CN113288902A - 贝母辛在制备预防和/或治疗溃疡性结肠炎药物中的应用 - Google Patents

贝母辛在制备预防和/或治疗溃疡性结肠炎药物中的应用 Download PDF

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Abstract

贝母辛在制备预防和/或治疗溃疡性结肠炎药物中的应用，涉及医药领域。本发明通过实验证实贝母辛并未对实验小鼠造成显著性影响：贝母辛组实验小鼠无死亡，体重无显著性变化，肠组织无明显病变，结肠和盲肠无明显病理性症状，贝母辛具备一定的安全性。贝母辛能减少溃疡性结肠炎小鼠的体重下降率，能改善溃疡性结肠炎小鼠粪便性状和便血情况，改善溃疡性结肠炎小鼠DAI，且能有效预防和改善溃疡性结肠炎小鼠的肠组织病理性损伤，由此说明贝母辛具有特别优异的抗溃疡性结肠炎活性和一定的安全性，能显著改善溃疡性结肠炎症状。

Description

贝母辛在制备预防和/或治疗溃疡性结肠炎药物中的应用
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及贝母辛在制备预防和/或治疗溃疡性结肠炎药物中的应用。
背景技术
溃疡性结肠炎是一种病因尚不十分明确、以结直肠粘膜连续性、弥漫性炎症改变为特点的慢性非特异性肠道炎症性疾病，其病变主要限于大肠粘膜和粘膜下层。临床表现为腹泻、黏液脓血便、腹痛，多成反复发作的慢性病程。
目前，溃疡性结肠炎在临床上的治疗依据病程发展多用氨基水杨酸制剂(5-氨基水杨酸或柳氮磺胺吡啶等)、皮质类固醇激素(泼尼松或氢化可的松等)或免疫抑制剂(硫唑嘌呤或6-巯基嘌呤等)加以治疗。但这三类药物对溃疡性结肠炎的治疗作用较为局限且副作用较多。目前仍无有效的长期预防或治疗的方法。因此，研发出一种高效低毒的抗溃疡性结肠炎的药物，进而减缓患者痛苦和改善患者生物质量具有十分重要的意义。
贝母属Fritillaria是百合科草本植物，其药用部位多为干燥鳞茎，有61种、50个变种、5变型。贝母属药材包括川贝母、浙贝母、平贝母、伊贝母和湖北贝母5种。贝母为止咳良药，其化学成分还具备祛痰、平喘、降压、抗血小板聚集、对平滑肌作用、抗氧化、抗癌和抗炎等功效。
贝母辛具有式I所示结构，贝母辛是贝母属中的一种生物碱，研究表明贝母属生物碱具有止咳祛痰、平喘、降压、镇痛、抗癌、抗菌等多种作用，截至目前，还未见贝母辛抗溃疡性结肠炎的相关报道。
Figure BDA0003103926720000021
发明内容
本发明的目的是提供贝母辛在制备预防和/或治疗溃疡性结肠炎药物中的应用。
本发明为解决技术问题所采用的技术方案如下：
本发明的贝母辛在制备预防和/或治疗溃疡性结肠炎药物中的应用。
作为优选的实施方式，所述贝母辛的结构式如下：
Figure BDA0003103926720000022
作为优选的实施方式，所述贝母辛单独使用或与其他药物联合使用。
作为优选的实施方式，所述贝母辛是从药用贝母属植物的干燥鳞茎中提取分离或通过化学合成得到的。
作为更优选的实施方式，所述药用贝母属植物包括川贝母、浙贝母、平贝母、伊贝母和湖北贝母。
作为优选的实施方式，所述药物的剂型包括：片剂、胶囊剂、糖浆、溶液、悬浮液、注射剂、酊剂、口服液、栓剂、丸剂、散剂和纳米制剂。
作为优选的实施方式，所述贝母辛通过改善溃疡性结肠炎小鼠DAI和肠组织病理性损伤发挥抗溃疡性结肠炎活性。
本发明的有益效果是：
本发明通过安全性实验探讨了贝母辛对实验小鼠死亡、体重、肠组织、结肠和盲肠病理的影响，结果显示贝母辛并未对实验小鼠造成显著性影响：贝母辛组实验小鼠无死亡，体重无显著性变化，肠组织无明显病变，结肠和盲肠无明显病理性症状，由此说明贝母辛具备一定的安全性。
本发明通过实验探讨了贝母辛对溃疡性结肠炎小鼠疾病症状的影响，结果显示贝母辛能减少溃疡性结肠炎小鼠的体重下降率，能改善溃疡性结肠炎小鼠粪便性状和便血情况，具有改善溃疡性结肠炎小鼠DAI的功能，且能够有效预防和改善溃疡性结肠炎小鼠的肠组织病理性损伤，由此说明贝母辛具有特别优异的抗溃疡性结肠炎活性和一定的安全性，能显著改善溃疡性结肠炎症状。
本发明经实验证实，贝母辛显示出了良好的抗溃疡性结肠炎活性，能够用于制备抗溃疡性结肠炎药物，具有良好的开发应用前景。
