CN113215188B

CN113215188B - 一种提高月季抗白粉病病菌侵染的方法

Info

Publication number: CN113215188B
Application number: CN202110471628.XA
Authority: CN
Inventors: 明凤; 李晓瑞; 李东世; 杨淳; 吴舒瑶
Original assignee: Shanghai Normal University
Current assignee: Shanghai Normal University
Priority date: 2021-04-29
Filing date: 2021-04-29
Publication date: 2023-05-16
Anticipated expiration: 2041-04-29
Also published as: CN113215188A

Abstract

本申请公开了一种提高月季抗白粉病病菌侵染的方法，所述方法包括下调月季中RcCPR5‑1基因的表达。所述RcCPR5‑1基因编码的蛋白序列如SEQ ID NO.3所示。

Description

一种提高月季抗白粉病病菌侵染的方法

技术领域

本发明涉及生物品种培育领域，尤其涉及一种提高月季抗白粉病病菌侵染的方法。

背景技术

月季属于蔷薇科植物,单倍体含有7条染色体，四季常开，花姿优美，花色繁复，芳香浓郁，目前已有3万多个月季品种(周英，2019)。月季是世界上最受欢迎的观赏植物之一，几千年来一直被作为园艺作物广泛种植，几百年来也一直被作为切花和香水原料，已成为许多国家的经济作物(Qi et al.,2018)。在中国，月季除了具有观赏性用途外，还具有食用和药用价值。由于其卓越的经济价值，近年来月季的种植面积猛增，而月季栽培条件和管理方法不当，常引起病菌侵入发生病害，这不仅直接影响月季的生长和开花，同时影响其美化效果和观赏价值甚至造成死亡。随着经济发展，人们生活质量不断提高，越来越关注于生活环境和品质，花卉市场规模增扩张迅速，月季在花卉市场中占据重要位置，市场对月季的需求量越来越大，在月季的养护过程中，月季病害成为月季栽培过程中亟需解决的难题，其中主要包括月季白粉病。

月季白粉病是月季生产上极为普遍又严重的病害，是由蔷薇单丝壳(Podosphaerapannosa)侵染引起的。白粉病在世界各地不同品种中均有发生，无论露天栽培还是温室生产的月季均易感染。月季白粉病危害月季的叶片、嫩梢、花蕾及花梗等部位，受害部位表面布满白色粉层。月季白粉病多发于温暖、干燥或潮湿的环境。病菌以菌丝体在病叶、病芽、病枝或休眠芽内越冬，以分生孢子借助气流、雨水等传播(向贵生，2017)。目前月季病害的防治主要是采用化学防治，化学防治能够有效治愈月季病害，但是化学防治，会提高月季生产成本，污染环境，且不能发挥长效治愈的能力；另一方面，植物经常暴露在各种各样的病原体中，具有一定的通过预先形成的有效结构和化学屏障以及植物诱导防御机制来实现对病原微生物的抗性的能力，因此本领域技术人员致力于开发一种提高月季植株抗白粉病病菌侵染的基因，应用于月季白粉病防治。

