KR100667859B1 - 나팔고둥 유생의 냉동보존방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 나팔고둥 유생의 냉동보존방법에 있어서, 상기 나팔고둥 유생을 동결방지제가 희석된 인공해수 안에 넣어 상기 동결방지제를 흡수하도록 하는 단계와, 상기 동결방지제를 흡수한 나팔고둥 유생을 실온에서 평형시간동안 놓아두는 단계와, 상기 평형시간 이후 상기 나팔고둥 유생을 동결기를 사용하여 냉각하는 단계로 이루어지는 나팔고둥 유생의 냉동보존방법을 제공하기 위한 것으로, 본 발명은 종래 보전과 취급이 곤란하던 나팔고둥 유생을 냉동보존할 수 있도록 함으로써 나팔고둥의 양식, 특히 인공종묘생산에 있어 과학적이고 예측 가능한 생산을 가능하게 하였으며, 이로인해 수산양식업의 과학화를 앞당기고, 기타 다른 산업에 비해 낙후된 양식산업을 발전시킬 수 있는 것이다.
또 본 발명은 나팔고둥 유생을 냉동보존함으로써 종 보존은 물론 종묘를 생산해야 하는 양식어민들이 직접 성패를 관리해야하는 번거러움을 줄일 수 있는 것이어서 양식어민들에게 경제적으로나 시간적으로 많은 이득을 제공할 수 있게 되며, 나팔고둥 어획의 풍흉에 관계없이 유생의 보존이 가능하므로 나팔고둥 인공종묘생산을 계획하고 생산시기를 임의로 조절할 수 있는 이점을 갖는 것이어서 양식어민 소득 증대에 큰 도움이 될 수 있는 매우 유용한 발명인 것이다.
나팔고둥, 유생, 냉동, 보존
Description
본 발명은 나팔고둥 유생의 냉동보존방법에 관한 것으로, 특히 지금까지 연구되어있지 않은 나팔고둥 유생들을 냉동보존 가능하게 함으로써 나팔고둥의 안정적이고 체계적인 인공종묘생산이 가능하도록 한 나팔고둥 유생의 냉동보존방법에 관한 것이다.
우리나라의 경우 1970년대 이후부터 피조개, 새조개, 키조개, 전복 등 고급품종의 양식방법이 개발되고는 있으나, 나팔고둥의 경우는 양식어민들이 직접 성패를 관리해야하고, 상기 성패의 관리에 많은 시간이 소요되어 경제적으로 많은 손실이 발생하고 있으며, 어획의 풍흉에 따라 유생의 보존량에 큰 차이가 발생하게 되어 나팔고둥을 인공종묘 생산함에 있어 생산을 계획하고 시기를 조절함에 상당한 불편함을 갖는 것이다.
현재 국내에서의 배우자 보존에 관한 연구는 주로 어류에 집중되어 있으며, 지금도 많은 어류를 대상으로 배우자 보존에 관한 연구가 계속되고 있으나, 의학이 나 축산업에서처럼 현장에서 산업적으로 실용화된 방법들은 그다지 많지 못한 실정이다.
본 발명은 유용한 양식패류인 나팔고둥의 유생을 냉동보존할 수 있도록 하므로써 나팔고둥의 인공종묘를 생산함에 있어 과학적이고 예측 가능하도록 함을 그 목적으로 하는 것이다.
상기한 바와 같이 본 발명의 목적을 달성하기 위한 나팔고둥 유생의 냉동보존방법은 다음과 같다.
먼저 나팔고둥 유생을 동결방지제(CPAs)가 희석된 인공해수 안에 넣어 상기 동결방지제를 체내에 흡수되도록 하는 단계와, 상기 동결방지제를 흡수한 나팔고둥 유생 실온에서 평형시간동안 놓아두는 단계와, 상기 평형시간 이후 상기 나팔고둥 유생을 동결기를 사용하여 냉각하는 단계로 이루어진다.
이때 상기 동결방지제(CPAs)는 유생을 냉동보존함에 있어 수분이 결빙됨으로 인해 세포가 파손되는 것을 방지하기 위해 첨가하는 것으로, 디메틸 설폭사이드(dimethyl sulfoxide, DMSO), 글리세롤(glycerol), 에틸렌 글리콜(ethylene glycol, EG), 프로판에디올(propanedial)중 어느 하나를 선택적으로 사용할 수도 있다.
또한 상기 인공해수 안에 동결방지제를 희석시킴에 있어 동결방지제의 함유량이 1.5 M(몰)이하의 경우에는 나팔고둥 유생이 동결시 결빙에 의해 죽게되며, 2 M 이상일 경우에는 동결방지제의 흡수량이 너무 많아져 세포가 파괴되므로, 상기 동결방지제의 함유량은 인공해수 안에 1.5 ~ 2 M의 농도로 혼합되도록 함이 가장 바람직하다.
또한 상기 동결방지제를 흡수한 나팔고둥 유생의 평형시간은 10분이하일 경우에는 동결방지제가 충분히 흡수되지 않은 상태이므로 나팔고둥 유생을 동결시킬 경우 결빙되어 죽게되며, 20분 이상일 경우 동결방지제의 흡수량이 너무많아져 과포화상태가 되어 세포가 파괴되므로, 상기 평형시간은 10~20분이 가장 바람직하다.