附图说明
图1为实施例1中贝母辛对正常小鼠生存率的影响。
图2为实施例1中贝母辛对正常小鼠体重的影响。
图3为实施例1中贝母辛对正常小鼠肠组织的影响。
图4为实施例1中贝母辛对正常小鼠结肠和盲肠组织病理的影响。
图5为实施例2中贝母辛对溃疡性结肠炎小鼠体重变化率的影响。
图6为实施例2中贝母辛对溃疡性结肠炎小鼠疾病活跃指数评分(DiseaseActivity Index，DAI score)影响。
图7为实施例2中贝母辛对溃疡性结肠炎小鼠肠组织病变的影响。
图8为实施例2中贝母辛对溃疡性结肠炎小鼠的结肠长度影响。
图9为实施例2中贝母辛对溃疡性结肠炎小鼠结肠和盲肠组织病理的影响。
图10为实施例2中贝母辛对溃疡性结肠炎小鼠结肠的组织学变化评分的影响。
图11为实施例2中贝母辛对溃疡性结肠炎小鼠盲肠的组织学变化评分的影响。
具体实施方式
本发明提供一种贝母辛在制备预防和/或治疗溃疡性结肠炎药物中的应用。
其中，贝母辛的结构式如下所示：
Figure BDA0003103926720000041
其中，贝母辛在使用时，作为预防和/或治疗溃疡性结肠炎药物的活性成分，
可以单独使用或与其他药物联合使用。
另外，贝母辛与其他药物组合应用时，组成一种药物组合物，该药物组合物包括贝母辛等有效成分外，还可以包括少量的且不影响有效成分的次要成分和/或药学上可接受的载体，例如：可以含有甜味剂以改善口味、抗氧化剂以防止氧化，以及各种制剂所必要的辅料等。
优选的，贝母辛是从药用贝母属植物的干燥鳞茎中提取分离或通过化学合成得到的。
更优选的，药用贝母属植物包括川贝母、浙贝母、平贝母、伊贝母和湖北贝母，但不限于此。川贝母的基源包括分布于西藏南部至东部、云南西北部、四川西部的卷叶贝母F.cirrhosa，分布于四川西北部、青海东南部的暗紫贝母F.unibracteata，分布于云南西北部、四川西部、青海南部、西藏(拉萨至亚东)的梭砂贝母(炉贝)F.delavayi，分布于陕西秦岭及其以南地区、甘肃东南部、四川东北部、湖北西北部的太白贝母F.Taipaiensis，分布于甘肃南部、青海东部和南部、四川西部的甘肃贝母F.przewalskii和分布于四川省阿坝州、甘孜州及相邻的青海、甘肃、西藏交界地区的瓦布贝母F.unibracteata。浙贝母的基源为分布于江苏南部、浙江北部、湖南的浙贝母F.thunbergii。平贝母的基源为分布于辽宁、吉林、黑龙江的平贝母F.ussuriensis。伊贝母的基源为分布于新疆西北部的伊贝母F.pallidiflorae。湖北贝母的基源为分布于湖北西南部、四川东部、湖南西北部的湖北贝母F.hupehensis。
其中，所说的预防和/或治疗溃疡性结肠炎药物的剂型不限，只要是能够使活性成分有效地到达体内的剂型都可以。例如：片剂、胶囊剂、糖浆、溶液、悬浮液、注射剂、酊剂、口服液、栓剂、丸剂、散剂等常见剂型或纳米制剂等缓释剂型等。
其中，所说的预防和/或治疗溃疡性结肠炎药物的形式不限，可以是各种形式，包括但不限于：药物、保健品、食品、日用品等。
其中，贝母辛是通过改善溃疡性结肠炎小鼠DAI和肠组织病理性损伤发挥其抗溃疡性结肠炎活性的。
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
材料来源：
C57BL/6J小鼠购自斯贝福(北京)生物技术有限公司；
贝母辛购自MCE公司；
5-氨基水杨酸购自Sigma公司；
3％葡聚糖硫酸钠购自MP公司。
实施例1贝母辛安全性实验
将体重为20g左右的健康雄性C57BL/6J小鼠18只，随机分成3组，每组6只，即对照组、贝母辛(5mg/kg)组和贝母辛(15mg/kg)组。适应环境一周后。用生理盐水配制贝母辛，每日按照实验小鼠的体重进行给药，贝母辛(5mg/kg)组给予贝母辛腹腔注射给药5mg/kg，贝母辛(15mg/kg)组给予贝母辛腹腔注射给药15mg/kg，对照组灌胃100μL生理盐水，连续给药7天，同时记录各组实验小鼠死亡、体重、肠组织、结肠和盲肠病理的情况。