发明内容

有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题是如何提高月季抗白粉病病菌侵染的能力。

为实现上述目的，本发明提供了一种提高月季植株抗白粉病病菌侵染的方法，所述方法包括下调月季中RcCPR5-1基因的表达。

在某些实施方式中，所述下调包括基因沉默或基因敲除。

在某些实施方式中，所述基因沉默使得沉默后植株与野生型植株相比，RcCPR5-1基因的表达量下降40％-60％。

在某些实施方式中，所述基因沉默使得沉默后植株与野生型植株相比，RcCPR5-1基因的表达量下降50％。

在某些实施方式中，所述表达量通过Real-time PCR检测获得。

在某些实施方式中，所述Real-time PCR检测利用如SEQ ID NO.6和7所示的引物。

在某些实施方式中，所述RcCPR5-1基因编码的蛋白序列如SEQ ID NO.3所示。

在某些实施方式中，所述RcCPR5-1基因的编码序列如SEQ ID NO.2所示。

在某些实施方式中，所述RcCPR5-1基因的序列如SEQ ID NO.1所示。

另一方面，本申请还提供了一种预防或治疗月季白粉病的方法，其特征在于，所述方法包括下调月季中RcCPR5-1基因的表达。

在某些实施方式中，所述下调包括基因沉默或基因敲除。

在某些实施方式中，所述表达量通过Real-time PCR检测获得。

在某些实施方式中，所述RcCPR5-1基因的序列如SEQ ID NO.1所示。

另一方面，本申请还提供了RcCPR5-1基因在提高月季抗白粉病病菌侵染中的应用，所述应用包括下调月季中RcCPR5-1基因的表达。

在某些实施方式中，所述下调包括基因沉默或基因敲除。

在某些实施方式中，所述表达量通过Real-time PCR检测获得。

在某些实施方式中，所述RcCPR5-1基因的序列如SEQ ID NO.1所示。

另一方面，本申请还提供了核酸分子RcCPR5-1，其特征在于，所述核酸分子RcCPR5-1编码的蛋白序列如SEQ ID NO.3所示。

在某些实施方式中，所述RcCPR5-1基因的序列如SEQ ID NO.1所示。

本申请通过病毒诱导的基因沉默(virus induced gene silencing，VIGS)获得了RcCPR5-1沉默月季株系，分析RcCPR5-1沉默株系和野生型株对病菌的抗性，明确其在月季病原菌浸染进程中的功能，通过对RcCPR5-1沉默月季株系及相应野生型植株对白粉病病菌侵染抗性的分析，明确了降低月季植株RcCPR5-1基因的表达能够显著提高其抗白粉病侵染的能力，从而为月季白粉病的预防和治疗提供了有效方法，降低了月季培育成本，提高了市场经济效益。

以下将结合附图对本发明的构思、具体结构及产生的技术效果作进一步说明，以充分地了解本发明的目的、特征和效果。

附图说明

图1显示的是本申请中的RcCPR5-1基因在野生型月季中不同器官表达分析结果图。

图2显示的是本申请中的RcCPR5-1基因在野生型月季的不同病菌侵染程度叶片中的表达分析结果图。

图3显示的是本申请中的月季RcCPR5-1基因沉默体和野生型月季中的RcCPR5-1基因表达量鉴定结果图。

图4显示的是本申请中的月季RcCPR5-1基因沉默体和野生型月季的叶片表型对比图。

图5显示的是本申请中的月季RcCPR5-1基因沉默体和野生型月季在接种白粉病病菌后病害程度对比图。

图6显示的是本申请中的月季RcCPR5-1基因沉默体和野生型月季在接种白粉病病菌后病斑侵染率统计结果图。

具体实施方式

以下将结合实施例对本发明作进一步地说明，应理解这些实施例仅作为例证的目的，本发明可以通过许多不同形式的实施例来得以体现，本发明的保护范围并非仅限于文中提到的实施例。

下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。所采用的试剂，若无特殊说明，均为市售或公开渠道可以获得的试剂。

在本申请中，可选用本领域已知的各种载体，如市售的载体，包括质粒等。

在本申请中，术语“基因沉默”通常是指转录后基因沉默(post-transcriptionalgene silencing,PTGS)，即在基因转录后的水平上通过对靶标RNA进行特异性干预而影响基因的表达。通常情况下当基因沉默时，相应基因表达下调/减少；而术语“基因敲除”通常是指对基因组DNA的操作，当基因被敲除时则通常表现为基因组DNA被破坏而不能表达，例如在细胞中，某种特定基因的所有等位基因均被敲除后则表现为该基因的表达消失。

月季品种“安吉拉(Angela)”为诞生于法国1984年的丰花藤本月季，花朵粉红色，浅粉色的亮点，中心色淡。无香或温和果香。花瓣35个，花朵平均直径4厘米，小到中等，全双(26-40花瓣)，簇花，小集群，杯状开花形式，花期长，多季节连续盛开；枝条中等，浓密；叶子中等，有光泽，中绿色。高度80-150厘米，最长可达300厘米；广泛种植于高架；耐旱耐热抗污染性能好。本申请的月季品种“安吉拉(Angela)”购买自上海佰麟园林绿化工程有限公司。

实施例1月季RcCPR5-1基因的克隆

1.月季品种“安吉拉”种植在上海师范大学桃园楼月季园，生长条件为露天，每周浇一次水，定期施肥和病害防治施药维护。

2.DNA提取。取500mg新鲜的月季植物组织材料，加入80μL裂解液，用研钵将植物组织研碎，加入120μL ddH₂O，12000rpm离心15min后将上清转移至新的离心管，测OD值，电泳检测。

