CN113243359A - 一种食蚜瘿蚊冷藏保存剂及保存方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种食蚜瘿蚊冷藏保存剂及保存方法，该冷藏保存剂是由以下重量份原料制成：甘油100～150份，海藻糖20～30份，抗坏血酸0.05～0.1份，防腐剂0.05～0.08份，黄原胶0.08～0.12份，蛭石200～300份，水100～200份。该方法包括食蚜瘿蚊蛹在冷藏保存过程中采用所述食蚜瘿蚊冷藏保存剂的步骤。本发明提供了一种基本上对食蚜瘿蚊的生命活动无损保持的方法，有效提高食蚜瘿蚊蛹的羽化率，且不影响其后期的生长发育。
Description
技术领域
本发明涉及一种食蚜瘿蚊冷藏保存剂及保存方法。
背景技术
发明该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的一些理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
食蚜瘿蚊属双翅目瘿蚊科，是蚜虫的一种专性捕食性天敌，可以捕食61种不同作物上的蚜虫，它是控制蚜虫为害的有效天敌，尤其对温室蚜虫有良好的控制效果，在世界范围内已经得到普遍应用，与蚜虫的其他天敌比较，食蚜瘿蚊繁殖能力、搜索和分散能力强，杀死的蚜虫比取食的蚜虫数高很多，适宜大批量繁殖，容易贮存和运输，便于生产应用，低温冷藏食蚜瘿蚊，提高食蚜瘿蚊的商品化率，充分发挥食蚜瘿蚊在蚜虫生物防治中的作用。
目前食蚜瘿蚊的低温冷藏技术，例如宫亚军等人将老熟幼虫挑入塑料瓶中，每瓶2头，并滴适量的水，放置室温下24h，待老熟幼虫化蛹后，分别放入4～5℃、8～9℃低温冰箱内贮藏10、20、30天后取出，置于23℃人工气候箱内，观察食蚜瘿蚊发育的情况，记录成虫羽化数。结果表明在4～5℃条件下贮藏30天，羽化率为87.5％。在8～9℃条件下贮藏10天，羽化率为47.5％，贮藏30天时，其羽化率仅为20％。可见，该传统方法冷藏储存时间较短，羽化率较低。
再例如，王玉波等人将食蚜瘿蚊卵置于白天20～26℃/晚上9～11℃，光周期L7-8/D16-17的条件下11～14天，即获得滞育态食蚜瘿蚊蛹，将得到的滞育态食蚜瘿蚊蛹在4～6条件下避光储存，储存时间长达150天，解除滞育后的平均羽化率为75％。采用滞育态的食蚜瘿蚊蛹虽然延长了储存时间和平均羽化率，但是采用了滞育态食蚜瘿蚊蛹，对其后期的生长发育或部分生物学特性可能会产生较为严重的影响。
发明内容
针对以上背景技术，提供一种提高羽化率和延长冷藏储存时间的食蚜瘿蚊冷藏保存剂及食蚜瘿蚊的保存方法。
具体的，本发明采用以下技术方案：
在本发明的第一个方面，提供一种食蚜瘿蚊冷藏保存剂，该冷藏保存剂是由以下重量份原料制成：
甘油100～150份，海藻糖20～30份，抗坏血酸0.05～0.1份，防腐剂0.05～0.08份，黄原胶0.08～0.12份，蛭石200～300份，水100～200份。
甘油和海藻糖能够在低温的恶劣环境条件下在细胞表面形成独特的保护膜，有效地保护生物分子结构不被破坏，从而维持生命体的生物特征。抗坏血酸防止氧物质等侵入蛹体内，造成机体被氧化，从而保护了食蚜瘿蚊蛹的保护酶系活力，进而不会降低生命活力。防腐剂防止冷藏保存剂滋生杂菌变质。黄原胶用以提高甘油和海藻糖组成的溶液的黏度，使食蚜瘿蚊蛹表面能够负载一定的甘油和海藻糖，在食蚜瘿蚊蛹的表面有效形成保护膜。蛭石用以保持甘油、海藻糖和黄原胶的载体，覆盖在食蚜瘿蚊蛹表面，温度变化小，能够缓和降温或升温。
