CN113288922B - 一种麻黄提取物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种麻黄提取物及其制备方法，包括以下步骤：(1)取麻黄中药材破碎，磨粉，过筛，得麻黄粉，加入体积分数为55％‑65％乙醇溶液、质量分数为0.3％～0.5％磷酸氢钠溶液，调节pH值为4.6～4.8，再添加酿酒酵母菌粉，置于28～30℃下进行发酵8～12h，得发酵料；(2)将发酵料在135‑142℃亚临界水提取8‑15分钟，离心，取上清液；(3)将上清液载入反相色谱柱中，进行梯度洗脱分离，采用甲醇和水混合溶剂作为洗脱剂，得到纯化液；(4)将纯化液进行喷雾干燥，进料流量为190～210mL/h，进风温度为280～320℃，干燥后，过筛，得到目标麻黄提取物，提高药效同时有利于减少不良反应。

Description

一种麻黄提取物及其制备方法
技术领域
本发明涉及药物制备技术领域，特别涉及一种麻黄提取物及其制备方法。
背景技术
麻黄为麻黄科植物草麻黄Ephedra sinica Stapf的干燥草质茎。麻黄主要含有生物碱类、黄酮类、有机酸类等，其中生物碱类有效成分主要为麻黄碱，麻黄碱包括盐酸麻黄碱、伪麻黄碱、盐酸甲基麻黄碱。其中，盐酸甲基麻黄碱的平喘作用大于麻黄碱、伪麻黄碱，而且更为安全。采用水、乙醇提取的提取率均较高。CN112220808A公开一种麻黄提取物及其活性成分和用途，所述麻黄提取物为麻黄水提物和麻黄醇提物，所述活性成分包括草棉黄素、没食子酸、槲皮素及芹菜素，该方法不适用提取麻黄碱等。CN103800397A公开大孔树脂纯化麻黄总生物碱的工艺，主要通过大孔树脂的预处理、上样、洗脱，纯化麻黄总生物碱。该纯化工艺主要针对麻黄总生物碱的纯化，没有考虑对盐酸甲基麻黄碱的转化等。因此，本发明旨在提供一种麻黄提取物的制备方法，解决上述问题。
发明内容
鉴于此，本发明提出一种麻黄提取物及其制备方法，不但提高麻黄碱的转化率，而且提高麻黄碱的转移率，尤其提高了盐酸甲基麻黄碱的转化率以及转移率，在充分提高麻黄提取物的止咳作用，同时有利于减少药物不良反应。
本发明的技术方案是这样实现的：
一种麻黄提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)发酵：取麻黄中药材破碎，磨粉，过筛，得麻黄粉，加入体积分数为 55％-65％乙醇溶液、质量分数为0.3％～0.5％磷酸氢钠溶液，调节pH值为4.6～4.8，再添加酿酒酵母菌粉，所述酿酒酵母菌粉为麻黄粉质量的5～8％，置于28～30℃下进行发酵8～12h，得发酵料；本发明加入一定浓度的乙醇溶液、磷酸氢钠溶液，并加入一定量的酿酒酵母菌粉，在一定发酵条件下，有效促进发酵效果，利于转化出更多麻黄碱，尤其利于转化出更多盐酸甲基麻黄碱，利于提高提取物中麻黄碱含量，尤其提高盐酸甲基麻黄碱含量，利于提高其药效、减少药物不良反应。
(2)提取：将发酵料在135-142℃亚临界水提取8-15分钟，所述发酵料和水的质量体积比kg/L为1：20-30，得到提取液，将提取液进行离心，取上清液，备用；本发明采用一定温度、时间条件进行亚临界水提取时间，利于提高总麻黄碱含量，尤其利于充分提取盐酸甲基麻黄碱。
(3)纯化：将上清液载入反相色谱柱中，进行梯度洗脱分离，采用甲醇和水混合溶剂作为洗脱剂，得到纯化液；本发明采用甲醇和水混合溶液进行梯度洗脱，提高其纯化效果，提高有效活性成分转移。还采用一定梯度浓度的甲醇和水混合溶液，进一步提高其效果。
(4)干燥：将纯化液进行喷雾干燥，进料流量为190～210mL/h，进风温度为280～320℃，干燥后，过筛，得到目标麻黄提取物。
进一步的，步骤(1)中，所述乙醇溶液、磷酸氢钠溶液与麻黄粉的质量比为1.2～1.3：0.3-0.5：1。