3.基因的克隆。以提取的月季DNA为模板，PCR获得RcCPR5-1基因，全长5268bp，其全长核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。使用对引物对(正向引物1：5'ATGGACCCACCTTCTTCCCTTC 3'(SEQ ID NO.4)，反向引物1：5'TCAGAAGATACCTCCTGTTCCA 3'(SEQ ID NO.5))对月季样品cDNA进行PCR扩增可获得长1698bp的编码区间基因片段。其编码区间序列如SEQ ID NO.2所示，RcCPR5-1编码的蛋白序列，有565个氨基酸残基，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

实施例2月季RcCPR5-1基因器官表达模式分析

分别提取月季茎、叶、花、果实中的总RNA(天恩哲RNA提取试剂盒)，利用反转录试剂盒(TaKaRa

RT reagent Kit DRR037A)将总RNA反转录成cDNA，利用引物SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7，进行Real-time PCR检测，如图1所示，其中，Leaf 1表示叶片未褪去红色，叶面未展开时幼嫩的叶片；Leaf 2表示叶片完全展开，成熟叶片；Stem表示月季幼嫩茎段；S 1表示花苞形成1天；S 2表示花苞形成3天；S 3表示萼片完全展开；S 4表示花瓣完全展开；Berry表示月季花瓣脱落形成的果荚。

结果显示该基因在各个器官中组成型表达，在花苞时期1中表达量最低，在花瓣中表达量最高。

实施例3月季RcCPR5-1基因在不同病菌侵染程度的表达模式分析

对露天培养的安吉拉月季接种白粉病菌处理不同天数获得不同病害程度的叶片取样，提取月季叶片中的RNA (天恩哲RNA提取试剂盒)；利用反转录试剂盒(TaKaRa

RT reagent Kit DRR037A)将RNA反转录成cDNA，利用引物SEQ ID NO.6与SEQ ID NO.7，进行Real-time PCR检测，结果如图2所示，其中，1表示未接种白粉病菌的月季叶片；2表示接种白粉病菌1天叶片；3表示接种白粉病菌2天叶片；4表示接种白粉病菌3天叶片；5表示接种白粉病菌4天叶片。该结果显示基因RcCPR5-1的表达量随着病害严重程度增加而增加。

实施例4 RcCPR5-1沉默体的沉默效率鉴定

分别提取构建TRV2-RcCPR5-1载体(载体TRV2购自质粒载体菌种细胞基因保藏中心)，载体中RcCPR5-1序列如SEQ ID NO.10所示，进行农杆菌GV3101(购自上海唯地生物技术有限公司)转化并注射烟草扩繁，2天后对烟草叶片进行研磨，将烟草汁液摩擦安吉拉叶片，该处理组为沉默株系，一周后有新长出来的叶片,同时以带有GFP标签的TRV2-GFP为对照组，检测RcCPR5-1基因沉默体，即分别提取沉默植株以及野生型植株对照组叶片中的总RNA，利用如下引物进行Realtime-PCR检测RcCPR5-1基因是否沉默，确定筛选沉默株系：

Forward Primer：5'TGGAAGCCACTGCATCATGTACACC3'(SEQ ID NO.8)

Reverse Primer：5'CGACTCACTACCTCAGCTTGACACC 3'(SEQ ID NO.9)。

以沉默体植株以及野生型植株对照组中的总RNA，利用引物SEQ ID NO.7和SEQ IDNO.8，进行Realtime-PCR检测沉默效率,结果如图3所示，沉默体中RcCPR5-1的表达量较野生型降低50％。

实施例5 RcCPR5-1沉默体表型分析

对沉默体植株以及野生型植株叶片进行取样，与实施例4沉默体沉默效率鉴定同一批次取样，结果如图4所示，在叶形、叶面积上均无差别。

实施例6 RcCPR5-1沉默体月季叶片白粉病菌抗性分析

对沉默体植株以及野生型植株叶片，进行白粉病菌菌丝块(归属于蔷薇单丝壳(Podosphaera pannosa)生理小种)接种；进行28℃暗培养，7天。

具体如下：

(1)RcCPR5-1沉默植株与野生型的植株在恒温培养箱内28℃培养，定时浇水。

(2)至有幼嫩叶片展开，用PDA固体培养基培养白粉病菌4天，扣取直径1cm菌丝块，倒扣在扎孔处理过的对照组TRV2-GFP和处理组TRV2-CPR5-1月季叶片上(扎孔是为了给月季叶片造成一个损伤，帮助病菌侵入)，28℃暗培养进行生物胁迫7天，拍照记录叶片形态。结果如图5所示。

