CN105585620B - 大豆蛋白GmAIRP1及其编码基因在培育抗逆性植物中的应用 - Google Patents
大豆蛋白GmAIRP1及其编码基因在培育抗逆性植物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105585620B CN105585620B CN201610127492.XA CN201610127492A CN105585620B CN 105585620 B CN105585620 B CN 105585620B CN 201610127492 A CN201610127492 A CN 201610127492A CN 105585620 B CN105585620 B CN 105585620B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- gmairp1
- tobacco
- plant
- albumen
- wild
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 title claims abstract description 53
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 39
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 title abstract description 4
- 235000019710 soybean protein Nutrition 0.000 title abstract description 4
- 241000208125 Nicotiana Species 0.000 claims abstract description 95
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 claims abstract description 95
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 22
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 13
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 9
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 claims abstract description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 13
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 claims description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 abstract description 21
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 21
- 230000035882 stress Effects 0.000 abstract description 15
- 238000005259 measurement Methods 0.000 abstract description 12
- 230000008641 drought stress Effects 0.000 abstract description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 7
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 abstract description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 4
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 abstract description 2
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 14
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 13
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 12
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 12
- 239000008118 PEG 6000 Substances 0.000 description 11
- 229920002584 Polyethylene Glycol 6000 Polymers 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 10
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 10
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 10
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 10
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 8
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 7
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 6
- 235000019354 vermiculite Nutrition 0.000 description 6
- 239000010455 vermiculite Substances 0.000 description 6
