CN114304073B - 一种三角新小卷蛾的人工饲养及虫卵收集方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种三角新小卷蛾的人工饲养及虫卵收集方法。该方法包括以下步骤：1)食料获取；2)卵纸处理；3)卵粒孵化；4)接虫及幼虫饲养；5)蛹的培养；6)成蛾饲养。本发明综合考虑了限制三角新小卷蛾虫体存活率的多种因素，针对性的研究出对三角新小卷蛾培养周期特点的饲养方法。所述方法通过综合研究温度、湿度、食料等对三角新小卷蛾虫体存活率的影响，并对该虫产卵介质进行了优选，最后得到一种符合三角新小卷蛾的天然生长环境，培养周期短，成活率高，且能收集到数量较多的卵，获得大量的标准试虫的饲养方法，为三角新小卷蛾的研究加快了步伐。

Description

一种三角新小卷蛾的人工饲养及虫卵收集方法

技术领域

本发明涉及昆虫饲养技术领域，具体涉及一种三角新小卷蛾的人工饲养及虫卵收集方法。

背景技术

三角新小卷蛾(Olthreutes leucaspis Meyrick)，又名黄三角黑卷叶蛾，属鳞翅目(Lepidoptera)卷蛾科(Tortricidae)，小卷叶蛾亚科。广泛分布于我国各荔枝、龙眼产区，是荔枝龙眼嫩梢期的主要害虫。幼虫危害荔枝、龙眼嫩梢、嫩叶及花穗，幼虫吐丝把叶片缀合成叶苞藏匿其中，取食叶片表皮，造成叶片缺刻卷曲，影响光合作用，致使嫩叶提早脱落，严重则嫩梢枯死，对树势和正常生长发育影响较大，特别在夏、秋梢期危害极为严重，直接影响翌年结果母枝的形成。目前三角新小卷蛾在珠三角地区的发生量已占危害荔枝和龙眼各种卷叶蛾总量的85％以上，成为危害荔枝、龙眼卷叶蛾类的优势种群。由于此虫发生代数多、世代重叠现象严重、繁殖速度快、扩散能力强，很容易爆发成灾。而三角新小卷蛾等荔枝卷叶蛾仍以化学防治为主，害虫抗药性加剧，防治难度加大。因此，三角新小卷蛾的生物学特性、害虫抗药性测定、新型农药药效测定及生物防治防效等应用性研究工作亟待进一步开展。

昆虫的室内大规模饲养，为研究提供大量标准虫源，是进行昆虫科学研究的重要基础。同样，对三角新小卷蛾开展有效防控技术研发及相关研究实验，比如该虫对杀虫剂敏感性测定、害虫抗药性测定、生物防治防效评价，以及该虫对光、色、味等因子的趋向行为反应等，均需要大量的活体虫源。然而，目前国内外尚没有关于该虫室内饲养方法的详细报道，加上该卷叶蛾吐丝卷叶特性，难以实现以人工饲料饲养。因此对三角新小卷蛾进行室内饲养技术研究十分必要且具有重要意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有科学实验研究应用的三角新小卷蛾材料的不足，提供一种三角新小卷蛾室内人工饲养和虫卵收集的方法，所述方法保证了该虫室内饲养的高存活率，收集到数量较多的卵，且饲养虫态较为整齐，可为实验研究提供大量虫态一致的活体虫源。

