CN113149996B - 一种作为cdk9抑制剂的多环酰胺类衍生物、其制备方法及用途 - Google Patents

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Abstract

本发明属于多环酰胺类衍生物技术领域，具体涉及一种作为CDK9抑制剂的多环酰胺类衍生物、其制备方法及用途。所述多环酰胺类衍生物表现出优异的CDK9酶抑制活性，可用于制备治疗癌症的药物，所述癌症尤其是血液癌，包括急性髓细胞白血病、多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞性白血病、滤泡性淋巴瘤等和实体瘤，包括乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、肝细胞癌、胰腺癌、肾癌、胃癌、结直肠癌和肺癌等。

Description

一种作为CDK9抑制剂的多环酰胺类衍生物、其制备方法及 用途
技术领域
本发明属于多环酰胺类衍生物技术领域，具体涉及一种作为CDK9抑制剂的多环酰胺类衍生物、其制备方法及用途。
背景技术
细胞周期依赖蛋白激酶(CDKs)是一类丝氨酸/苏氨酸激酶，在细胞周期调节及细胞转录过程中起着关键的作用，其作为治疗癌症和其他一些疾病的重要靶点受到越来越多的关注。CDKs家族共有13个结构类似的不同亚型，可以被10个左右的细胞周期蛋白激活，发挥不同的生物学功能。根据作用机制不同，一般分为细胞周期性CDK(CDK1-6)和转录性CDK(CDK7-9)。CDK9主要参与转录调控过程，由CDK9和cyclin(T1、T2a、T2b、K)组成的异源二聚体参与组成正性转录延长因子(P-TEFb)，在转录调控过程中发挥关键作用。CDK9具有经典的蛋白激酶折叠，由C-端和N-端激酶域及一个小的C-端延伸区组成。CDK9作为P-TEFb的亚单位参与转录的延长过程，在转录过程中发挥重要作用。CDK9调控短寿命抗凋亡蛋白的RNA转录，CDK9通过磷酸化RNApol II来调控抗凋亡蛋白的表达。由RNApol II所催化的转录是一个多步骤过程。RNApol II大亚基的C端结构域包含串联的七肽重复序列上的Ser和Thr的磷酸化在转录过程中起重要作用。P-TEFb复合物中的CDK9磷酸化RNApol II CTD 2位Ser的同时，也会磷酸化敏感的诱导因子DSIF和负性延长因子NELF。磷酸化会使NELF离去，同时会使DSIF转化为正性转录因子，随后RNApol II进入转录延长模式，转录延长过程启动1。
抑制CDK9会导致抗凋亡蛋白Mcl-1、XIAP等的下调，从而使这些抗凋亡蛋白失去维持肿瘤细胞稳定性的能力，进而诱导肿瘤细胞的凋亡。CDK9还参与许多细胞功能的调节。选择性地抑制CDK9还可以作为肿瘤侵袭和转移的潜在治疗策略。最近也有报道CDK9的抑制剂能够通过抑制转录和转录后修饰从而下调MYC蛋白，因此对MYC驱动的肿瘤有抑制的作用2。
此外抑制CDK9能够增加肿瘤环境中CD45+细胞数，提高CD3+T细胞的比例和激活树突细胞，因此联合CDK9的抑制剂能够增强肿瘤免疫检验点抑制剂(checkpoint blockage)的免疫响应3。
CDK作为治疗肿瘤和其他一些疾病的重要靶点，近20年来已有许多CDK抑制剂进入临床，并已有选择性CDK4/6抑制剂上市，这为研发选择性CDK抑制剂带来信心和希望。CDK9作为新颖和具有巨大潜力的抗肿瘤药物靶标，受到越来越多的关注，已有多个选择性CDK9抑制剂进入临床(Fadraciclib、Zotitraciclib、KB-130742和AZD-4573等)，以CDK9作为抗肿瘤药物靶标具有广阔应用前景。
目前CDK9抑制剂按其母核结构大致分为：黄酮类、嘧啶类、吡啶类、苯三嗪类等其他类。其中一些CDK9抑制剂对CDK9具有较高的选择性(WO2017001354,WO2018192273,WO2019154177等)。
但这些现有技术中公开的化合物以及试验药物在有效性、安全性或选择性等方面依然存在不确定性，因此有必要研究和开发新的选择性的CDK9抑制剂。
参考文献：
1、Boffo et al.CDK9 inhibitors in acute myeloidleukemia.J.Eep.Clin.Cancer Res.37,36(2018).
2、Blake et al.Application of a MYC degradation screen identifiessensitivity to CDK9 inhibitors in KRAS-mutant pancreaticcancer.Sci.Signal.12,eeav7259(2019).
3、Zhang et al.Targeting CDK9 Reactivates Epigenetically SilencedGenes in Cancer.Cell 175,1244-1258(2018).
发明内容
为了解决现有技术的上述问题，本发明的目的在于提供一种多环酰胺类衍生物、其药学上可接受的盐、其互变异构体或其立体异构体，以筛选出在有效性、安全性和选择性等性能方面均具有优异性能的用作CDK9抑制剂的化合物。
本发明的另一个目的是提供所述衍生物、其药学上可接受的盐、其互变异构体或其立体异构体的制备方法。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种多环酰胺类衍生物、其药学上可接受的盐、其互变异构体或其立体异构体，所述多环酰胺类衍生物的结构如式(I)所示：
Figure BDA0003049272910000021
其中：R1选自氢、卤素、氰基、取代或未取代的C1-C3的烷基或取代或未取代的C1-C3的烷氧基；优选地，所述“取代”是指任选地被1-3个卤素取代；
R2选自5-7元环烷基、5-7元环烯基、7-10元的稠环烷基、7-10元的桥环烷基、7-10元的螺环烷基、6-7元杂环基、6-7元杂环烯基、7-10元的稠杂环基，7-10元的桥杂环基、7-10元的螺杂环基，其中6-7元环烷基、6-7元环烯基、7-10元的稠环烷基、7-10元的桥环烷基、7-10元的螺环烷基、6-7元杂环基、6-7元杂环烯基、7-10元的稠杂环基，7-10元的桥杂环基、7-10元的螺杂环基任选地进一步被1-3个Ra所取代；
Ra选自C1-C3烷基、羟基、卤素、氰基、C1-C3烷氧基、3-7元环烷基、3-7元杂环基、苯基、5-6元的杂芳基、8-10元的稠芳基、8-10元的稠杂芳基、＝O、NH2、NHRb、NRb 2、S(O)Rb、S(O)2Rb、S(O)NH2、S(O)NHRb、S(O)N(Rb)2、S(O)2NH2、S(O)2NHRb、S(O)2N(Rb)2、NHS(O)Rb、NRbS(O)Rb、NHS(O)2Rb、NRbS(O)2Rb、C(O)Rb、C(O)ORb、OC(O)Rb、NHC(O)Rb、NRbC(O)Rb、NHC(O)ORb、NRbC(O)ORb、C(O)NH2、C(O)NHRb、C(O)N(Rb)2，其中所述的烷基、烷氧基、环烷基、杂环基、苯基、5-6元的杂芳基、8-10元的稠芳基、8-10元的稠杂芳基和氨基任选进一步被一个或多个Ra1所取代；
Rb独立地选自取代或未取代的C1-C3的烷基、取代或未取代的3-6元的环烷基或取代或未取代的杂环基；此处“取代”是指任选地被1-3个选自烷基、羟基、卤素、氰基、氨基或烷氧基的取代基取代；
Ra1选自C1-C3烷基、羟基、卤素、氰基、氨基、C1-C3烷氧基、S(O)Rb、S(O)2Rb、S(O)NH2、S(O)NHRb、S(O)N(Rb)2、S(O)2NH2、S(O)2NHRb、S(O)2N(Rb)2、NHS(O)Rb、NRbS(O)Rb、NHS(O)2Rb、NRbS(O)2Rb、C(O)Rb、C(O)ORb、OC(O)Rb、NHC(O)Rb、NRbC(O)Rb、NHC(O)ORb、NRbC(O)ORb、C(O)NH2、C(O)NHRb、C(O)N(Rb)2，其中的烷基和烷氧基任选地进一步被1-3个卤素、羟基、氰基、氨基或烷氧基所取代；
R3是
Figure BDA0003049272910000022
