CN113271976A - 包含免疫检查点抑制剂的抗癌组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，其包含：作为活性成分的(1)免疫检查点抑制剂、(2)双胍基化合物或其药学上可接受的盐、(3)2‑脱氧‑D‑葡萄糖；或进一步包含：(4)肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐、肌醇或它们的混合物。根据本发明的组合物不仅增加了具有有限指征的免疫检查点抑制剂对各种癌症的指征，而且还通过适当地组合特定药物而表现出协同抗癌效果，从而使治疗效果最大化并且仅杀死癌细胞而没有副作用。因此，本发明的组合物可以有效地用作预防或治疗癌症的抗癌剂。

Description

包含免疫检查点抑制剂的抗癌组合物
技术领域
本发明涉及一种抗癌组合物，其包含能够表现出额外抗癌作用的活性成分以及免疫检查点抑制剂。
背景技术
癌症是现代医学尚未攻克的典型疑难杂症之一。传统的手术、放疗、化疗等方法可能表现出短期治疗效果，但是为了解决许多副作用，如细胞毒性、转移和复发的问题，迫切需要开发新的治疗剂。传统的肿瘤治疗方法通过外科手术、化学剂使得靶向治疗剂发展，而最近，随着调节免疫环境的免疫检查点抗体的出现，免疫治疗的重要性非常显著(Couzin-Frankel,Science 2013；342:1432-1433)。
抑制抗癌免疫反应已成为治疗肿瘤抗性的重要机制，并且通过开发阻断细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)和程序性死亡受体-1(PD-1)或其配体PD-L1(程序性死亡-配体1)作为免疫检查点受体的单克隆抗体，有可能刺激和/或增强患者的内源性抗癌免疫反应。
这种途径可能在免疫调节中发挥独特的作用，例如，CTLA-4主要调节淋巴结中的T细胞增殖，而PD-1主要抑制肿瘤微环境中的T细胞。这些免疫检查点抑制剂最近已经证实对各种类型的肿瘤、特别是黑色素瘤和非小细胞肺癌具有优异的疗效，并迅速成为患者的标准治疗方法。
迄今为止，食品药品监督管理局(FDA)批准的免疫检查点抑制剂包括总共6种：美国制药公司百时美施贵宝(Bristol Myers Squibb)(BMS)的
Figure BDA0003128108330000011
(CTLA4抑制剂，成分名称为伊匹单抗(ipilimumab))和
Figure BDA0003128108330000015
(PD-1抑制剂，成分名称为纳武单抗(nivolumab))、美国制药公司默克(Merck)(MSD)的
Figure BDA0003128108330000012
(PD-1抑制剂，成分名称为帕姆单抗(pembrolizumab))、瑞士制药公司罗氏(Roche)的
Figure BDA0003128108330000013
(PD-L1抑制剂，成分名称为阿特珠单抗(atezolizumab))、美国制药公司辉瑞(Pfizer)和德国的默克(Merck)联合开发的
Figure BDA0003128108330000014
(PD-L1抑制剂，成分名称为阿维鲁单抗(avelumab))和英国制药公司阿斯利康(AstraZeneca)的
Figure BDA0003128108330000021
(PD-L1抑制剂，成分名称为德瓦鲁单抗(durvalumab))。
然而，免疫检查点抑制剂通常具有免疫相关的副作用，其对胃肠道、内分泌腺、皮肤和肝脏造成损害。众所周知，这些副作用大多与活化T淋巴细胞引起的免疫系统的不良反应有关。
此外，免疫检查点抑制剂仅对少数患者有效。在大多数晚期癌症中，抗-PD-1/PD-L1单一疗法的有效率(response rate)为约20％，抗-CTLA-4的有效率为约12％，因此可以看出需要改进(Borghaei等人，N Eng J Med.2015；373:1627-1639)。这种低疗效可能是由于缺乏现有肿瘤相关的T细胞免疫(Elizabeth等人，Am J Cli Oncol.2016年2月；39(1):98-106)。
为了最大化这些免疫检查点抑制剂的治疗效果，已经进行了与其他抗癌药结合的临床研究。例如，用于治疗晚期黑色素瘤的两种免疫抗癌药(纳武单抗和伊匹单抗的组合疗法)表现出比每种单一疗法具有更大的提高细胞存活率的效果。然而，10人中有4人有与治疗相关的严重副作用，足以中断治疗。在诱发癌症时结合使用两种或多种治疗方法是当今癌症治疗的基石，但是免疫检查点抑制剂表现出高有效率和相对高的治疗中断率。
因此，迫切需要能够增加治疗效果，同时将抗癌药引起的副作用最小化的研究。
此外，化疗失败的一个主要原因是抗癌药最初有效，但逐渐表现出耐药性，免疫力极度恶化。因此，需要一种提高癌症治疗功效而不增加药物毒性的方法。抗癌药的组合可以用作提高抗癌药功效的一种方法，但是不幸的是，不能期望抗癌药组合都是协同的，并且寻找具有协同作用的药物组合是非常困难的。因此，迫切需要开发能够最大化抗癌效果，同时最小化抗癌药副作用的抗癌复合制剂。
最近，人们对开发针对细胞信号传递途径的抗癌疗法很感兴趣，这些途径对癌细胞的代谢和生长很重要，参与癌细胞代谢的代表性药物包括二甲双胍和2-脱氧-D-葡萄糖，它们是双胍基化合物(Wokoun等人，Oncol Rep.2017；37:2418-2424)。
作为一种抗高血糖药物，二甲双胍几十年来一直被用作2型糖尿病的第一治疗药物。尽管二甲双胍被广泛用作抗糖尿病药物，但在2001年首次报道了其对哺乳动物的潜在抗癌作用。此外，第一份关于降低使用二甲双胍治疗的2型糖尿病患者的癌症风险的报告就在10年前发表。从那以后，在许多论文中，二甲双胍在几种癌细胞系(包括卵巢癌、异种移植动物或转基因小鼠)中显示出一致的抗增殖活性。关于代谢，已经发现二甲双胍是一类新的复合物Ⅰ和ATP合成酶抑制剂，其直接作用于线粒体以限制呼吸并使能量无效，并且其通过柠檬酸循环降低葡萄糖代谢(Andrzejewski等人，2014；2:12-25)。
2-脱氧-D-葡萄糖被认为是一种潜在的抗癌剂，因为它依赖肿瘤细胞进行糖酵解。2-脱氧-D-葡萄糖是一种葡萄糖类似物，其易于被葡萄糖转运蛋白吸收，并作为糖酵解的竞争性抑制剂，从而通过激活实体肿瘤中的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)来减少ATP的产生以诱导细胞死亡(Zhang等人，Cancer Lett.2014；355:176-183)。
然而，常用剂量的二甲双胍和2-脱氧-D-葡萄糖不足以充分治愈癌症，并且在高剂量治疗时可能发生不良反应，具有局限性(Raez等人，Cancer Chemother Pharmacol.2013；71:523-530)。Cheong等人研究的二甲双胍和2-脱氧-D-葡萄糖的组合治疗在乳腺癌细胞系中有效，但高于在人体中可耐受的浓度或在血浆中可给予的浓度(Cheong等人，Mol CabcerTger.2011；10:2350-2362)。在另一篇论文中，二甲双胍和2-脱氧-D-葡萄糖的组合已经成功地在前列腺癌细胞中进行了测试，使用的二甲双胍浓度高于人血浆中的浓度(Ben Sahra等人，Cancer Res.2010；70:2465-2475)。这表明优选临床有效的抗癌剂二甲双胍和2-脱氧-D-葡萄糖在体内可合理实现的范围内降低其治疗浓度。
同时，肌醇六磷酸(inositol hexaphosphate)和肌醇是天然的有机磷化合物，其在大多数谷物、种子和豆类中大量存在，甚至在哺乳动物细胞中也存在，并且与低磷(lowphosphate)的磷酸盐(phosphate)形式(IP1-5)一起存在。肌醇六磷酸在调节重要的细胞功能(如信号转导、细胞增殖和各种细胞的分化)中起重要作用，并且被认为是天然抗氧化剂(Shamsuddin等人，J Nutr.2003；133:3778S-3784S)。
最近，据报道，肌醇六磷酸具有一些预防癌症和抑制实验性肿瘤的生长、发展和转移的作用(Vucenik等人，Nutr Cancer。2006；55:109-125)。
在初步临床研究中，据报道，肌醇六磷酸和肌醇给药联合化疗，以减少化疗的副作用，并改善患有乳腺癌或结直肠癌、患有肝转移的患者的生活质量。然而，仅使用肌醇六磷酸或肌醇六磷酸和肌醇的组合仍然难以有效抑制癌细胞生长。
发明内容
技术问题
因此，本发明提供了一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，其包含：作为活性成分的(1)免疫检查点抑制剂、(2)双胍基化合物或其药学上可接受的盐和(3)2-脱氧-D-葡萄糖。
本发明还提供了一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，其包含：作为活性成分的(1)免疫检查点抑制剂、(2)双胍基化合物或其药学上可接受的盐、(3)2-脱氧-D-葡萄糖和(4)肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐、肌醇或它们的混合物。