进一步的，步骤(2)中，所述离心条件为5000-6000r/min离心3-5min。
进一步的，步骤(3)中，所述甲醇和水的洗脱梯度体积比例依次为85:15、 80:20、90:10。
进一步的，步骤(4)中，所述过筛的目数为60目。
进一步的，步骤(1)中，所述乙醇溶液的体积分数为60％，所述磷酸氢钠溶液的质量分数为0.35％。
进一步的，步骤(1)中，所述酿酒酵母菌粉为麻黄粉质量的7％。
进一步的，步骤(2)中，所述亚临界水提取的温度为138℃，提取时间为 12分钟。
进一步的，步骤(3)中，所述反相色谱柱填料为十八烷基硅烷。
一种麻黄提取物，由本发明任一项所述的麻黄提取物的制备方法制得。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
采用本发明提取方法，不但提高麻黄碱的转化率，而且提高麻黄碱的转移率，尤其提高了盐酸甲基麻黄碱的转化率以及转移率，在充分提高麻黄提取物的止咳作用，同时有利于减少药物不良反应。
其中，本发明加入一定浓度的乙醇溶液、磷酸氢钠溶液，并加入一定量的酿酒酵母菌粉，在一定发酵条件下，有效促进发酵效果，利于转化出更多麻黄碱，尤其利于转化出更多盐酸甲基麻黄碱，利于提高提取物中麻黄碱含量，尤其提高盐酸甲基麻黄碱含量，提高其药效以及安全性。本发明采用一定温度、时间条件进行亚临界水提取时间，利于提高总麻黄碱含量，尤其利于充分提取盐酸甲基麻黄碱。本发明采用甲醇和水混合溶液进行梯度洗脱，提高其纯化效果，提高有效活性成分转移。还采用一定梯度浓度的甲醇和水混合溶液，进一步提高其效果。
具体实施方式
为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。
本发明实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
本发明实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1麻黄提取物的制备方法
(1)发酵：取麻黄中药材破碎，磨粉，过筛，得麻黄粉，加入体积分数为60％乙醇溶液、质量分数为0.35％磷酸氢钠溶液，其中乙醇溶液、磷酸氢钠溶液与麻黄粉的质量比为1.25：0.4：1，调节pH值为4.7，再添加酿酒酵母菌粉，酿酒酵母菌粉加入量为麻黄粉质量的7％，置于28～30℃下发酵10h，得发酵料；
(2)提取：将发酵料在138℃亚临界水提取12分钟，发酵料和水的质量体积比kg/L为1：25，得到提取液，将提取液在5500r/min条件下离心4min，取上清液，备用；
(3)纯化：将上清液载入填料为十八烷基硅烷的反相色谱柱中，进行梯度洗脱分离，采用甲醇和水混合溶剂作为洗脱剂，所述甲醇和水的洗脱梯度依次为85:15、80:20、90:10，得到纯化液；
(4)干燥：将纯化液进行喷雾干燥，进料流量为200mL/h，进风温度为300℃，干燥后，过60目筛，得到目标麻黄提取物。
实施例2麻黄提取物的制备方法
(1)发酵：取麻黄中药材破碎，磨粉，过筛，得麻黄粉，加入体积分数为 55％乙醇溶液、质量分数为0.5％磷酸氢钠溶液，其中乙醇溶液、磷酸氢钠溶液与麻黄粉的质量比为1.2：0.5：1，调节pH值为4.6，再添加酿酒酵母菌粉，酿酒酵母菌粉加入量为麻黄粉质量的5％，置于28～30℃下发酵8h，得发酵料；
(2)提取：将发酵料在135℃亚临界水提取15分钟，发酵料和水的质量体积比kg/L为1：20，得到提取液，将提取液在5000r/min条件下离心5min，取上清液，备用；
(3)纯化：将上清液载入填料为十八烷基硅烷的反相色谱柱中，进行梯度洗脱分离，采用甲醇和水混合溶剂作为洗脱剂，所述甲醇和水的洗脱梯度依次为85:15、80:20、90:10，得到纯化液；