Z为N或CRc；
Rc独立地选自H、卤素、CN、C(O)NH2、C(O)NHRb、C(O)N(Rb)2、C(O)Rb、取代或未取代的C1-C3的烷基、取代或未取代的3-6元的环烷基或取代或未取代的4-7元杂环基，此处“取代”是指任选地被1-3个选自烷基、羟基、卤素、氰基、氨基或烷氧基的取代基所取代；
X和Y连同它们附接的原子一起形成5-7元杂环基或环烷基，其中杂环基包括1-2个选自N、O、S的杂原子；该5-7元杂环基或环烷基可以是饱和的或者是部分饱和的而且其中的环碳可以任选进一步被1-3个Rd取代；
Rd独立地选自卤素、OH、CN、＝O、C1-C3的烷基、3-6元的环烷基或杂环基，其中的烷基、环烷基和杂环基可以任选进一步被1-3个选自烷基、羟基、卤素、氰基、氨基或烷氧基的取代基所取代；
当R3是
Figure BDA0003049272910000023
时，以下条件必须满足至少一个：
(1)R1只能为C1-C3的烷氧基或者被1-3个卤素取代的C1-C3的烷基；
(2)R2选自6-7元杂环烯基、7-10元的稠环烷基、7-10元的桥环烷基、7-10元的螺环烷基、7-10元的稠杂环基，7-10元的桥杂环基、7-10元的螺杂环基，其中6-7元杂环烯基、7-10元的稠环烷基、7-10元的桥环烷基、7-10元的螺环烷基、7-10元的稠杂环基，7-10元的桥杂环基、7-10元的螺杂环基必须同时进一步被1-3个Re取代；
(3)R2被苯基、5-6元杂芳基、8-10元的稠芳基或8-10元的稠杂芳基取代，其中苯基、5-6元杂芳基、8-10元的稠芳基或8-10元的稠杂芳基任选进一步被1-3个Ra1所取代；
Re选自S(O)Rb、S(O)2Rb、S(O)NH2、S(O)NHRb、S(O)N(Rb)2、S(O)2NH2、S(O)2NHRb、S(O)2N(Rb)2、NHS(O)2Rb、NRbS(O)2Rb、C(O)Rb、C(O)ORb、OC(O)Rb、C(O)NH2、C(O)NHRb、C(O)N(Rb)2。
Figure BDA0003049272910000031
优选地，所述多环酰胺类衍生物的结构如式(Ⅱ)所示：
其中，R1、R2和Rc具有与上述通式(I)相同的限定范围。
优选地，所述多环酰胺类衍生物的结构如式(III)所示：
其中，R1、R2和Rc具有与上述通式(I)相同的限定范围。
优选地，所述多环酰胺类衍生物的结构如式(IV)所示：
其中：
R2a选自6-7元杂环烯基、7-10元的稠环烷基、7-10元的桥环烷基、7-10元的螺环烷基、7-10元的稠杂环基，7-10元的桥杂环基、7-10元的螺杂环基，其中6-7元杂环烯基、7-10元的稠环烷基、7-10元的桥环烷基、7-10元的螺环烷基、7-10元的稠杂环基，7-10元的桥杂环基、7-10元的螺杂环基任选进一步被1-3个Re所取代；
R1和Re具有与上述通式(I)相同的限定范围。
优选地，所述多环酰胺类衍生物的结构如式(V)所示：
其中，R1具有与上述通式(I)相同的限定范围，R2a具有与上述通式(IV)相同的限定范围。
优选地，所述多环酰胺类衍生物的结构如式(VI)所示：
其中R2和R3具有与上述通式(I)相同的限定范围。
优选地，所述多环酰胺类衍生物的结构如式(VII)所示：
其中，R4为苯基或5-6元的杂芳基、8-10元的稠芳基、8-10元的稠杂芳基，而且R4任选进一步被1-3个Ra1所取代；R1、R3和Ra1具有与上述通式(I)相同的限定范围。
进一步优选地，所述多环酰胺类衍生物选自如下结构的任意一种：
Figure BDA0003049272910000032
Figure BDA0003049272910000041
Figure BDA0003049272910000051
Figure BDA0003049272910000061
Figure BDA0003049272910000071
Figure BDA0003049272910000081
Figure BDA0003049272910000091
Figure BDA0003049272910000101
Figure BDA0003049272910000111
Figure BDA0003049272910000121
Figure BDA0003049272910000131
第二方面，本发明提供一种如第一方面所述的多环酰胺类衍生物、其药学上可接受的盐、其互变异构体或其立体异构体的制备方法，其选自如下三种方案中的一种：
方案一
Figure BDA0003049272910000141
第一步，通式(I-1)的化合物在碱性条件下，胺基Boc保护，得到通式(I-2)的化合物；
第二步，通式(I-2)的化合物在碱性条件下，在金属催化剂的存在下，得到通式(I-3)的化合物；
第三步，通式(I-3)的化合物和通式(I-4)的化合物在碱性条件下，在金属催化剂和配体的存在下经Suzuki反应，得到通式(I-5)的化合物；
第四步，通式(I-5)的化合物在酸性条件下，脱去Boc保护基得到通式(I-A)的化合物；
第五步，通式(I-A)的化合物和通式(I-B)的化合物在碱性条件下，经缩合反应得到通式(I)的化合物。
方案二
Figure BDA0003049272910000142
第一步，通式(I-4)的化合物在碱性条件下，在金属催化剂的存在下，得到通式(I-Bb)的化合物；
第二步，通式(I-1)的化合物和通式(I-B)的化合物在碱性条件下，经缩合反应得到通式(I)的化合物；
第三步，通式(I-Aa)的化合物和通式(I-Bb)的化合物在碱性条件下，在金属催化剂和配体的存在下经Suzuki反应，得到通式(I)的化合物。
方案三
Figure BDA0003049272910000143
第一步，通式(I-B)的化合物和氯化铵在碱性条件下，经缩合反应得到通式(I-Bbb)的化合物；
第二步，通式(I-6)的化合物和和通式(I-Bb)的化合物在碱性条件下，在催化剂存在下经Suzuki反应，得到通式(I-Aaa)的化合物；或者，通式(I-7)的化合物和和通式(I-4)的化合物在碱性条件下，在催化剂存在下经Suzuki反应，得到通式(I-Aaa)的化合物；
第三步，通式(I-Aaa)的化合物和通式(I-Bbb)的化合物在碱性条件下，经缩合反应得到通式(I)的化合物。
其中，W为
Figure BDA0003049272910000151
X为卤素；R1、R2和R3具有与上述通式(I)相同的限定范围。
对于上述制备方法中，提供碱性条件的试剂选自有机碱或无机碱类，所述的有机碱类为三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、正丁基锂、二异丙基氨基锂、双三甲基硅基胺基锂、醋酸钾、醋酸钠、叔丁醇钠、甲醇钠和叔丁醇钾中的一种或多种，所述的无机碱类为氢化钠、磷酸钾、碳酸钠、碳酸钾、醋酸钾、碳酸铯、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠和氢氧化锂中的一种或多种；
提供酸性条件的试剂为氯化氢、氯化氢的1,4-二氧六环溶液、三氟乙酸、甲酸、乙酸、盐酸、硫酸、甲磺酸、硝酸和磷酸中的一种或多种；
金属催化剂为钯/碳、雷尼镍、四-三苯基膦钯、二氯化钯、醋酸钯、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(Pd(dppf)Cl2)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物、双三苯基磷二氯化钯(Pd(PPh3)Cl2)和三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3)中的一种或多种；
配体为2-双环己基膦-2,6'-二甲氧基联苯(SPhos)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(XantPhos)、2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(XPhos)、2-二环己膦基-2'-(N,N-二甲胺)-联苯(DavePhos)、1,1'-双(二苯基膦)二茂铁(Dppf)和1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(BINAP)中的一种或多种，优选为4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(XantPhos)；