本发明采用的技术方案如下：

一种三角新小卷蛾的人工饲养及虫卵收集方法，包括以下步骤：

(1)食料获取：剪取顶部有嫩芽的荔枝嫩梢，保留8～16片叶，用水清洗干净，阴干后备用；

(2)卵纸处理：用洗耳球吹掉收集三角新小卷蛾卵的卵纸上黏附的鳞片，然后根据卵纸上卵的疏密程度将卵纸剪成小方片，每方片含1～5粒卵，用作卵卡；

(3)卵粒孵化：将卵卡在温度25℃，相对湿度75～85％，光周期为L:D＝14:10h的环境下进行孵化；

(4)接虫及幼虫饲养：用脱脂棉蘸水后将2～5枝荔枝嫩梢基部包裹成一小束，放入消毒过的养虫盒内，并将步骤(3)中即将孵化的卵卡(卵粒内出现黑头，如图1A)接到荔枝嫩叶上，任孵化后的三角新小卷蛾幼虫随意取食直至长成老熟幼虫后包叶化蛹；养虫盒置于温度25℃，相对湿度75～85％，光周期L:D＝14:10h的环境中饲养；饲养期间根据荔枝叶被取食情况，每1～4天更换新鲜食料一次同时清除异物；

(5)蛹的培养：待老熟幼虫化蛹后，将其从包叶中挑出并区分雌、雄蛹，分别转移至垫有滤纸的大培养皿中以湿棉球保湿培养，直至成虫羽化；

(6)成蛾饲养：将刚羽化的成虫配对后移入到纱网养虫笼中，养虫笼内顶部悬挂硫酸纸供成虫产卵，每日添加5～10％的蜂蜜水并更换硫酸纸，直至成虫死亡。

重复以上(2)-(4)步骤，进行室内继代饲养，饲养过程中的温度为25℃，相对湿度75～85％，光周期L:D＝14:10h。

进一步地，步骤(1)中的食料是指在至少1个月内未施过农药的荔枝树上采集的顶部有嫩芽的荔枝嫩梢。所述的荔枝嫩梢清洗干净、阴干后在使用前可放入保鲜袋内置于8～10℃保存。

进一步地，步骤(4)中脱脂棉蘸水要求完全浸湿但不滴水，并于养虫盒底部放置一张吸水滤纸以吸收盒内多余的水分。

进一步地，步骤(4)的幼虫饲养期间对于1～3龄幼虫每2～4天更换新鲜食料一次，对于4～6龄幼虫每1～3天更换新鲜食料一次，更换食料的同时清理食物残枝、虫粪和死亡虫体，清理完毕后用75％的酒精擦拭消毒。

进一步地，步骤(4)中的养虫盒规格为18cm×10cm×6cm，每养虫盒内接入卵数为10～40粒。

进一步地，步骤(4)中即将孵化的卵卡的判断标准是：卵粒内出现黑头，即为即将孵化的卵。

进一步地，步骤(6)中的纱网养虫笼规格为15cm×15cm×15cm，所述的硫酸纸规格为75mm×75mm。

进一步地，步骤(5)得到的蛹和步骤(6)得到的卵在未使用之前，可进行低温保藏，保藏条件为：卵在10～14℃下保藏8～14d，蛹在14～18℃保藏10～20d，以推迟其孵化或羽化时间。

本发明具有以下优点：

1、幼虫死亡率低：本发明以荔枝树嫩梢作为食源，通过室内保鲜并模拟卷叶蛾野外生存环境，分阶段提供适宜三角新小卷蛾生存以及继代繁殖的饲养条件。以清水浸湿饱和的脱脂棉包裹嫩梢作为保湿，可保持枝叶2～5d的新鲜可食，同时保证容器底部无明水，且无腐烂、发臭现象，减少幼虫感染死亡率。

2、取材容易，成本低：该饲养方法的核心是采用嫩梢、鲜叶继代饲养三角新小卷蛾，此法取材容易，成本低廉，接近野外三角新小卷蛾的生活习性，能保证三角新小卷蛾室内种群的稳定增长，同时可获得大量整齐的三角新小卷蛾不同虫态和虫龄的室内虫源。

3、产卵基质易换取，可操作性强：采用硫酸纸替代鲜叶作为产卵基质，可收集大量高质量虫卵，产卵量易计数，卵纸的换取和保存简单方便，省时省力，为三角新小卷蛾的高效饲养提供基础。