所述药物组合物甚至可以用低浓度的每种化合物的组合来有效地杀死癌细胞，并且期望在将来广泛用于癌症治疗领域以及确保人体的安全性，并且特别地，表现出癌细胞特异性的毒性作用，以用作具有降低的副作用的用于预防或治疗癌症的药物组合物。
解决问题的技术方案
作为实现目的的一个方面，本发明提供了一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，其包含：作为活性成分的(1)免疫检查点抑制剂、(2)双胍基化合物或其药学上可接受的盐和(3)2-脱氧-D-葡萄糖。
作为实现目的的另一方面，本发明提供了一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，其包含：(1)免疫检查点抑制剂、(2)双胍基化合物或其药学上可接受的盐和(3)2-脱氧-D-葡萄糖。
此外，用于预防或治疗癌症的药物组合物可进一步包含(4)肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐、肌醇或它们的混合物作为额外的活性成分。
本发明还提供了一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，其包含：作为活性成分的(1)免疫检查点抑制剂、(2)双胍基化合物或其药学上可接受的盐、(3)2-脱氧-D-葡萄糖和(4)肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐、肌醇或它们的混合物。
本发明还提供了一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，其包含：(1)免疫检查点抑制剂、(2)双胍基化合物或其药学上可接受的盐、(3)2-脱氧-D-葡萄糖和(4)肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐、肌醇或它们的混合物。
根据本发明的药物组合物包含少量的活性成分，以具有优异的效果，能够有效地治疗癌症且副作用更少。与用单一化合物治疗时相比，根据本发明的药物组合物可以使用更少量的包含在复合制剂中的单一化合物，从而显著降低副作用的风险和/或严重性，并显著增加治疗的总体效果。
特别地，根据本发明，当根据本发明的药物组合物包含并使用阻断免疫检查点受体CTLA-4和PD-1或其配体PD-L1的免疫检查点抑制剂时，免疫检查点抑制剂即使在低浓度下也具有优异的抗癌效果。
在下文中，将详细描述本发明。
本发明的药物组合物包含(1)免疫检查点抑制剂作为活性成分。
免疫检查点抑制剂可以通过阻断免疫检查点来抑制癌症的免疫逃避来治疗癌症，所述免疫检查点阻止具有高免疫抑制能力的癌症中免疫反应的进展。免疫检查点抑制剂是新的肿瘤治疗剂，由于免疫学的发展，人们对人类免疫系统有了更多的了解，因此开发了这种新的肿瘤治疗剂，并将其广泛用于抗癌策略。作为使用免疫检查点抑制剂发挥抗癌作用的示例性机制，存在通过CTLA-4的T淋巴细胞抑制机制和用于抑制预激活的T淋巴细胞的PD-1/PD-L1机制。然而，据报道，仅使用免疫检查点抑制剂的治疗有一个局限性，治疗效率低且效果轻微。
然而，由于通过将具有另一种治疗机制的活性成分与免疫检查点抑制剂组合给予的协同互补作用，本发明的药物组合物有助于预防和治疗癌症。
免疫检查点抑制剂可以为抗体、融合蛋白、适体或其免疫检查点蛋白结合片段。例如，免疫检查点抑制剂为抗免疫检查点蛋白抗体或其抗原结合片段。
在具体实例中，免疫检查点抑制剂为选自以下中的至少一种：抗CTLA4抗体、其衍生物或其抗原结合片段；抗PD-L1抗体、其衍生物或其抗原结合片段；抗LAG-3抗体、其衍生物或其抗原结合片段；抗OX40抗体、其衍生物或其抗原结合片段；抗TIM3抗体、其衍生物或其抗原结合片段；和抗PD-1抗体、其衍生物或其抗原结合片段。
例如，免疫检查点抑制剂可以为选自以下中的至少一种：伊匹单抗、其衍生物或其抗原结合片段；曲美木单抗(tremelimumab)、其衍生物或其抗原结合片段；纳武单抗、其衍生物或其抗原结合片段；帕姆单抗、其衍生物或其抗原结合片段；匹地利珠单抗(pidilizumab)、其衍生物或其抗原结合片段；阿特珠单抗、其衍生物或其抗原结合片段；德瓦鲁单抗、其衍生物或其抗原结合片段；阿维鲁单抗、其衍生物或其抗原结合片段；BMS-936559、其衍生物或其抗原结合片段；BMS-986016、其衍生物或其抗原结合片段；GSK3174998、其衍生物或其抗原结合片段；TSR-022、其衍生物或其抗原结合片段；MBG453、其衍生物或其抗原结合片段；LY3321367、其衍生物或其抗原结合片段；和IMP321重组融合蛋白。任何可以用作免疫检查点抑制剂或其他类型的免疫检查点抑制剂的抗体都可以无限制地使用。
具体而言，免疫检查点抑制剂可以优选为选自以下中的至少一种：抗CTLA4抗体、抗PD-1抗体、抗LAG-3抗体、抗OX40抗体、抗TIM3抗体和抗PD-L1抗体。抗体可以从例如常规抗体制造商等处购买和使用，或者可以根据已知的抗体生产方法制备和使用。
免疫检查点抑制剂可以是具有上述免疫检查点抑制剂作用的小分子化合物或参与其抑制机制的小分子化合物。这种小分子化合物可以为：例如，结合至免疫检查点蛋白的小分子化合物或参与免疫检查点抑制机制的小分子化合物。
具体而言，小分子化合物可以为BMS-202(来源：BMS)、BMS-8(来源：BMS)、CA170(来源：Curis/Aurigene)、CA327(来源：Curis/Aurigene)、Epacadostat、GDC-0919、BMS-986205等。任何用作免疫检查点抑制剂或具有相关作用的小分子化合物都可以无限制地使用。
本发明的药物组合物包含(2)双胍基化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分。
在本发明中，双胍基化合物为例如二甲双胍或苯乙双胍。具体而言，二甲双胍具有化学式1的结构式。
[化学式1]
Figure BDA0003128108330000061
具体而言，苯乙双胍具有化学式2的结构式。
[化学式2]
Figure BDA0003128108330000071
在本发明中，当(1)免疫检查点抑制剂、(2)双胍基化合物或其药学上可接受的盐和(3)2-脱氧-D-葡萄糖作为复合制剂使用时，这些化合物即使在低浓度下也显示出高抗癌效果。此外，当复合制剂进一步包含(4)肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐、肌醇或它们的混合物时，其显示出更好的抗癌效果。
双胍基药物不限于此，而是可以通过激活称为腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)的作用机制具有抗癌作用，该酶在细胞内能量平衡和营养代谢调节中起着关键作用。
当向大鼠口服给药二甲双胍时，可以看出二甲双胍(其LD50值为1450mg/kg)是一种非常安全的化合物，但是仍然存在二甲双胍需要高剂量使用的问题。与此同时，苯乙双胍在20世纪50年代末作为口服糖尿病治疗药物开发出来，且旨在用于治疗非胰岛素依赖型糖尿病(2型糖尿病)，但由于一种称为乳酸酸中毒的严重副作用，苯乙双胍的使用在20世纪70年代末被完全禁止。
已经证实，上述复合制剂即使在比每种单一药物或两种化合物的组合物低得多的浓度下也显示出高的抗癌效果，从而改善了高剂量给药的问题或二甲双胍或苯乙双胍的副作用的问题。
本发明的药物组合物包含(3)2-脱氧-D-葡萄糖作为活性成分。
在本发明中，2-脱氧-D-葡萄糖具有由化学式3表示的结构。
[化学式3]
Figure BDA0003128108330000072
化学式3的化合物具有作为糖酵解抑制剂的作用效果。
2-脱氧-D-葡萄糖(一种葡萄糖的衍生物)具有抑制葡萄糖代谢中糖酵解和抑制内质网中蛋白质糖基化以诱导囊泡应激的作用效果(vesicle stress)。因此，2-脱氧-D-葡萄糖(一种葡萄糖降解的抑制剂)本身没有表现出杀死癌细胞的作用，但是形成了具有优异的抗癌效果的本发明的复合制剂。
本发明的药物组合物可进一步包含(4)肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐、肌醇或它们的混合物作为额外的活性成分。
在本发明中，肌醇六磷酸和/或肌醇可以调节癌细胞中的几种重要路径。在本发明中，肌醇六磷酸具体具有化学式4的结构。
[化学式4]
Figure BDA0003128108330000081
在本发明中，肌醇具体具有化学式5的结构。
[化学式5]
Figure BDA0003128108330000082
在本发明中，证实了肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐、肌醇或它们的混合物与免疫检查点抑制剂、双胍基化合物或其药学上可接受的盐和2-脱氧-D-葡萄糖组合，从而即使在低浓度下也具有高抗癌效果。