缩合剂为二环己基碳二亚胺(DCC)、二异丙基碳二亚胺(DIC)、1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)、1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDCI)、2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)，2-(1H-苯并三偶氮L-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯(TBTU)，1-羟基苯并三唑(HOBt)和1-丙基磷酸酐(T3P)中的一种或多种。
上述反应优选在溶剂中进行，所用溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、1,4-二氧六环、水、四氢呋喃、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、醋酸、甲醇、乙醇、甲苯、石油醚、乙酸乙酯、正己烷、丙酮、乙醚和二甘醇中的一种或多种。
第三方面，本发明提供一种药物组合物，所述药物组合物包括如上所述的多环酰胺类衍生物、立体异构体、互变异构体、可药用盐；
优选地，所述药物组合物还包括可药用载体和/或赋形剂。
第四方面，本发明提供一种如第一方面所述的多环酰胺类衍生物、立体异构体、互变异构体、可药用盐或如第三方面所述的药物组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途，其中所述的癌症，优选血液癌，包括急性髓细胞白血病、多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞性白血病、滤泡性淋巴瘤等和实体瘤，包括乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、肝细胞癌、胰腺癌、肾癌、胃癌、结直肠癌和肺癌等。
本发明还提供作为CDK9抑制剂的多环酰胺类衍生物用于治疗癌症的方法，该方法是通过向患有癌症的受试者给予一个有效量的所述的化合物进行的。
本发明的这些化合物可以进一步与治疗有效量的一种或多种治疗癌症的试剂组合来给予，其中这些试剂的实例包括，例如辐射、烷化剂、血管生成抑制剂、抗有丝分裂剂、抗增生剂、极光激酶抑制剂、细胞死亡活化剂(例如，Bcl-2、BclxL、Bcl-w、Bfl-1、或Mcl-1的抑制剂)、死亡受体途径的活化剂、Bcr-Abl激酶抑制剂、BET(溴结构域蛋白)抑制剂、Ras信号通路抑制剂(例如MEK、Raf或Ras的抑制剂)、抗体、BiTE(双特异性T细胞接合器)抗体、抗体药物偶联物、生物应答调节剂、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂、细胞周期抑制剂、环氧合酶-2抑制剂、DVD(双重可变结构域抗体)、白血病病毒癌基因同系物(ErbB2)受体抑制剂、生长因子抑制剂、热休克蛋白(HSP)-90抑制剂、组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂、激素疗法、免疫药、细胞凋亡蛋白的抑制剂(IAP)、激酶抑制剂、肿瘤驱动蛋白抑制剂、Jak2抑制剂、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白抑制剂、微小RNA、丝裂原激活胞外信号-调节的激酶抑制剂、聚ADP(腺苷二磷酸)-核糖聚合酶(PARP)抑制剂、铂化疗剂、polo样激酶(Plk)抑制剂、磷酸肌醇-3激酶抑制剂、蛋白酶体抑制剂、小抑制核糖核酸酸类(siRNA)、拓扑异构酶抑制剂、泛素连接酶抑制剂、以及类似物，以及这些试剂的一种或多种组合。
如在此所使用的，术语“有效量”意指一种化合物或组合物的足以显著和积极改变有待治疗的症状和/或病症(例如，提供积极临床响应)的量。用于一种药物组合物中的活性成分的有效量将随着正在被治疗的具体病症、该病症的严重性，治疗的持续时间、同步治疗的性质，该一种或多种使用的具体的活性成分，一种或多种所使用的药学上可接受的赋形剂/载体、以及主治医生的知识和专业技能内的类似因素而变化。
具体地，用于在癌症治疗中使用的具有化学式(I)的化合物的一个有效量是足以对症减轻在人中癌症的症状的量，以减缓癌症的进展，或减少患有癌症的患者中症状恶化的风险。
术语解释
除非有相反陈述，否则本发明在说明书和权利要求书中所使用的部分术语定义如下：
“烷基”指饱和脂肪族烃基团，包括1-20个碳原子，或1-10个碳原子，或1-6个碳原子，或1-4个碳原子，或1-3个碳原子，或1-2个碳原子饱和直链或支链的单价烃基，其中烷基可以独立任选地被一个或多个本发明所描述地取代基所取代。烷基基团更近一步地实例包括，包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是任选取代或未取代的。
“烯基”指2-12个碳原子，或2-8个碳原子，或2-6个碳原子，或2-4个碳原子直链或支链的一价烃基，其中至少一个C-C为sp2双键，其中烯基的基团可以独立任选地被1个或多个本发明所描述的取代基所取代，其中具体的实例包括，但并不限于乙烯基、烯丙基和烯丁基等等。烯基可以是任选取代或未取代的。
“环烷基”是指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包括3至20个碳原子，优选包括3至12个碳原子，更优选包含3至6个碳原子。单环环烷基的非限制性实施例包括，但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。环烷基可以是任选取代的或未取代的。
“螺环烷基”指5至18元，两个或两个以上环状结构，且单环之间彼此共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，环内含有1个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺、双螺或多螺环烷基，优选为单螺和双螺环烷基，优选为4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元。“螺环烷基”的非限制性实施例包括但不限于：
Figure BDA0003049272910000161
“稠环烷基”指5至18元，含有两个或两个以上环状结构彼此公用一对碳原子的全碳多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，优选为6至12元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠环烷基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环烷基。“稠环烷基”的非限制性实施例包括但不限于：
Figure BDA0003049272910000162
“桥环烷基”指5至18元，含有两个或两个以上环状结构，彼此共用两个不直接相连接碳原子的全碳多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，优选为6至12元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，优选为双环、三环或四环，更有选为双环或三环。“桥环烷基”的非限制性实施例包括但不限于：
Figure BDA0003049272910000163
所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实施例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等。