4、本发明综合考虑了限制三角新小卷蛾虫体存活率的多种因素，针对性的研究出对三角新小卷蛾培养周期特点的饲养方法。所述方法通过综合研究温度、湿度、食料等对三角新小卷蛾虫体存活率的影响，并对该虫产卵介质进行了优选，最后得到一种符合三角新小卷蛾的天然生长环境，培养周期短，成活率高，且能收集到数量较多的卵，获得大量的标准试虫的饲养方法，为三角新小卷蛾的研究加快了步伐。

附图说明

图1为三角新小卷蛾(A.卵；B.初孵幼虫；C.低龄幼虫；D.老熟幼虫；E.蛹；F.成虫)。

图2为三角新小卷蛾雌(左)、雄(右)蛹的背腹形态图。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1：三角新小卷蛾的饲养条件优选

(1)三角新小卷蛾幼虫饲养温度的确定

在人工气候箱内，设置15℃、20℃、25℃、30℃和35℃5个温度处理，相对湿度设为80±5％，光周期为L:D＝14:10h。每一温度处理放置50粒卵，每天定时观察一次，查看孵化情况，并记录卵的发育历期；挑出孵化的幼虫置于指形管单头饲养，用新鲜的桂味荔枝嫩梢叶片作为食料，每天定时观察并记录各虫态的发育进度和存活情况。将当天羽化的成虫配对放入饲养盒中，接入称量纸供其产卵，并放入蜂蜜水(浓度10％)供其补充营养，观察记录成虫产卵和存活情况。根据所得数据分析温度对三角新小卷蛾生长发育的影响。结果见表1，在各温度范围内，卵的孵化率均很高，都达到了90％以上，25～30℃温度下卵孵化率高达96％。温度对幼虫的存活率影响较大，其中25～30℃温度下幼虫存活率相对更高一些，都达到了85％以上，但低温(15℃)或过高温(35℃)均不利于幼虫的存活。25℃和30℃最适宜蛹和成虫的发育，蛹的存活率均达到100％，而成虫的羽化率也均在90％以上。从整个世代的存活情况来看，25℃和30℃的世代存活率较高，15℃和35℃下的世代存活率较低。种群趋势指数是研究种群数量动态的一个重要指标，三角新小卷蛾种群在5个温度条件下均处于增长趋势(种群趋势指数I>1)，种群趋势指数由高到低顺序为60.72(25℃)>48.40(30℃)>36.72(20℃)>30.30(35℃)>23.04(15℃)。综上可见，在25℃，相对湿度80±5％下种群增长指数最高，种群数量增长最大，优选25℃对三角新小卷蛾进行饲养。

表1不同饲养温度下三角新小卷蛾实验种群生命表

(2)三角新小卷蛾幼虫饲养湿度的确定

在人工气候箱内饲养，设置5个相对湿度处理：55％RH、65％RH、75％RH、85％RH和95％RH，温度设为25±1℃，光周期为L:D＝14:10h。每一湿度处理放置50余粒卵，每天定时观察一次，查看孵化情况，挑出孵化的幼虫置于指形管单头饲养，用新鲜的桂味荔枝嫩梢叶片作为食料，每天定时观察并记录各虫态的存活情况，直至所有幼虫化蛹并羽化完成。根据所得数据分析湿度对三角新小卷蛾各虫态存活率的影响。结果见表2，在75％RH条件下卵、卵-幼虫、卵-蛹和世代存活率均最高，分别为95.43％、89.61％、86.74％和85.01％。其次为85％RH，该处理下荔枝蒂蛀虫卵、卵-幼虫、卵-蛹和世代存活率分别为92.85％、86.54％、83.07％和80.58％，且与75％RH处理组没有明显差异。因此选用75～85％RH为饲养湿度，对三角新小卷蛾进行饲养效果最佳。

表2不同饲养湿度下三角新小卷蛾各虫态的存活率(％)

