CN113156108A - 一种毛发毒品五联荧光检测试纸及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提出了一种毛发毒品五联荧光检测试纸及其制备方法。本发明阐述同时检测毛发中五个毒品项目的荧光五联检测试纸及其制备方法。所述五联检试纸包括五个检测项目：冰毒(MET)、氯胺酮(KET)、吗啡(MOP)、大麻(THC)、摇头丸(MDMA)。所述每个项目试纸包括PVC底板、样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜(NC膜)以及吸水纸几大组成部分。本发明的试纸利用免疫荧光层析技术，检测结果准确性强、灵敏度高、效率高、便携易操作，适合样本的现场批量筛查。组装至定制卡壳中，可人工判断也可使用配套自研设备，检测快速、精准，直接检测出毛发中五个毒品项目的含量情况。
Description
技术领域
本发明涉及生物检测领域，具体而言，本发明涉及同时检测毛发中五个毒品项目(包括冰毒、氯胺酮、吗啡、大麻、摇头丸)的荧光五联检测试纸及其制备方法。
背景技术
一直以来，在吸毒检测领域，检材一般仅限于唾液、血液或尿液样本，相对于这些检材获取繁琐，毛发样本提取更简便，无需特殊场所，不会侵犯受检人隐私问题，在最大程度保证了受检人的公民权益。另外，毛发检测基于毒品代谢物会被毛发蛋白固定的原理，通过检测相应部位和长度的毛发，能够反映出较长一段时间内的被检测人是否具有吸毒行为，也就能确定吸毒人员是否具有吸毒成瘾的问题。不同于唾液、血液或尿液样本中毒品检出灵敏度μg/ml的检出级别，毛发中毒品检出灵敏度需达到ng/mg的检出级别，如冰毒在唾液中的最低检出含量为50ng/ml，在尿液中的最低检出含量为1000ng/ml，而在毛发中的检出含量0.2ng/mg。本发明采用荧光免疫层析技术对毛发中五种毒品进行检测，荧光免疫层析技术作为一项新型免疫检测技术，相对于传统胶体金免疫层析，荧光免疫层析技术保留了现场快速检测的特点，但同时也具备灵敏度更高、特异性更强，并且可以消除胶体金背景对检测结果影响的优势。
发明内容
针对现有技术，本发明提供了一种毛发毒品五联荧光检测试纸，该试纸可同时定性检测毛发中的冰毒、氯胺酮、吗啡、大麻、摇头丸五个项目，节省人力物力。采用了荧光免疫层析技术，可更稳定、更灵敏的得出检测结果。
本发明采用定制卡壳组装装配试纸，可采用特定光源对结果进行人工判断，也可匹配使用自研配套设备进行结果读取，3～5分钟即可高速、精准的读取结果并出具规范的检测报告，操作人员经过简单培训即可自行进行操作，对于专业水平要求低。
本发明五个项目试纸采用同一卡壳组装，每个项目试纸各自独立又相互连接。每个项目均各自有一条C线控制线，一条T线测试线，验证互不干扰；五个项目试纸使用样品连接垫进行连接，同一样本即可同时检测五个项目。本发明所述各荧光试纸包括PVC底板、样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜(NC膜) 以及吸水纸。每个组成部分按照层析方向相互重叠组合在一起，再裁切成4mm 宽的试纸小条，再将五个项目的试纸装至定制卡壳对应位置中，使用样品连接垫连接在一起，盖上上盖即得五联检测试纸。具体操作如下：
1.将所述硝酸纤维素膜(NC膜)粘贴在所述PVC底板设定好的中部位置；
2.将所述吸水纸粘贴在所述硝酸纤维素膜(NC膜)上侧并与硝酸纤维素膜之间保持1.5～0.2cm的重叠；
3.将所述结合物垫粘贴在所述硝酸纤维素膜(NC膜)的另外一侧底板上，并与硝酸纤维素膜保持1.5～0.2cm的重叠；
4.将所述样品垫粘贴在所述结合物垫的另一侧底板上，并与结合物垫保持1.5～0.2cm的重叠。
本发明涉及的试纸NC膜上设置有一条测试线(T线)和一条控制线(C线)， C线喷涂有羊抗鼠或羊抗兔，T线喷涂有对应各项目BSA偶联的抗原。样品垫、结合垫都是经过了各自处理液浸泡再烘干的，其中结合垫上需要喷涂上对应项目的荧光微球-抗体结合物，经过烘干才能得到结合物垫。具体操作如下：