“杂环基”、“杂环”或“杂环的”在本申请中可交换使用，本申请中可交换使用，都是指包含3-12个环原子的饱和或部分不饱和的单环、双环或三环的非芳香性杂环基，其中至少一个环原子原子是杂原子，如氧、氮、硫原子等。优选具有5至7元单环或7至10元双-或三环，其可以包含1，2或3个选自氮、氧和/或硫中的原子。“杂环基”的实例包括但不限于吗啉基，氧杂环丁烷基，硫代吗啉基，四氢吡喃基，1，1-二氧代-硫代吗啉基，哌啶基，2-氧代-哌啶基，吡咯烷基，2-氧代-吡咯烷基，哌嗪-2-酮，8-氧杂-3-氮杂-双环[3.2.1]辛基和哌嗪基。所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基。杂环基可以是任选取代的或未取代的。
“螺杂环基”指5至18元，两个或两个以上环状结构，且单环之间彼此共用一个原子的多环基团，环内含有1个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧、硫或S(O)m的杂原子，其余环原子为碳，m＝1或2。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺杂环基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基。“螺杂环基”的非限制性实施例包括但不限于：
Figure BDA0003049272910000171
“稠杂环基”指含有两个或两个以上环状结构彼此公用一对原子的全碳多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧、硫或S(O)m的杂原子，其余环原子为碳，m＝1或2。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。“稠杂环基”的非限制性实施例包括但不限于：
Figure BDA0003049272910000172
“桥杂环基”指5至18元，含有两个或两个以上环状结构，彼此共用两个不直接相连接的原子的多环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子的芳香系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧、硫或S(O)m的杂原子，其余环原子为碳，m＝1或2。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥杂环基，优选为双环、三环或四环，更有选为双环或三环。“桥杂环基”的非限制性实施例包括但不限于：
Figure BDA0003049272910000173
“芳基”是指含有一个或者两个环的碳环芳香系统，其中所述环可以以稠合的方式连接在一起。术语“芳基”包括比如苯基、萘基、四氢萘基的芳香基团。优选芳基为C6-C10芳基，更优选芳基为苯基和萘基，最优选为苯基。芳基可以是取代或未取代的。所述“芳基”可与杂芳基、杂环基或环烷基稠合，其中与母体结构连接在一起的为芳基环，非限制性实施例包括但不限于：
Figure BDA0003049272910000181
“杂芳基”是指芳香族5至6元单环或9至10元双环，其可以包含1至4个选自氮、氧和/或硫中的原子。“杂芳基”的实施例包括但不限于呋喃基，吡啶基，2-氧代-1，2-二氢吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、噻吩基、异噁唑基、噁唑基、噁二唑基、咪唑基、吡咯基、吡唑基、三唑基、四唑基、噻唑基、异噻唑基、1，2，3-噻二唑基、苯并间二氧杂环戊烯基、苯并咪唑基、吲哚基、异吲哚基、1，3-二氧代-异吲哚基、喹啉基、吲唑基、苯并异噻唑基、苯并噁唑基和苯并异噁唑基。杂芳基可以是任选取代或未取代的。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，非限制性实施例包括但不限于：
Figure BDA0003049272910000182
“烷氧基”是指(烷基-O-)的基团。其中，烷基见本文有关定义。C1-C6的烷氧基为优先选择。其实例包括，但不限于：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基等。
“卤代烷基”指具有一个或者多个卤素取代基的烷基，其中烷基基团具有如本发明所述的含义。卤代烷基的实例包括，但并不限于氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、全氟乙基、1,1-二氯乙基、1,2-二氯丙基等。
“羟基”指-OH基团。
“卤素”是指氟、氯、溴和碘，优选氟、氯和溴。
“氨基”指-NH2。
“氰基”指-CN。
“硝基”指-NO2。
“苄基”指-CH2-苯基。
“羧基”指-C(O)OH。
“乙酰基”指-C(O)CH3或Ac。
“羧酸酯基”指-C(O)O(烷基)或(环烷基)，其中烷基、环烷基的定义如上所述。
“任选”意味着其所描述的事件可以但不必发生。例如，“AR1任选被1到多个Rc取代”该说明包含着AR1基团可以被1到多个Rc取代或者不被Rc取代的情形。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1-3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
本说明书所述的“取代”或“取代的”，如无特别指出，均是指基团可被一个或多个选自以下的基团取代：烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、疏基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氨基、卤代烷基、羟烷基、羧基、羧酸酯基、＝O、-C(O)Rb、-OC(O)Rb、-NRbRb、-C(O)NRbRb、-NRbC(O)Rb、-S(O)NRbRb或-S(O)2NRbRb，其中，Rb的定义如通式(I)中所述。
本发明中立体化学的定义和惯例的使用通常参考以下文献：
S.P.Parker,Ed.,McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-HillBook Company,New York；and Eliel,E.and Wilen,S.,"Stereochemistry ofOrganic Compounds",John Wiley&Sons,Inc.,New York,1994.本发明的化合物可以包含不对称中心或手性中心，因此存在不同的立体异构体。本发明的化合物所有的立体异构形式，包括但绝不限于，非对映体，对映异构体，阻转异构体，和它们的混合物，如外消旋混合物，组成了本发明的一部分。非对映异构体可以以其物理化学差异为基础，通过层析、结晶、蒸馏或升华等方法被分离为个别非对映异构体。对映异构体可以通过分离，使手性异构混合物转化为非对映异构混合物，其方式是与适当光学活性化合物(例如手性辅助剂，譬如手性醇或Mosher氏酰氯)的反应，分离非对映异构体，且使个别非对映异构体转化为相应的纯对映异构体。本发明的中间体与化合物也可以不同互变异构形式存在，且所有此种形式被包含在本发明的范围内。很多有机化合物都以光学活性形式存在，即它们有能力旋转平面偏振光的平面。在描述光学活性化合物时，前缀D、L或R、S用来表示分子手性中心的绝对构型。前缀d、l或(+)、(-)用来命名化合物平面偏振光旋转的符号，(-)或l是指化合物是左旋的，前缀(+)或d是指化合物是右旋的。这些立体异构体的原子或原子团互相连接次序相同，但是它们的立体结构不一样。特定的立体异构体可以是对映体，异构体的混合物通常称为对映异构体混合物。50：50的对映体混合物被称为外消旋混合物或外消旋体，这可能导致化学反应过程中没有立体选择性或立体定向性。术语“外消旋混合物”和“外消旋体”是指等摩尔的两个对映异构体的混合物，缺乏光学活性。