- 229910052902 vermiculite Inorganic materials 0.000 description 6
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 5
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 5
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 230000006353 environmental stress Effects 0.000 description 5
- JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N rifampicin Chemical compound O([C@](C1=O)(C)O/C=C/[C@@H]([C@H]([C@@H](OC(C)=O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)\C=C\C=C(C)/C(=O)NC=2C(O)=C3C([O-])=C4C)C)OC)C4=C1C3=C(O)C=2\C=N\N1CC[NH+](C)CC1 JQXXHWHPUNPDRT-WLSIYKJHSA-N 0.000 description 5
- 229960001225 rifampicin Drugs 0.000 description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 230000036579 abiotic stress Effects 0.000 description 3
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 3
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 3
- 239000002585 base Substances 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000012549 training Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 108010022579 ATP dependent 26S protease Proteins 0.000 description 2
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 2
- 101001091385 Homo sapiens Kallikrein-6 Proteins 0.000 description 2
- 102100034866 Kallikrein-6 Human genes 0.000 description 2
- 241000250366 Nicotiana gossei Species 0.000 description 2
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 2
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 235000019504 cigarettes Nutrition 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 2
- 241001233957 eudicotyledons Species 0.000 description 2
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 2
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 2
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 2
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000026938 proteasomal ubiquitin-dependent protein catabolic process Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- XOOZYXDSWZYGFR-VWMHFEHESA-N (2s)-pyrrolidine-2-carboxylic acid;toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1.OC(=O)[C@@H]1CCCN1 XOOZYXDSWZYGFR-VWMHFEHESA-N 0.000 description 1
- WXHLLJAMBQLULT-UHFFFAOYSA-N 2-[[6-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]-2-methylpyrimidin-4-yl]amino]-n-(2-methyl-6-sulfanylphenyl)-1,3-thiazole-5-carboxamide;hydrate Chemical compound O.C=1C(N2CCN(CCO)CC2)=NC(C)=NC=1NC(S1)=NC=C1C(=O)NC1=C(C)C=CC=C1S WXHLLJAMBQLULT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 229930186147 Cephalosporin Natural products 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 1
- 241000209510 Liliopsida Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 208000012868 Overgrowth Diseases 0.000 description 1
- 241000233614 Phytophthora Species 0.000 description 1