在本发明中，双胍基化合物和肌醇六磷酸可以以药学上可接受的盐的形式存在。作为盐，与药学上可接受的游离酸形成的酸加成盐是有益的。本发明中使用的术语“药学上可接受的盐”是指任何有机或无机加成盐，其中在对患者具有相对无毒和无害作用的浓度下，由该盐引起的副作用不会降低双胍基化合物和肌醇六磷酸的有益效果。
此时，作为加成盐，盐酸、磷酸、硫酸、硝酸、酒石酸等可用作无机酸，以及甲磺酸、对甲苯磺酸、乙酸、三氟乙酸、马来酸、琥珀酸、草酸、苯甲酸、酒石酸、富马酸、扁桃酸、丙酸、柠檬酸、乳酸、乙醇酸、葡萄糖酸、半乳糖醛酸、谷氨酸、戊二酸、葡萄糖醛酸、天冬氨酸、抗坏血酸、碳酸、香草酸、氢碘酸等可以用作有机酸，但不限于此。
此外，碱也可用于制备药学上可接受的金属盐。碱金属盐或碱土金属盐可以例如通过将化合物溶解在大量碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物溶液中，过滤未溶解的化合物盐，然后蒸发并干燥滤液来获得。在这种情况下，金属盐在药学上适于制备特别是钠盐、钾盐、钙盐和镁盐或其混合盐，但不限于此。
除非另有说明，双胍基化合物(二甲双胍或苯乙双胍)和肌醇六磷酸各自的药学上可接受的盐包括可能存在于双胍基化合物(二甲双胍或苯乙双胍)和肌醇六磷酸各自中的酸或碱性基团的盐。例如，药学上可接受的盐可以包括羟基的钠盐、钾盐、钙盐或镁盐等，以及其他药学上可接受的氨基的盐包括氢溴酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、醋酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐(methanesulfonate(mesylate))和对甲苯磺酸盐(p-toluenesulfonate)(甲苯磺酸盐(tosylate))盐等，它们可以通过本领域已知的制备盐的方法来制备。
作为本发明的双胍基化合物(二甲双胍或苯乙双胍)的盐，作为药学上可接受的盐，可以使用表现出与二甲双胍或苯乙双胍等同的抗癌效果的任何二甲双胍盐或苯乙双胍盐。优选地，可以使用盐酸二甲双胍、琥珀酸二甲双胍、柠檬酸二甲双胍或盐酸苯乙双胍、琥珀酸苯乙双胍、柠檬酸苯乙双胍等，但不限于此。
作为本发明的肌醇六磷酸盐，可以使用任何表现出与肌醇六磷酸等同的抗癌效果的肌醇六磷酸盐作为药学上可接受的盐。优选地，可以使用肌醇六磷酸钠、肌醇六磷酸钾、肌醇六磷酸钙、肌醇六磷酸铵、肌醇六磷酸镁、肌醇六磷酸钙镁等，但不限于此。
本发明的双胍基化合物、2-脱氧-D-葡萄糖和肌醇六磷酸也包括其衍生物。术语“衍生物”是指通过化学改变化合物的一部分(例如引入、取代和删除官能团)而制备的化合物，只要该化合物的抗癌活性没有改变，其就可以不受限制地包括在本发明中。
在本发明中，肌醇可以各种异构体的形式存在。异构体包括对映异构体和非对映异构体。任何具有药理学抗癌作用的肌醇都可以使用，且优选地，可以使用选自以下中的至少一种：D-手性-肌醇(D-chiro-inositol)、L-手性-肌醇(L-chiro-inositol)、myo-肌醇(myo-inositol)和鲨肌醇(scyllo-inositol)，但不限于此。
即使将两种或更多种已知各自具有抗癌效果的药物组合，也不能预期组合的药物表现出协同作用，相反，药物的功能被组合抵消，因此很难找到具有协同作用的药物组合。在本发明中，通过使用最小浓度的抗癌药物，开发了能够最大化抗癌效果同时最小化副作用的抗癌复合制剂。
在本发明中，用于预防或治疗癌症的药物组合物的优选方面可以是：
一种包含免疫检查点抑制剂、双胍基化合物或其药学上可接受的盐以及2-脱氧-D-葡萄糖的组合物；
一种包含免疫检查点抑制剂、双胍基化合物或其药学上可接受的盐、2-脱氧-D-葡萄糖以及肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐的组合物；
一种包含免疫检查点抑制剂、双胍基化合物或其药学上可接受的盐、2-脱氧-D-葡萄糖以及肌醇的组合物；或者
一种包含免疫检查点抑制剂、双胍基化合物或其药学上可接受的盐、2-脱氧-D-葡萄糖、肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐以及肌醇的组合物。在本发明中，免疫检查点抑制剂可以为选自以下中的至少一种：例如抗CTLA4抗体、抗PD-1抗体、抗LAG-3抗体、抗OX40抗体、抗TIM3抗体、抗PD-1抗体和抗PD-L1抗体。更优选地，免疫检查点抑制剂为选自以下中的任一种：抗CTLA4抗体、抗PD-1抗体和抗PD-L1抗体。或者，免疫检查点抑制剂可以为结合至免疫检查点蛋白的小分子化合物，或者参与免疫检查点抑制机制的小分子化合物。
例如，作为实现该目的的一个方面，抗CTLA-4抗体/二甲双胍/2-脱氧-D-葡萄糖的复合制剂，抗CTLA-4抗体/二甲双胍/2-脱氧-D-葡萄糖/肌醇六磷酸的复合制剂，抗CTLA-4抗体/二甲双胍/2-脱氧-D-葡萄糖/肌醇的复合制剂，以及抗CTLA-4抗体/二甲双胍/2-脱氧-D-葡萄糖/肌醇六磷酸/肌醇的复合制剂在减小肿瘤大小方面比各化合物的单一制剂或包含两种化合物的复合制剂更有效。
此外，作为实现该目的的另一方面，抗PD-1抗体/二甲双胍/2-脱氧-D-葡萄糖的复合制剂、抗PD-1抗体/二甲双胍/2-脱氧-D-葡萄糖/肌醇六磷酸的复合制剂、抗PD-1抗体/二甲双胍/2-脱氧-D-葡萄糖/肌醇的复合制剂以及抗PD-1抗体/二甲双胍/2-脱氧-D-葡萄糖/肌醇六磷酸/肌醇的复合制剂在减小肿瘤尺寸方面比各化合物的单一制剂或包含两种化合物的复合制剂更有效。
此外，作为实现该目的的另一方面，抗PD-L1抗体/二甲双胍/2-脱氧-D-葡萄糖的复合制剂、抗PD-L1抗体/二甲双胍/2-脱氧-D-葡萄糖/肌醇六磷酸的复合制剂、抗PD-L1抗体/二甲双胍/2-脱氧-D-葡萄糖/肌醇的复合制剂以及抗PD-L1抗体/二甲双胍/2-脱氧-D-葡萄糖/肌醇六磷酸/肌醇的复合制剂在减小肿瘤大小方面比各化合物的单一制剂或包含两种化合物的复合制剂更有效。
在本发明中，双胍基化合物可以为二甲双胍或其药学上可接受的盐，或者苯乙双胍或其药学上可接受的盐。
当描述以作为双胍基化合物的二甲双胍为中心的组合物时，本发明的用于预防或治疗癌症的药物组合物可以为：
一种包含免疫检查点抑制剂、二甲双胍或其药学上可接受的盐和2-脱氧-D-葡萄糖的组合物；
一种包含免疫检查点抑制剂、二甲双胍或其药学上可接受的盐、2-脱氧-D-葡萄糖和肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐的组合物；
一种包含免疫检查点抑制剂、二甲双胍或其药学上可接受的盐、2-脱氧-D-葡萄糖和肌醇的组合物；或者
一种包含免疫检查点抑制剂、二甲双胍或其药学上可接受的盐、2-脱氧-D-葡萄糖、肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐和肌醇的组合物。
当描述以作为另一种双胍基化合物的苯乙双胍为中心的组合物时，本发明的用于预防或治疗癌症的组合物可以为：
一种包含免疫检查点抑制剂、苯乙双胍或其药学上可接受的盐以及2-脱氧-D-葡萄糖的组合物；
一种包含免疫检查点抑制剂、苯乙双胍或其药学上可接受的盐、2-脱氧-D-葡萄糖以及肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐的组合物；
一种包含免疫检查点抑制剂、苯乙双胍或其药学上可接受的盐、2-脱氧-D-葡萄糖以及肌醇的组合物；或者
一种包含免疫检查点抑制剂、苯乙双胍或其药学上可接受的盐、2-脱氧-D-葡萄糖、肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐以及肌醇的组合物。在本发明的一个实施方案中，证实了根据本发明的药物组合物可以在癌症动物模型中以非常优异的效果抑制癌症。也就是说，根据本发明，免疫检查点抑制剂、双胍基化合物、2-脱氧-D-葡萄糖、肌醇六磷酸和肌醇中的每一种单独使用时，由于抗癌效果不足，需要大量使用，但是当使用结合这些化合物的复合制剂时，证实即使以少量使用也可以有效杀死癌细胞。
在根据本发明的每种药物组合物中，每种化合物的组合的重量比没有特别限制。
例如，作为免疫检查点抑制剂，至少一种单克隆抗体(例如抗CTLA4抗体、抗PD-1抗体、抗LAG-3抗体、抗OX40抗体、抗TIM3抗体、抗PD-1抗体和抗PD-L1抗体)的单剂量可以在0.01至25mg/kg的范围内使用。
根据要治疗的癌症类型，除免疫检查点抑制剂之外的化合物可以在以下范围内使用。
例如，二甲双胍或其药学上可接受的盐:2-脱氧-D-葡萄糖的重量比可以为1:0.2至1:5，并且组合的相对量可以根据待治疗的癌症类型而变化。
例如，苯乙双胍或其药学上可接受的盐:2-脱氧-D-葡萄糖的重量比可以为1:1至1:50，并且组合的相对量可以根据待治疗的癌症类型而变化。