“互变异构体”或“互变异构的形式”是指不同能量的结构的同分异构体可以通过低能垒互相转化。例如质子互变异构体(即质子移变的互变异构体)包括通过质子迁移的互变，如酮式-烯醇式和亚胺-烯胺的同分异构化作用。原子价(化合价)互变异构体包括重组成键电子的互变。除非其他方面表明，本发明所描述的结构式包括所有的同分异构形式(如对映异构，非对映异构，和几何异构)：例如含有不对称中心的R、S构型，双键的(Z)、(E)异构体，和(Z)、(E)的构象异构体。因此，本发明的化合物的单个立体化学异构体或其对映异构体，非对映异构体，或几何异构体的混合物都属于本发明的范围。
“可药用盐”指本发明化合物的盐，这类盐用于人或动物体内时具有安全性和有效性。化合物的盐可以通过在纯的溶液或合适的惰性溶解中用足量的碱或酸获得相应的加成盐。可药用的碱加成盐包括钠、钾、钙、铵、有机氨或镁盐等，可药用的酸加成盐包括无机酸盐和有机酸盐，所述的无机酸和有机酸包括盐酸、氢溴酸、碳酸、碳酸氢根、磷酸、磷酸一氢根、磷酸二氢根、硫酸、硫酸一氢根、乙酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、饭丁烯二酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸和甲磺酸等(参见Berge et al.,“PharmaceuticalSalts”,Journal of Pharmaceutical Science 66:1-19(1977))。
与现有技术相比，本发明提供的用作CDK9抑制剂的多环酰胺类衍生物具有如下有益效果：
本发明提供了一种新结构的CDK9抑制剂，试验结果表明，该多环酰胺类衍生物表现出优异的CDK9酶抑制活性，同时表现出优异的安全性和选择性，可用于制备治疗癌症，尤其是血液癌，包括急性髓细胞白血病、多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞性白血病、滤泡性淋巴瘤等和实体瘤，包括乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、肝细胞癌、胰腺癌、肾癌、胃癌、结直肠癌和肺癌等疾病的药物。
附图说明
图1是本发明所涉及化合物7-1、12、22-1-1和AZD4573对Mv4-11细胞RNA pol IISer2的磷酸化抑制作用SDS-PAGE电泳检测图。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明的方法进行说明，以使本发明技术方案更易于理解、掌握，但本发明并不局限于此。下述实施例中1H NMR图谱是用Bruker仪器(400MHz)测定而得，化学位移用ppm表示。使用四甲基硅烷内标准(0.00ppm)。1H NMR的表示方法：s＝单峰，d＝双重峰，t＝三重峰，q＝四重峰，m＝多重峰，br＝变宽的，dd＝双重峰的双重峰，dt＝三重峰的双重峰。若提供偶合常数时，其单位为Hz。
质谱是用LC/MS仪测定得到，离子化方式为ESI。
高效液相色谱仪型号：安捷伦1260、赛默飞U3000；色谱柱型号：Waters xbrigeC18(4.6*150mm,3.5μm)；流动相：A:ACN,B:Water(0.1％H3PO4)；流速：1.0mL/min；梯度：5％Afor 1min,increase to 20％A within4min,increase to 80％A within 8min,80％A for2min,back to 5％A within 0.1min；波长：220nm；柱温箱：35℃。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.2mm-0.3mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm-0.5mm。
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200-300目硅胶为载体。
在下列实例中，除非另有指明，所有温度为摄氏温度，除非另有指明，各种起始原料和试剂来自市售或者是根据已知的方法合成，市售原料和试剂均不经进一步纯化直接使用，除非另有指明，市售厂家包括但不限于国药集团，百灵威科技有限公司，梯希爱(上海)化成工业发展有限公司，上海毕得医药科技有限公司和上海迈瑞尔化学科技有限公司等。
CD3OD：氘代甲醇
CDCl3：氘代氯仿
DMSO-d6：氘代二甲基亚砜
Pd2(dba)3：三(二亚苄基丙酮)二钯
Pd(dppf)Cl2：[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯
XantPhos：4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽
XPhos：2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯
HATU：2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯
TLC：薄层色谱法
HPLC：高效液相色谱法
purity：纯度
&：和
氢气氛围是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。
实施例中无特殊说明，反应中的溶液是指水溶液。
实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃-30℃。
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂，纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系或薄层色谱法的展开剂体系包括：A：石油醚和乙酸乙酯体系；B：二氯甲烷和甲醇体系；C：正己烷：乙酸乙酯；其中溶剂的体积比根据化合物的极性不同而不同，也可以加入少量的酸性或碱性试剂进行调节，如醋酸或三乙胺等。
中间体的制备
中间体1
5,5-二甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑IN-1
Figure BDA0003049272910000201
第一步 羟基三甲基乙酸甲酯IN-1b
2,2-二甲基-3-羟基丙酸IN-1a(100.0g,0.85mol)溶于甲醇(1L)中，室温下滴加浓硫酸(91.1g,0.36mol)，加完升温至75℃反应4小时，TLC显示反应完全。反应液浓缩，加饱和碳酸氢钠水溶液调节pH至弱碱，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得淡黄色透明液体标题化合物IN-1b(93.0g,粗品)，直接用于下一步。
第二步 2,2-二甲基-3-((甲基磺酰基)氧基)丙酸甲酯IN-1c
化合物IN-1b(93.0g,粗品)溶于二氯甲烷(500mL)中，加入三乙胺(85.9g,0.85mol)，降温至-5℃，氮气保护下，滴加甲基磺酰氯(88.2g,0.77mol)，加完升至室温反应2小时，TLC显示反应完全。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得淡黄色透明液体标题化合物IN-1c(121.0g,粗品)，直接用于下一步。
第三步 3-溴-2,2-二甲基丙酸甲酯IN-1d
化合物IN-1c(121.0g,粗品)溶于N,N-二甲基甲酰胺(800mL)中，室温下加入溴化锂(101.0g,1.16mol)，升温至100℃反应过夜，TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，倒入水中，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得淡黄色透明液体标题化合物IN-1d(85.0g,三步收率51％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.69(s,3H),3.48(s,2H),1.29(s,6H).