实验结果如图1、图2、图3和图4所示。结果表明，给予贝母辛未对实验小鼠造成显著性影响，即与生理盐水对照组相比：贝母辛(5mg/kg)组和贝母辛(15mg/kg)组实验小鼠无死亡(见图1)，贝母辛(5mg/kg)组和贝母辛(15mg/kg)组实验小鼠体重无显著性变化(见图2)，贝母辛(5mg/kg)组和贝母辛(15mg/kg)组实验小鼠肠组织无明显病变(见图3)，贝母辛(5mg/kg)组和贝母辛(15mg/kg)组实验小鼠结肠和盲肠无明显病理性症状(见图4)。由此证明，即贝母辛具备一定的安全性，贝母辛对C57BL/6J小鼠无毒副作用。
实施例2贝母辛对溃疡性结肠炎小鼠疾病症状的影响
将体重20g左右的健康雄性C57BL/6J小鼠50只，随机分成5组，每组10只，即对照组、模型组、阳性药物组、贝母辛(5mg/kg)组和贝母辛(15mg/kg)组。适应环境一周后，每日按照实验小鼠的体重进行给药，对照组饮用正常水，并腹腔注射100μL生理盐水，贝母辛(5mg/kg)组给予贝母辛腹腔注射给药5mg/kg，贝母辛(15mg/kg)组给予贝母辛腹腔注射给药15mg/kg，模型组腹腔注射100μL生理盐水，阳性药物组给予5-氨基水杨酸灌胃给药150mg/kg，连续给药7天。在第1天给药完毕后，向所有组(对照组除外)实验小鼠的饮用水中添加3％葡聚糖硫酸钠(Dextran Sulfate Sodium Salt，DSS)，每间隔2天重新配制一次。实验动物分组及给药方法见表1。
表1动物实验设计
Figure BDA0003103926720000071
从造模开始，每天定时称量实验小鼠体重并计算体重变化率。此外，每天还需要记录实验小鼠的粪便性状以及利用便隐血检测试纸(四甲基联苯胺法)检测实验小鼠粪便的隐血情况，并分别从体重下降百分比、粪便粘稠度、粪便潜血三个指标进行评分，三个指标之和即为疾病活跃指数评分(Disease Activity Index，DAI score)。具体评分细则见表2。
表2疾病活跃指数评分细则
评分 体重下降百分比(％) 粪便粘稠度 粪便潜血
0 0 正常 阴性
1 1-5 软便 浅蓝
2 5-10 黏液样便 蓝色
3 10-20 稀液状便 深蓝
4 ＞20 稀液状便 肉眼血便
在给药后第7天，腹腔注射100mg/kg戊巴比妥钠给予实验小鼠安乐死，开腹取各组实验小鼠的直肠、结肠、盲肠和回肠记录结组织的病变情况，并测量结肠长度。纵向剪开肠组织，轻缓的去除残留粪便，用5％多聚甲醛固定，经落水透明、浸蜡包埋、切片贴片和染色封片制备成病理切片。通过病理切边观察小鼠结肠和盲肠组织的形态学变化，并分别从溃疡形成个数、上皮细胞变化、炎症浸润程度三个指标进行评分，三个指标之和即为组织学变化评分(Histological change scores)。具体评分细则见表3
表3组织学变化评分
Figure BDA0003103926720000081
第7天各组实验小鼠体重变化率见图5，模型组实验小鼠与对照组实验小鼠相比体重显著性下降(***p<0.001)，体重下降率为12.67％。贝母辛(5mg/kg)组实验小鼠和贝母辛(15mg/kg)组实验小鼠的体重下降率显著性低于模型组(#p<0.05)，且体重下降率分别为4.97％和7.02％，与阳性药物组体重下降率(6.98％)相比均无显著性差异。该实验结果表明贝母辛能够减少溃疡性结肠炎小鼠的体重下降率。
DAI score结果见图6，贝母辛(5mg/kg)组和贝母辛(15mg/kg)组在造模后的第5天能够显著性抑制DAI score的升高，即给药剂量为5mg/kg、15mg/kg的贝母辛都能够减小溃疡性结肠炎小鼠的体重下降，改善溃疡性结肠炎小鼠粪便性状和便血情况，且贝母辛(5mg/kg)组和贝母辛(15mg/kg)组对溃疡性结肠炎小鼠的DAI改善效果与阳性药物组相比无显著性差异。该实验结果表明贝母辛具有改善溃疡性结肠炎小鼠DAI的功能。
各组实验小鼠的肠组织见图7，结肠长度见图8。生理盐水对照组实验小鼠无便血情况，肠内容物形态良好。模型组实验小鼠的结肠长度与对照组相比显著性缩短(***p<0.001)，盲肠或结肠内出现大量血迹，肠内容物呈黏液样或稀液状。阳性药物组、贝母辛(5mg/kg)组和贝母辛(15mg/kg)组与模型组相比可以显著性抑制溃疡性结肠炎小鼠的结肠长度减少(#p<0.05)，结肠或直肠内出现少量血迹，肠内容物呈较软或黏液样，且贝母辛(5mg/kg)组和贝母辛(15mg/kg)组与阳性药物组相比均无显著性差异。