在另一个实例中，二甲双胍或其药学上可接受的盐:2-脱氧-D-葡萄糖:肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐的重量比可以为1:0.2:0.5至1:5:20，并且组合的相对量可以根据待治疗的癌症类型而变化。
在另一个实例中，苯乙双胍或其药学上可接受的盐:2-脱氧-D-葡萄糖:肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐的重量比可以为1:1:1至1:50:200，并且组合的相对量可以根据待治疗的癌症类型而变化。
在另一个实例中，二甲双胍或其药学上可接受的盐:2-脱氧-D-葡萄糖:肌醇的重量比可以为1:0.2:0.5至1:5:20，并且组合的相对量可以根据待治疗的癌症类型而变化。
在另一个实例中，苯乙双胍或其药学上可接受的盐:2-脱氧-D-葡萄糖:肌醇的重量比可以为1:1:1至1:50:200，并且组合的相对量可以根据待治疗的癌症类型而变化。
在另一个实例中，二甲双胍或其药学上可接受的盐:2-脱氧-D-葡萄糖:肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐:肌醇的重量比可以为1:0.2:0.5:0.5至1:5:20:20，并且组合的相对量可以根据待治疗的癌症类型而变化。
在另一个实例中，苯乙双胍或其药学上可接受的盐:2-脱氧-D-葡萄糖:肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐:肌醇的重量比可以为1:1:1:1至1:50:200:200，并且组合的相对量可以根据待治疗的癌症类型而变化。本发明还提供了一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，其包含：作为活性成分的(1)免疫检查点抑制剂、(2)双胍基化合物或其药学上可接受的盐、(3)2-脱氧-D-葡萄糖和(4)肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐、肌醇或它们的混合物。(1)至(4)的定义与上述相同。
本发明中使用的术语“癌症”是指与细胞死亡控制相关的疾病，并且是指当正常凋亡平衡被打破时由细胞过度增殖引起的疾病。这些异常过度增殖的细胞侵入周围组织和器官，在某些情况下形成肿块，破坏或改变身体的正常结构，这称为癌症。一般而言，术语“肿瘤”是指由于身体组织自主过度生长而异常生长的肿块，可分为良性肿瘤和恶性肿瘤。恶性肿瘤比良性肿瘤生长快得多，并且侵入周围组织，从而发生转移，危及生命。恶性肿瘤通常被称为“癌症”，癌症的类型包括脑脊髓瘤、脑癌、头颈癌、肺癌、乳腺癌、胸腺肿瘤、食道癌、胃癌、结肠癌、肝癌、胰腺癌、胆管癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌、生殖细胞瘤、卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌、淋巴瘤、白血病(例如急性白血病或慢性白血病)、骨肉瘤、多发性骨髓瘤、肉瘤、黑色素瘤、恶性黑色素瘤和皮肤癌等。本发明的抗癌组合物可用于但不限于癌症类型，但可用于预防或治疗选自以下中的至少一种：肝癌、肺癌、胃癌、胰腺癌、结肠癌、宫颈癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、脑癌、骨肉瘤、膀胱癌、头颈癌、肾癌、黑色素瘤、白血病和淋巴瘤。
本发明中使用的术语“预防或治疗”是指使用本发明的药物组合物或复合制剂抑制或延迟癌症发展的所有作用，特别地，“治疗”是指使用该组合物改善或有益地改善癌症的所有作用。
因此，本发明提供了一种治疗癌症的方法，包括向需要治疗癌症的受试者给予治疗有效量的(1)免疫检查点抑制剂、(2)双胍基化合物或其药学上可接受的盐和(3)2-脱氧-D-葡萄糖。该方法可进一步包括给予治疗有效量的(4)肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐、肌醇或它们的混合物。
本发明中使用的术语“给予/给药”是指以任何合适的方式向受试者提供本发明的药物组合物或复合制剂。此时，受试者指的是动物，并且可以是通常用本发明的药物组合物或复合制剂进行治疗，而表现出有益效果的哺乳动物。这种个体的优选实例可以包括灵长类动物，例如人类。
除了上述活性成分之外，如果需要，本发明的用于预防或治疗癌症的药物组合物可以进一步包含用于治疗癌症的化疗剂。
此外，本发明的用于预防或治疗癌症的药物组合物可以进一步包含药学上可接受的载体。根据使用目的，本发明的组合物可以根据一般方法按照口服制剂(例如粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂和气雾剂等)、无菌注射剂、外部形式(例如药膏等)和栓剂等来配制和使用。可以包含在这种组合物中的载体、赋形剂和稀释剂可以包含乳糖、右旋糖(dextrose)、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯胶(acacia rubber)、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯(methyl hydroxybenzoate)、羟基苯甲酸丙酯(propylhydroxybenzoate)、滑石粉、硬脂酸镁和矿物油等。
用于口服给药的固体制剂包括片剂、丸剂、粉剂、颗粒剂和胶囊剂等，并且这种固体制剂可以通过将至少一种赋形剂(例如淀粉、碳酸钙、蔗糖、乳糖、明胶等)与组合物混合来配制。此外，除了简单的赋形剂之外，还可以使用润滑剂，例如硬脂酸镁和滑石粉。用于口服给药的液体制剂可以对应于混悬剂、内部施用溶液、乳剂、糖浆剂等，并且除了通常用作简单稀释剂的水和液体石蜡之外，还可以包含各种赋形剂，例如润湿剂、甜味剂、芳香剂和防腐剂等。
一种胃肠外给药的制剂，包括无菌水溶液、非水溶液、混悬剂、乳剂、冻干剂和栓剂。作为非水溶液和混悬剂，可以使用丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄榄油)、可注射的酯(例如如油酸乙酯)等。注射剂的基质可包含常规添加剂，例如增溶剂、等渗剂、悬浮剂、乳化剂、稳定剂和防腐剂。
本发明的组合物可以使用多种方法给药，例如口服、静脉内、皮下、皮内、鼻内、腹膜内、肌内和经皮给药等，并且剂量可以根据患者的年龄、性别和体重而变化，并且可以由本领域技术人员容易地确定。根据本发明的组合物的剂量可以根据给药途径、疾病的严重程度、性别、体重、年龄等而增加或减少。例如，在五种化合物的复合制剂的情况下，作为免疫检查点抑制剂的单克隆抗体抗PD-1可以以0.01至25mg/kg(体重)作为单剂量使用，作为双胍基化合物的二甲双胍可以以每天5至80mg/kg(体重)使用，苯乙双胍可以以每天0.1至10mg/kg(体重)使用，2-脱氧-D-葡萄糖可以以每天0.1至160mg/kg(体重)使用，肌醇六磷酸可以以每天2至600mg/kg(体重)使用，肌醇可以以每天2至600mg/kg(体重)使用。然而，本发明的范围不受剂量的限制。
另一方面，本发明涉及一种治疗癌症的方法，包括向受试者给予：(1)免疫检查点抑制剂、(2)双胍基化合物或其药学上可接受的盐和(3)2-脱氧-D-葡萄糖。
另一方面，本发明涉及一种治疗癌症的方法，包括向受试者给予：(1)免疫检查点抑制剂、(2)双胍基化合物或其药学上可接受的盐、(3)2-脱氧-D-葡萄糖和(4)肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐、肌醇或它们的混合物。
作为又一方面，本发明涉及一种用于治疗癌症的组合物，其包含：(1)免疫检查点抑制剂、(2)双胍基化合物或其药学上可接受的盐和(3)2-脱氧-D-葡萄糖。
作为又一方面，本发明涉及一种用于治疗癌症的组合物，其包含：(1)免疫检查点抑制剂、(2)双胍基化合物或其药学上可接受的盐、(3)2-脱氧-D-葡萄糖和(4)肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐、肌醇或它们的混合物。
作为又一方面，本发明涉及一种包含(1)免疫检查点抑制剂、(2)双胍基化合物或其药学上可接受的盐和(3)2-脱氧-D-葡萄糖的组合物用于制备预防或治疗癌症的药物的用途。
作为又一方面，本发明涉及一种包含(1)免疫检查点抑制剂、(2)双胍基化合物或其药学上可接受的盐、(3)2-脱氧-D-葡萄糖和(4)肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐、肌醇或它们的混合物的组合物用于制备预防或治疗癌症的药物的用途。
本发明的有益效果
本发明的组合物不仅增加了具有有限指征(indicant)的免疫检查点抑制剂对各种癌症的指征，而且还通过适当地组合特定药物而表现出协同抗癌效果，从而使治疗效果最大化并且仅杀死癌细胞而没有副作用。因此，本发明的组合物可以有效地用作预防或治疗癌症的抗癌剂。
