KR20050030416A - 피조개 부유 유생의 냉동보존방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 피조개 부유 유생의 냉동보존방법에 있어서, 상기 피조개 부유유생을 동결방지제가 희석된 인공해수 안에 넣어 상기 동결방지제를 흡수하도록 하는 단계와, 상기 동결방지제를 흡수한 피조개 부유유생을 실온에서 평형시간동안 놓아두는 단계와, 상기 평형시간 이후 상기 피조개 부유유생을 동결기를 사용하여 냉각하는 단계로 이루어지는 피조개 부유 유생의 냉동보존방법을 제공하기 위한 것으로, 본 발명은 종래 보전과 취급이 곤란하던 피조개 부유유생을 냉동보존할 수 있도록 함으로써 피조개 양식분야, 특히 피조개 인공종묘생산에 있어 과학적이고 예측 가능한 생산을 가능하게 하였으며, 이로인해 수산양식업의 과학화를 앞당기고, 기타 다른 산업에 비해 낙후된 양식산업을 발전시킬 수 있는 것이다.
또 본 발명은 피조개 유생을 냉동보존함으로써 종 보존은 물론 종묘를 생산해야 하는 양식어민들이 직접 모패를 관리해야하는 번거러움을 줄일 수 있는 것이어서 양식어민들에게 경제적으로나 시간적으로 많은 이득을 제공할 수 있게 되며, 피조개 어획의 풍흉에 관계없이 유생의 보존이 가능하므로 피조개 인공종묘생산을 계획하고 생산시기를 임의로 조절할 수 있는 이점을 갖는 것이어서 양식어민 소득 증대에 큰 도움이 될 수 있는 매우 유용한 발명인 것이다.
Description
본 발명은 피조개 부유 유생의 냉동보존방법에 관한 것으로, 특히 지금까지 연구되어있지 않은 피조개의 부유유생들을 냉동보존가능하게 하므로써 피조개의 안정적이고 체계적인 인공종묘생산을 가능하게 하기 위한 피조개 부유 유생의 냉동보존방법에 관한 것이다.
우리나라의 경우 1970년대 이후부터 패류양식이 굴, 담치, 바지락 등에서 피조개, 새조개, 키조개, 전복 등 고급 품종의 양식방법이 개발되고는 있으나, 피조개의 경우는 양식어민들이 직접 모패를 관리해야하고, 상기 모패의 관리에 많은 시간을 소요되어 경제적으로 많은 손실이 발생하고 있으며, 어획의 풍흉에 따라 유생의 보존량에 큰 차이가 발생하게 되어 피조개를 인공종묘함에 있어 생산을 계획하고 시기를 조절함에 상당한 불편함을 갖는 것이다.
현재 국내에서의 배우자보존에 관한 연구는 주로 어류에 집중되어 있으며, 지금도 많은 어류를 대상으로 배우자 보존에 관한 연구가 계속되고 있으나, 의학이나 축산업에서처럼 현장에서 산업적으로 실용화된 방법들은 그다지 많지 못한 실정이다.
본 발명은 유용한 양식패류인 피조개의 부유유생을 냉동보존할 수 있도록 하므로써 피조개의 인공종묘를 생산함에 있어 과학적이고 예측 가능하도록 함을 그 목적으로 하는 것이다.
상기한 바와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위한 피조개 부유 유생의 냉동보존방법은 다음과 같다.
즉, 본 발명은 피조개 부유유생을 동결방지제(CPAs)가 희석된 인공해수 안에 넣어 상기 동결방지제를 흡수하도록 하는 단계와, 상기 동결방지제를 흡수한 피조개 부유유생을 실온에서 평형시간동안 놓아두는 단계와, 상기 평형시간 이후 상기 피조개 부유유생을 동결기를 사용하여 냉각하는 단계로 이루어진다.
