CN113261517B

CN113261517B - 一种抑菌脱粘剂、其制备方法及利用该抑菌脱粘剂提高瓦氏雅罗鱼人工繁育孵化率的方法

Info

Publication number: CN113261517B
Application number: CN202110600538.6A
Authority: CN
Inventors: 常玉梅; 韩世成; 梁利群; 孙博; 张立民
Original assignee: Heilongjiang River Fisheries Research Institute of Chinese Academy of Fishery Sciences
Current assignee: Heilongjiang River Fisheries Research Institute of Chinese Academy of Fishery Sciences
Priority date: 2021-05-31
Filing date: 2021-05-31
Publication date: 2022-05-31
Anticipated expiration: 2041-05-31
Also published as: CN113261517A

Abstract

本发明涉及一种抑菌脱粘剂、其制备方法及利用该抑菌脱粘剂提高瓦氏雅罗鱼人工繁育孵化率的方法，属于水产养殖技术领域。为解决瓦氏雅罗鱼人工繁育孵化率、成活率低的问题，本发明提供了一种抑菌脱粘剂，主要由吸附性载体和负载于载体上的抑菌成分组成，所述抑菌成分主要由五倍子、黄芩、苦参、金银花、连翘和菖蒲组成。利用本发明的抑菌脱粘剂提高瓦氏雅罗鱼人工繁育孵化率的方法，包括人工受精、受精卵脱粘及防治水霉处理、孵化和育苗。本发明抑菌脱粘微米级的吸附性载体脱粘效果良好，使受精卵粒能够彼此分离，提高了受精卵的孵化率；吸附性载体上负载的中药有效成分能够抑制水霉孢子及其他细菌的侵袭，防止水霉病滋生，提高了鱼苗的成活率。

Description

一种抑菌脱粘剂、其制备方法及利用该抑菌脱粘剂提高瓦氏雅罗鱼人工繁育孵化率的方法

技术领域

本发明属于水产养殖技术领域，尤其涉及一种抑菌脱粘剂、其制备方法及利用该抑菌脱粘剂提高瓦氏雅罗鱼人工繁育孵化率的方法。

背景技术

瓦氏雅罗鱼，鲤科、雅罗属鱼类，体形长，侧扁，背缘略呈弧形，腹部圆。瓦氏雅罗鱼为中国北方平原中上层鱼类，常生活于缓静水区。瓦氏雅罗鱼虽然不是冷水性鱼类，但喜栖于水流较缓、底质多砂砾、水质澄清的江河口或山涧支流的中上层，半咸水湖泊也可生活，完全静水中较为少见。

瓦氏雅罗鱼在中国东北地区和黄河中游地区都被列为一种重要的经济鱼类，其味道鲜美，肌肉中的含水量低、脂肪含量低、蛋白质含量高，易于被人体消化吸收，是营养价值高的淡水鱼品种。过去，瓦氏雅罗鱼一直是江河自然捕捞的主要对象，为了保护其野生渔业资源，现在已由自然捕捞向人工养殖方向发展。

在瓦氏雅罗鱼人工养殖过程中，人工受精产生的受精卵的孵化一直是非常重要的环节。瓦氏雅罗鱼3龄鱼开始达性成熟，卵暗黄色，粘性，卵径2.2mm。由于瓦氏雅罗鱼的受精卵属于粘性卵，大量受精卵粘连在一起容易导致部分受精卵无法接触到流动水而发生缺氧致死的情况。同时，未受精的死亡卵或窒息死亡的受精卵容易被水霉感染，水霉菌的外菌丝会包裹其他正常的受精卵阻挡其接触流动水，继而使正常的受精卵因缺氧窒息而大量死亡。

受精卵粘连和水霉感染造成鱼卵孵化率、成活率低，人工繁育过程中无法获得大量鱼苗是制约瓦氏雅罗鱼人工养殖大规模发展的重要因素。部分养殖户利用泥浆或滑石粉脱粘，然后使用亚甲基蓝防治水霉病，但亚甲基蓝具有高残留等特点，还潜在致畸、致癌、致突变的风险，影响了瓦氏雅罗鱼成活鱼苗的质量。