选用Bangs粒径为200nm的荧光微球，分别使用兔IgG多克隆抗体、冰毒单抗、氯胺酮单抗、吗啡单抗、大麻单抗、摇头丸单抗进行标记，每个原料标记的终浓度不一样，先将原料稀释至中间浓度后再进行标记。其中中间浓度：兔IgG多克隆抗体为2.0mg/ml，冰毒单抗为1.0mg/ml，氯胺酮单抗1.0mg/ml，吗啡单抗为1.0mg/ml，大麻单抗为0.5mg/ml，摇头丸单抗为1.0mg/ml。
1.取225μl MES溶液(浓度0.05M，PH值6.0)，加入25μl荧光微球，混匀后加入10μlEDC(15mg/ml)以及10μlNHS(15mg/ml)溶液，活化20分钟；
2.使用高速冷冻离心机进行离心，温度4℃，转速12000转/分钟；
3.去除上清，加入225μl BB溶液(浓度0.05M，PH6.0)，加入中间浓度的抗体25μl，超声分散后标记3小时；
4.使用高速冷冻离心机进行离心，温度4℃，转速12000转/分钟；
5.去除上清，加入250μl封闭液，封闭1小时；
6.使用高速冷冻离心机进行离心，温度4℃，转速12000转/分钟；
7.去除上清，加入250μl复溶液，超声分散；
8.所得标记好的荧光微球-抗体结合物喷涂至经过处理的结合垫片上，喷量控制在2～5μl/cm之间，经烘箱37℃烘干8～12小时即得喷涂有荧光微球-抗体结合物的结合物垫，取出后密封室温保存备用。
需要说明的是，一种毛发毒品五联荧光检测试纸为五联检测试纸，可同时检测五个不同项目，组装至定制卡壳，五联检测试纸只需要一次性加600μl～800μl 毛发提取液至加样口，试纸层析3～5min后，即可匹配特定光源照射然后人工进行判断结果，也可以通过自研配套设备进行结果读取，可根据实际情况需求、结果保存需求、成本预算等进行选择。
另外，一种毛发毒品五联荧光检测试纸采用的荧光免疫层析技术，是将免疫荧光与免疫层析技术相结合，利用抗原抗体特异性反应而建立的，相对于胶体金试纸，荧光检测试纸对于样本的抗干扰性能更强，检出灵敏度更高，结果重复性也更好。另一方面，相对于其他毒品检测技术，如气相色谱、液相色谱、气质联用等方法，五联免疫荧光层析试纸既解决了大型仪器无法现场及即时检测的问题，也节约了检测时间以及经费成本。
附图说明
为了更清楚地说明本发明产品、产品制备以及使用，下面给出产品相应附图，以下为附图的简单的介绍：
图1是本发明荧光免疫检试纸的侧面结构示意图；
图2是本发明荧光五联卡的装配后的内部结构示意图；
图3是本发明荧光五联卡的装配后的外部结构示意图；
图4是本发明产品制备过程图；
图5是本发明试纸结果判断图。
具体实施方式
本发明所提供一种毛发毒品五联荧光检测试纸可同时定性检测毛发中的冰毒、氯胺酮、吗啡、大麻、摇头丸。此五联荧光检测试纸包含五个项目试纸，通过样品连接垫连接组合在一起得到五联检测试纸，每一个项目试纸包括硝酸纤维素膜(NC膜)、吸水纸、样品垫、结合物垫等重要组成部分。其中NC膜上设置有一条测试线(T线)和一条控制线(C线)，C线喷涂有羊抗鼠或羊抗兔，T线喷涂有对应各项目BSA偶联的抗原，结合物垫上喷涂有荧光微球-抗体标记物。
下面通过具体实施例和附图对本发明申请进一步详细说明
实施例1
本发明可同时检测五个项目，包括冰毒、氯胺酮、吗啡、大麻、摇头丸，每一个项目试纸包含PVC底板、样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜(NC膜) 以及吸水纸几个重要组成部分，每个部分按照层析方向按顺序重叠组合在一起，形成五个不同项目的试纸，详细操作如下：
步骤1)将所述喷涂有C/T线的硝酸纤维素膜(NC膜)粘贴在所述PVC 底板固定位置；
步骤2)将所述吸水纸粘贴在所述硝酸纤维素膜(NC膜)上部，吸水纸与硝酸纤维素膜之间保持1.5～2mm的重叠；
步骤3)将所述结合物垫粘贴在所述硝酸纤维素膜(NC膜)的下部底板上，结合物垫压在硝酸纤维素膜上方并保持1.5～2mm的重叠；
步骤4)结合物垫另一端与所述样品垫连接，样品垫压在结合物垫上方并保持结合物垫与样品垫有1.5～2mm的重叠。
步骤5)使用裁条机进行裁条，试纸宽4mm，侧面观察即得荧光检测试纸的侧面结构示意图(图1)。
