CN112753658B

CN112753658B - 利用樟蚕卵室内繁殖松毛虫赤眼蜂的方法

Info

Publication number: CN112753658B
Application number: CN202110058917.7A
Authority: CN
Inventors: 尹晓辉; 邓建宇; 付开赟; 张敏; 郭文超; 丁新华; 吐尔逊·阿合买提
Original assignee: Institute Of Plant Protection Of Xinjiang Academy Of Agricultural Sciences; Zhejiang A&F University ZAFU
Current assignee: Institute Of Plant Protection Of Xinjiang Academy Of Agricultural Sciences; Zhejiang A&F University ZAFU
Priority date: 2021-01-17
Filing date: 2021-01-17
Publication date: 2022-08-09
Anticipated expiration: 2041-01-17
Also published as: CN112753658A

Abstract

本发明公开了一种利用樟蚕卵室内繁殖松毛虫赤眼蜂的方法，包括杀死樟蚕卵中胚胎，从而获得处理后樟蚕卵，将处理后樟蚕卵进行松毛虫赤眼蜂的繁殖：通过容器开口，将处理后樟蚕卵放入容器中，再向容器中接入松毛虫赤眼蜂，松毛虫赤眼蜂为羽化经过交尾的松毛虫赤眼蜂雌蜂；用透气性材料对容器开口处作封口处理，然后置于人工气候箱中培养；当培养时间为24±2h后，将松毛虫赤眼蜂从容器中移出；樟蚕卵置于气候箱中于上述培养条件继续培育，直至松毛虫赤眼蜂的卵羽化。

Description

利用樟蚕卵室内繁殖松毛虫赤眼蜂的方法

技术领域

本发明涉及昆虫卵寄生蜂——松毛虫赤眼蜂的人工繁殖方法，特别是一种利用樟蚕卵室内繁殖松毛虫赤眼蜂的方法，属于农业害虫的生物防治技术领域。

背景技术

樟蚕(Eriogyna(Saturnia)pyretoum Westwood)，属鳞翅目大蚕蛾科昆虫，是一种杂食性害虫，分布于浙江、广东、广西、福建等地，以幼虫取食樟树叶。严重时整株树的叶子被吃光，甚至造成树木死亡。该虫一年一代，以蛹在枝干或树皮缝隙、林下灌木等处的茧内越冬，次年月开始羽化，成虫羽化后不久即可交尾产卵，成虫有趋光性。樟蚕的防治多以人工灯光诱杀和化学药剂防治为主，生物防治较少，主要是在雨季初期(4月)，温度24℃以上和相对湿度95％以上时用白僵菌粉炮防治，效果良好。

赤眼蜂(Trichogramma spp.)的发现距今已有100多年，可寄生多种鳞翅目昆虫的卵，是全世界害虫生物防治中应用最广的一类卵寄生性天敌。自1926年美国的Flanders利用麦蛾Sitotroga cerealella(Olivier)卵成功地大量繁殖赤眼蜂后，国际上开始用麦蛾卵作为工厂化大量生产赤眼蜂的寄主。另外，中国科学院武汉病毒研究所成功研制出的“生物导弹”产品，其杀虫原理是以昆虫病毒流行学为基础，以卵寄生蜂(赤眼蜂)为媒介传播病毒，使初孵幼虫患病，从而诱导种群患病达到控制害虫的目的。

随着可持续农业的发展及无公害绿色食品业的要求的不断提高，这种以天敌为主的生物防治技术越来越被广大农民所接受。

申请号为201610145652.3的发明专利《柞蚕卵为寄主混合繁育松毛虫赤眼蜂和玉米螟赤眼蜂方法》包括以下步骤：在23～29℃、60～90％RH以及光照周期为12-16L:12-8D条件下，将寄生卵繁育的玉米螟赤眼蜂和松毛虫赤眼蜂按4:1比例同时混合接入柞蚕卵24小时；繁蜂过程中，将接入赤眼蜂的总数量和柞蚕卵的数量比例控制为5:1。由于柞蚕产业主要分布于我国辽宁、山东、河南、吉林、黑龙江、内蒙古、山西等省区，其中辽宁省的柞蚕产量占到全国份额的80％和世界份额的70％。上世纪80年代，浙江省曾经建立相应的生产基地，但受地域和季节限制，南方种植柞树和饲养榨蚕均未获得规模生产。如果采用北方柞蚕卵繁殖，则需要在浙江省建立冷库，将柞蚕从北方运输到南方保存，来维系其大量繁殖，费工、费时和财力投入大；因此很难实现南方当地赤眼蜂繁殖的规模化生产。且上述饲养赤眼蜂方法尚存在如下的不足之处，如寄生率和羽化率偏低、寄主榨蚕卵在夏秋季难获得、寄生种类大多局限于东北地区的赤眼蜂类型等。