发明内容

为解决瓦氏雅罗鱼人工繁育孵化率、成活率低的问题，本发明提供了一种抑菌脱粘剂、其制备方法及利用该抑菌脱粘剂提高瓦氏雅罗鱼人工繁育孵化率的方法。

本发明的技术方案：

一种抑菌脱粘剂，主要由吸附性载体和负载于载体上的抑菌成分组成，所述抑菌成分主要由五倍子、黄芩、苦参、金银花、连翘和菖蒲组成，所述抑菌成分的载药量为1～5wt.％。

进一步的，所述吸附性载体为硅藻土、活性炭或沸石中的一种或几种的组合。

进一步的，所述抑菌成分为重量份为5～10份的五倍子、6～8份的黄芩、6～8份的苦参、4～6份的金银花、4～6份的连翘和4～6份的菖蒲的中药混合水提物或微米级中药混合粉末。

一种本发明所述抑菌脱粘剂的制备方法，包括如下步骤：

步骤一、制备中药混合水提物或微米级中药混合粉末：

将重量份为5～10份的五倍子、6～8份的黄芩、6～8份的苦参、4～6份的金银花、4～6份的连翘和4～6份的菖蒲放入10倍体积的纯水中，浸泡12h后，煎煮至剩余液体为原纯水体积的1/3，即为中药混合水提物；

或者将重量份为5～10份的五倍子、6～8份的黄芩、6～8份的苦参、4～6份的金银花、4～6份的连翘和4～6份的菖蒲超微粉碎至粒径为200目的微米级中药混合粉末；

步骤二、制备抑菌脱粘剂：

将吸附性载体烘干至恒重，按吸附性载体与中药混合水提物质量体积比为1g：30mL将两者混合，超声处理后用100目筛过滤得到抑菌脱粘剂；

或者将吸附性载体烘干至恒重，按吸附性载体与微米级中药混合粉末质量比为1:3将两者混合，球磨处理后用100目筛过滤得到抑菌脱粘剂。

进一步的，步骤二所述超声处理是在100～300W功率下超声处理30～45min；所述球磨处理是在球磨机转速为200～300rpm条件下球磨1～2h。

一种利用本发明所述抑菌脱粘剂提高瓦氏雅罗鱼人工繁育孵化率的方法，包括如下步骤：

步骤1、人工受精：分别蓄养采捕到的性腺发育完善的瓦氏雅罗鱼的3龄雌鱼和雄鱼；在气温15～20℃条件下挤压采集雌鱼的成熟卵粒和雄鱼的精液共同置于容器中，用毛笔充分搅拌使精液均匀包裹成熟卵粒，静置2～5min，注入清水激活精子，完成人工受精；

步骤2、受精卵脱粘及防治水霉处理：抑菌脱粘剂加纯水搅拌得到抑菌脱粘剂悬浊液，边搅动抑菌脱粘剂悬浊液边将步骤1得到的受精卵缓慢倒入悬浊液中，继续搅拌3～5min，使受精卵脱去粘性并均匀地分布在悬浊液中；

步骤3、孵化：将经过步骤2脱粘处理的受精卵移入孵化槽，将分散的受精卵置于孵化水源中进行流水孵化；

步骤4、育苗：孵化的仔稚鱼平游后放入室外的育苗池内进行强化培养，得到瓦氏雅罗鱼鱼苗。

进一步的，步骤1将10～15尾雌鱼的成熟卵粒和10～12尾雄鱼的精液共同置于容器中进行人工受精。

进一步的，步骤2所述抑菌脱粘剂悬浊液的浓度为10～15wt.％。

进一步的，步骤3所述孵化槽在投入脱粘受精卵前先用2.0ppm高锰酸钾溶液进行消毒处理，对孵化槽内水源进行过滤和生石灰消毒处理，清除水体中的病原菌、水霉孢子。

进一步的，步骤3所述孵化槽水温为14～22℃，水深50cm，放卵密度为800～1000粒/L，水中溶解氧不低于10mg/L，水流速为0.3～0.5m/s孵化7～14天，将水流速升至0.5～0.8m/s再孵化10～15天。