(3)测定沉默体与野生型的病斑大小。对TRV2-GFP对照组叶片、TRV2-CPR5-1处理组叶片进行白粉病接种7d后，进行染病率的统计(以针孔是否扩大为标准)，计算侵染病害发生率，染病率为每组月季病菌侵入针孔叶片数(即针孔扩大叶片数)比该组总的处理叶片数。结果如图6所示，沉默体植株叶片染病程度远低于野生型植株叶片，表明下调RcCPR5-1基因的表达能够在月季白粉病菌病害侵染过程中降低侵染，即通过降低RcCPR5-1基因的表达能够提高月季白粉病抗性。

以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术无需创造性劳动就可以根据本发明的构思做出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。

序列表

<110> 上海师范大学

<120> 一种提高月季抗白粉病病菌侵染的方法

<130> CN015-21008PICN

<160> 10

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 2265

<212> DNA

<213> Artificial Sequence（人工序列）

<220>

<223> RcCPR5-1全长序列

<400> 1

gtaaaaggtg tgtcaaagct taaacggtaa tgtcctccgc ttcaaatata cgttgttcct 60

gtaagtccct cccaccgctc cctttatttt aaaatctctc ttgaatgctg ctccattccc 120

aacttcccac cttcctatgg acccaccttc ttcccttcaa cccccccatc tctccgccgc 180

ttccaaccac catgaaaact caatccccgc cgtcgatcat aataagaaga aggggaagaa 240

aaagctattc aaggacgccg cttcggtcgc gtcctcctcc tcctcctctt ctgcttccac 300

ttcttcgggc ttctctgtaa gaggacccgc gcgcgtgacg ggcaagcgcc gagcgcagaa 360

ggtggttgtc aatgcggcgc ggcggagcgc taattccgat gatatagggt ttcggttggg 420

gatgtcaatg gcggtgtttg taaaccagat tctggaaagg aatggtgagc taggtggagg 480

gatgtcttct gatcatcttg ctaagatatg tgcttcagct gtcagaggat cgtttgctaa 540

tgatttcggg aacacgtttg attgttttat ccagaacttt gaacaatcat ttgggagcac 600

cttaagaact ctaaagtcga tcaaagaatc atccgaagat aacacaggat atctctccag 660

caagcaaaac atagaagaac atagtccgcg tgtcactcat gacgaacaag atgactgtct 720

aagaggggaa gcttgtagaa gcagttccag tacagaagat tatcactcaa aagaagtggc 780

ccacactact gcaactgagg gtcgattaaa ttatagagat caattgcatc cgaatatgct 840

gacaaaccct gtcaacctgg aggttgccct gcatggccaa atcaatcaat tgacttgtat 900

tcccctgaga actgttgaac ctgtgaccaa ccaatccatg tttaatactt ttgagaaatc 960

tgtcatggag caatctcgtg ctaatgagct gaagatttgg gagcttggtc tggcaatgaa 1020

gaagttgtcg ttgaaagagg aacaagtggc tctaggtcat gattcaaatc atctggagag 1080

atcaaaaata gctatgggca catcaaaggc atccttcaaa gctgaaaaat ttaagactca 1140

attagaagac acaagacact ctgagctcct taggacgtgc attgactgtc tagttactgg 1200

gttattggtc atggctgcag ccctgtctta tggtacttac atatattcat acagaagaat 1260

tatggaagcc actgcatcat gtacaccttc aaaggattca aagtcttggt ggaatcccat 1320

ggcatctgtc aattcgagca ttcaagttct aaggtgtcaa gctgaggtag tgagtcggat 1380

ggtgtttggt ttcttcatga tttttgcaat tgcttatttg atcctccagc gctcggcagt 1440

ttcgaaacag acaatgccag ttactttcat agtcttgctg ttgggaattg cctgtggttg 1500

ggccggcaag ttttgtgtag acacattggg agggagcgga tatcactggc ttatatattg 1560

ggagactctg tgcctcgtgc atttcttctg caatgttttt acatcagttt tgttccatat 1620