- 238000012181 QIAquick gel extraction kit Methods 0.000 description 1
- 108700005075 Regulator Genes Proteins 0.000 description 1
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 102000006275 Ubiquitin-Protein Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010083111 Ubiquitin-Protein Ligases Proteins 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 101150063416 add gene Proteins 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000011260 aqueous acid Substances 0.000 description 1
- 238000009412 basement excavation Methods 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000010805 cDNA synthesis kit Methods 0.000 description 1
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 1
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229940124587 cephalosporin Drugs 0.000 description 1
- 150000001780 cephalosporins Chemical class 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000002242 deionisation method Methods 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000012214 genetic breeding Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 239000003501 hydroponics Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- LCCNCVORNKJIRZ-UHFFFAOYSA-N parathion Chemical compound CCOP(=S)(OCC)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 LCCNCVORNKJIRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BULVZWIRKLYCBC-UHFFFAOYSA-N phorate Chemical compound CCOP(=S)(OCC)SCSCC BULVZWIRKLYCBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000006965 reversible inhibition Effects 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000017105 transposition Effects 0.000 description 1
- 238000010798 ubiquitination Methods 0.000 description 1
- 230000034512 ubiquitination Effects 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8201—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation
- C12N15/8202—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation by biological means, e.g. cell mediated or natural vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8273—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for drought, cold, salt resistance
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Botany (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明公开了大豆蛋白GmAIRP1及其编码基因在培育抗逆性植物中的应用。本发明提供了如下1)‑3)中任一种物质在调控植物抗逆性中的应用：1)蛋白；2)编码蛋白的DNA分子；3)含有编码蛋白的DNA分子的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌；本发明的实验证明，本发明将基因GmAIRP1转入烟草中，得到转GmAIRP1烟草，用干旱胁迫条件处理转GmAIRP1烟草和野生型烟草，转GmAIRP1烟草长势优于野生型烟草；对两组植株的POD、CAT、MDA、脯氨酸含量测定结果显示，转基因植株清除自由基和调节渗透压的能力总体高于野生植株，揭示GmAIRP1可能参与了植物的抗干旱调控过程，为培育抗干旱性植物奠定基础。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种大豆蛋白GmAIRP1及其编码基因在培育抗逆性植物中的应用。
背景技术