本发明的有益效果：

本发明将中药有效成分负载在吸附性载体上所提供的抑菌脱粘剂能够同时进行粘性卵的脱粘和防治水霉处理。将本发明提供的抑菌脱粘剂用于瓦氏雅罗鱼的人工繁育孵化受精卵的过程，微米级的吸附性载体脱粘效果良好，使受精卵粒能够彼此分离，提高了受精卵的孵化率，同时避免了传统泥浆脱粘容易在受精卵表面粘附污物的缺陷；吸附性载体上负载的中药有效成分能够抑制水霉孢子及其他细菌的侵袭，防止水霉病滋生，同时避免了传统化学防治水霉病容易导致仔稚鱼畸形的问题，在提高受精卵孵化率的基础上进一步提高了鱼苗的成活率。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的保护范围中。下列实施例中未具体注明的工艺设备或装置均采用本领域内的常规设备或装置，若未特别指明，本发明实施例中所用的原料等均可市售获得；若未具体指明，本发明实施例中所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。

实施例1

本实施例提供了一种抑菌脱粘剂，由硅藻土和负载于硅藻土上的中药混合水提物组成，其中中药混合水提物的负载量为5wt.％。

本实施例抑菌脱粘剂的制备方法包括如下步骤：

步骤一、制备中药混合水提物：

按重量份准备10份的五倍子、8份的黄芩、8份的苦参、6份的金银花、6份的连翘和6份的菖蒲放入10倍体积的纯水中，浸泡12h后，煎煮至剩余液体为原纯水体积的1/3，即为中药混合水提物；

步骤二、制备抑菌脱粘剂：

将粒径为100目的硅藻土烘干至恒重，按硅藻土与中药混合水提物质量体积比为1g：30mL将两者混合，100W功率下超声处理45min后用100目筛过滤得到抑菌脱粘剂。

实施例2

本实施例提供了一种抑菌脱粘剂，由活性炭和负载于活性炭上的中药混合水提物组成，其中中药混合水提物的负载量为4wt.％。

本实施例抑菌脱粘剂的制备方法包括如下步骤：

步骤一、制备中药混合水提物：

按重量份准备8份的五倍子、7份的黄芩、7份的苦参、5份的金银花、5份的连翘和5份的菖蒲放入10倍体积的纯水中，浸泡12h后，煎煮至剩余液体为原纯水体积的1/3，即为中药混合水提物；

步骤二、制备抑菌脱粘剂：

将粒径为100目的活性炭烘干至恒重，按活性炭与中药混合水提物质量体积比为1g：30mL将两者混合，200W功率下超声处理35min后用100目筛过滤得到抑菌脱粘剂。

本实施例制备的抑菌脱粘剂，以五倍子、黄芩、苦参、金银花、连翘和菖蒲的水提物为抑菌成分，利用超声波的作用将中药抑菌成分均匀分散于活性炭的孔隙中，制备了负载有抑菌成分的脱粘剂。中药抑菌成分抑菌谱广，不仅能有效预防水霉病，对其他细菌病毒也具有防治作用，能够显著提高瓦氏雅罗鱼的孵化率。中药抑菌成分天然环保，毒副作用小，不存在污染水体的问题，对受精卵也基本不产生伤害，不存在致畸风险，进一步提高了人工繁育过程中瓦氏雅罗鱼的成活率。