cctgcatgga cccattgatg tgtctccagg gacaaaagga aattcagtat ttccttactg 1680

gatacgcaga ttggtgttct acggtattac gttcctgttt ctgccattgc tttgtggcct 1740

tttgcctttt gcaagccttg ctgaatggaa gcaccatttc ttgctgctgg ttgctgatgt 1800

tgattactgg gttggaacag gaggtatctt ctgaccgtca gcatgacttt gtgatttctc 1860

tcatgcatga gtaatttaag ggtcattttg tatattatca ttttgagtcc aatgaagttg 1920

gagagatatg ctggcaggag ttgggtttgg gtccttaatt tgtatcatca gataatttaa 1980

tgaagaagtt gtaaaatcat gaatatgtgt cttatgtcaa gctgtcactg ctgtaacggg 2040

cctaaacagc gctgcttgcg ttgtaatgta tttgtctctt gtatcagtag ccatttttca 2100

tgtgtgagta atttaaaggg gccatttcgt gttgttatca ctttcggtct agtgaagtgt 2160

ctgtcagatg gccccgaagg gaagcagtct agttaagttg agagactgat ttgtattatc 2220

agaaaagtta atgaagttat gattcataaa agaacttgaa ttgtc 2265

<210> 2

<211> 1698

<212> DNA

<213> Artificial Sequence（人工序列）

<220>

<223> RcCPR5-1编码序列

<400> 2

atggacccac cttcttccct tcaacccccc catctctccg ccgcttccaa ccaccatgaa 60

aactcaatcc ccgccgtcga tcataataag aagaagggga agaaaaagct attcaaggac 120

gccgcttcgg tcgcgtcctc ctcctcctcc tcttctgctt ccacttcttc gggcttctct 180

gtaagaggac ccgcgcgcgt gacgggcaag cgccgagcgc agaaggtggt tgtcaatgcg 240

gcgcggcgga gcgctaattc cgatgatata gggtttcggt tggggatgtc aatggcggtg 300

tttgtaaacc agattctgga aaggaatggt gagctaggtg gagggatgtc ttctgatcat 360

cttgctaaga tatgtgcttc agctgtcaga ggatcgtttg ctaatgattt cgggaacacg 420

tttgattgtt ttatccagaa ctttgaacaa tcatttggga gcaccttaag aactctaaag 480

tcgatcaaag aatcatccga agataacaca ggatatctct ccagcaagca aaacatagaa 540

gaacatagtc cgcgtgtcac tcatgacgaa caagatgact gtctaagagg ggaagcttgt 600

agaagcagtt ccagtacaga agattatcac tcaaaagaag tggcccacac tactgcaact 660

gagggtcgat taaattatag agatcaattg catccgaata tgctgacaaa ccctgtcaac 720

ctggaggttg ccctgcatgg ccaaatcaat caattgactt gtattcccct gagaactgtt 780

gaacctgtga ccaaccaatc catgtttaat acttttgaga aatctgtcat ggagcaatct 840

cgtgctaatg agctgaagat ttgggagctt ggtctggcaa tgaagaagtt gtcgttgaaa 900

gaggaacaag tggctctagg tcatgattca aatcatctgg agagatcaaa aatagctatg 960

ggcacatcaa aggcatcctt caaagctgaa aaatttaaga ctcaattaga agacacaaga 1020

cactctgagc tccttaggac gtgcattgac tgtctagtta ctgggttatt ggtcatggct 1080

gcagccctgt cttatggtac ttacatatat tcatacagaa gaattatgga agccactgca 1140

tcatgtacac cttcaaagga ttcaaagtct tggtggaatc ccatggcatc tgtcaattcg 1200

agcattcaag ttctaaggtg tcaagctgag gtagtgagtc ggatggtgtt tggtttcttc 1260

atgatttttg caattgctta tttgatcctc cagcgctcgg cagtttcgaa acagacaatg 1320

ccagttactt tcatagtctt gctgttggga attgcctgtg gttgggccgg caagttttgt 1380

gtagacacat tgggagggag cggatatcac tggcttatat attgggagac tctgtgcctc 1440