附图说明
图1和图2示出了通过用二甲双胍(MET)、2-脱氧-D-葡萄糖(2DG)和肌醇六磷酸(IP6)的单一或复合制剂以人血浆中可使用的低浓度处理人源性癌细胞系48小时后，通过MTT检测法测定的以百分数表示的细胞存活率图。每条竖条代表一个标准偏差。利用GraphPad Prism 6.0软件进行Tukey的多重比较后分析，通过单向方差分析测试进行统计分析。
图1A是检测作为源自人肝脏的癌细胞的HepG2细胞系的图。图1B是检测作为源自人肺的癌细胞的A549细胞系的图。图1C是检测作为源自人胃的癌细胞的AGS细胞系的图。图1D是检测作为源自人胰腺的癌细胞的PANC-1细胞系的图。图1E是检测作为源自人结肠的癌细胞的DLD-1细胞系的图。图1F是检测作为源自人宫颈的癌细胞的HeLa细胞系的图。图2A是检测作为源自人乳腺的癌细胞的MDA-MB-231细胞系的图。图2B是检测作为源自人前列腺的癌细胞的PC-3细胞系的图。图2C是检测作为源自人卵巢的癌细胞的SK-OV-3细胞系的图。图2D是检测作为源自人膀胱的癌细胞的T24细胞系的图。图2E是检测作为源自人脑的癌细胞的U-87MG细胞系的图。图2F是检测源自人骨骼的癌细胞的Saos-2细胞系的图。****p<0.0001。
图3和图4示出了通过苯乙双胍(PHE)、2DG和IP6的单一和复合制剂以人血浆中可使用的低浓度处理人源癌细胞48小时后，通过MTT检测法测定的以百分数表示的细胞存活率图。每条竖条代表一个标准偏差。利用GraphPad Prism 6.0软件进行Tukey的多重比较后分析，通过单向方差分析测试进行统计分析。
图3A是检测作为源自人肝脏的癌细胞的HepG2细胞系的图。图3B是检测作为源自人肺的癌细胞的A549细胞系的图。图3C是检测作为源自人胃的癌细胞的AGS细胞系的图。图3D是检测作为源自人胰腺的癌细胞的PANC-1细胞系的图。图3E是检测作为源自人结肠的癌细胞的DLD-1细胞系的图。图3F是检测作为源自人宫颈的癌细胞的HeLa细胞系的图。图4A是检测作为源自人乳腺的癌细胞的MDA-MB-231细胞系的图。图4B是检测作为源自人前列腺的癌细胞的PC-3细胞系的图。图4C是检测作为源自人卵巢的癌细胞的SK-OV-3细胞系的图。图4D是检测作为源自人膀胱的癌细胞的T24细胞系的图。图4E是检测作为源自人脑的癌细胞的U-87MG细胞系的图。图4F是检测作为源自人骨骼的癌细胞的Saos-2细胞系的图。****p<0.0001。
图5示出了通过MET、2DG和IP6的单个和复合制剂以人血浆可使用的低浓度处理人源性正常细胞系48小时后，通过MTT检测法测定的以百分数表示的细胞存活率图。****p<0.0001。
图6示出了4T1细胞中的细胞存活率和蛋白质表达。每条竖条代表一个标准偏差。利用GraphPad Prism 6.0软件进行Tukey的多重比较后分析，通过单向方差分析测试进行统计分析。图6A示出了通过MET、2DG和IP6单独和组合处理源自小鼠的乳腺癌4T1细胞48小时后，通过MTT检测法测定的以百分数表示的细胞存活率图。图6B和6C示出了根据MET、2DG和IP6的单一和组合处理的AMPK和ACC的磷酸化表达图。*p<0.05。****p<0.0001。
图7是MET、2DG和IP6的单一和复合制剂对4T1细胞的ATP合成抑制图。利用GraphPad Prism 6.0软件进行Tukey的多重比较后分析，通过双向方差分析测试进行统计分析。*p<0.05。****p<0.0001。
图8是在测试动物中，根据抗PD-1抗体、MET、2DG、IP6和Ins的单一和复合制剂的给药，每隔三天测量的肿瘤体积图。利用GraphPad Prism 6.0软件进行Tukey的多重比较后分析，通过双向方差分析测试进行统计分析。**p<0.01，***p<0.0001。
图9是在受试动物中，根据抗PD-L1抗体、MET、2DG、IP6和Ins的单一和复合制剂的给药，以三天为间隔测量的肿瘤体积图。利用GraphPad Prism 6.0软件进行Tukey的多重比较后分析，通过双向方差分析测试进行统计分析。**p<0.01，***p<0.0001。
图10是在受试动物中，根据抗CTLA-4抗体、MET、2DG、IP6和Ins的单一和复合制剂的给药，以三天为间隔测量的肿瘤体积图。利用GraphPad Prism 6.0软件进行Tukey的多重比较后分析，通过双向方差分析测试进行统计分析。***p<0.001，****p<0.0001。
具体实施方式
参考下面详细描述的实施方案，本发明的优点和特征以及实现它们的方法将是显而易见的。然而，本发明不限于以下示例性实施方案，而是可以以各种不同的形式实施。提供示例性实施方案仅仅是为了完成本发明的公开，并向本发明所属领域的普通技术人员充分提供本发明的范围，并且本发明将仅由所附权利要求来限定。
在下面的实施例中，单克隆抗体、抗小鼠PD-1单克隆抗体(mAb)(RMP1-14)、抗小鼠PD-L1单克隆抗体(10F.9G2)、抗小鼠CTLA-4单克隆抗体(UC10-4F10-11)被用作免疫检查点抑制剂。此外，在二甲双胍或苯乙双胍的各种药学上可接受的盐形式中，使用盐酸二甲双胍(盐酸二甲双胍(Metformin HCl))和盐酸苯乙双胍(盐酸苯乙双胍(Phenformin HCl))作为双胍基化合物。这些盐的形式不受实施例的限制。此外，在肌醇六磷酸的几种药学上可接受的盐形式中，使用了肌醇六磷酸(植酸)。这些盐的形式不受实例的限制。此外，使用myo-肌醇作为肌醇的异构体。这些异构体不受实例的限制。
细胞培养
测试中使用以下细胞作为肿瘤细胞：肝癌(HepG2)、肺癌(A549)、胃癌(AGS)、胰腺癌(PANC-1)、结肠癌(DLD-1)、宫颈癌(HeLa)、乳腺癌(MDA-MB-231)、前列腺癌(PC-3)、卵巢癌(SK-OV-3)、膀胱癌(T24)、胶质母细胞瘤(U-87MG)、骨肉瘤(Saos-2)和源自小鼠的乳腺癌细胞；以下细胞作为非肿瘤细胞：前列腺细胞系(PZ-HPV-7)、结肠细胞系(CCD-18Co)和肺细胞系(MRC5)。所有细胞系均购自韩国细胞系银行或美国模式培养物保藏所(ATCC)(Rockville，MD)。
使用通过将10％胎牛血清(FBS，Hyclone)和1％青霉素/链霉素(P/S，Hyclone)添加到罗斯韦尔公园纪念研究所1640培养基(RPMI1640，Hyclone，Logan，UT，USA)中获得的细胞培养液，将细胞在37℃的培养箱(5％CO2/95％空气)中培养和维持。当将细胞填充到培养皿的约80％时，用磷酸盐缓冲盐水(PBS，Hyclone)洗涤单层细胞，并用0.25％胰蛋白酶-2.65mM EDTA(Hyclone)进行传代培养，每两天更换一次培养基。
使用的药物
用作单克隆抗体的抗小鼠PD-1单克隆抗体(RMP1-14)、抗小鼠PD-L1单克隆抗体(10F.9G2)和抗小鼠CTLA-4单克隆抗体(UC10-4F10-11)购自BioXcell，然后按照制造商提供的方法储存和处理。
盐酸二甲双胍(以下简称MET)、盐酸苯乙双胍(以下简称PHE)、2-脱氧-D-葡萄糖(以下简称2DG)、肌醇六磷酸(植酸，以下简称IP6)和myo-肌醇(以下简称Ins)购自Sigma(美国圣路易斯)。在本发明中，总结通过试验获得的结果的表和附图中使用的所有药物被表示为缩写。
参考例1：体外细胞生长抑制试验
通过MTT试验[3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(3-(4,5-dimethylthiazolyl-2)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)检测法]证实了MET或PHE、2DG和IP6的细胞毒性。在将细胞(3至4×105个细胞/孔)分配到96孔培养板中并稳定12小时或更长时间后，取出每个孔的培养基，将每个细胞的MET或PHE、2DG和IP6按每种浓度混合，并用无血清培养基处理。对于对照细胞，在培养基中加入PBS。在37℃下用CO2培养48小时后，将含有对照和混合物的培养基完全除去，并用MTT(美国密苏里州圣路易斯西格玛奥德里奇)试剂(0.5mg/mL)在37℃下培养4小时。此后，将含MTT试剂的培养基完全除去，由活细胞形成的MTT甲瓒晶体(formazan crystal)被留下，并通过加入DMSO(Sigma)在室温下溶解15分钟或更长时间。使用微板读数器在560nm的波长下测量吸光度(美国佛蒙特州威诺斯基
Figure BDA0003128108330000191
仪器公司)。
参考例2：单一制剂和复合制剂的测试方法
将细胞(3至4×105个细胞/孔)接种在96孔板中，并用每种浓度的作为单一制剂的各MET或PHE、2DG和IP6处理，以确认细胞增殖抑制率。