实施例3

本实施例提供了一种抑菌脱粘剂，由活性炭和负载于活性炭上的微米级中药混合粉末组成，其中微米级中药混合粉末的负载量为3wt.％。

本实施例抑菌脱粘剂的制备方法包括如下步骤：

步骤一、制备微米级中药混合粉末：

将重量份为7份的五倍子、6份的黄芩、6份的苦参、4份的金银花、4份的连翘和4份的菖蒲超微粉碎至粒径为200目的微米级中药混合粉末；

步骤二、制备抑菌脱粘剂：

将活性炭干至恒重，按活性炭与微米级中药混合粉末质量比为1:3将两者混合，在球磨机转速为200rpm条件下球磨2h后用100目筛过滤得到抑菌脱粘剂。

实施例4

本实施例提供了一种抑菌脱粘剂，由沸石和负载于沸石上的微米级中药混合粉末组成，其中微米级中药混合粉末的负载量为1wt.％。

本实施例抑菌脱粘剂的制备方法包括如下步骤：

步骤一、制备微米级中药混合粉末：

将重量份为5份的五倍子、7份的黄芩、7份的苦参、5份的金银花、5份的连翘和5份的菖蒲超微粉碎至粒径为200目的微米级中药混合粉末；

步骤二、制备抑菌脱粘剂：

将沸石烘干至恒重，按沸石与微米级中药混合粉末质量比为1:3将两者混合，在球磨机转速为300rpm条件下球磨1h后用100目筛过滤得到抑菌脱粘剂。

本实施例提供的抑菌脱粘剂在制备过程中，利用球磨处理将200目的中药混合粉末与沸石充分混合，使中药粉末能够嵌入沸石的孔隙中，最终得到粒径为100目的抑菌脱粘剂。在脱粘处理过程中，载药沸石粒径适中，既能使粘性受精卵彼此分开，又不会完全覆盖在受精卵表面，保证了受精卵能充分接触到流动水中的氧，从而提高了瓦氏雅罗鱼的孵化率。

实施例5

本实施例提供了一种抑菌脱粘剂，由沸石和负载于沸石上的中药混合水提物组成，其中中药混合水提物的负载量为2wt.％。

本实施例抑菌脱粘剂的制备方法包括如下步骤：

步骤一、制备中药混合水提物：

按重量份准备10份的五倍子、6份的黄芩、7份的苦参、5份的金银花、5份的连翘和6份的菖蒲放入10倍体积的纯水中，浸泡12h后，煎煮至剩余液体为原纯水体积的1/3，即为中药混合水提物；

步骤二、制备抑菌脱粘剂：

将粒径为100目的沸石烘干至恒重，按沸石与中药混合水提物质量体积比为1g：30mL将两者混合，300W功率下超声处理30min后用100目筛过滤得到抑菌脱粘剂。

实施例6

本实施例将实施例2制备的抑菌脱粘剂用于瓦氏雅罗鱼的人工繁育，提供了一种提高瓦氏雅罗鱼人工繁育孵卵率的方法，具体步骤如下。

步骤1、人工受精：

分别蓄养采捕到的性腺发育完善的瓦氏雅罗鱼的3龄雌鱼和雄鱼；在气温15～20℃条件下挤压采集雌鱼的成熟卵粒，每只采集容器中采集10～15尾雌鱼的成熟卵粒，卵粒数量为20～30万粒。采集10～12尾雄鱼的精液置于鱼卵采集容器中，用毛笔充分搅拌使精液均匀包裹成熟卵粒，静置2～5min，向容器中注入清水激活精子，完成人工受精；

步骤2、受精卵脱粘及防治水霉处理：

实施例2制备的抑菌脱粘剂加纯水搅拌得到浓度为15wt.％抑菌脱粘剂悬浊液，边搅动抑菌脱粘剂悬浊液边将步骤1得到的受精卵缓慢倒入抑菌脱粘剂悬浊液中，继续搅拌3～5min，使受精卵脱去粘性并均匀地分布在悬浊液中；

步骤3、孵化：

孵化槽使用前先用2.0ppm高锰酸钾溶液进行消毒处理，对孵化槽内水源进行过滤和生石灰消毒处理，清除水体中的病原菌、水霉孢子。然后将经过步骤2脱粘处理的受精卵移入孵化槽，放卵密度为800～1000粒/L，孵化槽水温为14～22℃，水深50cm，水中溶解氧不低于10mg/L，水流速为0.3～0.5m/s孵化7～14天，将水流速升至0.5～0.8m/s再孵化10～15天；