赤眼蜂的大量生产过程主要由2个方面组成，即中间寄主的饲养和寄生蜂的繁殖，大多数生产工厂集中主要的时间和精力用来生产中间寄主。选择适于规模繁殖赤眼蜂的中间寄主是大面积应用赤眼蜂的前提，国外普遍利用地中海粉斑螟卵和麦蛾卵为中间寄主进行赤眼蜂的规模化生产，且已实现机械化生产。

目前无樟蚕卵进行大量繁殖松毛虫赤眼蜂的方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种利用樟蚕卵大量繁殖松毛虫赤眼蜂的方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种利用樟蚕卵室内繁殖松毛虫赤眼蜂的方法，包括杀死樟蚕卵中胚胎，从而获得处理后樟蚕卵，将处理后樟蚕卵进行松毛虫赤眼蜂的繁殖；所述繁殖包括如下步骤：

①、通过容器开口，将处理后樟蚕卵放入容器中，再向容器中接入松毛虫赤眼蜂，所述松毛虫赤眼蜂为羽化经过交尾的松毛虫赤眼蜂雌蜂(即，全部是羽化经过交尾的松毛虫赤眼蜂雌蜂或者含有羽化经过交尾的松毛虫赤眼蜂雌蜂的成年峰)；

松毛虫赤眼蜂将寄生在处理后樟蚕卵上，容器中设置营养源(补充型营养源)；营养源用于向松毛虫赤眼蜂提供营养；

蜂卵的数量比为2～10：1；

②、用透气性材料对容器开口处作封口处理，然后置于人工气候箱中培养；培养条件为：温度25±1℃，相对湿度RH 75±5％，完全黑暗；

当培养时间为24±2h后，将松毛虫赤眼蜂从容器中移出；樟蚕卵置于气候箱中于上述培养条件继续培育，直至松毛虫赤眼蜂的卵羽化(培育时间约为10±0.5d)。

备注说明：人工气候箱中培养5d后检查即可发现，被松毛虫赤眼蜂寄生的樟蚕卵变成黑色，未被寄生的卵仍为银灰色；继续培育10±0.5d后，新一代松毛虫赤眼蜂成蜂开始陆续羽化(羽化率可高达97.7％)，可进行继代饲养。

作为本发明的利用樟蚕卵室内繁殖松毛虫赤眼蜂的方法的改进：处理后樟蚕卵直接进行松毛虫赤眼蜂繁殖；或者先进行保存，然后再进行后续的繁殖；

所述保存为：将处理后樟蚕卵置于设有透气孔的容器内，且控制容器内的相对湿度75±5％，将上述内装樟蚕卵的容器置于4±1℃保存。

作为本发明的利用樟蚕卵室内繁殖松毛虫赤眼蜂的方法的进一步改进，所述杀死樟蚕卵中胚胎、从而获得处理后樟蚕卵的方法为：

采用自然产卵或人工挤卵的方式，将樟蚕卵置于硫酸纸上，将带有樟蚕卵的硫酸纸经去杂和消毒处理(轻微消毒处理)后，于光强21.2Lux的紫外线下照射2h，以杀死樟蚕卵中的胚胎，得处理后樟蚕卵。

说明：从产卵/挤卵至接受紫外线照射的时间，不能超过24小时(挤卵后的晾干，一般控制在3～24小时)。紫外线照射的目的是杀死樟蚕卵中胚胎。

作为本发明的利用樟蚕卵室内繁殖松毛虫赤眼蜂的方法的进一步改进：

所述去杂为：吹去(轻轻吹去)硫酸纸上人工挤卵时樟蚕上掉落的鳞片，所述消毒处理(轻微消毒处理)为：采用沾有75％乙醇的棉球采用擦拭(轻轻擦拭)的方式对硫酸纸连同卵进行消毒。