处理复合制剂药物，以具有对应于包含选自MET或PHE、2DG和IP6的两种或更多种化合物的复合制剂的IC50的药物浓度。所有细胞系在单一或复合制剂的浓度下培养48小时，并通过MTT检测法测量生长抑制效果。
参考例3：测试动物
五周大的雌性无特定病原体的BALB/c裸鼠是从Doo Yeol Biotech Co.,Ltd购买和使用的。经过一周的检疫和适应后，选择健康无体重下降的动物用于试验。
测试动物在温度为23±3℃，相对湿度为50±10％，通风次数为10-15次/小时，光照时间为12小时(08:00-20:00)，照度为150-300Lux的养殖环境中饲养。在预试验期间，允许测试动物自由食用测试动物的固体饲料(Cargill Agripurina Co.,Ltd)和饮用水。
参考例4:肿瘤细胞移植和测试物质给药
经过一周的适应期后，在BALB/c裸鼠中，将4T1细胞(1×105个细胞/小鼠)、乳腺癌细胞注射到测试动物的左乳房脂肪组织中，然后目测观察肿瘤组织。当测试动物的肿瘤组织大小为约50mm3时，根据随机区组设计将测试动物分成10个测试组。即，将9个测试组分为对照组、Ins组(Ins 100mg/kg)、IP6组(IP6 1000 mg/kg)、MET组(MET 500mg/kg)、2DG组(2DG 1000mg/kg)、单克隆抗体组(150μg/小鼠作为单克隆抗体(抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体或抗CTLA-4抗体))、单克隆抗体+MET+2DG组(单克隆抗体150μg/小鼠+MET 500mg/kg+2DG1000mg/kg)、单克隆抗体+MET+2DG+Ins组(单克隆抗体150μg/小鼠+MET 500mg/kg+2DG1000mg/kg+Ins 1000mg/kg)、单克隆抗体+MET+2DG+IP6组(单克隆抗体150μg/小鼠+MET500mg/kg+2DG 1000mg/kg+IP6 1000mg/kg)、单克隆抗体+MET+2DG+IP6+Ins组(单克隆抗体150μg/小鼠+MET 500mg/kg+IP6 1000 mg/kg)、单克隆抗体+MET+2DG+IP6+Ins组(单克隆抗体150μg/小鼠+MET 500mg/kg+2DG 1000mg/kg+IP6 500 mg/kg+Ins 500mg/kg)，并且每个测试组使用10只测试动物。通过将试验组分离时间设定为1天，每4天腹膜内给予测试物质单克隆抗体，并且通过将测试组分离时间设定为1天，将测试物质Ins、IP6、MET和2DG溶解在蒸馏水中直到测试结束时间，并且在预定时间口服给药3周。
参考例5：测试动物的体重和肿瘤体积的测量
从测试物质给药之日起，每周一次在固定时间测量测试期间测试动物的体重。通过每三天使用数显卡尺(digital caliper)测量肿瘤体积，测量了肿瘤的长度和宽度，并且通过代入以下方程式来计算肿瘤体积。
肿瘤体积(mm3)＝(宽度2×长度)/2
参考例6：统计处理
所有分析值均表示为平均±标准差(SD)。为了比较对照组和测试物质治疗组之间的差异，利用GraphPad Prism 6.0软件进行Tukey的多重比较后分析，通过单向方差分析测试或双向方差分析测试来验证显著性。确定只有当p<0.05或更多时才有统计学意义。
实施例1.MET(或PHE)、2DG、IP6单一制剂和复合制剂的细胞增殖抑制试验
使用12种类型的癌细胞比较了MET(或PHE)、2DG和IP6的单一制剂和复合制剂的的细胞增殖抑制效果。
实施例1-1：单独或组合给予MET、2DG和IP6后的细胞存活率
图1和图2是向癌细胞系如肝癌(HepG2)、肺癌(A549)、胃癌(AGS)、胰腺癌(PANC-1)、结肠癌(DLD-1)、宫颈癌(HeLa)、乳腺癌(MDA-MB-231)、前列腺癌(PC-3)、卵巢癌(SK-OV-3)、膀胱癌(T24)、胶质母细胞瘤(U-87MG)和骨肉瘤(Saos-2)单独或组合给予MET、2DG和IP6后，检测细胞存活率的图。
图1A示出了用4mM的MET、1mM的2DG和1mM的IP6单独或组合处理的肝癌细胞系(HepG2)的细胞存活率。组合处理制剂的存活率明显低于包括对照在内的单一处理(P<0.0001)的存活率。在组合处理组之间进行比较，MET+2DG+IP6的组合的细胞存活率为17.44±4.8％，其明显比MET+2DG的组合的细胞存活率45.40±4.2％(P<0.0001)低2.6倍。
图1B示出了用4mM的MET、1mM的2DG和1mM的IP6单独或组合处理肺癌(A549)细胞系的细胞存活率。组合处理制剂的存活率明显低于包括对照组在内的单一处理(P<0.0001)的存活率。在组合处理组之间进行比较，MET+2DG+IP6的组合处理组的细胞存活率为19.43±5.2％，其明显比MET+2DG组合的细胞存活率48.84±5.3％(P<0.0001)低2.5倍。
图1C示出用2mM的MET、0.7mM的2DG和1mM的IP6单独或组合处理的胃癌(AGS)细胞系的细胞存活率。组合处理制剂的存活率明显低于包括对照组在内的单一处理(P<0.0001)的存活率。在组合处理组之间进行比较，MET+2DG+IP6的组合的细胞存活率为15.20±4.2％，其明显比MET+2DG的组合的细胞存活率53.00±3.8％(P<0.0001)低3.5倍。
图1D示出了5mM的MET、0.7mM的2DG和1mM的IP6单独和组合处理胰腺癌(PANC-1)细胞系的细胞存活率。组合处理制剂的存活率明显低于包括对照在内的单一处理(P<0.0001)的存活率。在组合处理组之间进行比较，MET+2DG+IP6的组合的细胞存活率为25.27±5.2％，其明显比MET+2DG组合的细胞存活率65.40±4.3％(P<0.0001)低2.6倍。
图1E示出了用5mM的MET、0.4mM的2DG和1mM的IP6单独和组合处理结肠癌(DLD-1)细胞系的细胞存活率。组合处理制剂的存活率明显低于包括对照在内的单一处理(P<0.0001)的存活率。在组合处理组之间进行比较，MET+2DG+IP6组合的细胞存活率为26.70±4.7％，其明显比MET+2DG的组合的细胞存活率65.40±4.6％(P<0.0001)低2.4倍。
图1F示出了用6mM的MET、0.5mM的2DG和1mM的IP6单独和组合处理的宫颈癌(HeLa)细胞系的细胞存活率。组合处理的制剂的存活率明显低于包括对照在内的单一处理(P<0.0001)的存活率。在组合处理组之间进行比较，MET+2DG+IP6的组合的细胞存活率为24.67±3.6％，其明显比MET+2DG的组合的细胞存活率52.89±4.6％(P<0.0001)低2.1倍。
图2A示出了用6mM的MET、1mM的2DG和1mM的IP6单独和组合处理的乳腺癌(MDA-MB-231)细胞系的细胞存活率。组合处理制剂的存活率明显低于包括对照在内的单一处理(P<0.0001)的存活率。在组合处理组之间进行比较，MET+2DG+IP6组合的细胞存活率为26.37±5.3％，其明显比MET+2DG组合的细胞存活率55.15±4.5％(P<0.0001)低2.1倍。
图2B示出了用5mM的MET、1mM的2DG和1mM的IP6单独和组合处理的前列腺癌(PC-3)细胞系的细胞的存活率。组合处理制剂的存活率明显低于包括对照在内的单一处理(P<0.0001)的存活率。在组合处理组之间进行比较，MET+2DG+IP6组合的细胞存活率为19.51±5.6％，其明显比MET+2DG组合的细胞存活率66.70±4.6％(P<0.0001)低3.4倍。
图2C示出了用5mM的MET、0.5mM的2DG和1mM的IP6单独和组合处理的卵巢癌(SK-OV-3)细胞系的细胞存活率。组合处理制剂的存活率明显低于包括对照在内的单一处理(P<0.0001)的存活率。在组合处理组之间进行比较，MET+2DG+IP6组合的细胞存活率为22.80±5.2％，其明显比MET+2DG组合的细胞存活率66.80±3.6％(P<0.0001)低2.9倍。
图2D示出了用4mM的MET、1mM的2DG和1mM的IP6单独和组合处理的膀胱癌(T24)细胞系的细胞存活率。组合处理制剂的存活率明显低于包括对照在内的单一处理(P<0.0001)的存活率。在组合处理组之间进行比较，MET+2DG+IP6组合的细胞存活率为26.42±4.8％，其明显比MET+2DG组合的细胞存活率63.30±4.2％(P<0.0001)低2.4倍。
图2E示出了用5mM的MET、0.4mM的2DG和1mM的IP6单独和组合处理的胶质母细胞瘤(U-87MG)细胞系的细胞存活率。组合处理制剂的存活率明显低于包括对照在内的单一处理(P<0.0001)的存活率。在组合处理组之间进行比较，MET+2DG+IP6组合的细胞存活率为20.80±5.7％，其明显比MET+2DG的组合的细胞存活率61.32±4.8％(P<0.0001)低2.9倍。