注：同列数据后的不同字母标注表示数据经邓肯式多重比较差异显著(P<0.05)。

实施例2：三角新小卷蛾的饲养质量评价

(1)荔枝树嫩梢的采集和保鲜：2020年3月15日，广东省农业科学院白云试验基地荔枝园中至少1个月内未施过农药的荔枝树上剪取顶部有嫩芽的荔枝嫩梢，嫩梢保留8～16片叶，茎秆木质化。由于三角新小卷蛾幼虫对取食荔枝嫩叶的品种没有明显的选择性，饲养时妃子笑、桂味、糯米糍、怀枝等的健康嫩梢均可采。采集时先将嫩梢带回室内用清水清洗一遍，下部茎秆浸泡在在水中，待用。

(2)荔枝树嫩梢的处理：2020年3月15日，用脱脂棉蘸水后将2～5枝荔枝嫩梢基部包裹成一小束，放入消毒过的18cm×10cm×6cm养虫盒内，在养虫盒底部放置一张吸水滤纸以吸收盒内多余的水分。该脱脂棉蘸水要求完全浸湿但不滴水，每隔2天对棉球进行滴水保湿。

(3)卵纸处理：收集三角新小卷蛾卵的卵纸取出后首先用洗耳球吹掉卵纸上黏附的鳞片，保持洁净；依据卵纸上三角新小卷蛾卵的疏密程度，将已处理的卵纸剪成小方片，每方片含1～5粒卵，用作卵卡。

(4)卵粒孵化：将卵卡在温度25±1℃，相对湿度80％±5℃，光周期L:D＝14:10h的环境下进行孵化。

(5)幼虫期饲养及日常管护：2020年3月15日至4月18日，将即将孵化的卵卡(卵粒内出现黑头)接到荔枝嫩叶上，每养虫盒内接入卵数为40粒，任孵化后的三角新小卷蛾幼虫随意取食直至长成老熟幼虫后包叶化蛹。养虫盒置于温度25±0.5℃，相对湿度80±5％，光周期L:D＝14:10h的环境中饲养。饲养期间根据荔枝鲜叶被取食情况，每1～4天更换新鲜荔枝嫩梢一次，其中对于1～3龄幼虫每2～4天更换新鲜荔枝嫩梢一次，对于4-6龄幼虫每1～3天更换新鲜荔枝嫩梢一次，更换新鲜荔枝嫩梢的同时清理食物残枝、虫粪和死亡虫体；清理完毕后用75％的酒精擦拭消毒。待老熟幼虫化蛹后，将其从包叶中挑出并区分雌、雄蛹，分别转移至垫有滤纸的大培养皿中以湿棉球保湿培养，直至成虫羽化。将刚羽化的成虫按照雌、雄成虫比约1:1的比例移入到15cm×15cm×15cm纱网养虫笼中，养虫笼内顶部悬挂75mm×75mm称量纸(硫酸纸)供成虫产卵，每日添加10％的蜂蜜水并更换称量纸，直至成虫死亡。

利用上述方法，饲养设3个重复，饲养期间每天上午定时观察，记录各虫态的发育进度和存活情况，成虫期详细记录成虫产卵情况和寿命。表3和表4结果显示，该饲养方法较为理想，三角新小卷蛾各虫态平均存活率80％以上，后代卵的孵化率均在90％以上，此方法可以用于室内进行三角新小卷蛾种群的建立和繁殖。在上述饲养条件下三角新小卷蛾完成1代大约平均需要30.81d，与田间自然种群极为相似，可作为室内试验理想虫源。

表3鲜叶饲养三角新小卷蛾的效果

表4鲜叶饲养三角新小卷蛾各虫态发育历期

对比例1：产卵基质的筛选

采用实施例2的饲养方法进行饲养同批次的三角新小卷蛾成虫，根据该虫产卵特性，将载有荔枝鲜叶、蜡纸、PE保鲜膜、称量纸(硫酸纸)和空白玻璃载玻片5种产卵基质随机放入专用养虫盒内，然后将处于产卵高峰期的4日龄三角新小卷蛾雌、雄成虫各6对放入纱网养虫笼内，其他饲养条件相同。每隔24h更换一次产卵基质，检查记录落卵量，连续观察4d，重复4次。并按以下公式计算三角新小卷蛾对不同基质的产卵选择率(产卵选择率％＝某一基质落卵量×100/所有基质落卵总和)。结果见表5。