이를 실시예에 의해 보다 상세히 설명하면 다음과 같다.
실시예
실험에 사용한 나팔고둥 유생은 각각 평균 450±10 ㎕의 유생을 이용하였다.
먼저 인공해수 안에 동결방지제인 디메틸 설폭사이드(dimethyl sulfoxide, DMSO), 글리세롤(glycerol), 에틸렌 글리콜(ethylene glycol, EG), 프로판에디올(propanedial)중 어느 하나를 선택하거나 서로 혼합하여 1.5~2 M의 농도가 되도록 하고 각각의 수조에 준비된 나팔고둥 유생을 투입하였다.
다음 상기 동결방지제가 흡입된 유생을 0.5 ㎖ 용량의 스트로에 100~300개체의 밀도로 담고, 실온 20℃에서 10~20분 평형시간을 두었다. 평형시간 이후 유생 이 담긴 스트로를 피로그램 동결기를 사용하여 -1℃/1min의 속도로 0℃에서 -12℃까지 냉각하여 10분의 평형시간후 다시 -2℃/min 속도로 -35℃까지 냉각하였으며 평형시간 10분후 액체질소통에 넣었다. 다음 액체질소통에서 1일 보관후, 스트로를 30℃물에 넣어 해동하였다.
실험구는 각각 3개의 스트로를 사용하여 반복구를 두었으며, 생존율은 현미경상에서 활발한 섬모운동 및 회전운동을 하는 유생을 카운팅하여 계산하였다.
실험결과 나팔고둥 유생의 생존율은 평형시간 10분을 준 글리세롤(glycerol), 에틸렌 글리콜(ethylene glycol, EG), 프로판에디올(propanedial) 세 실험구에서는 1.0 M, 1.5 M , 2.0 M 모두 10％전후의 낮은 생존율을 보였고, 디메틸 설폭사이드(dimethyl sulfoxide, DMSO)에서는 1.0 M에서 22.4±3.2％, 1.5 M에서 44.1±3.6％ 그리고, 2.0 M에서 40.3±3.2로 1.5 M에서 가장 높은 생존율을 보였다.
그리고 평형시간 20분을 준 글리세롤(glycerol), 에틸렌 글리콜(ethylene glycol, EG), 프로판에디올(propanedial) 실험구는 생존율 10~20%정도로 평형시간 10분을 준 시험구보다 조금더 높은 수치를 나타냈다. 디메틸 설폭사이드(dimethyl sulfoxide, DMSO) 1.5 M 구간에서 가장 높은 80.4±3.3을 나타내었고 1.0 M, 2.0 M에서는 각각 50.4±4.5, 58.0±2.2로 나타나 평형시간 20분을 준 디메틸 설폭사이드(dimethyl sulfoxide, DMSO) 1.5M구간에서 가장높은 생존율을 보이는 것으로 나타났다.
이처럼 본 발명은 나팔고둥 유생을 냉동보존함에 있어 폐사율을 가장 낮도 록 조건들을 설정하고, 또 냉동 보존된 부유유생들을 필요할 때 해동시켜 종묘를 생산할 수 있도록 한 것이다.
따라서 본 발명은 종래 보전과 취급이 곤란하던 나팔고둥 유생을 냉동 보존할 수 있도록 함으로써 나팔고둥 양식분야, 특히 인공종묘생산에 있어 과학적이고 예측 가능한 생산을 가능하게 하였으며, 이로 인해 수산양식업의 과학화를 앞당기고, 기타 다른 산업에 비해 낙후된 양식산업을 발전시킬 수 있는 것이다.
또 본 발명은 나팔고둥 유생을 냉동보존함으로써 종 보존은 물론 종묘를 생산해야 하는 양식어민들이 직접 성패를 관리해야하는 번거러움을 줄일 수 있는 것이어서 양식어민들에게 경제적으로나 시간적으로 많은 이득을 제공할 수 있게 되며, 나팔고둥 어획의 풍흉에 관계없이 유생의 보존이 가능하므로 나팔고둥의 인공종묘생산을 계획하고 생산시기를 임의로 조절할 수 있는 이점을 갖는 것이어서 양식어민 소득 증대에 큰 도움이 될 수 있는 매우 유용한 발명인 것이다.
Claims (4)
- 디메틸 설폭사이드가 희석된 인공해수 안에 나팔고둥 유생을 넣어 상기 동결방지제가 흡수되도록 하고, 상기 동결방지제가 체내에 흡수된 나팔고둥 유생을 스트로에 0.5 ㎖당 50 ~ 100개체의 밀도로 담아 실온 23℃에서 10~20분 평형시간동안 놓아둔 다음, 상기 유생이 담긴 스트로를 프로그램 동결기 사용하여 -1℃/1min의 속도로 0℃에서 -12℃까지 1차 냉각하고, 상기 1차 냉각된 나팔고둥 유생을 2차 냉각하며, 상기 2차냉각 후 스트로를 액체질소통에 넣어 1일동안 보관하여 상기 스트로를 30℃ 물에 넣어 해동하는 단계로 이루어지는 나팔고둥 유생을 냉동보존하는 방법에 있어서,상기 나팔고둥 유생의 2차 냉각은 -2℃/min 속도로 -35℃까지 냉각되도록 함을 특징으로 하는 나팔고둥 유생의 냉동보존방법.
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