图2F示出了用5mM的MET、0.7mM的2DG和1mM的IP6单独和组合处理的骨肉瘤(Saos-2)细胞系的细胞存活率。组合处理制剂的存活率明显低于包括对照在内的单一处理(P<0.0001)的存活率。在组合处理组之间进行比较，MET+2DG+IP6组合的细胞存活率为24.52±5.7％，其明显比MET+2DG组合细胞存活率64.33±4.9％(P<0.0001)低2.6倍。
这些结果证实了MET、2DG和IP6的三重复合制剂比单一或双重复合制剂具有更好的癌细胞增殖抑制效果。
实施例1-2：单独和组合给予PHE、2DG和IP6后的细胞存活率
图3和图4是检测向人癌细胞系(如肝癌(HepG2)、肺癌(A549)、胃癌(AGS)、胰腺癌(PANC-1)、结肠癌(DLD-1)、宫颈癌(HeLa)、乳腺癌(MDA-MB-231)、前列腺癌(PC-3)、卵巢癌(SK-OV-3)、膀胱癌(T24)、胶质母细胞瘤(U-87MG)和骨肉瘤(Saos-2))单独或组合给予PEH、2DG和IP6后的细胞存活率的图。
图3A示出了用0.3mM的PHE、1mM的2DG和1mM的IP6单独和组合处理的肝癌(HepG2)细胞系的细胞存活率。组合处理制剂的存活率明显低于包括对照在内的单一处理(P<0.0001)的存活率。在组合处理组之间进行比较，PHE+2DG+IP6组合的细胞存活率为20.21±4.1％，其明显比PHE+2DG组合的细胞存活率49.55±4.8％(P<0.0001)低2.5倍。
图3B示出了用0.3mM的PHE、1mM的2DG和1mM的IP6单独和组合处理的肺癌(A549)细胞系的细胞存活率。组合处理制剂的存活率明显低于包括对照在内的单一处理(P<0.0001)的存活率。PHE+2DG+IP6组合的细胞存活率为22.41±5.2％，其明显比PHE+2DG组合的细胞存活率54.77±5.8％(P<0.0001)低2.4倍。
图3C示出了用0.3mM的PHE、0.7mM的2DG和1mM的IP6单独和组合处理的胃癌(AGS)细胞系的细胞存活率。组合处理制剂的存活率明显低于包括对照在内的单一处理(P<0.0001)的存活率。在组合处理组之间进行比较，PHE+2DG+IP6组合的细胞存活率为17.38±3.8％，其明显比PHE+2DG组合的细胞存活率50.45±3.9％(P<0.0001)低2.9倍。
图3D示出了用0.2mM的PHE、0.7mM的2DG和1mM的IP6组合处理的胰腺癌(PANC-1)细胞系的细胞存活率。组合处理组的存活率明显低于包括对照在内的单一处理(P<0.0001)的存活率。在组合处理组之间进行比较，PHE+2DG+IP6组合的细胞存活率为25.27±5.2％，其明显比PHE+2DG组合的细胞存活率65.40±4.3％(P<0.0001)低2.6倍。
图3E示出了用0.3mM的PHE、0.4mM的2DG和1mM的IP6单独和组合处理的结肠癌(DLD-1)细胞系的细胞存活率。组合处理制剂的存活率明显低于包括对照在内的单一处理(P<0.0001)的存活率。在组合处理组之间进行比较，PHE+2DG+IP6组合的细胞存活率为22.21±4.8％，其明显比PHE+2DG组合的细胞存活率60.98±4.7％(P<0.0001)低2.7倍。
图3F示出了用0.2mM的PHE、0.5mM的2DG和1mM的IP6单独和组合处理的宫颈癌(HeLa)细胞系的细胞存活率。组合处理制剂的存活率明显低于包括对照在内的单一处理(P<0.0001)的存活率。在组合处理组之间进行比较，PHE+2DG+IP6组合的细胞存活率为25.65±3.9％，其明显比PHE+2DG组合的细胞存活率54.67±4.6％(P<0.0001)低2.1倍。
图4A示出了用0.2mM的PHE、1mM的2DG和1mM的IP6单独和组合处理的乳腺癌(MDA-MB-231)细胞系的细胞存活率。组合处理制剂的存活率明显低于包括对照在内的单一处理(P<0.0001)的存活率。在组合处理组之间进行比较，PHE+2DG+IP6组合的细胞存活率为20.76±4.2％，其明显比PHE+2DG组合的细胞存活率48.54±4.5％(P<0.0001)低2.3倍。
图4B示出了用0.3mM的PHE、1mM的2DG和1mM的IP6单独和组合处理的前列腺癌(PC-3)细胞系的细胞存活率。组合处理制剂的存活率明显低于包括对照在内的单一处理(P<0.0001)的存活率。在组合处理组之间进行比较，PHE+2DG+IP6组合的细胞存活率为20.77±4.3％，其明显比PHE+2DG组合的细胞存活率59.66±4.6％(P<0.0001)低2.9倍。
图4C示出了用0.4mM的PHE、0.5mM的2DG和1mM的IP6单独和组合处理的卵巢癌(SK-OV-3)细胞系的细胞存活率。组合处理组的存活率明显低于包括对照在内的单一处理(P<0.0001)的存活率。在组合处理组之间进行比较，PHE+2DG+IP6组合的细胞存活率为20.44±4.2％，其明显比PHE+2DG组合的细胞存活率60.54±5.1％(P<0.0001)低3.0倍。
图4D示出了用0.4mM的PHE、1mM的2DG和1mM的IP6单独和组合处理的膀胱癌(T24)细胞系的细胞存活率。组合处理制剂的存活率明显低于包括对照在内的单一处理(P<0.0001)的存活率。在组合处理组之间进行比较，PHE+2DG+IP6组合的细胞存活率为21.45±4.2％，其明显比PHE+2DG组合的细胞存活率58.70±4.5％(P<0.0001)低2.7倍。
图4E示出了用0.2mM的PHE、0.4mM的2DG和1mM的IP6单独和组合处理的胶质母细胞瘤(U-87MG)细胞系的细胞存活率。组合处理制剂的存活率明显低于包括对照在内的单一处理(P<0.0001)的存活率。在组合处理组之间进行比较，PHE+2DG+IP6组合的细胞存活率为15.76±4.2％，其明显比PHE+2DG组合的细胞存活率54.32±4.8％(P<0.0001)低3.4倍。
图4F示出了用0.2mM的PHE、0.7mM的2DG和1mM的IP6单独和组合处理的骨肉瘤(Saos-2)细胞系的细胞存活率。组合处理制剂的存活率明显低于包括对照在内的单一处理(P<0.0001)的存活率。在组合处理组之间进行比较，PHE+2DG+IP6组合的细胞存活率为22.76±4.2％，其明显比PHE+2DG组合的细胞存活率61.93±4.7％(P<0.0001)低2.7倍。
这些结果证实了PHE、2DG和IP6的三重复合制剂比单一或双重复合制剂具有更好的癌细胞增殖抑制效果。
实施例2：MET、2DG和IP6的复合制剂对正常细胞的影响
图5是为了观察MET、2DG和IP6的复合制剂对正常细胞的效果，用三种组合制剂处理作为肿瘤细胞的前列腺癌(PC-3)细胞系、结肠癌(DLD-1)细胞系和肺癌(A549)细胞系以及作为非肿瘤细胞的前列腺(PZ-HPV-7)细胞系、结肠(CCD-18Co)细胞系和肺(MRC5)细胞系48小时后，通过MTT检测法检测细胞毒性的图。
结果，在用5mM的MET、1mM的2DG和1mM的IP6的复合制剂处理的PC-3和PZ-HPV-7细胞系中，作为肿瘤细胞的PC-3细胞系的细胞存活率显著降低，而作为非肿瘤细胞的PZ-HPV-7细胞系的细胞存活率不受影响(P<0.0001)。
结果，在用5mM的MET、0.4mM的2DG和1mM的IP6的复合制剂处理的DLD-1细胞系和CCD-18Co细胞系中，作为肿瘤细胞的DLD-1细胞系的细胞存活率显著降低，而作为非肿瘤细胞的CCD-18Co细胞系的细胞存活率不受影响(P<0.0001)。
结果，在用4mM的MET、1mM的2DG和1mM的IP6的复合制剂处理的A549细胞系和MRC5细胞系中，作为肿瘤细胞的A549细胞系的细胞存活率显著降低，而作为非肿瘤细胞的MRC5细胞系的细胞存活率不受影响(P<0.0001)。
三种组合制剂处理的每种非肿瘤细胞的凋亡显示出不同于肿瘤细胞的模式，并且三种组合制剂被证实是体内安全的药物。
实施例3：通过MET、2DG和IP6的单一和复合制剂处理的4T1细胞的细胞存活率和蛋 白质表达
活细胞的代谢利用ATP和ADP作为能量来源，并产生AMP。AMP激活的蛋白激酶(AMPK)是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，被称为脂质和葡萄糖代谢的调节剂，并且在眼科糖尿病中起着重要的调节作用。AMPK被AMP激活以抑制ATP的功能，其中AMP在细胞能量消耗时增加，并通过诱导分解代谢在维持体内平衡中起关键作用。AMPK激活抑制癌细胞的增殖，并抑制乙酰辅酶A羧化酶(ACC)(一种在脂肪代谢方面诱导脂肪酸合成的酶)。
图6A示出了用5mM MET、2mM 2DG和1mM IP6单独和组合处理源于小鼠的乳腺癌(4T1)细胞系的细胞存活率。组合处理制剂的存活率明显低于包括对照在内的单一处理(P<0.0001)的存活率。在组合处理组中进行比较，(MET+2DG+IP6)组的细胞存活率为23.04±4.0％，其明显比(MET+2DG)组的细胞存活率50.03±4.0％(P<0.0001)低2.2倍。