盐碱、干旱等非生物胁迫是限制植物生长发育的主要环境因子。这些环境因子导致植物体内发生一系列的生理代谢反应，表现为代谢和生长的可逆性抑制，严重时甚至引起不可逆伤害，导致整个植株死亡。植物在长期的进化中，逐渐形成了一系列应答逆境胁迫的防御机制，其中泛素/26S蛋白酶体途径是应答胁迫的一个重要途径。泛素连接酶E3决定靶蛋白的特异性识别，在泛素化过程中具有至关重要的作用。
大豆是我国重要的经济作物和粮食作物，干旱、盐碱等非生物胁迫导致其产量和品质均大大下降，既不能满足国内人民生活的需求，也极大限制了大豆的出口。探究泛素/26S蛋白酶体途径在大豆抵御非生物胁迫中的功能与作用机制、挖掘相关调节基因，将有助于推动大豆抗逆遗传育种。
发明内容
本发明一个目的是提供如下1)-3)中任一种物质的新用途。
本发明提供的如下1)-3)中任一种物质在调控植物抗逆性中的应用：1)蛋白；2)编码蛋白的DNA分子；3)含有编码蛋白的DNA分子的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌；
所述蛋白为如下(1)或(2)：
(1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(2)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(1)衍生的蛋白质。
上述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加为不超过10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。
本发明另一个目的是提供如下1)-3)中任一种物质的新用途。
本发明提供的如下1)-3)中任一种物质在培育抗逆植物中的应用：
1)蛋白；
2)编码蛋白的DNA分子；
3)含有编码蛋白的DNA分子的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌；
所述蛋白为如下(1)或(2)：
(1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(2)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(1)衍生的蛋白质。
上述应用中，所述编码蛋白的DNA分子是如下1)至3)中任一所述的DNA分子：
1)序列表中序列1所示的DNA分子；
2)在严格条件下与1)所限定的DNA分子杂交且编码由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质的DNA分子；
3)与1)所限定的DNA分子至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且编码由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质的DNA分子。
上述严格条件可为在6×SSC，0.5％SDS的溶液中，在65℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。
上述应用中，所述调控植物抗逆性为提高植物抗逆性。
上述应用中，所述抗逆为抗干旱。
上述应用中，所述植物为单子叶植物或双子叶植物；所述双子叶植物具体为烟草。
本发明第三个目的是提供一种重组载体。
本发明提供的重组载体，为将编码蛋白的DNA分子插入表达载体中，得到表达蛋白的重组载体；
所述蛋白为如下(1)或(2)：
(1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(2)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(1)衍生的蛋白质。
上述重组载体中，所述编码蛋白的DNA分子是如下1)至3)中任一所述的DNA分子：
1)序列表中序列1所示的DNA分子；
2)在严格条件下与1)所限定的DNA分子杂交且编码由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质的DNA分子；
3)与1)所限定的DNA分子至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且编码由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质的DNA分子。
上述重组载体为将序列表中序列1所示的GmAIRP1基因替换表达载体PBI121的BamHI和SacI酶切位点间DNA片段得到的载体，命名为pBI121-GmAIRP1。
上述转基因植物的抗干旱性高于所述目的植物体现在干旱胁迫或PEG胁迫下，转GmAIRP1烟草的脯氨酸含量高于野生型烟草。
本发明的实验证明，本发明将基因GmAIRP1转入烟草中，得到转GmAIRP1烟草，用干旱胁迫条件处理转GmAIRP1烟草和野生型烟草，转GmAIRP1烟草长势优于野生型烟草；对两组植株的POD、CAT、MDA、脯氨酸含量测定结果显示，转基因植株清除自由基和调节渗透压的能力总体高于野生植株，揭示GmAIRP1可能参与了植物的抗干旱调控过程，为培育抗干旱性植物奠定基础。
附图说明
图1为GmAIRP1基因的RT-PCR扩增结果。
图2为100μmol/L ABA诱导下GmAIRP1基因的表达模式。
图3为20％PEG6000诱导下GmAIRP1基因表模式。
图4为农杆菌中重组质粒的PCR鉴定。
图5为转GmAIRP1烟草的PCR产物电泳检测结果。
图6为转GmAIRP1烟草的RT-PCR检测。
图7为转GmAIRP1烟草的发育进程。
图8为野生型烟草种子与转GmAIRP1烟草种子对比。
图9为转GmAIRP1烟草的抗干旱表型分析。
图10为20％PEG6000处理下转GmAIRP1烟草和野生烟草中的POD、CAT和MDA含量。
图11为20％PEG6000处理下转GmAIRP1烟草和野生烟草中脯氨酸含量。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
合丰45大豆(不同株型大豆群体分布对产量形成的影响.大豆科学，2005，29(4)：634-637.)；
龙江981烟草(烤烟新品种龙江981的选育及其特征特性.中国烟草科学，2015，36(4)：18-23.)
农杆菌菌株为EHA105(影响根癌农杆菌EHA105感受态细胞转化效率因素的研究.热带生物学报，2012,3(1)：22-27.)