所述透气性材料为脱脂棉塞。

补充营养源为质量浓度为4～6％的蜂蜜水；蜂蜜水每天的供给量为：每100头松毛虫赤眼蜂成蜂对应0.2～0.5ml的蜂蜜水。

本发明可以化害为利，通过常规的灯诱、人工摘除以及人工饲养等方式获取樟蚕卵，以此作为室内繁殖赤眼蜂提供南方优良的寄主。

本发明具有如下技术优势：

1、本发明以农林害虫樟蚕卵为材料，实现了变害为利，羽化率高；适合繁殖赤眼蜂。

2、本发明为南方松毛虫赤眼蜂、玉米螟赤眼蜂和螟黄赤眼蜂等的人工繁殖提供提供有利寄主，为大规模生产奠定基础。

综上所述，本发明提供了一种利用樟蚕卵室内繁殖松毛虫赤眼蜂Trichogrammadendrolimi的方法。本发明以樟蚕Eriogyna(Saturnia)pyretoum Westwood卵为寄主，可连续多代繁殖松毛虫赤眼蜂。利用杀死卵中胚胎后的樟蚕卵为寄主，在松毛虫赤眼蜂的人工繁殖中，不仅不受时空限制，可以继代不断繁殖，而且所繁殖个体质量高，寄生率稳定，羽化率较高，显示出多种优点，为农林害虫生物防治大量繁蜂提供了一条新途径。

附图说明

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。

图1是赤眼蜂对柞蚕卵(保存10d)的寄生率统计表(保存10d，完全黑暗的人工气候箱)；

图2是赤眼蜂对樟蚕卵(保存10d)的寄生率的统计表(保存10d，完全黑暗的人工气候箱)；

图3是赤眼蜂对柞蚕卵(新鲜)的寄生率统计表(新鲜卵0d，完全黑暗的人工气候箱)；

图4是赤眼蜂对樟蚕卵(新鲜)的寄生率的统计表(新鲜卵0d，完全黑暗的人工气候箱)；

注：同一列数值上面不同的小写字母表示P＝0.05水平差异显著。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例1、一种利用樟蚕卵室内繁殖松毛虫赤眼蜂的方法，依次进行以下步骤：

1)、樟蚕的收集与处理：

采取于头一年11月人工收集的樟蚕和翌年2月-3月灯诱收集的樟蚕蛾，采用人工挤卵的方式，使樟蚕卵置于硫酸纸上，用于繁殖赤眼蜂。

2)、樟蚕卵的收集与处理(杀死樟蚕卵中胚胎的处理)

将带有樟蚕卵的硫酸纸先进行去杂和轻微消毒处理：轻轻吹去硫酸纸上的鳞片，用沾有75％(体积％)乙醇的棉球轻轻擦拭纸面，从而实现轻微消毒处理；然后放于光强21.2Lux的紫外线下照射2h，以杀死樟蚕卵中的胚胎；得处理后樟蚕卵。

说明：从挤卵至接受紫外线照射的时间，不能超过24小时(优选3～24小时)。

3)、樟蚕卵的保存

将带有处理后樟蚕卵的硫酸纸用纱布包好放于盒盖钻有小孔的圆形塑料盒中，盒中放置湿润棉球保湿(即，保证盒内的湿度为75-80％，因此，当棉球干燥后，需要及时进行更换)，于4℃冰箱中保存，保存时间至少可为10天。

4)、松毛虫赤眼蜂的繁殖，包括以下步骤：

①、将保存的樟蚕卵从冰箱中取出放入1cm×5.5cm试管中，然后引入羽化经过交尾的雌蜂，使蜂卵比为2：1、9:4、3:1、10:3、4：1等。放入沾有5％(质量％)蜂蜜水的脱脂棉棉线粘于试管内管壁，使得棉线的底部距离试管口约2cm处，作为松毛虫赤眼蜂成虫的补充营养源。