第四步 2,2-二甲基-3-(1H-吡唑-1-基)丙酸甲酯IN-1e
化合物IN-1d(85.0g,0.44mol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(500mL)中，室温下加入碳酸铯(173.0g,0.53mol)和咪唑(32.6g,0.48mol)，升温至85℃反应过夜，TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，倒入水中，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得淡黄色透明液体标题化合物IN-1e(41.0g,收率52％)。
LC-MS:m/z＝183.2[M+H]+
第五步 2,2-二甲基-3-(1H-吡唑-1-基)丙酸IN-1f
化合物IN-1e(41.0g,0.22mol)溶于四氢呋喃(150mL)和甲醇(100mL)的混合溶剂中，加入氢氧化钠(18.0g,0.45mol)的水(100mL)溶液，室温搅拌1小时，TLC显示反应完全。反应液浓缩去除四氢呋喃和甲醇，加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得白色固体标题化合物IN-1f(33.0g,粗品)，直接用于下一步。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.44(s,1H),7.61(t,J＝1.6Hz,1H),7.41(d,J＝1.6Hz,1H),6.21(t,J＝2.0Hz,1H),4.24(s,2H),1.06(s,6H).
第六步 5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-4-酮IN-1g
化合物IN-1f(33.0g,粗品)溶于无水四氢呋喃(300mL)中，氮气保护下，降温至-65℃，缓缓滴加正丁基锂(160mL,0.4mol,2.5M四氢呋喃溶液)，滴完升温至-45℃反应1小时，再升至室温搅拌过夜，TLC显示反应完全。反应液缓缓倒入水中，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得淡黄色液体标题化合物IN-1g(18.1g,两步收率55％)。
第七步 5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑IN-1h
化合物IN-1g(18.1g,0.12mol)溶于二甘醇(300mL)中，室温下加入水合肼(30mL,0.6mol,85％)，升温至180℃(内温156℃)反应2小时，降温至150℃，缓慢加入氢氧化钾(23.6g,0.42mol)，加完升温至180℃反应5小时，TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，加水，加盐酸(3M)溶液调节pH＝6-7，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得到淡黄色液体标题化合物IN-1h(7.8g,收率48％)。
第八步 3-溴-5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑IN-1i
化合物IN-1h(7.1g,52.1mmol)溶于二氯甲烷(60mL)中，加入N-溴代丁二酰亚胺(9.3g,52.2mmol)，室温反应过夜，TLC显示反应完全。反应液加水，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得到黄色液体标题化合物IN-1i(7.8g,收率48％)。
第九步 5,5-二甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑IN-1
化合物IN-1i(5.5g,25.6mmol)溶于1,4-二氧六环(50mL)中，加入联硼酸频那醇酯(9.7g,38.2mmol)、醋酸钾(5.0g,51.0mmol)和Pd(dppf)Cl2二氯甲烷络合物(244mg,0.3mmol)，氮气保护下，升温至85℃反应过夜，TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得到淡黄色液体标题化合物IN-1(2.4g,收率36％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.77(s,1H),3.88(s,2H),2.79(s,2H),1.26(s,12H),1.24(s,6H).
中间体2
7-溴-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲腈IN-2
Figure BDA0003049272910000221
第一步 4-溴-1H-吡咯-2-甲醛IN-2b
1H-吡咯-2-甲醛IN-1a(10.0g,105.3mmol)溶于四氢呋喃(100mL)中，氮气保护下，冷却至0℃，加入N-溴代丁二酰亚胺(19.7g,110.5mmol)，保持在0℃下反应30分钟，TLC显示原料消失。反应液浓缩除去有机溶剂，加水稀释，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱纯化得到白色固体标题化合物IN-2b(12.6g,收率69％)。
LC-MS:m/z＝174.0[M+H]+
第二步 4-溴-1H-吡咯-2-甲腈IN-2c
化合物IN-2b(5.0g,28.7mmol)溶于水(150mL)中，加入O-羟胺磺酸(11.4g,100.6mmol)，室温搅拌过夜，TLC显示原料消失(原料和产品用醛酮显色剂区分)。反应液冷却至0℃，氢氧化钾溶液(4N)调节pH＝13-14，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱纯化得到白色固体标题化合物IN-2c(4.2g,收率85.0％)。
LC-MS:m/z＝168.9[M-H]-
第三步 4-(4-溴-2-氰基-1H-吡咯-1-基)-3,3-二甲基丁酸甲酯IN-2d
化合物IN-2c(1.0g,5.8mmol)分散在N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中，室温下加入碳酸钾(1.6g,11.6mmol)和化合物IN-1d(1.7g,8.8mmol)，升温至85℃搅拌过夜，TLC显示原料反应完全。反应液冷却至室温，加水稀释，乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得到黄色液体标题化合物IN-2d(1.7g,收率97％)。
第四步 4-(4-溴-2-氰基-1H-吡咯-1-基)-3,3-二甲基丁酸IN-2e
化合物IN-2d(1.7g,5.7mmol)分散在四氢呋喃(15mL)和甲醇(15mL)中，冷却至0℃，加入氢氧化钠水溶液(3mL,12mmol,4M)，缓慢升至室温搅拌30分钟，TLC显示原料反应完全。反应液浓缩除去有机溶剂，加水稀释，乙酸乙酯萃取，有机相弃掉，水相用稀盐酸(1N)调节pH为酸性，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得黄色油状标题化合物IN-2e(1.4g,粗品)，直接用于下一步。
第五步 4-(4-溴-2-氰基-1H-吡咯-1-基)-3,3-二甲基丁酰氯IN-2f
化合物IN-2e(1.4g,粗品)分散在二氯甲烷(30mL)中，室温下加入N,N-二甲基甲酰胺(1mL)，冷却至0℃，滴加草酰氯(980mg,7.7mmol)，滴毕，缓慢升至室温搅拌30分钟，TLC显示原料反应完全(甲醇淬灭点板)。反应液浓缩得黄色油状标题化合物IN-2f(1.5g,粗品)，直接用于下一步。
第六步 7-溴-2,2-二甲基-1-氧代-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲腈IN-2g
三氯化铝(1.4g,5.8mmol)分散在二氯甲烷(15mL)中，冷却至0℃，氮气保护下滴加化合物IN-2f(1.5g,粗品)的二氯甲烷(15mL)溶液，滴毕，自然升温至室温搅拌过夜，TLC显示原料反应完全。反应液倒入冰水淬灭，加盐酸(1N)调节pH为酸性，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得白色固体标题化合物IN-2g(900mg,三步收率62％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.00(s,1H),4.17(s,2H),1.38(s,6H).
