肝病(例如病毒性肝炎，除非在筛选前至少3年根除；遗传性血色素沉着病；威尔逊氏病；α1抗胰蛋白酶缺乏；酒精性肝病；药物诱导的肝病)的患者。

具有临床或组织学上记录的肝硬化的患者。

过去五年内已知的酒精和/或任何其他药物滥用或依赖。

研究者认为应排除在研究之外的临床上显著的心血管紊乱、胃肠紊乱、除糖尿病以外的代谢紊乱、神经紊乱、肺紊乱、内分泌紊乱、精神紊乱、肿瘤紊乱或肾病综合征的已知病史或存在。

患有家族性(即，遗传性)高甘油三酯血症和家族性(即，遗传性)高胆固醇血症的患者。

已知干扰药物(包括胆汁盐代谢物)的吸收分布、代谢或排泄的任何疾病或状况(例如炎性肠病(IBD)、既往肠(回肠或结肠)手术、慢性胰腺炎、乳糜泻病或既往迷走神经切断术、持续慢性便秘)的病史或存在。

带有心脏起搏器或脑起搏器(即，植入式神经装置)的患者。

筛选前最后三个月期间的手术，该手术涉及金属装置的支架植入(例如膝部、臀部等)。

随机化前6个月内超过5％的体重损失。

肝活组织检查5年内的减肥手术史。

不受控制的动脉高血压。

妊娠以及哺乳的女性。

除II型以外的糖尿病(I型、内分泌病、遗传综合征等)。

患有HIV感染的患者。

根据病史，对于女性每日酒精摄取>20g/天，并且对于男性每日酒精摄取>30g/天(每日平均)。

用其他抗糖尿病药物治疗：GLP-1受体激动剂和噻唑烷二酮类(TZD)，除非在活组织检查前至少12个月开始且以稳定剂量持续6个月。在GLP-1受体激动剂停用的情况下，根据病史，应在活组织检查前至少6个月停用。

SGLT-2抑制剂、二甲双胍、贝特类、他汀类、胰岛素、DPP-4抑制剂和磺酰脲类，除非在活组织检查前的最后6个月内处方剂量持续稳定。

筛选访视前12个月内用丙戊酸、他莫昔芬、甲氨蝶呤、胺碘酮的治疗或用抗胆碱能剂、皮质类固醇、高剂量雌激素和四环素的长期治疗。

用抗生素(例如利福昔明)的长期治疗。

顺势疗法治疗和/或替代治疗。任何治疗都应在随机化前至少48小时的筛选期期间停止。

不受控制的甲状腺功能减退，其被定义为促甲状腺激素>2×正常上限(ULN)。在筛选前甲状腺功能障碍得到控制持续至少6个月是允许的。

肾功能障碍eGFR<40的患者。

不明原因的血清肌酸磷酸激酶(CPK)>3×正常上限(ULN)。有CPK升高原因的患者可以在随机化前重测量；CPK重测试>3×ULN导致排除。

患有使其不适合进行NMRS的状况的患者(如由PI或MRI设施确定的)。

对Aramchol^TM或片剂中的任何赋形剂有过敏性。

对胆酸或胆汁酸螯合剂有过敏性。

详述

这是多中心、IIb期、随机化、双盲、安慰剂对照的研究，其被设计为评估两种Aramchol^TM剂量在年龄18岁至75岁的受试者中的功效和安全性，受试者患有通过在进入研究前6个月的时间段内进行的肝活组织检查证实的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，具有超重或肥胖，以及患有前驱糖尿病或II型糖尿病的受试者。

合格的受试者将以2:2:1的比招募入三个治疗组：Aramchol^TM 400mg片剂和Aramchol^TM 600mg片剂以及安慰剂片剂。

受试者将在研究地点接受11次预定访视的评价：筛选时(第1次访视(第-4-0周))、基线(第2次访视(第0天))、第3次访视(第2周)、第4次访视(第4周)、第5次访视(第8周)、第6次访视(第12周)、第7次访视(第24周)、第8次访视(第32周)、第9次访视(第40周)和第10次访视(第52周-(治疗结束/提前终止访视))。研究治疗期完成之后，受试者将在没有研究药物的情况下被随访持续另外的13周的时间段(直到第11次访视(第65周))。

在筛选期期间，将通过血液测试、肝活组织检查和NMRS评价疾病的严重程度。

在研究期间，将进行以下评估：

a.生命体征将在每次研究访视时进行测量。

b.体检将在筛选访视、24周、治疗结束/提前终止和第65周访视时进行。

在筛选访视、基线访视、第2、4、8、24、40、52和65周访视(随访结束)期间将进行以下血液测试：全血细胞计数(CBC)、血清化学(包括电解质、肝酶、直接胆红素和总胆红素、葡萄糖、脂质谱(包括甘油三酯)、胆固醇、HDL、LDL和VLDL、CPK、肌酐、尿素、白蛋白、碱性磷酸酶)、ESR和尿分析。血清学(HBV、HCV和HIV)将在筛选访视期间进行。将在筛选访视和基线访视、第24周访视、治疗结束/提前终止访视和第65周访视中测量凝血(纤维蛋白原、PT/INR、aPTT)。胰岛素(HOMA)将在筛选访视、第24周访视和治疗结束/提前终止访视时进行测量。HbA1C将在筛选访视、第8周访视、第24周访视、第40周访视和治疗结束/提前终止访视时进行测量。将在基线访视和治疗期结束时测量C反应蛋白、瘦素、脂联素、CK-18(M30和M65)、铁蛋白、PAI-1、IL-6、TNF-α、FGF-19、C4(7-α-羟基-4-胆甾烯-3-酮)、血清胆汁酸汇集(poolserum Bile Acids)、B-羟基丁酸盐和游离脂肪酸。在这些访视采集的血液样品将被测试可能的生物标志物，包括但不限于胎球蛋白A和GDF15。筛选访视期间将测量TSH、T3和T4。具有生育潜力的女性的β-hCG将在筛选访视期间进行。在需要进行特殊调查的情况下，将收集血清样品并保持冷冻直到研究结束。该样品将在筛选和第10次访视/提前终止期间收集。