每天更换沾有5％蜂蜜水的脱脂棉棉线，从而确保蜂蜜水每天的供给量为：每100头松毛虫赤眼蜂成蜂对应0.2～0.5ml的蜂蜜水。

②、用脱脂棉塞对试管开口处作封口处理，然后置于温度25℃，湿度RH 75±5％，完全黑暗的人工气候箱中培养；当培养时间为24h后，将松毛虫赤眼蜂雌蜂从容器中移出；樟蚕卵在气候箱中于上述培养条件继续培育10d；此时松毛虫赤眼蜂卵羽化，即，新一代松毛虫赤眼蜂成峰陆续羽化，羽化率可高达97.7％，可进行继代饲养。

羽化率的计算公式为：羽化率＝羽化蜂数量/(羽化蜂数量+未羽化蜂数量)*100％。

说明：当培养时间为24h后，将松毛虫赤眼蜂雌蜂从容器中移出时，可取样观察樟蚕卵的寄生情况。人工气候箱中培养5d后(从松毛虫赤眼蜂雌蜂从容器中移出时开始计时)就可发现：被松毛虫赤眼蜂寄生的樟蚕卵变成黑色，未被寄生的卵仍为银灰色。

实验1：

采用柞蚕卵作为寄主，用大蜂量快速接蜂法将卵卡(带有处理后柞蚕卵的硫酸纸)放入盛有大量松毛虫赤眼蜂雌蜂的大试管中，蜂与卵的比例(数量比)在10：1以上，1h后将卵卡取出，清除上面剩余的蜂，然后放在20℃培养箱中培养，温度为25℃，湿度为RH 75±5％。开始时的2h内，每20min从恒温箱中取卵1次，其中一部分放入固定液中固定，固定24h后取出放入80％酒精中保存；另一部分立刻解剖，进行活体观察。

2h后，每小时各固定和活体观察1次；

在24～72h之间，具体为：24～50h，每2h固定和观察1次，50～60h，每0.5h时固定和活体观察1次；60～72h,每2h固定和观察1次；

在72h以后直到成虫，每4～6h固定和活体观察1次。

为方便起见，在实验过程中同时采用4种在不同时间内接蜂的寄生卵，这样不仅可以反复观察某一发育时期的胚体，而且还可以使实验工作都在白天进行，不至于因夜间休息而影响实验工作。实验中染色用醋酸洋红，制片采用石蜡切片法。实验结果如表1显示：

表1、柞蚕蚕卵中的赤眼蜂个体发育阶段

采用樟蚕卵作为寄主，用大蜂量接蜂法将卵卡(带有处理后樟蚕卵的硫酸纸)放入盛有大量松毛虫赤眼蜂雌蜂的大试管中，蜂卵比例也为10:1，其它条件和方法与上述相同，实验结果如表2所示：

表2、樟蚕卵中的赤眼蜂个体发育阶段

注：赤眼蜂从卵开始，直到成虫羽化，均在寄生卵内营寄生生活。

根据表1和表2，可得知：2种蚕卵中的赤眼蜂个体发育阶段基本一致。

实验二、室内条件下赤眼蜂对不同寄主的寄生能力比较：

将预保存10d后的樟蚕卵和柞蚕卵从冰箱中取出放入1cm×5.5cm试管中，每个试管接入的松毛虫赤眼蜂雌蜂约10头，根据不同的蜂卵比放入卵(如图1、图2所述)，将长约2cm、蘸有5％蜂蜜水的脱脂棉棉线粘于试管内管壁距离管口约2cm处，作为松毛虫赤眼蜂成虫的补充营养源。用脱脂棉塞封口，置温度25℃，湿度RH 75％±5％，完全黑暗的人工气候箱中培养。24h后，将松毛虫赤眼蜂雌蜂移出，樟蚕卵和柞蚕卵于气候箱中继续培育，等待观察寄生情况。