第七步 7-溴-1-羟基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲腈IN-2h
化合物IN-2g(870mg,3.4mmol)分散在甲醇(15mL)中，冷却至0℃，加入硼氢化钠(330mg,8.7mmol)，升至室温搅拌1小时，TLC显示原料反应完全。反应液加水淬灭，浓缩除去甲醇，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物IN-2h(1.0g,粗品)，直接用于下一步。
第八步 7-溴-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲腈IN-2
化合物IN-2h(1.0g,粗品)分散在三氟乙酸(20mL)中，冷却至0℃，氮气置换，滴加三乙基硅烷(1.4g,12mmol)，加完0℃搅拌1小时，TLC显示原料反应完全。反应液浓缩，饱和碳酸氢钠水溶液调节pH为碱性，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得黄色液体标题化合物IN-2(370mg,粗品)，直接用于下一步。
LC-MS:m/z＝239.3[M+H]+
中间体3
(1R,3S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环己烷-1-甲酸苄酯(假定)IN-3-1
(1S,3R)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环己烷-1-甲酸苄酯(假定)IN-3-2
Figure BDA0003049272910000231
第一步 3-((叔丁氧羰基)氨基)环己烷-1-甲酸IN-3b
3-氨基环己烷甲酸IN-3a(10.0g,69.8mmol)溶于1,4-二氧六环(100mL)中，加入氢氧化钠(4.2g,105mmol)的水(100mL)溶液，待固体全部溶解后加入二碳酸二叔丁酯(19.8g,90.7mmol)，室温搅拌过夜，TLC显示反应完全。反应液加入盐酸(3M)调节pH＝3-4，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得白色固体标题化合物IN-3b(16.0g,粗品)，直接用于下一步。
第二步 (1R,3S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环己烷-1-甲酸苄酯(假定)IN-3-1&(1S,3R)-3-((叔丁氧羰基)氨基)环己烷-1-甲酸苄酯(假定)IN-3-2
化合物IN-3b(20.2g,粗品)溶于N,N-二甲基甲酰胺(200mL)中，降温至0℃，加入碳酸铯(40.3g,123.7mmol)，氮气保护下，缓缓滴加溴化苄(14.8g,86.5mmol)，滴加完后，缓缓升至室温反应2小时，TLC显示反应完全。反应液加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得白色固体化合物IN-3(24.9g,两步收率82％)。取5.9g手性拆分(DAICEL AD-H,30*250mm,5um,30mL/min,IPA:Hexane＝5:95)得化合物IN-3-1(1号峰,RT 21.2min)(2.7g,收率46％)和化合物IN-3-2(2号峰,RT29.1min)(1.5g,+27.1°,ee＝100％,收率25％)。根据文献RT数据，化合物IN-3-2为所需构型的中间体。
LC-MS:m/z＝234.1[M-Boc+H]+
中间体4
5-氧代八氢并环戊二烯-2-甲酸甲酯IN-4
Figure BDA0003049272910000241
第一步 环己-4-烯-1,2-二基二甲醇IN-4b
4-环己烯-1,2-二羧酸IN-4a(20.0g,117.5mmol)溶于四氢呋喃(400mL)中，降温至0℃，分批加入氢化铝锂(17.9g,471.7mmol)，加完升温至80℃搅拌2小时，TLC显示反应完全。反应液降温至0℃，依次加入水(18mL)，氢氧化钠水溶液(18mL,1.5N)，搅拌10分钟，加入水(50mL)，搅拌10分钟，过滤，滤饼四氢呋喃洗涤，滤液浓缩得淡黄色液体标题化合物IN-4b(16.5g,粗品)，直接用于下一步。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ5.57(s,2H),4.41(t,J＝4.2Hz,2H),3.42-3.37(m,2H),3.28-3.22(m,2H),1.99-1.85(m,6H).
第二步 环己-4-烯-1,2-二基双(亚甲基)二甲磺酸酯IN-4c
化合物IN-4b(16.5g,粗品)溶于二氯甲烷(200mL)中，降温至0℃，依次加入三乙胺(31.7g,313.3mmol)和甲基磺酰氯(33.0g,288.1mmol)，升至室温搅拌2小时，TLC显示反应完全。反应液加水淬灭，二氯甲烷萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物IN-4c(33.0g,粗品)，直接用于下一步。
第三步 4,5-双(溴甲基)环己-1-烯IN-4d
化合物IN-4c(33.0g,粗品)溶于N,N-二甲基甲酰胺(200mL)中，室温下加入溴化锂(28.5g,328.2mmol)，升温至100℃搅拌2小时，TLC显示反应完全。反应液热过滤，滤饼乙酸乙酯洗涤，滤液加水，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得到淡黄色液体标题化合物IN-4d(16.0g,三步收率51％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.63(s,2H),3.42-3.39(m,2H),3.34-3.30(m,2H),2.39-2.35(m,2H),2.27-2.21(m,2H),2.09-2.03(m,2H).
第四步 1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-茚-2,2-二甲酸二甲酯IN-4e
化合物IN-4d(15.0g,56.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(200mL)中，室温下加入丙二酸二甲酯(15g,113.5mmol)和碳酸钾(31.2g,225.7mmol)，升温至110℃搅拌过夜，TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得淡黄色液体标题化合物IN-4e(7.5g,收率56％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.63(s,2H),3.72(d,J＝3.2Hz,6H),2.36-2.31(m,2H),2.18-2.07(m,6H),1.88-1.80(m,2H).
第五步 2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-茚-2-甲酸甲酯IN-4f
化合物IN-4e(7.5g,31.5mmol)溶于二甲基亚砜(20mL)和水(2mL)中，室温下加入氯化钠(3.75g,64.2mmol)，升温至170℃搅拌过夜，TLC显示反应完全。反应液降至室温，加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得淡黄色液体标题化合物IN-4f(4.0g,粗品)，直接用于下一步反应。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.66-5.60(m,2H),3.67(d,J＝2.0Hz,6H),3.02-2.83(m,2H),2.18-2.13(m,4H),2.01-1.68(m,2H).