体重和腰围将在筛选访视、基线访视、第24周访视、治疗结束访视和第65周访视时测量。身高将在筛选访视期间测量。

ECG将在筛选访视、第7次访视(第24周)和治疗结束访视期间进行。

所有受试者将在筛选访视和治疗结束访视时经历两次NMRS扫描。

只有在研究者认为有必要的情况下，才将进行FibroMax测试。

肝活组织检查将在筛选访视和治疗结束访视期间进行。筛选访视中的活组织检查只有在该访视前6个月内未进行时才将进行。

代谢组学血液测试将在筛选访视、第7次访视和治疗结束/提前终止访视时进行。将从一些同意的患者(约15名)取得肝活组织检查样品用于分析。

内皮功能将在选定的部位进行。该测试将在将给予研究治疗之前的基线访视和治疗结束/提前终止访视期间进行。

在基线(第2次访视)、第4周(第4次访视)、第12周(第6次访视)、第24周(第7次访视)、第40周(第9次访视)、治疗结束(第10次访视)和随访(第11次访视)时，将从以色列的患者中收集Aramchol^TM谷值水平的血液样品(给药前)。在墨西哥、USA和中国香港的选定地点，将在第4次访视(每个地区最多10名受试者)时收集一份血液样品(给药前)，以测试群体(例如，非裔美国人、亚裔、西班牙裔)之间谷值Aramchol^TM血液水平的差异。

用于基因分析的血液样品将在基线访视期间从所有同意的患者中采集，将保持冷冻，并且仅在研究结束时进行分析。

生活方式问卷将在所有访视中完成。

在整个研究中，将对不良事件进行监测。

在整个研究中，将对伴随药物进行监测。

电话联系将在第16、20、28、36、44和48周进行。一旦120名受试者在研究治疗下完成24周的随访期，将进行中期安全性分析。独立的DSMB将分析安全性数据，并且推荐继续的行动方案。所有患者都将继续在研究方案下接受治疗，直到获知分析结论。

安全性评估将包括治疗紧急AE的频率和严重程度、临床上显著的实验室异常、ECG变化和体检结果。

结果

(i)主要结果和次要结果测量(400mg组)

如通过磁共振波谱法(MRS)测量的，用400mg的Aramchol^TM的治疗显著降低了肝甘油三酯比率。

如通过磁共振波谱法(MRS)测量的，用400mg的Aramchol^TM的治疗使肝甘油三酯比率降低10％-40％。

如通过磁共振波谱法(MRS)测量的，用400mg的Aramchol^TM的治疗使肝甘油三酯比率降低15％-35％。

如通过磁共振波谱法(MRS)测量的，用400mg的Aramchol^TM的治疗使肝甘油三酯比率降低20％-30％。

与用安慰剂治疗的受试者相比，用400mg的Aramchol^TM的治疗导致显著更高比例的具有纤维化改善(即减少>或＝1分)而没有NASH的恶化的受试者。

与用安慰剂治疗的受试者相比，用400mg的Aramchol^TM的治疗导致显著更高比例的具有纤维化改善(即减少>或＝1分)而没有NASH的恶化的受试者。与用安慰剂治疗的受试者相比时，改善率为至少2。

与用安慰剂治疗的受试者相比，用400mg的Aramchol^TM的治疗导致显著更高比例的具有NAS评分改善(即改善至少2分)而没有纤维化评分的恶化的受试者。

与用安慰剂治疗的受试者相比，用400mg的Aramchol^TM的治疗导致显著更高比例的具有SAF活动度评分改善(即改善至少2分)而没有纤维化评分的恶化的受试者。

与用安慰剂治疗的受试者相比，用400mg的Aramchol^TM的治疗导致显著更高比例的具有NASH消退(0的气球样变、0或1的炎症)而没有纤维化的恶化的受试者。

(ii)探索性结果测量(400mg组)

用400mg的Aramchol^TM的治疗抑制了受试者的纤维化评分的恶化，这种抑制显著高于基于Aramchol^TM对受试者的肝甘油三酯的作用将预期的。

用400mg的Aramchol^TM对患有肝纤维化的受试者的治疗改善了受试者的纤维化评分，这种改善显著高于基于Aramchol^TM对受试者的肝甘油三酯的作用将预期的作用。

用400mg的Aramchol^TM对患有1a期肝纤维化的受试者的治疗改善了受试者的纤维化评分，这种改善显著高于基于Aramchol^TM对受试者的肝甘油三酯的作用将预期的作用。

用400mg的Aramchol^TM对患有1b期肝纤维化的受试者的治疗改善了受试者的纤维化评分，这种改善显著高于基于Aramchol^TM对受试者的肝甘油三酯的作用将预期的作用。

用400mg的Aramchol^TM对患有1c期肝纤维化的受试者的治疗改善了受试者的纤维化评分，这种改善显著高于基于Aramchol^TM对受试者的肝甘油三酯的作用将预期的作用。

用400mg的Aramchol^TM对患有2期肝纤维化的受试者的治疗改善了受试者的纤维化评分，这种改善显著高于基于Aramchol^TM对受试者的肝甘油三酯的作用将预期的作用。

用400mg的Aramchol^TM对患有3期肝纤维化的受试者的治疗改善了受试者的纤维化评分，这种改善显著高于基于Aramchol^TM对受试者的肝甘油三酯的作用将预期的作用。

用400mg的Aramchol^TM对患有4期肝纤维化的受试者的治疗改善了受试者的纤维化评分，这种改善显著高于基于Aramchol^TM对受试者的肝甘油三酯的作用将预期的作用。

用400mg的Aramchol^TM对患有肝纤维化的受试者的治疗改善了受试者的SAF评分，这种改善高于基于Aramchol^TM对受试者的肝甘油三酯的作用将预期的。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的受试者相比，用400mg的Aramchol^TM对患有肝纤维化的受试者的治疗导致显著更高比例的没有纤维化评分的恶化的受试者。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的受试者相比，用400mg的Aramchol^TM对患有肝纤维化的受试者的治疗导致显著更高比例的具有纤维化改善(即减少>或＝1分)的受试者。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的受试者相比，用400mg的Aramchol^TM对患有肝纤维化的受试者的治疗导致显著更高比例的具有纤维化改善(即减少>或＝1分)而没有NASH的恶化的受试者。