이때 상기 동결방지제(CPAs)는 유생을 냉동보존함에 있어 수분이 결빙되므로 인해 세포가 파손되는 것을 방지하기 위해 첨가하는 것으로, 디메틸 설폭사이드(dimethyl sulfoxide,DMSO), 글리세롤(glycerol), 에틸렌 글리콜(ethylene glycol,EG), 프로필렌 글리콜(propylene glycol,PG), 메탄올(methanol) 중 어느 하나를 선택적으로 사용하여도 무방하다.
또한 상기 인공해수 안에 동결방지제를 희석시킴에 있어 동결방지제의 함유량이 1.5 M(몰)이하의 경우에는 피조개 부유유생이 동결시 결빙에 의해 죽게되며, 2 M 이상일 경우에는 동결방지제의 흡수양이 너무 많아져 세포가 파괴되므로, 상기 동결방지제의 함유량은 인공해수 안에 1.5 ~ 2 M의 농도로 혼합되도록 함이 가장 바람직하다.
또한 상기 동결방지제를 흡수한 피조개 부유유생의 평형시간은 10분이하일경우에는 동결방지제가 충분히 흡수되지 않은 상태이므로 피조개 부유유생을 동결시 킬 경우 결빙되어 죽게되며, 20분 이상일 경우 동결방지제의 흡수량이 너무 많아져 과포화상태가 되어 세포가 파괴되므로, 상기 평형시간은 10~20분이 가장 바람직하다.
이를 실시예에 의해 보다 상세히 설명하면 다음과 같다.
실시예
실험에 사용한 피조개 부생유생은 D형 유생을 사용하였으며, 각각 평균 각장 90±10 ㎛, 150±10 ㎛의 유생을 이용하였다.
먼저 인공해수 안에 동결방지제인 디메틸 설폭사이드(dimethyl sulfoxide,DMSO), 글리세롤(glycerol), 에틸렌 글리콜(ethylene glycol,EG), 프로필렌 글리콜(propylene glycol,PG), 메탄올(methanol)을 1.5~2M의 농도로 혼합한 각각의 수조에 준비된 부생유생을 투입하였다.
다음 상기 동결방지제가 흡입된 유생을 0.5 ㎖ 용량의 스트로에 50~100개체의 밀도로 담고, 실온 23℃에서 10~20분 평형시간을 두었다. 평형시간 이후 유생이 담긴 스토로를 프로그램 동결기 사용하여 -1℃/1min의 속도로 0℃에서 -12℃까지 냉각하였고, -2℃/min 속도로 -35℃까지 냉각하였으며 평형시간 5분후 액체질소통에 넣었다. 다음 액체질소통에서 1일 보관후, 스트로를 30℃ 물에 넣어 해동하였다.
실험구는 각각 3개의 스트로를 사용하여 반복구를 두었으며, 생존율은 현미경상에서 활발한 섬모운동 및 회전운동을 하는 유생을 카운팅하여 계산하였다.
실험결과 D형 유생의 생존율은 평형시간 20분을 한 DMSO 2 M 농도에서 77.6±3.2%로 가장 높았고, Glycerol 1.5 M에서 53.8±2.3%를 보였다. 각정기 유생의 생존율도 평형시간 20분을 한 DMSO 2 M 농도에서 59.3±4.7%로 가장 높았고, Glycerol 1.5 M에서 37.5±3.4%를 보였다.
그러나 평형시간 10분을 한 EG, PG, Methanol을 사용한 실험구는 모두 폐사하였다.
실시예 2
실험에 사용한 피조개 부생유생은 각정기유생을 사용하였으며, 각각 평균 각장 90±10 ㎛, 150±10 ㎛의 유생을 이용하였다.
먼저 인공해수 안에 동결방지제인 디메틸 설폭사이드(dimethyl sulfoxide,DMSO), 글리세롤(glycerol), 에틸렌 글리콜(ethylene glycol,EG), 프로필렌 글리콜(propylene glycol,PG), 메탄올(methanol)을 1.5~2M의 농도로 혼합한 각각의 수조에 준비된 부생유생을 투입하였다.