各组实验小鼠的结肠和盲肠的病理切片结果见图9，其中结肠的Histologicalchange scores(Colon)见图10，盲肠的Histological change scores(Caecun)见图11。生理盐水对照的结肠和盲肠的粘膜层肠上皮结构完整，为单层柱状上皮，上皮细胞形态结构正常，固有层肠腺数量丰富，可见较多杯状细胞，肌层染色均匀，肌纤维形态结构正常、排列规则，未见明显炎症，均无明显异常。模型组实验小鼠的结肠组织出现组织大面积溃疡，损伤侵及黏膜下层；溃疡处大量的肠腺消失被增生的结缔组织取代，并伴有大量的淋巴细胞浸润；黏膜下层重度水肿，结缔组织排列疏松，并伴有多量的淋巴细胞浸润，Histologicalchange scores(Colon)显著性高于生理盐水对照组(***p<0.001)。阳性药物组、贝母辛(5mg/kg)组和贝母辛(15mg/kg)组实验小鼠的结肠组织出现组织小面积溃疡，损伤侵及黏膜下层；溃疡处少量的肠腺消失被增生的结缔组织取代，并伴有中量或少量的淋巴细胞浸润，溃疡灶周围偶见肠腺扩张；黏膜下层轻度水肿或无水肿，并伴有少量的淋巴细胞浸润，Histological change scores(Colon)显著性高于模型组(#p<0.05)，且贝母辛(5mg/kg)组和贝母辛(15mg/kg)组与阳性药物组相比均无显著性差异。模型组实验小鼠的盲肠组织局部溃疡，损伤侵及黏膜下层；溃疡处少量的肠腺消失被增生的结缔组织取代，并伴有少量的淋巴细胞浸润；黏膜下层轻度水肿，结缔组织排列疏松，并伴有少量的淋巴细胞浸润，Histological change scores(Caecum)显著性高于生理盐水对照组(***p<0.001)。阳性药物组、贝母辛(5mg/kg)组和贝母辛(15mg/kg)组实验小鼠的盲肠组织局部少见溃疡，上皮细胞脱落，固有层可见少量结缔组织增生；黏膜下层轻度水肿，并伴有少量的淋巴细胞浸润，Histological change scores(Caecum)显著性高于模型组(#p<0.05)，贝母辛(5mg/kg)组和贝母辛(15mg/kg)组与阳性药物组相比均无显著性差异。该实验结果表明贝母辛能够有效预防和改善溃疡性结肠炎小鼠的肠组织病理性损伤。
本发明经过实验证实，贝母辛显示出了特别优异的抗溃疡性结肠炎活性和一定的安全性，能显著性改善模型实验小鼠溃疡性结肠炎症状，能够用于制备抗溃疡性结肠炎药物。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，但这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (7)

1.贝母辛在制备预防和/或治疗溃疡性结肠炎药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述贝母辛的结构式如下：
Figure FDA0003103926710000011
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述贝母辛单独使用或与其他药物联合使用。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述贝母辛是从药用贝母属植物的干燥鳞茎中提取分离或通过化学合成得到的。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述药用贝母属植物包括川贝母、浙贝母、平贝母、伊贝母和湖北贝母。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型包括：片剂、胶囊剂、糖浆、溶液、悬浮液、注射剂、酊剂、口服液、栓剂、丸剂、散剂和纳米制剂。
7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述贝母辛通过改善溃疡性结肠炎小鼠DAI和肠组织病理性损伤发挥抗溃疡性结肠炎活性。
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