植物表达载体质粒PBI121全长14Kb，含有卡那霉素抗性，记载在如下文献中：致病疫霉NLP家族基因PITG_10839的克隆和功能分析.中国农业科学，2014,47(5):895-902。
MS培养基，1/2MS培养基，卡那霉素(Kan)，头孢霉素(Cef)，利福平(Rif)、6BA，NAA等。
RNA提取试剂盒RNAprep pure Plant Kit、DNA琼脂糖凝胶回收试剂盒、质粒DNA提取试剂盒均购自天根生物有限公司；RNA反转录试剂盒First Strand cDNA Synthesis Kit购自东洋纺生物有限公司；限制性内切酶BamHI和SacI均购自NEB公司。ExTaq DNA聚合酶、dNTP、氨苄青霉素(Amp)购自宝生物(大连)有限公司。
实施例1、GmAIRP1基因的克隆及表达模式
一、GmAIRP1基因的克隆
利用primer premier5.0设计引物，并分别在引物5′端加上BamHI和SacI两个限制内切酶识别位点，引物序列如下：
GmAIRP1-P1：5′CGGGATCCATGGGCGGTTGCTGTTGT 3′BamHI
GmAIRP1-P2：5′GGAGCTCTTATTCAATGGGAGGGTCG 3′SacI
提取合丰45大豆的总RNA，反转录得到cDNA作为模板，用GmAIRP1-P1和GmAIRP1-P2进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。
PCR扩增产物电泳结果如图1所示，M:DL2000分子量标准；1～8:PCR扩增产物，得到约640bp大小的目的条带。
将上述PCR扩增产物与pMD-19T simple载体连接，转化E.coli DH5α，通过蓝白斑筛选和PCR鉴定初步筛选出阳性克隆，对阳性克隆进行测序，结果该PCR产物具有序列表中序列1所示的核苷酸，序列表中序列1所示的基因命名为GmAIRP1，该基因的开放阅读框为序列1第1-642位核苷酸，其编码的蛋白命名为GmAIRP1，该蛋白的氨基酸序列为序列表中序列2所示，该蛋白由213个氨基酸残基组成。
二、GmAIRP1基因在逆境胁迫和激素诱导下的表达模式分析
1、逆境胁迫
将合丰45大豆种子播种于蛭石中，在温度为28℃的温室中培养，当幼苗长至第三片三出复叶时，进行各种处理。
(1)干旱胁迫处理：在干燥的蛭石中浇入含20％PFG6000的Hoagland溶液，处理0～24h；
(2)ABA处理：在干燥的蛭石中浇入含100μmol/L ABA Hoagland溶液，处理0～24h。
分别于0.5h、1h、1.5h、3h、6h、12h和24h取不同处理组的大豆叶片，用去离子水冲洗，液氮速冻后于-80℃保存，提取RNA，反转录得到cDNA作为模板，进行RT-PCR。
上述内参及目的基因引物如表1所示，
表1为内参及目的基因引物
ABA胁迫GmAIRP1基因表达结果如图2(上图为电泳图，下图为柱状图)所示，在ABA处理之后，GmAIRP1基因的表达量大致呈现一个先降后升的趋势，通过柱状图可以观察到，在处理后1h和6h时表达量最高，1h时达到峰值，在12h后该基因表达量趋于平稳，这表明短时间的ABA处理能够诱导该基因上调表达。
PEG6000胁迫GmAIRP1基因表达结果如图3(上图为电泳图，下图为柱状图)所示，在20％PEG6000处理后，GmAIRP1基因的表达趋势相比ABA处理后的表达趋势有所平缓，基本上都维持在比较高的表达量。同样在0.5h该基因表达量有所下降，在1h上升，直到3h后达到最大峰值，之后表达量趋于平稳，大致呈现一个先下降后上升的趋势。这表明，短时间的干旱胁迫也可以诱导该基因表达量的升高。
实施例2、GmAIRP1基因的功能鉴定
一、重组载体的构建
将实施例1的一获得的642bp的PCR产物经过BamHI和SacI酶切，与经过相同酶切的表达载体PBI121连接，得到重组载体。
经过测序，重组载体为将序列表中序列1所示的GmAIRP1基因替换表达载体PBI121的BamHI和SacI酶切位点间DNA片段得到的载体，命名为pBI121-GmAIRP1。
二、重组菌的制备
三亲杂交法将目的质粒pBI121-GmAIRP1导入农杆菌EHA105，具体如下：
(1)将受体农杆菌EHA105接种于含有100mg/L利福平的YEP固体培养基上，28℃培养，待长出单菌落，挑取一个单菌落接种于液体培养基中，28℃振荡培养。
(2)将含有prk2013(上海北诺生物科技有限公司，货号addgene 0697，Kan抗性)的大肠杆菌接种于LB固体培养基上，37℃培养，待长出单菌落，挑取一个单菌落接种于液体培养基中，37℃振荡培养(1天)。
(3)挑选带有pBI121-GmAIRP1质粒的大肠杆菌单菌落在含50mg/L的Kan液体LB培养基中37℃震荡培养(1天)。
(4)待三种菌长到OD为0.5左右时，等体积(共150～200μl)混匀，涂布于不含任何抗生素的YEP固体培养基上，28℃过夜培养。
(5)将长出的菌落转接到含有100mg/L利福平和50mg/L Kan的YEP固体培养基上，28℃培养2-4天，长出单菌落。
(6)将单菌落再次转接到含有100mg/L利福平和50mg/L Kan的YEP固体培养基上，28℃培养2天，长出单菌落。
将上述单菌落培养于50mg/L利福平和50mg/L Kan的YEP液体培养基中，提取质粒，用引物GmAIRP1-P1、GmAIRP1-P2进行扩增。
结果如图4所示，M：DL2000分子量标准；1-2：单克隆菌落PCR产物；3：空白对照，得到642bp的为阳性克隆，将上述阳性克隆命名为EHA105/pBI121-GmAIRP1。
三、转GmAIRP1烟草的获得
1、农杆菌介导的烟草遗传转化制备转GmAIRP1烟草
(1)无菌苗的获得
取龙江981烟草(以下也称为野生型烟草)种子在95％的乙醇中浸泡1min，用无菌水冲洗4次，然后用10％的次氯酸钠浸泡15min，无菌水冲洗6次，将种子接种到MS培养基上或铺有3-4层潮湿的滤纸上，待植株长到4-5片真叶时即可用于感染。
(2)预培养：取烟草叶片，无菌条件下用解剖器将烟草叶片切成约5mm直径的叶盘，放入MS1(MS+2mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA)培养基中预培养48小时。