步骤4、育苗：孵化的仔稚鱼上浮平游后放入室外的育苗池内进行强化培养，按照每立方水体投加1kg的比例向育苗池内泼洒牛奶与鸡蛋黄混合物，1天2次，饲喂3～5天，得到瓦氏雅罗鱼鱼苗。

利用80目筛绢制作的鱼苗网，捞取10g干重的鱼苗，清查鱼苗个数计算鱼苗单重；称量育苗池内所有鱼苗干重，得到总鱼苗数量，经统计计算瓦氏雅罗鱼的孵化率达到83％，成活率达到90％。

实施例7

本实施例将实施例4制备的抑菌脱粘剂用于瓦氏雅罗鱼的人工繁育，提供了一种提高瓦氏雅罗鱼人工繁育孵卵率的方法，具体步骤如下。

步骤1、人工受精：

步骤2、受精卵脱粘及防治水霉处理：

实施例4制备的抑菌脱粘剂加纯水搅拌得到浓度为10wt.％抑菌脱粘剂悬浊液，边搅动抑菌脱粘剂悬浊液边将步骤1得到的受精卵缓慢倒入抑菌脱粘剂悬浊液中，继续搅拌3～5min，使受精卵脱去粘性并均匀地分布在悬浊液中；

步骤3、孵化：

孵化槽使用前先用2.0ppm高锰酸钾溶液进行消毒处理，对孵化槽内水源进行过滤和生石灰消毒处理，清除水体中的病原菌、水霉孢子，在孵化槽底部铺设一层2cm厚的实施例4制备的抑菌脱粘剂。然后将经过步骤2脱粘处理的受精卵移入孵化槽，放卵密度为800～1000粒/L，孵化槽水温为14～22℃，水深50cm，水中溶解氧不低于10mg/L，水流速为0.3～0.5m/s孵化7～14天，将水流速升至0.5～0.8m/s再孵化10～15天；

利用80目筛绢制作的鱼苗网，捞取10g干重的鱼苗，清查鱼苗个数计算鱼苗单重；称量育苗池内所有鱼苗干重，得到总鱼苗数量，经统计计算瓦氏雅罗鱼的孵化率达到87％，成活率达到94％。

本实施例在孵化槽底部铺设抑菌脱粘剂，能够在孵化过程中源源不断的向流动的孵化水体环境中输出抑菌成分，杀灭水体中可能存在的水霉菌和其他致病菌，从而保证水霉菌不会侵染已死亡的未受精卵粒，进一步防治水霉病的发生，提高瓦氏雅罗鱼的孵化率。

对比例1

本对比例在瓦氏雅罗鱼的人工繁育过程中利用泥浆和亚甲基蓝进行受精卵脱粘及防治水霉处理，提供了一种常规的瓦氏雅罗鱼人工繁育孵卵率的方法，具体步骤如下。

步骤1、人工受精：

步骤2、受精卵脱粘及防治水霉处理：

向步骤1得到的受精卵缓慢倒入稀泥浆液，用羽毛搅拌5min，大部分受精卵粒彼此分离，但卵外附着大量赃物；将受精卵用0.2wt.％亚甲基蓝溶液浸泡20min，完成防治水霉处理；

步骤3、孵化：

利用80目筛绢制作的鱼苗网，捞取10g干重的鱼苗，清查鱼苗个数计算鱼苗单重；称量育苗池内所有鱼苗干重，得到总鱼苗数量，经统计计算瓦氏雅罗鱼的孵化率为67％以上，成活率仅为51％。

与对比例1相比，实施例6和实施例7在瓦氏雅罗鱼的人工繁育孵化受精卵过程中，采用微米级的吸附性载体脱粘效果良好，使受精卵粒能够彼此分离，提高了受精卵的孵化率，同时避免了传统泥浆脱粘容易在受精卵表面粘附污物的缺陷；吸附性载体上负载的中药有效成分能够抑制水霉孢子及其他细菌的侵袭，防止水霉病滋生，同时避免了亚甲基蓝等化学物质防治水霉病容易导致仔稚鱼畸形的问题，在提高受精卵孵化率的基础上进一步提高了鱼苗的成活率。