与用安慰剂治疗的受试者相比，用400mg的Aramchol^TM对患有肝纤维化的受试者的治疗导致显著更高比例的具有纤维化改善(即减少>或＝1分)而没有NASH的恶化的受试者。与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的受试者相比时，改善率为至少2。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的受试者相比，用400mg的Aramchol^TM的治疗导致显著更高比例的具有NAS评分改善(即改善至少2分)的受试者。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的受试者相比，用400mg的Aramchol^TM的治疗导致显著更高比例的具有NAS评分改善(即改善至少2分)而没有纤维化评分的恶化的受试者。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的受试者相比，用400mg的Aramchol^TM对患有肝纤维化的受试者的治疗导致显著更高比例的具有SAF活动度评分改善(即改善至少2分)的受试者。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的受试者相比，用400mg的Aramchol^TM对患有肝纤维化的受试者的治疗导致显著更高比例的具有SAF活动度评分改善(即改善至少2分)而没有纤维化评分的恶化的受试者。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的受试者相比，用400mg的Aramchol^TM对患有肝纤维化的受试者的治疗导致显著更高比例的具有NASH消退(0的气球样变、0或1的炎症)的受试者。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的受试者相比，用400mg的Aramchol^TM对患有肝纤维化的受试者的治疗导致显著更高比例的具有NASH消退(0的气球样变、0或1的炎症)而没有纤维化的恶化的受试者。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的受试者相比，用400mg的Aramchol^TM对未患有肝纤维化的受试者的治疗导致显著更高比例的没有纤维化评分的恶化的受试者。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的受试者相比，用400mg的Aramchol^TM的治疗导致显著更高比例的具有NAS评分改善(即改善至少2分)的受试者。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的受试者相比，用400mg的Aramchol^TM的治疗导致显著更高比例的具有NAS评分改善(即改善至少2分)而没有纤维化评分的恶化的受试者。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的受试者相比，用400mg的Aramchol^TM对未患有肝纤维化的受试者的治疗导致显著更高比例的具有SAF活动度评分改善(即改善至少2分)的受试者。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的受试者相比，用400mg的Aramchol^TM对未患有肝纤维化的受试者的治疗导致显著更高比例的具有SAF活动度评分改善(即改善至少2分)而没有纤维化评分的恶化的受试者。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的受试者相比，用400mg的Aramchol^TM对未患有肝纤维化的受试者的治疗导致显著更高比例的具有NASH消退(0的气球样变、0或1的炎症)的受试者。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的受试者相比，用400mg的Aramchol^TM对未患有肝纤维化的受试者的治疗导致显著更高比例的具有NASH消退(0的气球样变、0或1的炎症)而没有纤维化的恶化的受试者。

(iii)主要结果和次要结果测量(600mg组)

如通过磁共振波谱法(MRS)测量的，用600mg的Aramchol^TM的治疗显著降低了肝甘油三酯比率。

如通过磁共振波谱法(MRS)测量的，用600mg的Aramchol^TM的治疗使肝甘油三酯比率降低10％-40％。

如通过磁共振波谱法(MRS)测量的，用600mg的Aramchol^TM的治疗使肝甘油三酯比率降低15％-35％。

如通过磁共振波谱法(MRS)测量的，用600mg的Aramchol^TM的治疗使肝甘油三酯比率降低20％-30％。

与用安慰剂治疗的受试者相比，用600mg的Aramchol^TM的治疗导致显著更高比例的具有纤维化改善(即减少>或＝1分)而没有NASH的恶化的受试者。

与用安慰剂治疗的受试者相比，用600mg的Aramchol^TM的治疗导致显著更高比例的具有纤维化改善(即减少>或＝1分)而没有NASH的恶化的受试者。与用安慰剂治疗的受试者相比时，改善率为至少2。

与用安慰剂治疗的受试者相比，用600mg的Aramchol^TM的治疗导致显著更高比例的具有NAS评分改善(即改善至少2分)而没有纤维化评分的恶化的受试者。

与用安慰剂治疗的受试者相比，用600mg的Aramchol^TM的治疗导致显著更高比例的具有SAF活动度评分改善(即改善至少2分)而没有纤维化评分的恶化的受试者。

与用安慰剂治疗的受试者相比，用600mg的Aramchol^TM的治疗导致显著更高比例的具有NASH消退(0的气球样变、0或1的炎症)而没有纤维化的恶化的受试者。

(iv)探索性结果测量(600mg组)

用600mg的Aramchol^TM的治疗抑制了受试者的纤维化评分的恶化，这种抑制显著高于基于Aramchol^TM对受试者的肝甘油三酯的作用将预期的。

用600mg的Aramchol^TM对患有肝纤维化的受试者的治疗改善了受试者的纤维化评分，这种改善显著高于基于Aramchol^TM对受试者的肝甘油三酯的作用将预期的。

用600mg的Aramchol^TM对患有1a期肝纤维化的受试者的治疗改善了受试者的纤维化评分，这种改善显著高于基于Aramchol^TM对受试者的肝甘油三酯的作用将预期的作用。

用600mg的Aramchol^TM对患有1b期肝纤维化的受试者的治疗改善了受试者的纤维化评分，这种改善显著高于基于Aramchol^TM对受试者的肝甘油三酯的作用将预期的作用。

用600mg的Aramchol^TM对患有1c期肝纤维化的受试者的治疗改善了受试者的纤维化评分，这种改善显著高于基于Aramchol^TM对受试者的肝甘油三酯的作用将预期的作用。

用600mg的Aramchol^TM对患有2期肝纤维化的受试者的治疗改善了受试者的纤维化评分，这种改善显著高于基于Aramchol^TM对受试者的肝甘油三酯的作用将预期的作用。

用600mg的Aramchol^TM对患有3期肝纤维化的受试者的治疗改善了受试者的纤维化评分，这种改善显著高于基于Aramchol^TM对受试者的肝甘油三酯的作用将预期的作用。

用600mg的Aramchol^TM对患有4期肝纤维化的受试者的治疗改善了受试者的纤维化评分，这种改善显著高于基于Aramchol^TM对受试者的肝甘油三酯的作用将预期的作用。

用600mg的Aramchol^TM对患有肝纤维化的受试者的治疗改善了受试者的SAF评分，这种改善高于基于Aramchol^TM对受试者的肝甘油三酯的作用将预期的。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的受试者相比，用600mg的Aramchol^TM对患有肝纤维化的受试者的治疗导致显著更高比例的没有纤维化评分的恶化的受试者。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的受试者相比，用600mg的Aramchol^TM对患有肝纤维化的受试者的治疗导致显著更高比例的具有纤维化改善(即减少>或＝1分)的受试者。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的受试者相比，用600mg的Aramchol^TM对患有肝纤维化的受试者的治疗导致显著更高比例的具有纤维化改善(即减少>或＝1分)而没有NASH的恶化的受试者。