表5三角新小卷蛾在5种基质上的落卵量和产卵选择性

注：同列数据后的不相同字母标注表示数据经邓肯式多重比较差异显著(P<0.05)。

由表5可知，三角新小卷蛾在5种基质上的落卵量和产卵选择性由高到低为：荔枝鲜叶>称量纸(硫酸纸)>蜡纸>PE保鲜膜>玻璃片；其中天然产卵基质荔枝鲜叶上的累积落卵量和产卵选择率最高，分别为211.47粒和33.36％；其次为称量纸(硫酸纸)，其累积落卵量和产卵选择率为193.45粒和30.51％，且与荔枝鲜叶相比差异不显著。另外不同日龄雌虫之间选择性存在差异，但各日龄试虫在荔枝鲜叶和称量纸(硫酸纸)上的落卵量均高于其他三种基质。荔枝鲜叶作为产卵基质时，由于鲜叶在常规饲养条件下保存时间不长，叶片和附着的虫卵易霉变，因此优选称量纸(硫酸纸)作为三角新小卷蛾的产卵基质。

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种三角新小卷蛾的人工饲养及虫卵收集方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)食料获取：剪取顶部有嫩芽的荔枝嫩梢，保留8～16片叶，用水清洗干净，阴干后备用；

(2)卵纸处理：用洗耳球吹掉收集三角新小卷蛾卵的卵纸上黏附的鳞片，然后根据卵纸上卵的疏密程度将卵纸剪成小方片，每方片含1～5粒卵，用作卵卡；

(3)卵粒孵化：将卵卡在光周期为L:D＝14:10h，温度25℃，相对湿度75～85％的环境下进行孵化；

(4)接虫及幼虫饲养：用脱脂棉蘸水后将2～5枝荔枝嫩梢基部包裹成一小束，放入消毒过的18cm×10cm×6cm的养虫盒内，每养虫盒内接入卵数为10～40粒，并将步骤(3)中即将孵化的卵卡接到荔枝嫩叶上，任孵化后的三角新小卷蛾幼虫随意取食直至长成老熟幼虫后包叶化蛹；饲养的光周期为L:D＝14:10h，温度为25℃，相对湿度为75～85％；饲养期间根据荔枝叶被取食情况，每1～4天更换新鲜食料一次同时清除异物；

(5)蛹的培养：待老熟幼虫化蛹后，将其从包叶中挑出并区分雌、雄蛹，分别转移至垫有滤纸的大培养皿中以湿棉球保湿培养，直至成虫羽化；

(6)成蛾饲养：将刚羽化的成虫配对后移入到纱网养虫笼中，养虫笼内顶部悬挂硫酸纸供成虫产卵，每日添加5～10％的蜂蜜水并更换硫酸纸，直至成虫死亡。

2.根据权利要求1所述的三角新小卷蛾的人工饲养及虫卵收集方法，其特征在于，步骤(4)中脱脂棉蘸水要求完全浸湿但不滴水，并于养虫盒底部放置一张吸水滤纸以吸收盒内多余的水分。

3.根据权利要求1所述的三角新小卷蛾的人工饲养及虫卵收集方法，其特征在于，步骤(4)的饲养期间对于1～3龄幼虫每2～4天更换新鲜食料一次，对于4～6龄幼虫每1～3天更换新鲜食料一次，更换食料的同时清理食物残枝、虫粪和死亡虫体，清理完毕后用75％的酒精擦拭消毒。

4.根据权利要求1所述的三角新小卷蛾的人工饲养及虫卵收集方法，其特征在于，步骤(4)中即将孵化的卵卡的判断标准是：卵粒内出现黑头。

5.根据权利要求1所述的三角新小卷蛾的人工饲养及虫卵收集方法，其特征在于，步骤(6)中的纱网养虫笼规格为15cm×15cm×15cm，所述的硫酸纸规格为75mm×75mm。