实验各设3～4个重复，依次分别解剖樟蚕卵和柞蚕卵观察赤眼蜂的寄生情况和统计每个重复产卵量(取平均值)。

说明：图1体现的是寄主为柞蚕卵时的优选蜂卵比的寄生率，图2体现的是寄主为樟蚕卵时的优选蜂卵比的寄生率。

寄生率的计算公式为：寄生率＝具羽化孔的寄生卵数量/总的供寄生的卵数量。

寄主为樟蚕卵、在最佳寄生比例(2:1)时，羽化率为97.7％。

因此可得知：本发明可以化害为利，通过利用南方优良的寄主樟蚕作为室内繁殖赤眼蜂，赤眼蜂的寄生率明显高于用柞蚕作为寄主时，且本发明的羽化率也较佳。

实验三、将实验二中预保存10d后的樟蚕卵和柞蚕卵改成直接使用处理后樟蚕卵和柞蚕卵(即，保存时间为0天，未保存)，蜂卵比改成如图3、图4所述；其余等同于实验二。

所得结果如图3、图4：

采用本发明的方法，在樟蚕卵：松毛虫赤眼蜂＝2:1这个优选方案下，直接使用处理后樟蚕卵与使用预保存10d后的樟蚕卵，寄生率基本一致。

而，采用柞蚕卵作为寄主时，在柞蚕卵：松毛虫赤眼蜂＝1:1这个优选方案下，直接使用处理后樟蚕卵的寄生率远远大于使用预保存10d后的柞蚕卵。

因此，本发明效果更佳。

对比例1、将实验二(实施例1)中的“完全黑暗的人工气候箱”改成“光照周期为14L:10D”，其余等同于实验二；

当樟蚕卵作为寄主时，樟蚕卵：松毛虫赤眼蜂＝2:1时的寄生率约为95％；

当柞蚕卵作为寄主时，柞蚕卵：松毛虫赤眼蜂＝1:1时的寄生率约为70％。

最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。

Claims

1.利用樟蚕卵室内繁殖松毛虫赤眼蜂的方法，包括杀死樟蚕卵中胚胎，从而获得处理后樟蚕卵，其特征是：将处理后樟蚕卵进行松毛虫赤眼蜂的繁殖；所述繁殖包括如下步骤：

①、通过容器开口，将处理后樟蚕卵放入容器中，再向容器中接入松毛虫赤眼蜂，所述松毛虫赤眼蜂为羽化经过交尾的松毛虫赤眼蜂雌蜂；

松毛虫赤眼蜂将寄生在处理后樟蚕卵上，容器中设置营养源；营养源用于向松毛虫赤眼蜂提供营养；

蜂卵的数量比为2~10：1；

②、用透气性材料对容器开口处作封口处理，然后置于人工气候箱中培养；培养条件为：温度25±1℃，相对湿度RH 75±5%，完全黑暗；

当培养时间为24±2h后，将松毛虫赤眼蜂从容器中移出；樟蚕卵置于气候箱中于上述培养条件继续培育，直至松毛虫赤眼蜂的卵羽化。

2.根据权利要求1所述的利用樟蚕卵室内繁殖松毛虫赤眼蜂的方法，其特征是：处理后樟蚕卵直接进行松毛虫赤眼蜂繁殖；或者先进行保存，然后再进行后续的繁殖；

所述保存为：将处理后樟蚕卵置于设有透气孔的容器内，且控制容器内的相对湿度75± 5%，将上述内装樟蚕卵的容器置于4±1℃保存。

3.根据权利要求1或2所述的利用樟蚕卵室内繁殖松毛虫赤眼蜂的方法，其特征是，所述杀死樟蚕卵中胚胎、从而获得处理后樟蚕卵的方法为：

采用自然产卵或人工挤卵的方式，将樟蚕卵置于硫酸纸上，将带有樟蚕卵的硫酸纸经去杂和消毒处理后，于光强21.2Lux的紫外线下照射2h，以杀死樟蚕卵中的胚胎，得处理后樟蚕卵。

4.根据权利要求3所述的利用樟蚕卵室内繁殖松毛虫赤眼蜂的方法，其特征是：

所述去杂为：吹去硫酸纸上人工挤卵时樟蚕上掉落的鳞片，所述消毒处理为：采用沾有75%乙醇的棉球用擦拭的方式对硫酸纸连同卵进行消毒。

5.根据权利要求4所述的利用樟蚕卵室内繁殖松毛虫赤眼蜂的方法，其特征是：

所述透气性材料为脱脂棉塞。

6.根据权利要求4所述的利用樟蚕卵室内繁殖松毛虫赤眼蜂的方法，其特征是：

营养源为补充营养源，所述补充营养源为质量浓度为4~6%的蜂蜜水；蜂蜜水每天的供给量为：每100头松毛虫赤眼蜂成蜂对应0.2~0.5 ml的蜂蜜水。