与用安慰剂治疗的受试者相比，用600mg的Aramchol^TM对患有肝纤维化的受试者的治疗导致显著更高比例的具有纤维化改善(即减少>或＝1分)而没有NASH的恶化的受试者。与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的受试者相比时，改善率为至少2。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的受试者相比，用600mg的Aramchol^TM的治疗导致显著更高比例的具有NAS评分改善(即改善至少2分)的受试者。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的受试者相比，用600mg的Aramchol^TM的治疗导致显著更高比例的具有NAS评分改善(即改善至少2分)而没有纤维化评分的恶化的受试者。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的受试者相比，用600mg的Aramchol^TM对患有肝纤维化的受试者的治疗导致显著更高比例的具有SAF活动度评分改善(即改善至少2分)的受试者。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的受试者相比，用600mg的Aramchol^TM对患有肝纤维化的受试者的治疗导致显著更高比例的具有SAF活动度评分改善(即改善至少2分)而没有纤维化评分的恶化的受试者。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的受试者相比，用600mg的Aramchol^TM对患有肝纤维化的受试者的治疗导致显著更高比例的具有NASH消退(0的气球样变、0或1的炎症)的受试者。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的受试者相比，用600mg的Aramchol^TM对患有肝纤维化的受试者的治疗导致显著更高比例的具有NASH消退(0的气球样变、0或1的炎症)而没有纤维化的恶化的受试者。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的受试者相比，用600mg的Aramchol^TM对未患有肝纤维化的受试者的治疗导致显著更高比例的没有纤维化评分的恶化的受试者。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的受试者相比，用600mg的Aramchol^TM的治疗导致显著更高比例的具有NAS评分改善(即改善至少2分)的受试者。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的受试者相比，用600mg的Aramchol^TM的治疗导致显著更高比例的具有NAS评分改善(即改善至少2分)而没有纤维化评分的恶化的受试者。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的受试者相比，用600mg的Aramchol^TM对未患有肝纤维化的受试者的治疗导致显著更高比例的具有SAF活动度评分改善(即改善至少2分)的受试者。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的受试者相比，用600mg的Aramchol^TM对未患有肝纤维化的受试者的治疗导致显著更高比例的具有SAF活动度评分改善(即改善至少2分)而没有纤维化评分的恶化的受试者。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的受试者相比，用600mg的Aramchol^TM对未患有肝纤维化的受试者的治疗导致显著更高比例的具有NASH消退(0的气球样变、0或1的炎症)的受试者。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的受试者相比，用600mg的Aramchol^TM对未患有肝纤维化的受试者的治疗导致显著更高比例的具有NASH消退(0的气球样变、0或1的炎症)而没有纤维化的恶化的受试者。

讨论

基于本文描述的研究，令人惊讶地发现Aramchol^TM是有效的抗纤维化和抗肝硬化剂。还发现Aramchol^TM出乎意料地优于OCA，并且提供肝纤维化的改善的、有效的治疗。因此，Aramchol^TM可以用于预防急性或致死性肝衰竭和/或肝性脑病或门体静脉脑病，例如毒素诱导的肝衰竭和/或肝性脑病。

此外，还令人惊讶地发现Aramchol^TM有效地逆转已建立的纤维化。如通过脂质积累(苏丹红染色)、纤维化(天狼星红和SMA染色)和炎症(F4/80和CD64染色)的减少来确定的，Aramchol^TM治疗改善了肝组织学。事实上，除了NASH的主要病理学即脂肪变性和炎症之外，Aramchol^TM还对纤维化有作用。

本文呈现的结果表明，Aramchol^TM下调来自人类星状细胞的胶原产生，Aramchol^TM的作用通过下调SCD 1和上调谷胱甘肽产生来介导，并且Aramchol^TM对纤维化的作用经由下调脂肪变性和炎症以及直接经由下调来自星状细胞的胶原产生来介导。总之，本文的信息支持如权利要求中阐述的Aramchol^TM在人类患者中的作用。

对于本文列出的更高剂量的Aramchol^TM，预期与400mg或600mg剂量的实施例4的结果类似的结果。

实施例5：在患有NASH的人类受试者中使用Aramchol^TM(硬脂酰CoA去饱和酶抑制剂)进行的体内研究。总体2b期随机化的安慰剂对照的ARREST试验的一年结果。

在3个月的2a期人类NAFLD研究中，Aramchol^TM减少了肝脂肪。它在临床前模型中也具有抗纤维化作用。

本文报告了来自总体2b期ARREST研究的最终结果，该研究评价了在患有NASH的患者(pt)中用Aramchol^TM进行的1年治疗。

方法

纳入患有前驱糖尿病或糖尿病和经活组织检查证实的NASH(NAS≥4；F<4)的超重/肥胖患者。在基线和第52周进行肝活组织检查和通过MR波谱法进行的肝脂肪测量(LF-MRS)。两者都在中心读取。主要终点是LF-MRS相对于基线的绝对变化(600mg相对于安慰剂，PLB；混合模型重复测量)。关键次要终点包括：NASH消退而没有纤维化恶化，≥1期的纤维化减少而没有NASH恶化和ALT减少。

结果

将来自11个国家(US、欧洲、拉丁美洲)的247名患者以2:2:1随机化至Aramchol^TM400mg QD(N＝101)、Aramchol^TM 600mg QD(N＝98)或PLB(N＝48)。在基线时：65％女性，平均年龄54.4岁，BMI 32.7kg/m²，HbA1c 6.6％±1.0％(平均值±SD)，LF-MRS 28.5％±11.7％(平均值±SD)；60％纤维化2-3期和NAS 5.12±1.00(平均值±SD)。89％的患者完成了研究。该研究的结果在图16-图20中总结。

LF-MRS在400mg(p＝0.045)和600mg(p<0.066)相对于PLB显著减少。在600mg时，在47％的患者中观察到统计学上显著的≥5％的肝脂肪绝对减少，相对于在PLB时的24％(p<0.028)，以及在400mg时的37％，表明剂量响应(图16B)。600mg组的患者相比PLB具有更常见的NASH消退而没有纤维化恶化：分别为16.7％相对于5.0％(OR＝4.74，95％CI：0.99-22.66，p＝0.051)(图18A)。600mg组中有29.5％出现了≥1期的纤维化减少而没有NASH恶化，相对于PLB组的17.5％(p＝0.21)(图19A)。600mg组中的1例(1.3％)患者进展为肝硬化，相对于400mg组中的6例(7.5％)，以及PLB组中的3例(7.5％)(图19B)。两种剂量均以剂量响应方式相对于PLB显著减少ALT(p<0.001)(图20A)、AST(p＝0.002)(图20B)和HbA1c(p<0.007)。血清脂质参数和体重无变化。由于不良事件(AE)导致的中止<5％，并且10％的患者中出现严重AE，这在组之间无差异。

结论

在患有NASH的患者中的一年的PLB对照的2b期试验中，Aramchol^TM显著减少了肝脂肪，改善了组织学、肝生物化学和血糖控制，具有优秀的安全性和耐受性。Aramchol^TM对NASH的治疗效力应在更大的3期试验中进行测试。

实施例6：在患有NASH的人类受试者中用Aramchol^TM进行的体内研究。患者中300mgBID和600mg QD剂量的ARAMCHOL^TM的建模和模拟。

表1总结了来自三项研究的报告的血浆暴露——健康志愿者中的单剂量I期(30mg-900mg，AUC＝AUC_inf)；II期Aramchol^TM003重复剂量研究(来自100mg和300mg QD在D84的AUC)，在D84的IIb期C_最小(400mg和600mg QD)。