(3)农杆菌活化：挑取一个转化后的农杆菌单菌落，接种于10mlYEP液体培养基(含50mg/L Rif和50mg/L Kan)中，28℃，250r/min振荡培养过夜，次日，以1：100比例转接至20ml上述YEP培养基中活化(为避免生长过度，可多接种几瓶)，28℃，250r/min振荡培养至对数生长期(OD600＝0.5～0.6)。
(4)侵染与共培养：将烟草叶圆片浸入活化的农杆菌菌液中5～8min。用灭菌的滤纸吸净多余的菌液，置于MS1培养基上，于黑暗处28℃共培养30～48h。
(5)芽诱导：将叶片转置于诱导出芽的MS2选择培养基(MS1+100mg/LKan+500mg/LCef)上，室温25℃，16h，3000Lux光照条件下培养。三天转一次，连续转三次后，以后每两周转一次。
(6)生根和移栽：待不定芽长到1厘米左右时，将芽转移至MS3培养基(1/2MS+0.2mg/L NAA+l00mg/L Kan+250mg/LCef)上诱导生根，等根长到6-7厘米时，移至蛭石中，一个星期后将植株移入土壤中，得到T0代转GmAIRP1烟草。
上述发展流程如图7所示，A:愈伤组织的诱导和分化；B：再生植株；C：阳性植株开花与结实。
2、转GmAIRP1烟草的分子生物学鉴定
1)PCR鉴定
提取T0代转GmAIRP1烟草叶片的基因组DNA，用引物GmAIRP1-P1、GmAIRP1-P2进行PCR扩增，得到PCR产物。以野生型烟草为对照。
PCR产物电泳结果如图5所示，M：DL2000分子量标准；1-7：T0代转GmAIRP1烟草；8：阳性对照pBI121-GmAIRP1；9：野生型烟草对照；10：空白对照，得到642bp为PCR鉴定阳性T0代转GmAIRP1烟草。
(2)RT-PCR鉴定
提取上述PCR鉴定阳性T0代转GmAIRP1烟草的RNA，反转录为cDNA，用GmAIRP1基因引物P1、P2进行RT-PCR检测，得到PCR产物。
PCR产物电泳结果如图6所示，M：DL2000分子量标准；1-3：阳性T0代转GmAIRP1烟草；4：野生型烟草对照；5：空白对照6：阳性对照pBI121-GmAIRP1，得到642bp为阳性T0代转GmAIRP1烟草。
采用同样的方法将pBI121载体转入野生型烟草中，得到T0代转pBI121烟草，采用同样的方法进行PCR鉴定和RT-PCR鉴定，结果与野生型烟草无显著差异。
T0代收种得到T1代。
四、转GmAIRP1烟草的表型及抗逆性检测
1、表型检测
观察阳性T0代转GmAIRP1烟草和野生型烟草的种子，结果如图8所示，A：野生型烟草种子；B：阳性T0代转GmAIRP1烟草种子，可以看出，阳性T0代转GmAIRP1烟草种子相比野生型烟草种子颜色更深，接近黑色，籽粒也没有野生型种子饱满，推测可能是因为外源基因的转入影响了烟草的结实，具体作用机制还需进一步研究。
2、转基因烟草的抗逆性鉴定
10mmol/L pH7.0的磷酸缓冲液；POD反应液；CAT反应液；3％磺基水杨酸水溶液；2.5％酸性茚三酮显色液；甲苯；85％磷酸；冰乙酸；10％TCA；0.6％TBA；Hoagland溶液；NaCl；PEG6000；6-BA；NAA等。
1)将阳性T0代转GmAIRP1烟草进行无性繁殖
选用阳性T0代转GmAIRP1烟草的幼叶叶片，经去离子水洗后用70％乙醇擦洗叶片表面，后立即置于10％次氯酸钠溶液中进行表面灭菌6分钟，接着在无菌条件下，用无菌去离子水洗涤4-5次，用无菌吸水纸吸去叶片表面的水分，并除去主脉。切成约5x 5(毫米)的小块，接种于装有MS(2mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+100mg/L Kan)培养基，每瓶5块。材料接种后,将培养瓶置于25士l℃的恒温培养间进行培养,每天用日光灯光照10小时，将所得芽转入1/2MS(0.2mg/L NAA+100mg/L Kan)培养基中进行生根处理，待幼苗长出2-3片幼叶，作为无性繁殖转GmAIRP1烟草。
2)胁迫处理
将上述无性繁殖转GmAIRP1烟草、野生型烟草和T0代转pBI121烟草分别移到含有含有200mmol/L甘露醇的1/2MS培养基中，置于25士l℃的恒温培养室进行培养，每天用日光灯光照10小时，21天后观察幼苗生长形态，并拍照。
结果如图9所示，上：野生型植株(A1-A3)；下：无性繁殖转GmAIRP1烟草(B1-B3)，可以看出，在干旱处理下，转GmAIRP1烟草生长情况好于野生型烟草，因此转GmAIRP1烟草(B1-B3)的抗干旱性高于野生型烟草。
3)检测胁迫处理后相关生理指标
选取无性繁殖转GmAIRP1烟草、野生型烟草和T0代转pBI121烟草栽种于蛭石中，用Hoagland溶液培养一个月，选择长势一致的植株分别进行胁迫处理。干旱胁迫处理：在干燥的蛭石中浇入含20％PEG6000的Hoagland溶液，处理3d。分别在第1d、2d、3d进行取材，将所取材料用液氮冷冻后存于-80℃冰箱待用。实验设三次重复。
A、抗氧化酶活性测定
(1)酶液的提取
分别称取0.1g各组经干旱胁迫处理的无性繁殖转GmAIRP1烟草、野生型烟草和T0代转pBI121烟草叶片加入2ml预冷的50mmol/L磷酸缓冲液，充分研磨至无粗纤维为止，分装在小离心管中，再用1ml pH7.0的磷酸缓冲液洗净研钵，洗液一并转入50ml心管中，10000rpm离心20min，吸取上清液2ml即为POD和CAT粗酶提取液。
称取0.15g各组经干旱胁迫处理的无性繁殖转GmAIRP1烟草、野生型烟草和T0代转pBI121烟草叶片，加1ml的10％TCA于研钵中研磨，然后再加0.5ml TCA继续研磨，匀浆在4000r/min离心10min,上清液即为MDA粗酶提取液。
(2)酶活性测定
a、POD活性的测定
取上清液50μl加入比色杯中(对照加磷酸缓)，加3ml反应液，马上读470nm下的OD值并计时，每隔1min读1次OD470值(读0，1，2min)。
计算公式：POD总活性(Ug/min)＝△A470*VT/VS*W*0.01*t；
注：△A：反应时间内吸光值的变化，VT：总粗酶液体积(ml)，VS：测定时所用粗酶液体积(ml)，W：样品鲜重(g)，t：时间(min)。
b、CAT活性的测定
分别吸取上清酶液和用沸水煮过的上清酶液200μl加入比色杯中(对照加磷酸)，加3ml反应液，马上读240nm下的OD值并计时，每隔30S再读一次(读第0，1，2，3min的OD值)。