다음 상기 동결방지제가 흡입된 유생을 0.5 ㎖ 용량의 스트로에 50~100개체의 밀도로 담고, 실온 23℃에서 10~20분 평형시간을 두었다. 평형시간 이후 유생이 담긴 스토로를 프로그램 동결기 사용하여 -1℃/1min의 속도로 0℃에서 -12℃까지 냉각하였고, -2℃/min 속도로 -35℃까지 냉각하였으며 평형시간 5분후 액체질소통에 넣었다. 다음 액체질소통에서 1일 보관후, 스트로를 30℃ 물에 넣어 해동하였다.
실험구는 각각 3개의 스트로를 사용하여 반복구를 두었으며, 생존율은 현미경상에서 활발한 섬모운동 및 회전운동을 하는 유생을 카운팅하여 계산하였다.
실험결과 D형 유생의 생존율은 평형시간 20분을 한 DMSO 2 M 농도에서 77.6±3.2%로 가장 높았고, Glycerol 1.5 M에서 53.8±2.3%를 보였다. 각정기 유생의 생존율도 평형시간 20분을 한 DMSO 2 M 농도에서 59.3±4.7%로 가장 높았고, Glycerol 1.5 M에서 37.5±3.4%를 보였다.
그러나 평형시간 10분을 한 EG, PG, Methanol을 사용한 실험구는 모두 폐사하였다.
이처럼 본 발명은 피조개 부유유생, 특히 D형유생과 각정기 유생을 냉동보존함에 있어 폐사율을 가장 낮도록 조건들을 설정하고, 또 냉동 보존된 부유유생들을 필요할 때 해동시켜 종묘를 생산할 수 있도록 한 것이다.
따라서 본 발명은 종래 보전과 취급이 곤란하던 피조개 부유유생을 냉동보존할 수 있도록 함으로써 피조개 양식분야, 특히 피조개 인공종묘생산에 있어 과학적이고 예측 가능한 생산을 가능하게 하였으며, 이로인해 수산양식업의 과학화를 앞당기고, 기타 다른 산업에 비해 낙후된 양식산업을 발전시킬 수 있는 것이다.
또 본 발명은 피조개 유생을 냉동보존함으로써 종 보존은 물론 종묘를 생산해야 하는 양식어민들이 직접 모패를 관리해야하는 번거러움을 줄일 수 있는 것이어서 양식어민들에게 경제적으로나 시간적으로 많은 이득을 제공할 수 있게 되며, 피조개 어획의 풍흉에 관계없이 유생의 보존이 가능하므로 피조개 인공종묘생산을 계획하고 생산시기를 임의로 조절할 수 있는 이점을 갖는 것이어서 양식어민 소득 증대에 큰 도움이 될 수 있는 매우 유용한 발명인 것이다.
Claims (5)
- 피조개 부유 유생의 냉동보존방법에 있어서,상기 피조개 부유유생을 동결방지제가 희석된 인공해수 안에 넣어 상기 동결방지제를 흡수하도록 하는 단계와,상기 동결방지제를 흡수한 피조개 부유유생을 실온에서 평형시간동안 놓아두는 단계와,상기 평형시간 이후 상기 피조개 부유유생을 동결기를 사용하여 냉각하는 단계로 이루어짐을 특징으로 하는 피조개 부유 유생의 냉동보존방법.
- 제 1항에 있어서, 상기 동결방지제는 디메틸 설폭사이드, 글리세롤, 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜, 메탄올 중 어느 하나를 선택적으로 사용하는 것을 특징으로 하는 피조개 부유 유생의 냉동보존방법.
- 제 1항에 있어서, 상기 인공해수 안에 동결방지제를 희석시킴에 있어 동결방지제의 함유량이 1.5 ~ 2 M의 농도로 혼합되도록 함을 특징으로 하는 피조개 부유 유생의 냉동보존방법.
- 제 1항에 있어서, 상기 피조개 부유유생의 평형시간은 10~20분임을 특징으로 하는 피조개 부유 유생의 냉동보존방법.
- 제 1항에 있어서, 상기 피조개 부유유생은 D형유생과 각정기 유생으로 이루어짐을 특징으로 하는 피조개 부유 유생의 냉동보존방법.
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