步骤6)将试纸按照项目顺序组装至定制卡壳中，用样品连接垫将五个项目试纸进行连接，可见五联荧光检测试纸装配后的内部结构示意图(图2)
步骤6)盖上卡壳上盖，可得到装袋前的五联试剂卡，其外观图可见装配后的外部结构示意图(图3)
实施例2
本发明包含PVC底板、样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜(NC膜)以及吸水纸几个重要组成部分，其中样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜(NC膜)均需经过特殊处理。
样品垫需要使用样品垫处理液进行浸泡，再经过烘箱37℃烘干；结合物垫由荧光微球-抗体结合物按照各项目对应量喷涂到结合垫上再经过烘箱37℃烘干得到。所述荧光微球-抗体结合物需按照特殊标记步骤将荧光微球与抗体结合在一起；所述结合垫需要使用结合垫处理液进行浸泡，再经过烘箱37℃烘干；硝酸纤维素膜(NC膜)上包括质控线(C线)与检测线(T线)两部分，将喷涂各项目BSA全抗原、羊抗鼠或羊抗兔二抗上的包被液分别喷涂到固定位置，再经过烘箱37℃烘干。
为了更直观体现产品制备过程，对各组成部分制备流程做了产品制备过程图(图4)
实施例3
本发明采用的荧光免疫层析技术，是将免疫荧光与免疫层析技术相结合，利用抗原抗体特异性反应而建立的，相对于胶体金试纸，荧光检测试纸对于样本的抗干扰性能更强，检测结果更稳定，荧光试纸的检出灵敏也更高，结果重复性也更强。另一方面，相对于其他毒品检测技术，如气相色谱、液相色谱、气质联用等方法，五联免疫荧光层析试纸既解决了大型仪器无法现场即时检测的问题，也节约了检测时间以及经费成本。
一种毛发毒品五联荧光检测试纸可匹配特定光源照射然后人工进行结果判断，也可以通过自研配套设备进行结果判断。判断结果可为阴性、阳性、无效，当试纸只有C线时，结果判为阳性；当试纸只有T线时，结果判为无效；当试纸C线、T线均存在的情况下，结果判为阴性，T线会因不同样本或其他情况出现深浅不一的情况。具体可见五联荧光检测试纸结果判断图(图5) 。
Claims (8)
1.一种毛发毒品五联荧光检测试纸，其特征在于，所述荧光试纸组成部分包括PVC底板、样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜(NC膜)以及吸水纸。
2.一种毛发毒品五联荧光检测试纸，其特征在于，采用了荧光免疫层析技术，根据不同待测项目，采用不同的单克隆抗体和抗原，可定性检测毛发中五个毒品项目的含量情况。
3.一种毛发毒品五联荧光检测试纸，其特征在于，产品包括五个项目试纸，五个项目试纸组装至定制卡壳内，检测卡可匹配自研配套设备进行结果读取，直接出具规范的检测报告。
4.一种毛发毒品五联荧光检测试纸，其特征在于，所测的五个项目包括冰毒(MET)、氯胺酮(KET)、吗啡(MOP)、大麻(THC)、摇头丸(MDMA)。
5.一种毛发毒品五联荧光检测试纸，其特征在于，仅需3～5分钟即可知道所测五个项目在毛发中的含量情况。
6.一种毛发毒品五联荧光检测试纸，其特征在于，所述试纸包括的样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜(NC膜)均需经过特殊处理：样品垫需用对应处理液浸泡后烘干；结合物垫由对应项目的荧光微球-抗体标记物喷涂到处理过的结合垫上烘干而得；硝酸纤维素膜上设置有一条测试线(T线)和一条控制线(C线)，C线喷涂有羊抗鼠或羊抗兔，T线喷涂有对应各项目BSA偶联的抗原。
7.一种毛发毒品五联荧光检测试纸，是将PVC底板、样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜(NC膜)以及吸水纸各组成部分按照一定顺序重叠组合在一起，形成五个不同项目的试纸。
8.一种毛发毒品五联荧光检测试纸按步骤粘贴好之后裁切至规定尺寸，并组装至定制卡壳中，使用处理过的样品连接垫进行连接，得到五联检测试纸。
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