计算公式：CAT总活性(Ug/min)＝[A1-(A2+A3)/2]*VT/0.1*VS*W*t；
注：A1:加入煮死酶液的对照管吸光值，A2、A3：样品吸光值，VT：总粗酶液体积(ml)，VS：测定时所用粗酶液体积(ml)，W：样品鲜重(g)，t：时间(min)。
c、MDA活性的测定
取离心的上清液2ml(对照用2ml蒸馏水代替)，加入2ml 0.6％TBA，混合后于沸水中反应15min,取上清夜测定450、532及600nm处的OD值。
计算公式：
MDA浓度(μmol/L)＝6.45×(D532-D600)-0.56×D450
MDA含量(μmol/g)＝MDA浓度(μmol/L)×提取液体积(ml)/鲜重(g)
结果如图10所示，可以看出，在20％PEG6000处理下两组植物的POD含量大致呈现出先升后降的趋势。胁迫第1天，转GmAIRP1烟草的POD活性达到最大峰值，显著高于野生型烟草POD的活性。随着胁迫时间增加两组植株POD活性均下降，可能是随着胁迫时间的增长，两组植株氧化物酶系统遭到破坏所致。由此推测，短时间内转GmAIRP1烟草可先启动抗氧化酶系统抵御外界胁迫。
20％PEG6000处理下两组植株的CAT活性变化大致呈现先降低后升高最后降低的趋势，在胁迫第二天达到峰值。转GmAIRP1烟草的CAT的活性均高于野生型烟草。
20％PEG6000处理下，转GmAIRP1烟草与野生型烟草的MDA含量都不断累积，但转GmAIRP1烟草MDA含量均低于野生植株，表明膜质过氧化程度低于野生型植株，可能的原因是GmAIRP1基因的表达能更有效的启动转基因植株的抗氧化酶系统，以降低干旱对膜的损伤程度。
野生型烟草和T0代转pBI121烟草结果无显著差异。
由此推测，干旱胁迫下，转基因植株的抗逆性高于野生植株。
B、游离脯氨酸含量的测定
在正常的生长环境下，植物中游离脯氨酸的含量较低，但植物遇到干旱、低温、盐碱等逆境胁迫时，游离的脯氨酸会大量累积，且累积指数与植物的抗逆性呈正相关，因此，脯氨酸可以作为植物抵抗逆境胁迫的一项生理生化指标。
(1)标准曲线的制作
取6支具塞试管分别按下表加入下列试剂：
表2
加入表中试剂后，置于沸水浴中加热30min。取出冷却，各试管再加入4ml甲苯，振荡30秒钟，静置片刻，使色素全部转至甲苯溶液。用移液器轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯溶液至比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，在520mm波长处测定OD值。以1～5号管脯氨酸含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。求出线性回归方程(y＝0.018x-0.0205R2＝0.9741)。根据线性回归方程和计算公式求出游离脯氨酸的含量。
(2)样品的测定
1)脯氨酸的提取
称取各组经干旱胁迫处理的无性繁殖转GmAIRP1烟草、野生型烟草和T0代转pBI121烟草叶片各0.2g，分别置大试管中，然后向各管分别加入5ml 3％的磺基水杨酸溶液，在沸水浴中提取10min(提取过程中要经常摇动)，冷却后过滤于干净的试管中，滤液即为脯氨酸的提取液。实验设三次重复。
2)脯氨酸含量的测定
吸取2ml提取液于带玻塞试管中，加入2ml冰醋酸及2ml 2.5﹪酸性茚三酮试剂，在沸水浴中加热30min，溶液即呈红色。冷却后加入4ml甲苯，摇荡30秒钟，静置片刻，取上层液至10ml离心管中，在3000r/min离心5min。用吸管轻轻吸取上层脯氨酸红色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，在520mm波长处测定OD值。
3)计算公式：
从标准曲线上查出样品测定液中脯氨酸的含量，按下公式计算样品中脯氨酸含量：
脯氨酸含量(μg·g－1Fw)＝X×提取液总量(ml)/样品鲜重(g)×测定时提取液用量(ml)。
注：X为从标准曲线中查得的脯氨酸含量(μg)
结果如图11所示，20％PEG6000处理下，转GmAIRP1烟草的游离脯氨酸的含量随着胁迫天数的增加呈迅猛上升趋势，虽然野生型烟草的游离脯氨酸含量也有所上升，但是上升幅度小，显著低于转GmAIRP1烟草的游离脯氨酸含量。
野生型烟草和T0代转pBI121烟草结果无显著差异。
Claims (3)
1.如下1）-3）中任一种物质在调控植物抗逆性中的应用：
1）蛋白；
2）编码蛋白的DNA分子；
3）含有编码蛋白的DNA分子的重组载体、表达盒或重组菌；
所述蛋白为由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；所述调控植物抗逆性为提高植物抗逆性；所述抗逆为抗干旱；所述植物为烟草。
2.如下1）-3）中任一种物质在培育抗逆植物中的应用：
1）蛋白；
2）编码蛋白的DNA分子；
3）含有编码蛋白的DNA分子的重组载体、表达盒或重组菌；
所述蛋白为由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；所述调控植物抗逆性为提高植物抗逆性；所述抗逆为抗干旱；所述植物为烟草。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：
所述编码蛋白的DNA分子是序列表中序列1所示的DNA分子。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610127492.XA CN105585620B (zh) | 2016-03-07 | 2016-03-07 | 大豆蛋白GmAIRP1及其编码基因在培育抗逆性植物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610127492.XA CN105585620B (zh) | 2016-03-07 | 2016-03-07 | 大豆蛋白GmAIRP1及其编码基因在培育抗逆性植物中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105585620A CN105585620A (zh) | 2016-05-18 |
| CN105585620B true CN105585620B (zh) | 2019-02-01 |