在图6B和6C中，与(MET+2DG)组相比，(MET+2DG+IP6)组的AMPK被显著激活(P<0.0001)，并且ACC的磷酸化降低(P<0.05)。
实施例4.MET、2DG和IP6的单一和复合制剂对4T1细胞的ATP合成抑制
ATP(三磷酸腺苷)是生物体的一种能量来源，并且当细胞内ATP合成受到抑制时，能量代谢活性降低。在实施例3的源自小鼠的乳腺癌细胞系4T1中证实了MET、2DG和IP6的ATP合成抑制作用。
4T1的每个细胞(103-104个细胞)在60mm培养皿中培养24小时，并用4mM的MET、1mM的2DG和1mM的IP6单独和组合处理，并进一步培养48小时。此后，收集细胞并计数，在100毫升含有10体积％FBS的RPMI培养液中稀释，并转移到96孔板的每个孔中。将100mL PromegaATP检测试剂盒(美国北卡罗来纳州达勒姆Promega公司，G7572)的检测缓冲液(rL/L试剂+重建缓冲液)添加到含有细胞的孔中，并在560nm处测量荧光发射。结果如图7所示。
如图7所示，测试结果表明，在用于测试的4T1细胞系中的单一和组合处理中，ATP合成在组合处理中受到抑制，而在单独处理中未受到抑制(P<0.0001)。与MET+2DG组(P<0.05)相比，MET+2DG+IP6组显著抑制ATP合成。结果，可以看出MET+2DG+IP6组的复合制剂最有效地降低了癌细胞中的能量水平。在下面的实施例5至7中，通过将测试物质Ins、IP6、MET、2DG与免疫检查点抑制剂组合给药，表现出了肿瘤生长抑制效果。
实施例5.抗PD-1、Ins、IP6、MET和2DG的单一和复合制剂对肿瘤体积变化的影响
当肿瘤组织的大小为约50mm3时，对测试组进行分类并开始给予测试物质，并且从给予测试物质的开始日期起每隔3天测量肿瘤体积。测试的结果如图8所示，从给予测试物质的第3天起，与对照组相比，单一治疗组和组合治疗组的肿瘤体积减少。在给予测试物质的第21天，仅用单克隆抗体给药的抗PD-1组与抗PD-1+MET+2DG组显著不同(P<0.01)。此外，对照组、Ins组、IP6组、MET组、2DG组和抗PD-1组的显著差异高于四种或更多种包含单克隆抗体的复合制剂抗PD-1+MET+2DG+Ins组、抗PD-1+MET+2DG+IP6组和抗PD-1+MET+2DG+IP6+Ins组(P<0.0001)。在总共10个组中，抗PD-1+MET+2DG+IP6+Ins组表现出最大的肿瘤体积减少，并表现出高的肿瘤生长抑制作用(图8)。
实施例6.抗PD-L1、Ins、IP6、MET和2DG的单一和复合制剂对肿瘤体积变化的影响
当肿瘤组织的大小约为50mm3时，对测试组进行分类并开始给予测试物质，并且从开始给予测试物质起每隔3天测量肿瘤体积。测试的结果如图9所示，从试验物质给药的第3天起，与对照组相比，单一治疗组和组合治疗组的肿瘤体积减少。在给予测试物质的第21天，仅用单克隆抗体给药的抗PD-L1组与抗PD-L1+MET+2DG组显著不同(P<0.01)。此外，对照组、Ins组、IP6组、MET组、2DG组和抗PD-L1组的显著性差异高于包含单克隆抗体的四种或更多种复合制剂的抗PD-L1+MET+2DG+Ins组、抗PD-L1+MET+2DG+IP6组和抗PD-L1+MET+2DG+IP6+Ins组(P<0.0001)。在总共10个组中，抗PD-L1+MET+2DG+IP6+Ins组表现出最大的肿瘤体积减小，并表现出高的肿瘤生长抑制作用(图9)。
实施例7.抗CTLA-4、Ins、IP6、MET和2DG的单一和复合制剂对肿瘤体积变化的影响
当肿瘤组织的大小为约50mm3时，对测试组进行分类并开始给予测试物质，并且从开始给予测试物质起每隔3天测量肿瘤体积。测试的结果如图10所示，从给予测试物质的第3天起，与对照组相比，单一治疗组和组合治疗组的肿瘤体积减少。在给予测试物质的第21天，仅用单克隆抗体给药的抗CTLA-4组与抗CTLA-4+MET+2DG组显著不同(P<0.001)。此外，对照组、Ins组、IP6组、MET组、2DG组和抗CTLA-4组比四种或更多种含有单克隆抗体的复合制剂的抗CTLA-4+MET+2DG+Ins组、抗CTLA-4+MET+2DG+IP6组和抗CTLA-4+MET+2DG+IP6+Ins组具有更高的显著性差异(P<0.0001)。在总共10个组中，抗CTLA-4+MET+2DG+IP6+Ins组表现出最高的肿瘤体积减少，并表现出高的肿瘤生长抑制作用(图10)。

Claims (19)

1.一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，包含：(1)免疫检查点抑制剂、(2)双胍基化合物或其药学上可接受的盐和(3)2-脱氧-D-葡萄糖。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，进一步包含：(4)肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐、肌醇或它们的混合物。
3.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述组合物包含(1)免疫检查点抑制剂、(2)双胍基化合物或其药学上可接受的盐、(3)2-脱氧-D-葡萄糖和(4)肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐。
4.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述组合物包含(1)免疫检查点抑制剂、(2)双胍基化合物或其药学上可接受的盐、(3)2-脱氧-D-葡萄糖和(4)肌醇。
5.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述组合物包含(1)免疫检查点抑制剂、(2)双胍基化合物或其药学上可接受的盐、(3)2-脱氧-D-葡萄糖和(4)肌醇六磷酸和肌醇。
6.根据权利要求1所述的药物组合物，其中(1)所述免疫检查点抑制剂为选自以下中的至少一种：抗CTLA4抗体、抗PD-1抗体、抗LAG-3抗体、抗OX40抗体、抗TIM3抗体和抗PD-L1抗体。
7.根据权利要求6所述的药物组合物，其中(1)所述免疫检查点抑制剂为选自以下中的至少一种：抗CTLA4抗体、抗PD-1抗体和抗PD-L1抗体。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的药物组合物，其中所述免疫检查点抑制剂的单剂量为0.01至25mg/kg。
9.根据权利要求1至7中任一项所述的药物组合物，其中(2)双胍基化合物为二甲双胍或苯乙双胍。
10.根据权利要求2所述的药物组合物，其中(4)所述肌醇化合物为选自以下中的至少一种：D-手性肌醇、L-手性肌醇、myo-肌醇和鲨肌醇。
11.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述癌症为选自以下中的至少一种：肝癌、肺癌、胃癌、胰腺癌、结肠癌、宫颈癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、脑癌、骨肉瘤、膀胱癌、头颈癌、肾癌、黑色素瘤、白血病和淋巴瘤。
12.一种用于预防或治疗癌症的药物组合物，包含：(1)免疫检查点抑制剂、(2)双胍基化合物或其药学上可接受的盐、(3)2-脱氧-D-葡萄糖和(4)肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐、肌醇或它们的混合物。
13.一种治疗癌症的方法，包括向需要其治疗的受试者给药治疗有效量的(1)免疫检查点抑制剂、(2)双胍基化合物或其药学上可接受的盐和(3)2-脱氧-D-葡萄糖。
14.根据权利要求13所述的方法，进一步给药治疗有效量的(4)肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐、肌醇或它们的混合物。
15.根据权利要求13所述的方法，其中(1)所述免疫检查点抑制剂为选自以下中的至少一种：抗CTLA4抗体、抗PD-1抗体、抗LAG-3抗体、抗OX40抗体、抗TIM3抗体和抗PD-L1抗体。
16.一种用于治疗癌症的组合物，包含：(1)免疫检查点抑制剂、(2)双胍基化合物或其药学上可接受的盐和(3)2-脱氧-D-葡萄糖。
17.根据权利要求16所述的组合物，其中所述组合物进一步包含(4)肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐、肌醇或它们的混合物。
18.一种包含(1)免疫检查点抑制剂、(2)双胍基化合物或其药学上可接受的盐和(3)2-脱氧-D-葡萄糖的组合物在制备治疗癌症的药物中的用途。
19.根据权利要求18所述的用途，其中所述组合物进一步包含(4)肌醇六磷酸或其药学上可接受的盐、肌醇或它们的混合物。
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