在本发明的一个优选实施方式中，所述冷藏保存剂是由以下重量份原料制成：
甘油120份，海藻糖25份，抗坏血酸0.08份，防腐剂0.06份，黄原胶0.1份，蛭石240份，水180份。
在本发明的一个或多个实施方式中，根据食蚜瘿蚊蛹的大小，本发明选择蛭石的粒径为20～40目，过大或过小粒径的蛭石无法对食蚜瘿蚊蛹提供有效保存效果。
在本发明的一个或多个实施方式中，所述防腐剂包括但不限于苯甲酸或其盐类或山梨酸或其盐类。
在本发明的第二个方面，提供一种食蚜瘿蚊冷藏保存剂的制备方法，该方法包括以下步骤：
1)将海藻糖、抗坏血酸、防腐剂和水混合均匀，形成混合液一；
2)将混合液一与黄原胶混合均匀，形成混合液二；
3)将混合液二与甘油混合均匀，形成混合液三；
4)蛭石灭菌后单独保存。
在本发明的第三个方面，提供一种食蚜瘿蚊冷藏保存方法，该方法包括食蚜瘿蚊蛹在冷藏保存过程中采用所述食蚜瘿蚊冷藏保存剂的步骤。
在本发明的一个或多个实施方式中，提供一种食蚜瘿蚊冷藏保存的具体保存方法，该方法包括：
S1：将所述混合液三与待冷藏保存的食蚜瘿蚊蛹混合，混合液三的添加量以没过食蚜瘿蚊蛹为准；
S2：取出S1中的食蚜瘿蚊蛹；
S3：将取出后的食蚜瘿蚊蛹的剩余混合液三倒入蛭石中混合均匀；
S4：将S2中的食蚜瘿蚊蛹放置于S3中的蛭石中；
S5：将S4中的食蚜瘿蚊蛹进行冷藏保存。
在本发明的一个或多个实施方式中，为提高冷藏后食蚜瘿蚊蛹的羽化率，在S1中，提供一种获得高品质食蚜瘿蚊蛹的方法，该方法包括以下步骤：
(1)将食蚜瘿蚊饲料倒入饲养盘中，在饲养盘上放置丝网，然后将其移入接卵室中；
其中所述食蚜瘿蚊饲料是由以下重量份原料制成：
蚜虫汁液200～300份，小麦胚芽汁液50～100份，大麦苗汁液200～300份，蔗糖10～30份，食品防腐剂0.02～0.05份；
其中蚜虫汁液是通过以下方法制备得到的：
①培育清洁苗：选用无农药残留的大麦种子，浸种8～12h后，种植大麦，培育清洁苗；
②繁育蚜虫：用清洁苗饲养蚜虫，繁育48～72h；
③间歇式摇床培育蚜虫：将步骤②中繁育的蚜虫采用间歇式摇床培养，培育时间为12～24h，每次摇晃时间为3～6s，暂停时间为60～120s，振幅为10～20mm；
④收集蚜虫以及分泌的物质：收集步骤③中培育的蚜虫和其分泌的物质，将蚜虫进行打浆、过滤，获得蚜虫上清液；将分泌的物质采用蚜虫上清液进行充分溶解，获得蚜虫汁液；
(2)将食蚜瘿蚊成虫接种至接卵室中，进行交配和接卵；
(3)将着卵的饲养盘(带有丝网)移入养虫室，至2龄幼虫时，将带有蚜虫的大麦苗移入养虫室，直到第6～7d发育至老熟幼虫，移出养虫室；
(4)将老熟幼虫倾斜至水中，老熟幼虫跳入水中，用吸管收集水中的老熟幼虫，移入化蛹瓶中获得高品质食蚜瘿蚊蛹。
在本发明的一个或多个实施方式中，步骤(1)中，所述食品防腐剂为山梨酸钾或苯甲酸。
在本发明的一个或多个实施方式中，步骤(2)中，交配和接卵时间共为24h。
在本发明的一个或多个实施方式中，步骤(3)中，直到第7d发育至老熟幼虫，移出养虫室。
在本发明的一个或多个实施方式中，S4中，冷藏保存的条件为：温度为1～3℃，湿度为40～50％。