表1.健康志愿者和患者中的暴露数据总结。

健康志愿者的暴露与跨30mg-900mg的剂量范围的AUC/剂量(397-97ng/mL.h/(mg/kg))的约四倍减少成亚比例(sub-proportional)。相对于30mg/kg的生物利用度已经计算为(AUC/剂量)/(AUC/30mg)，并且在图11中针对该组进行了绘制。

从100mg至300mg的患者的暴露也是亚比例的。值得注意的是，在这项研究中，在300mg的平均稳态AUC(32992ng/mL.h)比健康志愿者中单剂量的AUC_inf(64285ng/mL.h)低约2倍。这可能是因为在患者研究中使用了片剂制剂，相对于在健康志愿者中使用了粉剂/混悬剂，或者可能只是反映了受试者之间的高度可变性(通常在研究组中的暴露CV为>50％)。

测量了400mg和600mg时患者的稳态(第84天)C_最小。虽然本研究中未计算AUC，但由于半衰期相对长(>24h)，预计C_最小、C_最大和C_平均相似，并且因此AUC可以由C_最小*24近似，以允许与其他研究进行比较(预计真实值略高)。这指示患者在400mg时的暴露(68616ng/mL.h)相对于300mg时的暴露(32992ng/mL.h)成超比例(super-proportional)，这与AUC/剂量随剂量降低的一般趋势相反。同样，这可能反映受试者之间的可变性或片剂中所用赋形剂的差异。

在图12A和图12B中示出了AUC与剂量和AUC/剂量与剂量的图。

建模和模拟

考虑到通常观察到的亚比例暴露，将相同的总每日剂量分成两个BID剂量可能增加血浆AUC。这项分析的目的是对这种行为建模。

在Phoenix

中对患者(2期ARAMCHOL^TM 003)第1天和第84天的300mg数据进行了建模，假设单房室药代动力学(由C1和V参数化)和以速率Ka具有延迟T_延迟的一级吸收。拟合模型参数全部具有<25％的CV，并且预测的浓度数据合理地捕捉了观察数据，如图13A-图13C所示。

如图14所示，这些模型参数用于模拟在300mg BID时的暴露。使用该模型预测的稳态C_最小为2630ng/mL，AUC为65500ng/mL.h。

为了预测600mg时的暴露，假设在健康志愿者中观察到相同的非线性，对亚比例PK(较高剂量时较低的生物利用度)进行了校正。基于图13A-图13C，与300mg(0.53)相比，在600mg时相对生物利用度将低约0.75倍(约0.4)，并且来自300mg数据的模型参数V/F和C1/F已相应调整。

图15中示出来自600mg QD剂量的模拟暴露，预测的C_最小为1820mg/mL，并且AUC为49100ng/mL.h。

考虑到受试者之间和研究之间的暴露的可变性，AUC和C_最小的绝对值可能与预测值不同，但预测了300mg BID剂量，平均地给出比600mg QD高约1.4倍的C_最小，以及高1.3倍的AUC。

总之：

药物的暴露由曲线下面积(AUC，积分浓度-时间曲线)表示，并且通常与剂量成线性。在这些情况下，一个剂量的900mg的Aramchol^TM预计给出300mg剂量的暴露(AUC)的三倍。然而，发现较高的剂量导致暴露的低于线性增加。因此，在健康志愿者中，尽管有高3倍的剂量，但单个900mg剂量(AUC＝86943ng/mL.h)仅给出比单个300mg剂量(AUC＝64285ng/mL.h)高1.35倍的暴露。这可能是由于在较高的剂量水平下Armachol的不完全吸收。基于这种关系，预期两个300mg剂量(例如，以12h剂量间隔)给出比单个每日600mg剂量高约1.4的因数的暴露。

实施例7：使用Aramchol^TM进行的机制研究：Aramchol^TM在肝星状细胞中下调SCD1并诱导PPARγ，以减弱细胞活化和纤维化。

背景：

肝星状细胞(HSC)的活化通过受PPARγ信号传导抑制的过程驱动肝纤维化。Aramchol^TM(花生酰氨基胆烷酸)是脂肪酸-胆汁酸缀合物，其在2b期研究中降低非酒精性脂肪肝病(NAFLD)中的肝脂肪含量，并且改善非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，而没有使纤维化恶化。Aramchol^TM在两种不同的模型(MCD饮食和硫代乙酰胺)中减轻纤维化。在小鼠中，Aramchol^TM通过下调肝细胞中的脂肪酸合成酶硬脂酰Co-A去饱和酶1(SCD-1)来减少肝脂肪。Aramchol^TM的抗纤维化作用的机制是未知的；此外，尽管HSC还以视黄酯储存脂质。SCD-1在HSC中的作用以及Aramchol^TM对SCD-1活性的影响是未知的。

目的：

使用人类肝星状细胞系LX-2研究Aramchol^TM对HSC的直接抗纤维化作用，并且确定Aramchol^TM对HSC的作用机制。

方法：

用Aramchol^TM(10μM)处理血清饥饿的LX2细胞24小时或48小时。分别通过qPCR和蛋白质印迹测量纤维化基因表达和SCD-1蛋白表达。RNAseq在24h和48h一式两份地进行。用DSeq2评估差异基因表达，而基因集富集分析(GSEA)和基因本体(GO)分析评估了基因表达变化的功能性。通过灌注从C57BL/6小鼠收获原代肝细胞，并且在培养中用Aramchol^TM(10μM)处理48小时。通过qPCR测量PPARγmRNA表达。

结果：

结果在图21-图25中示出。

图21A和图21B描绘Aramchol^TM如何下调HSC中的SCD-1mRNA和纤维化基因并且上调PPARγmRNA。基于RT-PCR(N＝3)*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。

图22A和图22B描绘Aramchol^TM如何下调HSC中的SCD-1。图22A和图22B分别描绘用Aramchol^TM处理持续24hr或48hr的HSC中下调的SCD-1蛋白的蛋白质印迹和密度测定。(N＝3)*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。

图23描绘通过RNASeq证实用Aramchol^TM处理48hr之后，纤维化基因和SCD-1mRNA的下调以及PPARγmRNA的上调。胆固醇流出调节蛋白ABCA1也被上调。

图24描绘在处理48小时之后，Aramchol^TM不影响原代小鼠肝细胞中的PPARγmRNA表达。(N＝3)*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。

图25A和图25B描绘Aramchol^TM如何下调HSC中的胆固醇生物合成和胶原形成。LX-2细胞在处理24小时(图25A)或48小时(图25B)之后的基因集富集分析。