gtgcatttct tctgcaatgt ttttacatca gttttgttcc atatcctgca tggacccatt 1500

gatgtgtctc cagggacaaa aggaaattca gtatttcctt actggatacg cagattggtg 1560

ttctacggta ttacgttcct gtttctgcca ttgctttgtg gccttttgcc ttttgcaagc 1620

cttgctgaat ggaagcacca tttcttgctg ctggttgctg atgttgatta ctgggttgga 1680

acaggaggta tcttctga 1698

<210> 3

<211> 565

<212> PRT

<213> Artificial Sequence（人工序列）

<220>

<223> RcCPR5-1编码的氨基酸序列

<400> 3

Met Asp Pro Pro Ser Ser Leu Gln Pro Pro His Leu Ser Ala Ala Ser

1 5 10 15

Asn His His Glu Asn Ser Ile Pro Ala Val Asp His Asn Lys Lys Lys

20 25 30

Gly Lys Lys Lys Leu Phe Lys Asp Ala Ala Ser Val Ala Ser Ser Ser

35 40 45

Ser Ser Ser Ser Ala Ser Thr Ser Ser Gly Phe Ser Val Arg Gly Pro

50 55 60

Ala Arg Val Thr Gly Lys Arg Arg Ala Gln Lys Val Val Val Asn Ala

65 70 75 80

Ala Arg Arg Ser Ala Asn Ser Asp Asp Ile Gly Phe Arg Leu Gly Met

85 90 95

Ser Met Ala Val Phe Val Asn Gln Ile Leu Glu Arg Asn Gly Glu Leu

100 105 110

Gly Gly Gly Met Ser Ser Asp His Leu Ala Lys Ile Cys Ala Ser Ala

115 120 125

Val Arg Gly Ser Phe Ala Asn Asp Phe Gly Asn Thr Phe Asp Cys Phe

130 135 140

Ile Gln Asn Phe Glu Gln Ser Phe Gly Ser Thr Leu Arg Thr Leu Lys

145 150 155 160

Ser Ile Lys Glu Ser Ser Glu Asp Asn Thr Gly Tyr Leu Ser Ser Lys

165 170 175

Gln Asn Ile Glu Glu His Ser Pro Arg Val Thr His Asp Glu Gln Asp

180 185 190

Asp Cys Leu Arg Gly Glu Ala Cys Arg Ser Ser Ser Ser Thr Glu Asp

195 200 205

Tyr His Ser Lys Glu Val Ala His Thr Thr Ala Thr Glu Gly Arg Leu

210 215 220

Asn Tyr Arg Asp Gln Leu His Pro Asn Met Leu Thr Asn Pro Val Asn

225 230 235 240

Leu Glu Val Ala Leu His Gly Gln Ile Asn Gln Leu Thr Cys Ile Pro

245 250 255

Leu Arg Thr Val Glu Pro Val Thr Asn Gln Ser Met Phe Asn Thr Phe

260 265 270

Glu Lys Ser Val Met Glu Gln Ser Arg Ala Asn Glu Leu Lys Ile Trp

275 280 285

Glu Leu Gly Leu Ala Met Lys Lys Leu Ser Leu Lys Glu Glu Gln Val

290 295 300

Ala Leu Gly His Asp Ser Asn His Leu Glu Arg Ser Lys Ile Ala Met

305 310 315 320

Gly Thr Ser Lys Ala Ser Phe Lys Ala Glu Lys Phe Lys Thr Gln Leu

325 330 335

Glu Asp Thr Arg His Ser Glu Leu Leu Arg Thr Cys Ile Asp Cys Leu

340 345 350

Val Thr Gly Leu Leu Val Met Ala Ala Ala Leu Ser Tyr Gly Thr Tyr

355 360 365

Ile Tyr Ser Tyr Arg Arg Ile Met Glu Ala Thr Ala Ser Cys Thr Pro

370 375 380

Ser Lys Asp Ser Lys Ser Trp Trp Asn Pro Met Ala Ser Val Asn Ser

385 390 395 400

Ser Ile Gln Val Leu Arg Cys Gln Ala Glu Val Val Ser Arg Met Val

405 410 415

Phe Gly Phe Phe Met Ile Phe Ala Ile Ala Tyr Leu Ile Leu Gln Arg

420 425 430