(4)干燥：将纯化液进行喷雾干燥，进料流量为190mL/h，进风温度为280℃，干燥后，过60目筛，得到目标麻黄提取物。
实施例3麻黄提取物的制备方法
(1)发酵：取麻黄中药材破碎，磨粉，过筛，得麻黄粉，加入体积分数为 65％乙醇溶液、质量分数为0.3％磷酸氢钠溶液，其中乙醇溶液、磷酸氢钠溶液与麻黄粉的质量比为1.3：0.3：1，调节pH值为4.8，再添加酿酒酵母菌粉，酿酒酵母菌粉加入量为麻黄粉质量的8％，置于28～30℃下进行发酵12h，得发酵料；
(2)提取：将发酵料在142℃亚临界水提取8分钟，发酵料和水的质量体积比kg/L为1：30，得到提取液，将提取液在6000r/min条件下离心3min，取上清液，备用；
(3)纯化：将上清液载入填料为十八烷基硅烷的反相色谱柱中，进行梯度洗脱分离，采用甲醇和水混合溶剂作为洗脱剂，所述甲醇和水的洗脱梯度依次为85:15、80:20、90:10，得到纯化液；
(4)干燥：将纯化液进行喷雾干燥，进料流量为210mL/h，进风温度为320℃，干燥后，过60目筛，得到目标麻黄提取物。
对比例1
该对比例与实施例1主要区别在于，步骤(1)中，酿酒酵母菌粉替换为布拉氏酵母菌。
对比例2
该对比例与实施例1主要区别在于步骤(1)中，酿酒酵母菌粉的加入量为麻黄粉质量的1％。
对比例3
该对比例与实施例1主要区别在于，步骤(1)中，磷酸氢钠溶液替换磷酸二氢钠溶液。
对比例4
该对比例与实施例1主要区别在于，调整步骤(1)发酵温度为32℃，发酵时间为24h。
对比例5
该对比例与实施例1主要区别在于，调整步骤(2)亚临界水提取时间为20 分钟，提取温度为148℃。
对比例6
该对比例与实施例1主要区别在于，调整步骤(3)调整洗脱剂，将甲醇和水混合溶剂替换为无水甲醇。
对比例7
该对比例与实施例1主要区别在于，调整步骤(3)没有采用梯度洗脱，使用单一浓度80:20(v/v)的甲醇和水作为洗脱剂。
一、有效成分检测
实施例1-3以及对比例1-7采用同一批次麻黄中药材制备麻黄提取物，采用 HPLC法分别检测药材以及提取物中盐酸麻黄碱、盐酸甲基麻黄碱、伪麻黄碱次碱含量，并统计总麻黄碱含量(总麻黄碱含量＝盐酸甲基麻黄碱含量+盐酸伪麻黄碱含量+盐酸麻黄碱含量)。并计算有效成分转移率。
色谱条件：采用Dikma Diamonsil-C18(4.6mm×250mm，5μm)色谱柱；乙腈-0.1％磷酸水溶液(4∶96)为流动相；检测波长为210nm；体积流量1.0ml/min；柱温30℃；进样量10μl。
其中，转移率＝提取物中有效成分含量(mg)/原药材中有效成分含量(mg)×100％，结果见表1：
表 1
Figure BDA0003064901250000061
上述结果表明，与对比例1-7比较，实施例1-3制得麻黄提取物总麻黄碱转移率明显提高，尤其提高了盐酸甲基麻黄碱转移率以及含量。采用本发明提取方法，转化出更多盐酸甲基麻黄碱，有效提高提取物中盐酸甲基麻黄碱含量，也提高了总麻黄碱含量。
二、动物试验
选用健康豚鼠130只。随机10只做为正常组普通饲养，其余豚鼠造模(即模型组)，第1天肌注4％OVA(鸡清白蛋白)溶液0.5ml，同时腹腔注射2％氢氧化铝0.2ml。从第14天开始，模型组豚鼠用1％OVA溶液(多功能诱咳引喘仪)雾化后攻击1min，隔天一次，共7次。最后一周，模型豚鼠按体重分为空白模型组，试验组1-8(实施例1-3以及对比例1-7麻黄提取物，5g生药/kg)，阳性药富马酸酮替芬片组(0.5mg/kg)，开始口服给药，给药容积10ml/kg，正常与模型组给予等容积0.5％CMC，每天一次，连续7天。咳嗽反应的测定：第26天，各组豚鼠放入诱咳引喘仪中，雾化吸入0.2×10-2mol/L辣椒素溶液，记录2min内各豚鼠的咳嗽次数。各组数据进行统计，结果见表2。