Family
ID=55925554
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610127492.XA Expired - Fee Related CN105585620B (zh) | 2016-03-07 | 2016-03-07 | 大豆蛋白GmAIRP1及其编码基因在培育抗逆性植物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105585620B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105585621B (zh) * | 2016-03-07 | 2019-03-12 | 哈尔滨师范大学 | 大豆蛋白GmAIRP1及其编码基因与应用 |
| CN115873085B (zh) * | 2022-07-10 | 2023-11-10 | 哈尔滨师范大学 | 一种大豆基因GmMAX2a在植物抗逆中的应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104892741A (zh) * | 2014-03-05 | 2015-09-09 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 植物耐逆性相关蛋白GmNF-YA17及其编码基因和应用 |
| CN105585621A (zh) * | 2016-03-07 | 2016-05-18 | 哈尔滨师范大学 | 大豆蛋白GmAIRP1及其编码基因与应用 |
-
2016
- 2016-03-07 CN CN201610127492.XA patent/CN105585620B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104892741A (zh) * | 2014-03-05 | 2015-09-09 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 植物耐逆性相关蛋白GmNF-YA17及其编码基因和应用 |
| CN105585621A (zh) * | 2016-03-07 | 2016-05-18 | 哈尔滨师范大学 | 大豆蛋白GmAIRP1及其编码基因与应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 大豆E3泛素连接酶基因GmAIRP1的克隆与功能鉴定;朱美娇;《万方学位论文全文数据库》;20151229;摘要及及第14页第2.3.2.1节及图2-4 |
| 泛素/26S蛋白酶体途径调节非生物胁迫的研究进展;朱美娇等;《北方园艺》;20151231(第3期);第188-192页 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105585620A (zh) | 2016-05-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105255915B (zh) | 拟南芥AtGDSL基因在油菜抗菌核病及促进种子萌发中的应用 | |
| CN110791523A (zh) | 一种棉花抗旱相关基因GhRCHY1及其应用 | |
| CN109553671A (zh) | 枳抗寒基因PtrTZF1及其在植物抗寒遗传改良中的应用 | |
| CN108841841A (zh) | 一种番茄转录因子SlbZIP6的克隆及其在抗高温胁迫中的应用 | |
| CN109306000A (zh) | 抗逆相关蛋白IbBBX24及其编码基因与应用 | |
| CN110577960B (zh) | 梨木质素合成基因PbMC1a/1b及其在果实品质遗传改良中的应用 | |
| CN104694491B (zh) | 玫瑰的花青素还原酶RrANR基因及其编码蛋白和应用 | |
| CN106496313B (zh) | 抗病相关蛋白IbSWEET10及其编码基因与应用 | |
| CN108486149B (zh) | 一种黄瓜CsWRKY50基因在增强黄瓜霜霉病抗性中的应用 | |
| CN105585620B (zh) | 大豆蛋白GmAIRP1及其编码基因在培育抗逆性植物中的应用 | |
| CN105585621B (zh) | 大豆蛋白GmAIRP1及其编码基因与应用 | |
| CN104388448B (zh) | 一种玉米磷脂酶A2基因ZmsPLA2-1及其应用 | |
| CN102120996A (zh) | 葡萄白藜芦醇-氧-甲基转移酶催化白藜芦醇生成紫檀芪的方法 | |
| CN112430584B (zh) | 一种杜梨泛素连接酶基因、编码蛋白及其在植物抗旱遗传改良中的应用 | |
| CN109468333A (zh) | 柑橘漆酶家族基因CsiLAC4及其应用 | |
| CN109392702A (zh) | 一种人工选育正常茭白的方法 | |
| CN106749580B (zh) | 植物耐盐相关蛋白TaPUB15-D及其编码基因与应用 | |
| CN108315335A (zh) | 梨干旱诱导转录因子PbrWRKY53及其在提高植物抗旱能力方面的应用 | |
| CN115491380B (zh) | 植物脂氧合酶基因lox及其在植物广谱抗病性中的应用 | |
| CN109370922A (zh) | 一对成功实现茭白正常茭人工选育的菰黑粉菌及其应用 | |
| CN106349355B (zh) | 抗逆相关蛋白IbCPK28及其编码基因与应用 | |
| CN106701783B (zh) | 水稻基因OsDF1及抗病调控功能的应用 | |
| CN115058435A (zh) | 一种仁用杏Pasdehydrin-3基因及其在抗寒、促开花或种子结实中的应用 | |
| CN116606358A (zh) | GmTLP8蛋白及其编码基因在调控植物耐逆性中的应用 | |
| CN109182359B (zh) | 一种梨抗寒基因PbrBAM3及其表达载体、应用和编码的蛋白质及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20190201 |