Ser Ala Val Ser Lys Gln Thr Met Pro Val Thr Phe Ile Val Leu Leu

435 440 445

Leu Gly Ile Ala Cys Gly Trp Ala Gly Lys Phe Cys Val Asp Thr Leu

450 455 460

Gly Gly Ser Gly Tyr His Trp Leu Ile Tyr Trp Glu Thr Leu Cys Leu

465 470 475 480

Val His Phe Phe Cys Asn Val Phe Thr Ser Val Leu Phe His Ile Leu

485 490 495

His Gly Pro Ile Asp Val Ser Pro Gly Thr Lys Gly Asn Ser Val Phe

500 505 510

Pro Tyr Trp Ile Arg Arg Leu Val Phe Tyr Gly Ile Thr Phe Leu Phe

515 520 525

Leu Pro Leu Leu Cys Gly Leu Leu Pro Phe Ala Ser Leu Ala Glu Trp

530 535 540

Lys His His Phe Leu Leu Leu Val Ala Asp Val Asp Tyr Trp Val Gly

545 550 555 560

Thr Gly Gly Ile Phe

565

<210> 4

<211> 22

<212> DNA

<213> Artificial Sequence（人工序列）

<220>

<223> 5' ATGGACCCACCTTCTTCCCTTC 3'

<400> 4

atggacccac cttcttccct tc 22

<210> 5

<211> 22

<212> DNA

<213> Artificial Sequence（人工序列）

<220>

<223> 编码序列扩增引物

<400> 5

tcagaagata cctcctgttc ca 22

<210> 6

<211> 25

<212> DNA

<213> Artificial Sequence（人工序列）

<220>

<223> 定量检测引物

<400> 6

tggaagccac tgcatcatgt acacc 25

<210> 7

<211> 25

<212> DNA

<213> Artificial Sequence（人工序列）

<220>

<223> 定量检测引物

<400> 7

cgactcacta cctcagcttg acacc 25

<210> 8

<211> 25

<212> DNA

<213> Artificial Sequence（人工序列）

<220>

<223> 沉默检测引物

<400> 8

tggaagccac tgcatcatgt acacc 25

<210> 9

<211> 25

<212> DNA

<213> Artificial Sequence（人工序列）

<220>

<223> 沉默检测引物

<400> 9

cgactcacta cctcagcttg acacc 25

<210> 10

<211> 322

<212> DNA

<213> Artificial Sequence（人工序列）

<220>

<223> TRV2-RcCPR5-1

<400> 10

tgacgaacaa gatgactgtc taagagggga agcttgtaga agcagttcca gtacagaaga 60

ttatcactca aaagaagtgg cccacactac tgcaactgag ggtcgattaa attatagaga 120

tcaattgcat ccgaatatgc tgacaaaccc tgtcaacctg gaggttgccc tgcatggcca 180

aatcaatcaa ttgacttgta ttcccctcgt gctaatgagc tgaagatttg ggagcttggt 240

ctggcaatga agaagttgtc gttgaaagag gaacaagtgg ctctaggtca tgattcaaat 300

catctggaga gatcaaaaat ag 322

Claims

1.一种提高月季抗白粉病病菌侵染的方法，其特征在于，所述方法包括下调月季中RcCPR5-1基因的表达，所述RcCPR5-1基因编码的蛋白序列如SEQ ID NO.3所示。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述下调包括基因沉默或基因敲除。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述基因沉默使得沉默后植株与野生型植株相比，RcCPR5-1基因的表达量下降40％-60％。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述基因沉默使得沉默后植株与野生型植株相比，RcCPR5-1基因的表达量下降50％。

5.如权利要求1所述的方法，其中，所述RcCPR5-1基因的编码序列如SEQ ID NO.2所示。

6.如权利要求5所述的方法，其中，所述RcCPR5-1基因的序列如SEQ ID NO.1所示。

7.一种预防或治疗月季白粉病的方法，其特征在于，所述方法包括下调月季中RcCPR5-1基因的表达，所述RcCPR5-1基因编码的蛋白序列如SEQ ID NO.3所示。

8.RcCPR5-1基因在提高月季抗白粉病病菌侵染中的应用，所述应用包括下调月季中RcCPR5-1基因的表达，所述RcCPR5-1基因编码的蛋白序列如SEQ ID NO.3所示。