结论：

Aramchol^TM在肝星状细胞中使PPARγmRNA升高并且下调SCD-1mRNA和蛋白质。通过RNAseq和途径分析，Aramchol^TM下调了作为临床验证的HSC活化信号(HSC activationsignature)的一部分的纤维化基因(包括COL1A1和αSMA)，以及涉及胆固醇生物合成和体内平衡以及胶原形成的途径。Aramchol^TM选择性地上调HSC中而非肝细胞中的PPARγmRNA。

用300mg Q12h和600mg Q24h的方案口服给药至稳定状态之后，Aramchol的血浆浓度

这是单中心、开放标签、2期、随机化的交叉研究，其中受试者在一期内持续9天每日两次(Q12h)接受Aramchol^TM 300mg的口服剂量，在第10天早上接受单个剂量，并且在另一期内持续10天每日一次(Q24h)接受600mg。在每一期的第10天，在给药间隔内在稳态获得药代动力学(PK)谱。受试者在Aramchol的每个剂量之前的30分钟内吃便餐(light meal)。

受试者以1:1随机化，以使得8名在第一期接受每种方案，并且在第二期接受替代方案，如下所示：

研究人群

16名年龄18岁-45岁的健康男性或女性受试者。主要纳入标准：同意时年龄在18岁-45岁；身体质量指数(body mass index)在18.0kg/m²-30.9kg/m²(包括端点)的范围内；理解试验的性质并遵守其要求的能力；基于临床病史、体检、ECG、生命体征和临床实验室测试被视为健康的；能够并愿意给出完全知情的书面同意；同意使用可靠的避孕；同意在研究期间和之后3个月不献血或不捐献血液制品；愿意给出书面同意以将数据输入过度志愿活动预防系统(The Over-volunteering Prevention System,TOPS)。

研究药物

根据欧盟医药产品管理规则(The Rules Governing Medicinal Products inthe European Union)第4卷：良好生产规范(Good Manufacturing Practice，GMP)，以及HMR对研究药物产品(IMP)的生产许可，研究药物Aramchol由主办方和HMR药房包装并贴上标签。IMP标签包括由第4卷：GMP的附录13所要求的所有信息。根据GMP和HMR标准操作程序对IMP进行储存和说明用途。IMP责任记录从IMP收到起保持在现场。将IMP供应保持在15℃和25℃之间的安全、限制进入、温度受控的储存区。在整个研究期间，保持对IMP储存区的温度读数的记录。在试验结束时，将所有未使用的IMP供应归还给主办方。只有经授权的人员具有IMP的使用机会。

时间表和程序

临床程序的时间表：受试者在其研究药物的首个剂量之前21天内筛选。在每一期从第-1天直至第11天早上，他们保持住在病房。方案中规定，第1期最后的剂量和第2期首个剂量之间的至少7天的间隔。实际间隔为30天。受试者在第二期结束之后14天(±2天)参加了随访访视。研究结束被定义为最后的受试者的最终随访访视。仅在第1期，在第1天的早上剂量之前采集基线样品。在两个治疗期中，在第7天、第8天、第9天和第10天的早上剂量之前，以及对于每日两次给药方案在第10天给药后1h、2h、4h、6h、8h、10h和12h，采集用于测定血浆Aramchol的血液样品，并且对于每日一次的方案在给药后16h、20h和24h采集另外的样品。在整个研究中经常评估安全性和耐受性，包括生命体征、12导联安全ECG、体检、实验室安全性测试和不良事件，直到受试者最后的访视。

生物分析和药代动力学分析：收集在含有抗凝血剂K2EDTA的管中的人类血浆中的Aramchol在蛋白质沉淀后进行测定，随后使用LC/MS/MS检测进行液-液萃取。定量下限为50ng/mL。在第1期和第2期的第10天，对于每个受试者计算以下血浆PK参数：在从零时间(给药前)到时间τ的给药间隔(τ)期间，最终剂量之后的浓度-时间曲线下面积(AUCτ)，其使用(指定的)梯形方法计算，将300mg Q12h方案的值(AUC12h)加倍以获得24h的值；通过AUCτ计算的给药间隔中的平均血浆浓度C_平均；从观察到的浓度获得的给药间隔结束时的浓度Cτ。

统计学：对于主要终点，待测试的假设是：零假设：两个给药间隔(Q12h和Q24h)之间的AUCτ不存在显著差异。备择假设：在两个给药间隔(Q12h和Q24h)之间，存在AUCτ的显著差异。对PK数据进行线性混合效应分析，其中将分期、治疗和顺序(sequence)作为固定效应，并且将顺序中的受试者作为随机效应。计算几何平均比率和相关的90％置信区间。

结果

群体：16名受试者被招募，3名女性和13名男性。12名受试者是高加索人(白人)，2名是黑人，1名是高加索人和非洲黑人混血儿，并且1名是亚洲人(不包括东亚人)。他们的平均年龄为34.3岁(22岁至43岁的范围)。

安全性和耐受性：Aramchol是安全的且耐受良好的。没有死亡或严重AE，并且没有导致提前终止的AE。第2期报告了一例SAE，其中受试者正在服用Aramchol 600mg Q24h。该受试者在第2期给药第9天报告复视，称症状在2天前开始。继续给药，并且该受试者第二天按照方案完成研究。诊断为不明病因的左侧第6颅神经麻痹。不存在其他异常的神经学发现。头部CT和MRI未展示异常。该事件在最后的研究剂量之后一个月仍在进行。在报告的22例AE中，12例(54.5％)被评定为轻度，并且除了受试者1006的SAE和另一例AE外，所有AE快速消除。在Aramchol 600mg Q24h方案(n＝12)和300mg Q12h方案(n＝10)期间，类似数量的受试者报告了AE。报告最频繁的AE是头痛(由4名受试者报告)。所有其他AE是单个事件。在研究期间，生命体征或心电图(ECG)形态学或间隔没有记录到临床上显著的异常。不存在实验室安全性参数的临床上显著的异常，实验室安全性参数包括全血细胞计数、血浆生化和尿分析。

药代动力学结果

表1示出了通过AUCτ/t对于两种给药方案的每个受试者计算的AUCτ和C_平均，以及AUC0-24h 300mg Q12h/600mg Q24h的比率。

表1.个体AUCτ和C_平均值以及AUC0-24值的比率

*计算为2×AUC 0-12

第7天、第8天、第9天的谷值浓度(早上剂量前)显示所有受试者在第10天前处于稳态。300mg Q12h方案第7天和第10天的平均±SD值分别为4633.6±1033.3ng/mL和4526.7±1180.4ng/mL，并且针对600mg Q24h的对应值分别为2948.6±1008.6ng/mL和2837.1±942.8ng/mL。表2和表3分别示出了在给药间隔中的AUC0-24和C_平均的几何平均比率以及90％CI和变异系数(CV％)的统计学分析。300mg Q12h方案相对于600mg Q24h方案的几何平均AUC0-24值的比率为1.53(90％CI 1.38，1.69)。在给药间隔结束时的平均血浆浓度Cτ在Aramchol 300mg Q12h后为4981ng/mL，并且在Aramchol 600mg Q24h后为3031ng/mL。明显地，每日两次给药方案的平均暴露比每日一次方案高约50％。如所预期的，数据还示出Q12h给药方案的可变性小于Q24h方案。