与本发明人知晓的相关技术相比，本发明其中的一个技术方案具有如下有益效果：
本发明提供了一种基本上对食蚜瘿蚊的生命活动无损保持的方法，有效提高食蚜瘿蚊蛹的羽化率，经过试验验证，且不影响其后期的生长发育和食蚜瘿蚊的生物学特性，包括羽化成虫的寿命、交配率、产卵量等指标与未冷藏保存的食蚜瘿蚊均无显著差异。
本发明不需要采用滞育态的食蚜瘿蚊蛹即可提高食蚜瘿蚊蛹的羽化率和延长冷藏保存时间，冷藏时间150d时，平均羽化率高达89.6％。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作和/或它们的组合。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本发明的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本发明的技术方案。
实施例1高品质食蚜瘿蚊蛹的获得
(1)将食蚜瘿蚊饲料倒入饲养盘中，在饲养盘上放置多层无菌丝网，将其移入接卵室中；
所述食蚜瘿蚊饲料，该饲料是由以下重量份原料制成：
蚜虫汁液280份，小麦胚芽汁液60份，大麦苗汁液260份，蔗糖15份，食品防腐剂-苯甲酸0.02份；
所述食蚜瘿蚊饲料是通过以下方法制备得到的：
1)蚜虫汁液的制备：选用无农药残留的大麦种子，用水浸泡10h，于温室内种植大麦，培育出清洁苗，分两部分待用；待大麦出苗后，移入养蚜室，接种禾谷缢管蚜，控制养蚜室内温度为25℃左右，相对湿度为65％左右，光照每天保持在14h左右，光照强度为2500lx；繁育时间为3d；繁育3d后，将带有蚜虫的大麦苗移入摇瓶内进行间歇式摇床培养，培育时间为18h，每次摇晃时间为3s，暂停时间为90s，振幅为20mm；培育18h后，收集经过间歇式培育的蚜虫，将收集的大量蚜虫进行打浆，抽滤去除固体物质，获得蚜虫上清液；刮下大麦苗上蚜虫分泌的物质-主要成分是糖蜜，将分泌的物质采用蚜虫上清液进行搅拌，使其充分溶解，获得蚜虫汁液，备用；
2)小麦胚芽汁液的制备：将小麦胚芽进行打浆、过滤，获得小麦胚芽汁液，备用；
3)大麦苗汁液的制备：将步骤1)中培育的部分清洁苗进行打浆、过滤，获得大麦苗汁液，备用；
4)食蚜瘿蚊饲料的制备：将设定重量份的蔗糖和苯甲酸添加至大麦苗汁液中充分溶解，然后将其与蚜虫汁液和小麦胚芽汁液混合均匀，获得透明绿色的食蚜瘿蚊饲料液体；
(2)将食蚜瘿蚊成虫接种至接卵室，自然接卵24h；
(3)将着卵的饲养盘(带有丝网)移入养虫室，至2龄幼虫时(孵化后到第一次蜕皮是1龄，此处的2龄幼虫指的是第一次蜕皮以后的幼虫，大约在孵化后的2d后)，将带有蚜虫的大麦苗移入养虫室，直到第7d发育至老熟幼虫，移出养虫室；
(4)将老熟幼虫倾斜至水中，老熟幼虫跳入水中，用吸管收集水中的老熟幼虫，移入化蛹瓶中进行常规地充分化蛹，化蛹瓶中的设有湿润的化蛹基质-蛭石。
实施例2
一种食蚜瘿蚊冷藏保存剂，该冷藏保存剂是由以下重量份原料制成：
甘油120份，海藻糖25份，抗坏血酸0.08份，苯甲酸0.06份，黄原胶0.1份，20～40目的蛭石240份，水180份。
所述食蚜瘿蚊冷藏保存剂的制备方法，该方法包括以下步骤：
1)将海藻糖、抗坏血酸、防腐剂和水混合均匀，形成混合液一；