Claims

1.一种抑菌脱粘剂，其特征在于，主要由吸附性载体和负载于载体上的抑菌成分组成，所述抑菌成分主要由五倍子、黄芩、苦参、金银花、连翘和菖蒲组成，所述抑菌成分的载药量为1~5wt.% ，所述吸附性载体为硅藻土、活性炭或沸石中的一种或几种的组合；所述抑菌脱粘剂用于瓦氏雅罗鱼的人工繁育。

2.根据权利要求1所述一种抑菌脱粘剂，其特征在于，所述抑菌成分为重量份为5~10份的五倍子、6~8份的黄芩、6~8份的苦参、4~6份的金银花、4~6份的连翘和4~6份的菖蒲的中药混合水提物或微米级中药混合粉末。

3.一种权利要求1或2任一所述抑菌脱粘剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一、制备中药混合水提物或微米级中药混合粉末：

将重量份为5~10份的五倍子、6~8份的黄芩、6~8份的苦参、4~6份的金银花、4~6份的连翘和4~6份的菖蒲放入10倍体积的纯水中，浸泡12h后，煎煮至剩余液体为原纯水体积的1/3，即为中药混合水提物；

或者将重量份为5~10份的五倍子、6~8份的黄芩、6~8份的苦参、4~6份的金银花、4~6份的连翘和4~6份的菖蒲超微粉碎至粒径为200目的微米级中药混合粉末；

步骤二、制备抑菌脱粘剂：

4.根据权利要求3所述抑菌脱粘剂的制备方法，其特征在于，步骤二所述超声处理是在100~300W功率下超声处理30~45min；所述球磨处理是在球磨机转速为200~300rpm条件下球磨1~2h。

5.一种利用权利要求1或2任一所述抑菌脱粘剂提高瓦氏雅罗鱼人工繁育孵化率的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1、人工受精：分别蓄养采捕到的性腺发育完善的瓦氏雅罗鱼的3龄雌鱼和雄鱼；在气温15~20℃条件下挤压采集雌鱼的成熟卵粒和雄鱼的精液共同置于容器中，用毛笔充分搅拌使精液均匀包裹成熟卵粒，静置2~5min，注入清水激活精子，完成人工受精；

步骤2、受精卵脱粘及防治水霉处理：抑菌脱粘剂加纯水搅拌得到抑菌脱粘剂悬浊液，边搅动抑菌脱粘剂悬浊液边将步骤1得到的受精卵缓慢倒入悬浊液中，继续搅拌3~5min，使受精卵脱去粘性并均匀地分布在悬浊液中；

6.根据权利要求5所述提高瓦氏雅罗鱼人工繁育孵化率的方法，其特征在于，步骤1将10~15尾雌鱼的成熟卵粒和10~12尾雄鱼的精液共同置于容器中进行人工受精。

7.根据权利要求6所述提高瓦氏雅罗鱼人工繁育孵化率的方法，其特征在于，步骤2所述抑菌脱粘剂悬浊液的浓度为10~15wt.%。

8.根据权利要求7所述提高瓦氏雅罗鱼人工繁育孵化率的方法，其特征在于，步骤3所述孵化槽在投入脱粘受精卵前先用2.0ppm高锰酸钾溶液进行消毒处理，对孵化槽内水源进行过滤和生石灰消毒处理，清除水体中的病原菌、水霉孢子。

9.根据权利要求8所述提高瓦氏雅罗鱼人工繁育孵化率的方法，其特征在于，步骤3所述孵化槽水温为14~22℃，水深50cm，放卵密度为800~1000粒/L，水中溶解氧不低于10mg/L，水流速为0.3~0.5m/s孵化7~14天，将水流升至0.5~0.8m/s再孵化10~15天。