表2.最终剂量后给药间隔中的AUC_τng*h/mL

表3.最终剂量后给药间隔中的C_平均ng/mL

给药错误：在第2期给药的第9天即倒数第二天早上，受试者1007本应接受Aramchol 300mg，但替代地错误地被施用了Aramchol 600mg的剂量。该受试者在最初8天接受了每日两次300mg的正确剂量。试验医师和主办方同意当天晚上不对受试者给药，以使得他的治疗不超过计划的总每日剂量。鉴于这一错误，重复了统计学分析，其中省略了该受试者。表4和表5分别呈现了AUC0-24和C_平均以及90％CI和CV的比率的分析。300mg Q12h相对于600mg Q24h方案的AUC0-24的几何平均值的平均比率为1.55(90％CI 1.39，1.72)。在给药间隔中的平均血浆浓度在Aramchol 300mg Q12h后为5011ng/mL，并且在Aramchol^TM 600mgQ24h后为2998ng/mL。

表4.最终剂量后给药间隔中的AUCτng.h/mL-排除受试者1007

表5.最终剂量后给药间隔中的C_平均ng/mL(排除受试者1007)

讨论和结论：以每12小时300mg的剂量施用Aramchol导致24小时的血浆浓度显著高于每24h施用一次600mg的Aramchol所观察到的24小时的血浆浓度。在所有16名受试者中，每12小时给药方案的平均浓度高约50％，并且暴露更大。如表3中所示，在Aramchol600mg Q24h中具有相对高的暴露的受试者中，最小增加为1.07的比率，并且最大为2.69，这在第1期具有最低暴露的受试者接受Aramchol 600mg Q24h时发生。排除在第9天早上接受了Aramchol 600mg的剂量而不是Aramchol 300mg的预定剂量的一名受试者使结果几乎无差别。得出的结论是，每日两次的方案可靠地导致显著更高的暴露。这可以转化为Aramchol在治疗NASH中更大的有效性。在这项研究中，较高的暴露不与任何安全性损害相关。其是耐受良好的，并且所有受试者完成了2×10天的给药期。除头痛外，所有AE均为单个事件，并且不存在严重AE。然而，存在一例SAE，由于第6颅神经麻痹导致复视的病例，其原因未知。受试者在检查中没有其他神经学发现，并且CT和MRI未示出异常。受试者在筛选期期间报告了普通感冒，但迄今为止没有信息支持病毒病因。该SAE在第2期第9天(600mg Q24h)报告，并且在最后的研究剂量之后一个月仍在进行。它被认为不太可能与研究产品的施用相关。总之，与将单个每日剂量增加到高于600mg相比，认为每日两次300mg的方案可以达到Aramchol的更大暴露。该方案由给药10天的健康受试者良好耐受。迄今为止健康志愿者的任何研究或受试者被治疗长达1年的2期研究中均不存在安全性问题。

虽然本发明的某些特征已经在本文中被说明和描述，但是本领域普通技术人员现在将想到许多修改、替换、变化和等效物。因此，应当理解，所附权利要求意图涵盖落在本发明的真实精神内的所有这样的修改和变化。

Claims (38)

1.一种用于治疗患有肝纤维化的人类受试者的肝纤维化的方法，包括向受试者施用每日剂量的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐，以便提供所述Aramchol^TM的全身性暴露，其中平均AUC_0-12在约40,000ng/ml至约90,000ng/ml之间。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述平均AUC_0-12为约55,000ng/ml。

3.一种用于治疗患有肝纤维化的人类受试者的肝纤维化的方法，包括向受试者施用每日剂量的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐，以便提供所述Aramchol^TM的全身性暴露，其中平均AUC_0-24在约80,000ng/ml至约180,000ng/ml之间。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述平均AUC_0-24为约110,000ng/ml。

5.一种用于治疗患有肝纤维化的人类受试者的肝纤维化的方法，包括向受试者施用每日剂量的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol^TM)或其药学上可接受的盐，以便提供所述Aramchol^TM的全身性暴露，其中每24h的C_平均在约3000ng/ml至约7000ng/ml之间。

6.根据权利要求5所述的方法，其中每24h的C_平均为约4500ng/ml。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述Aramchol^TM以在400mg和900mg之间的每日剂量施用，每日至少两次。

8.根据权利要求7所述的方法，其中每日剂量量为600mg或800mg。

9.根据权利要求7所述的方法，其中每次施用的剂量为300mg或400mg。

10.根据权利要求7所述的方法，其中所述Aramchol^TM每日两次被施用。

11.根据权利要求7所述的方法，其中所述Aramchol^TM的每日剂量为600mg，并且每日两次被施用，其中每次施用的剂量为300mg。

12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述受试者患有非酒精性脂肪肝病(NAFLD)；所述人类受试者具有至少1的气球样变评分、至少1的炎症评分和至少1的脂肪变性评分；所述人类受试者患有II型糖尿病或前驱糖尿病；或其任何组合。

13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述人类受试者患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。

14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述人类受试者具有至少4、至少5、至少6或至少7的NAFLD活动度(NAS)评分。

15.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述人类受试者未患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。

16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述肝纤维化为1期纤维化、2期纤维化、3期纤维化或4期纤维化。

17.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中每12小时向所述受试者施用300mg的Aramchol^TM。

18.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述Aramchol^TM被口服施用。

19.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述Aramchol^TM在早上和晚上施用。

20.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述Aramchol^TM与水一起施用，或者与餐食同时施用或在餐食的30分钟内施用，优选地其中所述餐食是早餐或晚餐，更优选地其中所述餐食是高脂肪餐或高卡路里餐。

21.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述Aramchol^TM在至少52周、至少72周、至少96周、至少2年、至少3年或至少4年的过程中施用。

22.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法还包括所述受试者的NAFLD没有根据活动度(NAS)评分所定义的恶化，所述受试者的脂肪变性、活动度和纤维化(SAF)活动度评分没有恶化，所述受试者中的肝脂肪的减少，受试者的脂肪变性的改善，受试者的气球样变的改善，NAFLD消退，NAFLD消退而没有纤维化的恶化，纤维化减少而没有NAFLD恶化，所述受试者中ALT水平的降低，所述受试者中AST水平的降低，所述受试者中HbAlc水平的降低，受试者没有进展为肝硬化，抑制非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和/或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的进展或其任何组合。