2)将混合液一与黄原胶混合均匀，形成混合液二；
3)将混合液二与甘油混合均匀，形成混合液三；
4)蛭石灭菌后单独保存。
实施例3
一种食蚜瘿蚊冷藏保存剂，该冷藏保存剂是由以下重量份原料制成：
甘油100份，海藻糖28份，抗坏血酸0.05份，苯甲酸0.05份，黄原胶0.08份，20～40目的蛭石200份，水140份。
所述食蚜瘿蚊冷藏保存剂的制备方法如实施例2所述。
实施例4
一种食蚜瘿蚊冷藏保存剂，该冷藏保存剂是由以下重量份原料制成：
甘油150份，海藻糖30份，抗坏血酸0.1份，苯甲酸钠0.06份，黄原胶0.12份，20～40目的蛭石280份，水160份。
所述食蚜瘿蚊冷藏保存剂的制备方法如实施例2所述。
实施例5
一种食蚜瘿蚊冷藏保存的方法，该方法具体包括：
S1：将实施例2中所述混合液三与实施例1中的高品质的食蚜瘿蚊蛹混合，混合液三的添加量以没过食蚜瘿蚊蛹为准；
S2：取出S1中的食蚜瘿蚊蛹；
S3：将取出后的食蚜瘿蚊蛹的剩余混合液三倒入蛭石中混合均匀，放入冷藏瓶中；
S4：将S2中的食蚜瘿蚊蛹放置于S3中的冷藏瓶中的蛭石内部中；
S5：将S4中的冷藏瓶放入低温贮藏箱中进行冷藏保存，冷藏温度设置为3℃，湿度设置为45％。
对比例1
一种食蚜瘿蚊冷藏保存的方法，包括以下步骤：
与实施例5的方法相同。与实施例5不同的是：将S1中的实施例1中的高品质的食蚜瘿蚊蛹替换为传统方法繁育的食蚜瘿蚊蛹，所述传统获得食蚜瘿蚊蛹的方法为：
①培育清洁苗：选用无农药残留的大麦，浸种10h后，种植大麦，培育清洁苗，7d后使用；
②繁育蚜虫：用大麦苗培育禾谷缢管蚜，繁育蚜虫3d。
③食蚜瘿蚊的繁育：选育培育的蚜虫用于饲养食蚜瘿蚊，待蚜虫饲养盘中的大麦苗上蚜量为1000头的左右时候移至食蚜瘿蚊接卵室接蚊；接蚊24h后，将大麦苗移出，放入养虫室中，繁育7d后，食蚜瘿蚊卵发育至老熟幼虫，将大麦苗倾斜到水中，老熟幼虫跳入水中，收集老熟幼虫于湿润的饲养瓶中进行化蛹。
对比例2
将S1中的实施例1中的高品质的食蚜瘿蚊蛹不作前处理，直接放入冷藏瓶中进行冷藏，冷藏温度设置为3℃，湿度设置为45％。
按照实施例5、对比例1和对比例2中保存方法进行冷藏保存，每隔30d取样1次，取出后置于23℃的培养箱内，观察蛹的羽化情况，统计羽化数量，试验设3次重复。平均羽化率对比试验结果如表1。
结果：由表1可得，与对比例1和对比例2相比，本发明的实施例5的保存方法其平均羽化率有显著的提高，而采用了传统繁育的食蚜瘿蚊蛹的保存方法羽化率较低，采用传统的冷藏保存方法羽化率最低。
表1实施例5、对比例1和对比例2的平均羽化率试验结果
| 保藏时间 | 实施例5 | 对比例1 | 对比例2 |
| 60天 | 93.1％ | 85.2％ | 75.8％ |
| 90天 | 90.5％ | 78.6％ | 64.5％ |
| 120天 | 89.6％ | 74.6％ | 40.3％ |
| 150天 | 85.5％ | 62.7％ | 15.6％ |
| 180天 | 78.8％ | 50.6％ | 5.5％ |
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种食蚜瘿蚊冷藏保存剂，其特征是，该冷藏剂是由以下重量份原料制成：