表 2
Figure BDA0003064901250000071
与模型组比较*P<0.05,**P<0.01
结果表明，与空白模型组对比，各试验组对豚鼠变异性哮喘均有一定的止咳作用。其中，实施例1-3制得麻黄提取物的止咳作用得到明显提高。
其中，对比例1-4提取物活性成分含量以及药效明显下降。本发明加入一定浓度的磷酸氢钠溶液，并加入一定量的酿酒酵母菌粉，在一定发酵条件下，有效促进发酵效果，利于转化出更多麻黄碱，尤其利于转化出更多盐酸甲基麻黄碱，利于提高提取物中麻黄碱含量，尤其提高盐酸甲基麻黄碱含量，提高其药效以及安全性。
对比例5提高亚临界水提取温度以及时间，提取物活性成分含量反而下降。本发明采用一定温度、时间条件进行亚临界水提取时间，利于提高总麻黄碱含量，尤其利于充分提取盐酸甲基麻黄碱。
对比例6调整洗脱剂为无水甲醇，对比例7使用单一浓度甲醇和水作为洗脱剂，其提取物活性成分转移率以及药效也都有所下降。本发明采用甲醇和水混合溶液进行梯度洗脱，提高其纯化效果，提高有效活性成分转移。还采用一定梯度浓度的甲醇和水混合溶液，进一步提高其效果。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种麻黄提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)发酵：取麻黄中药材破碎，磨粉，过筛，得麻黄粉，加入体积分数为55％-65％乙醇溶液、质量分数为0.3％～0.5％磷酸氢钠溶液，调节pH值为4.6～4.8，再添加酿酒酵母菌粉，所述酿酒酵母菌粉为麻黄粉质量的5～8％，置于28～30℃下进行发酵8～12h，得发酵料；
所述乙醇溶液、磷酸氢钠溶液与麻黄粉的质量比为1.2～1.3：0.3-0.5：1；
(2)提取：将发酵料在135-142℃亚临界水提取8-15分钟，所述发酵料和水的质量体积比kg/L为1：20-30，得到提取液，将提取液进行离心，取上清液，备用；
(3)纯化：将上清液载入反相色谱柱中，进行梯度洗脱分离，采用甲醇和水混合溶剂作为洗脱剂，得到纯化液；
所述甲醇和水的洗脱梯度体积比例依次为85:15、80:20、90:10；
所述反相色谱柱填料为十八烷基硅烷；
(4)干燥：将纯化液进行喷雾干燥，进料流量为190～210mL/h，进风温度为280～320℃，干燥后，过筛，得到目标麻黄提取物。
2.根据权利要求1所述的麻黄提取物的制备方法，其特征在于，
步骤(2)中，所述离心条件为5000-6000r/min离心3-5min。
3.根据权利要求1所述的麻黄提取物的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述过筛的目数为60目。
4.根据权利要求1所述的麻黄提取物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述乙醇溶液的体积分数为60％，所述磷酸氢钠溶液的质量分数为0.35％。
5.根据权利要求1所述的麻黄提取物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述酿酒酵母菌粉为麻黄粉质量的7％。
6.根据权利要求1所述的麻黄提取物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述亚临界水提取的温度为138℃，提取时间为12分钟。
7.一种麻黄提取物，其特征在于，由权利要求1-6任一项所述的麻黄提取物的制备方法制得。
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