23.根据权利要求22所述的方法，还包括改善所述受试者的NAFLD活动度(NAS)评分，或改善所述受试者的脂肪变性、活动度和纤维化(SAF)活动度评分，改善所述受试者的纤维化评分或其任何组合。

24.根据权利要求23所述的方法，其中所述受试者在Aramchol^TM的施用开始时的NAS评分为至少4，并且所述受试者的NAS评分的改善为由多于一个参数贡献的至少2分的改善；

b)所述受试者在Aramchol^TM的施用开始时的SAF活动度评分为至少4，并且所述受试者的SAF活动度评分的改善为至少2分的改善。

25.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法还在所述受试者中减少肝脂肪，改善组织学、肝生物化学和血糖控制。

26.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法具有优异的安全性和耐受性。

27.根据权利要求22所述的方法，其中抑制NAFLD或NASH的进展包括预防进展，或相对于未用Aramchol^TM治疗的患者减少的进展。

28.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述人类受试者患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，并且所述方法还包括在所述受试者中抑制NASH的进展、NASH消退或其组合。

29.根据权利要求22所述的方法，其中所述改善、没有恶化或进展是从Aramchol^TM的施用开始2周、4周、8周、24周、40周、52周、65周、72周或96周；2年、3年或4年的改善、没有恶化或进展。

30.根据权利要求28所述的方法，其中NASH消退包括所述人类受试者具有0的气球样变评分和0或1的炎症评分。

31.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法还包括根据MRS所测量的，所述受试者中的肝甘油三酯与水的比率相对于Aramchol^TM的施用开始时的比率的降低。

32.根据权利要求31所述的方法，其中肝甘油三酯与水的比率降低10％至40％。

33.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法还包括：相对于Aramchol^TM的施用开始时的水平或比率，在所述受试者中

a)血红蛋白A1C或HOMA-IR的水平的降低；

b)纤维蛋白原、CK-18、C反应蛋白(CRP)、TNFα、IL 6和纤维化测试(NFS)的水平的降低；

c)瘦素与脂联素的比率的降低；或者

d)脂联素的水平的增加；

或者

e)所述人类受试者的体重相对于在Aramchol^TM的施用开始时的所述人类受试者的体重的减少；

f)所述人类受试者的腰围相对于在Aramchol^TM的施用开始时的所述人类受试者的腰围的减少；或者

g)所述人类受试者的脂肪肝指数相对于在Aramchol^TM的施用开始时的所述人类受试者的脂肪肝指数的减少。

34.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述人类受试者具有高脂肪和高卡路里的饮食和/或抵抗生活方式干预或抵抗饮食干预。

35.根据前述权利要求中任一项所述的方法，还包括施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含至少一种选自由以下组成的组的化合物：

a)二十碳五烯酸乙酯(EPA-E)、二十碳五烯酸(EPA)及其药学上可接受的酰胺、盐、酯和磷脂；

b)单独的或与一种或更多种另外的治疗剂组合的乙酰CoA羧化酶(ACC)的抑制剂；

c)盐酸吡格列酮或对映异构体纯的富含氘的吡格列酮；

d)过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)δ和γ双重激动剂；和

e)血管紧张素II受体拮抗剂、血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、胱天蛋白酶抑制剂、组织蛋白酶B抑制剂、CCR2趋化因子拮抗剂、CCR5趋化因子拮抗剂、氯通道刺激剂、胆固醇增溶剂、二酰基甘油O-酰基转移酶1(DGAT1)抑制剂、二肽基肽酶IV(DPPIV)抑制剂、法尼醇X受体(FXR)激动剂诸如奥贝胆酸和Px-104、FXR/TGR5双重激动剂、半乳糖凝集素-3抑制剂诸如LIPC-1010和GR-MD-02、胰高血糖素样肽(GLPI)激动剂、谷胱甘肽前体、丙型肝炎病毒NS3蛋白酶抑制剂、HMG CoA还原酶抑制剂、11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD I)抑制剂、IL-1β拮抗剂、IL-6拮抗剂、IL-10激动剂、IL-17拮抗剂、回肠钠胆汁酸协同转运蛋白抑制剂、瘦素类似物、5-脂氧合酶抑制剂、LPL基因刺激剂、赖氨酰氧化酶同源物2(LOXL2)抑制剂、PDE3抑制剂、PDE4抑制剂、磷脂酶C(PLC)抑制剂、PPARα激动剂、PPARγ激动剂诸如罗格列酮和吡格列酮、二甲双胍、己酮可可碱、维生素E、硒、ω-3脂肪酸和甜菜碱、PPAR8激动剂、Rho相关蛋白激酶2(ROCK2)抑制剂、钠葡萄糖转运蛋白-2(SGLT2)抑制剂、硬脂酰CoA去饱和酶I抑制剂、甲状腺激素受体β激动剂、肿瘤坏死因子α(TNFα)配体抑制剂、转谷氨酰胺酶抑制剂、转谷氨酰胺酶抑制剂前体、PTPib抑制剂、ASKI抑制剂和血管粘附蛋白-1抑制剂诸如PXS4728A、二甲双胍、GR-MD-02、半胱胺酒石酸氢盐、simtuzumab、emricasan、GFT-505、CER-002、KD3010、KD3020、MBX8025、LUM002、RP-103和cenicriviroc。

36.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述肝纤维化是由以下引起的：接触肝毒性化学物质或机械性梗阻、营养不良、血色素沉着病、被动性充血、暴露于毒物或毒素、暴露于药物、免疫反应、遗传决定的对某种物质的敏感、感染、细菌感染、病毒感染、寄生虫感染、病毒性肝炎、梅毒、自身免疫性肝炎、毒素诱导的肝炎、贮积或代谢性肝紊乱、先天性肝纤维化、原发性胆汁性肝硬化、药物诱导的肝炎、寄生虫性肝炎、原发性硬化性胆管炎、巴德-吉亚利综合征、肝静脉闭塞病、门静脉血栓形成或由于先前肝手术造成的瘢痕化，优选地，所述纤维化表现为门静脉高血压和/或肝硬化。

37.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述受试者初次进行Aramchol^TM治疗，或者初次进行NAFLD治疗。

38.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述纤维化由选自由以下组成的组的因素引起：肺纤维化、心脏纤维化、肾纤维化、皮肤纤维化、眼纤维化、粘膜纤维化、中枢神经系统纤维化、骨或骨髓纤维化、内分泌器官纤维化、胃肠系统纤维化、纵隔纤维化、纤维蛋白形成后纤维化、增生性纤维化、腹膜后纤维化、胰腺纤维化或与自身免疫性疾病相关的纤维化。

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