甘油100～150份，海藻糖20～30份，抗坏血酸0.05～0.1份，防腐剂0.05～0.08份，黄原胶0.08～0.12份，蛭石200～300份，水100～200份。
2.如权利要求1所述的食蚜瘿蚊冷藏保存剂，其特征是，该冷藏剂是由以下重量份原料制成：
甘油120份，海藻糖25份，抗坏血酸0.08份，防腐剂0.06份，黄原胶0.1份，蛭石240份，水180份。
3.如权利要求1所述的食蚜瘿蚊冷藏保存剂，其特征是，蛭石的粒径为20～40目。
4.如权利要求1所述的食蚜瘿蚊冷藏保存剂，其特征是，所述防腐剂为苯甲酸或其盐类或山梨酸或其盐类。
5.一种权利要求1～4中任一项所述的食蚜瘿蚊冷藏保存剂的制备方法，其特征是，该方法包括以下步骤：
1)将海藻糖、抗坏血酸、防腐剂和水混合均匀，形成混合液一；
2)将混合液一与黄原胶混合均匀，形成混合液二；
3)将混合液二与甘油混合均匀，形成混合液三；
4)蛭石灭菌后单独保存。
6.一种食蚜瘿蚊冷藏保存方法，其特征是，该方法包括食蚜瘿蚊蛹在冷藏保存过程中采用权利要求1～4中任一项所述的食蚜瘿蚊冷藏保存剂的步骤。
7.如权利要求6所述的食蚜瘿蚊冷藏保存方法，其特征是，具体方法包括以下步骤：
S1：将权利要求5所述的混合液三与待冷藏保存的食蚜瘿蚊蛹混合，混合液三的添加量以没过食蚜瘿蚊蛹为准；
S2：取出S1中的食蚜瘿蚊蛹；
S3：将取出后的食蚜瘿蚊蛹的剩余混合液三倒入蛭石中混合均匀；
S4：将S2中的食蚜瘿蚊蛹放置于S3中的蛭石中；
S5：将S4中的食蚜瘿蚊蛹进行冷藏保存。
8.如权利要求7所述的食蚜瘿蚊冷藏保存方法，其特征是，所述食蚜瘿蚊蛹是通过以下方法获得：
(1)将食蚜瘿蚊饲料倒入饲养盘中，在饲养盘上放置丝网，然后将其移入接卵室中；其中所述食蚜瘿蚊饲料是由以下重量份原料制成：
蚜虫汁液200～300份，小麦胚芽汁液50～100份，大麦苗汁液200～300份，蔗糖10～30份，食品防腐剂0.02～0.05份；
其中蚜虫汁液是通过以下方法制备得到的：
①培育清洁苗：
选用无农药残留的大麦种子，浸种8～12h后，种植大麦，培育清洁苗；
②繁育蚜虫：
用清洁苗饲养蚜虫，繁育48～72h；
③间歇式摇床培育蚜虫：
将步骤②中繁育的蚜虫采用间歇式摇床培养，培育时间为12～24h，每次摇晃时间为3～6s，暂停时间为60～120s，振幅为10～20mm；
④收集蚜虫以及分泌的物质：
收集步骤③中培育的蚜虫和其分泌的物质，将蚜虫进行打浆、过滤，获得蚜虫上清液；将分泌的物质采用蚜虫上清液进行充分溶解，获得蚜虫汁液；
(2)将食蚜瘿蚊成虫接种至接卵室中，进行交配和接卵；
(3)将着卵的饲养盘移入养虫室，至2龄幼虫时，将带有蚜虫的大麦苗移入养虫室，直到第6～7d发育至老熟幼虫，移出养虫室；
(4)将老熟幼虫倾斜至水中，老熟幼虫跳入水中，用吸管收集水中的老熟幼虫，移入化蛹瓶中获得高品质食蚜瘿蚊蛹。
9.如权利要求7所述的食蚜瘿蚊冷藏保存方法，其特征是，S4中，冷藏保存的条件为：温度为1～3℃，湿度为40～50％。
10.如权利要求8所述的食蚜瘿蚊冷藏保存方法，其特征是，步骤(1)中，所述食品防腐剂为山梨酸钾或苯甲酸；
步骤(2)中，交配和接卵时间共为24h；
步骤(3)中，直到第7d发育至老熟幼虫，移出养虫室。
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