第六步 4-(甲氧羰基)环戊烷-1,2-二甲酸IN-4g
化合物IN-4f(5.3g,粗品)溶于乙腈/乙酸乙酯(50mL/50mL)中，加入高碘酸钠(27.3g,127.6mol)的水溶液(100mL)和三氯化钌(122mg,0.59mmol)，室温反应过夜。TLC显示原料消失。反应液过滤，滤液用盐酸(1N)调节pH至1-2，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到淡黄色固体粗品，石油醚/二氯甲烷打浆，过滤得白色固体标题化合物IN-4g(6.2g,粗品)，直接用于下一步反应。
第七步 5-氧代八氢并环戊二烯-2-甲酸甲酯IN-4
化合物IN-4g(2.7g,粗品)溶于乙酸酐(16mL)中，升温至130℃反应2小时，加入无水乙酸钠(816mg,9.95mmol)，120℃反应过夜。反应液冷却至0℃，加甲醇淬灭，然后加饱和碳酸钠水溶液调节pH至8-9，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得到无色液体标题化合物IN-4(1.3g,三步收率23％)。
中间体5
5-溴-7-异氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪IN-5
Figure BDA0003049272910000251
第一步 1-(三异丙基甲硅烷基)吡咯IN-5b
氢化钠(13.7g,342mmol,60％)分散至四氢呋喃(400mL)中，冷却至0℃，氮气保护下，滴加吡咯IN-5a(17.4g,259mmol)，加毕，升至室温搅拌1小时，再次冷却至0℃，滴加三异丙基氯硅烷(50.0g,259mmol)，滴加完后升至室温搅拌2小时，TLC显示原料反应完全。反应液缓慢倒入冰水中，乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物IN-5b(63.0g,粗品)直接用于下一步。
第二步 吡咯-3-甲醛IN-5c
N,N-二甲基甲酰胺(18.6g,256mmol)溶于二氯甲烷(500mL)中，室温下滴加草酰氯(32.53g,256mmol)，加完室温搅拌2小时，有白色固体生成。化合物IN-5b(52.0g,233mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，滴加至上述反应中，加完加热回流2小时，降至室温搅拌过夜，TLC显示反应完全。反应液浓缩除去二氯甲烷，加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得褐色液体标题化合物IN-5c(7.0g,两步收率34％)。
第三步 5-溴吡咯-3-甲醛IN-5d
化合物IN-5c(7.0g,73.6mmol)溶于四氢呋喃(150mL)中，氮气保护下，冷却至-65℃，滴加N-溴代丁二酰亚胺(13.7g,77.0mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(30mL)溶液，保持温度在-65℃，TLC跟踪至反应完全。反应液乙酸乙酯稀释，水洗，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得标题化合物IN-5d(3.6g,收率28％)。
第四步 2-溴-4-异氰基-1H-吡咯IN-5e
磺酸羟胺(9.3g,82.2mmol)分散在水(40mL)中，冷却至0℃，加入化合物IN-5d(3.6g,20.7mmol)，自然升至室温搅拌过夜，TLC显示原料反应完全。反应液过滤，滤饼水洗，滤液用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH为中性，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得淡黄色固体标题化合物IN-5e(3.0g,收率85％)。
第五步 4-(2-溴-4-异氰基-1H-吡咯-1-基)-3,3-二甲基丁酸甲酯IN-5f
化合物IN-5e(4.0g,23.4mmol)分散在N,N-二甲基甲酰胺(40mL)中，室温下加入化合物IN-1d(7.4g,35.3mmol)和碳酸钾(6.5g,47.0mmol)，氮气保护下升温至80℃搅拌过夜，TLC显示原料反应完全。反应液加水稀释，乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得黄色油标题化合物IN-5f(4.2g,收率57％)。
第六步 4-(2-溴-4-异氰基-1H-吡咯-1-基)-3,3-二甲基丁酸IN-5g
化合物IN-5f(4.1g,13.1mmol)分散在四氢呋喃(20mL)和甲醇(20mL)中，加入氢氧化钠水溶液(7mL,28mmol,4M)，室温搅拌1小时，TLC显示原料反应完全。反应液浓缩除去溶剂，加水(50mL)，乙酸乙酯萃取，丢弃有机相，水相用稀盐酸(1N)调节pH约为1左右，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得黄色固体标题化合物IN-5g(3.5g,粗品)，直接用于下一步。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.49(s,1H),7.64(d,J＝2.0Hz,1H),6.70(d,J＝2.0Hz,1H),4.15(s,2H),3.38(s,2H),1.11(s,6H).
第七步 4-(2-溴-4-异氰基-1H-吡咯-1-基)-3,3-二甲基丁酰氯IN-5h
化合物IN-5g(3.5g,粗品)分散在二氯甲烷(80mL)和N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中，冷却至0℃，氮气保护下滴加草酰氯(2.5g,19.7mmol)，滴毕，0℃搅拌1小时，TLC显示原料反应完全。反应液浓缩得到标题化合物IN-5h(4.0g,粗品)，直接用于下一步。
第八步 5-溴-7-异氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-1-酮IN-5i
将氯化铝(3.7g,27.7mmol)分散在二氯甲烷(80mL)中，冷却至0℃，氮气保护下，滴加化合物IN-5h(4.0g,13.2mmol)的二氯甲烷(80mL)溶液，滴毕，自然升至室温搅拌过夜，TLC显示原料反应完全。反应液加水淬灭，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得黄色固体标题化合物IN-5i(2.5g,三步收率76％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.81(s,1H),4.02(s,2H),1.38(s,6H).
第九步 5-溴7-异氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-1-醇IN-5j
化合物IN-5i(2.5g,9.9mmol)分散在甲醇(50mL)中，冷却至0℃，分批加入硼氢化钠(940mg,24.8mmol)，加完升至室温搅拌1小时，LCMS显示反应完全。反应液加水淬灭，浓缩除去甲醇，乙酸乙酯稀释，水洗，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物IN-5j(2.0g,粗品)，直接用于下一步。
LC-MS:m/z＝237.1[M-H2O]+
第十步 7-异氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪IN-5k
化合物IN-5j(2.0g,粗品)分散在三氟乙酸(30mL)中，冷却至0℃，氮气保护下，滴加三乙基硅烷(2.7g,23.2mmol)，加完0℃搅拌1小时，TLC显示原料反应完。反应液浓缩除去溶剂，加水稀释，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得黄色固体标题化合物IN-5k(1.2g,两步收率76％)。
第十一步 5-溴-7-异氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪IN-5
化合物IN-5k(1.2g,7.5mmol)分散在二氯甲烷(20mL)中，冷却至0℃，分批加入N-溴代丁二酰亚胺(1.2g,6.7mmol)，加毕，0℃下搅拌20分钟，TLC显示原料反应完全。反应液加水稀释，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得黄色液体标题化合物IN-5(1.6g,收率89％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.34(s,1H),3.68(s,2H),2.84(s,2H),1.28(s,6H).
中间体6
7-氨基甲酰基-2-氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯IN-6-1,2
Figure BDA0003049272910000271
第一步 环戊烷-1,3-二甲酸IN-6b
降冰片烯IN-6a(20.0g,0.21mol)溶于乙腈/乙酸乙酯(400mL/400mL)中，依次加入高碘酸钠(181.8g,0.85mol)的水溶液(600mL)和三氯化钌(969mg,4.67mmol)，室温反应过夜。TLC显示原料消失。反应液过滤，滤液用氢氧化钠(5N)溶液调节pH至11-12，乙酸乙酯萃取，丢弃有机相，水相用稀盐酸(1N)调节pH至1-2，乙酸乙酯萃取，合并有机，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到淡黄色固体标题化合物IN-6b(18.5g,粗品)，直接用于下一步。
第二步 1,3-二甲酸二环戊烷酯IN-6c
化合物IN-6b(18.5g,粗品)溶于甲醇(200mL)中，室温下加入浓硫酸(5mL)，升温至70℃反应过夜。反应液浓缩，加水稀释，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得到淡黄色液体标题化合物IN-6c(18.6g,两步收率47％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.36(s,6H),2.87-2.73(m,2H),2.27-2.23(m,1H),2.14-2.08(m,1H),2.01-1.89(m,4H).
第三步 1-烯丙基环戊烷-1,3-二甲酸二甲酯IN-6d-1,2
化合物IN-6c(40.0g，215mmol)分散至无水四氢呋喃(500mL)中，降温至-60℃，氮气保护下，滴加二异丙基氨基锂(120mL,240mmol,2M四氢呋喃溶液)，加完-60℃搅拌30分钟，滴加溴丙烯(5.8g,47.9mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液，加完-60℃搅拌30分钟，TLC显示反应完全。反应液饱和氯化铵溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得小极性无色液体标题化合物IN-6d-1(12.0g,收率25％)和大极性标题化合物IN-6d-2(15.0g,收率31％)。
化合物IN-6d-1
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.74-5.64(m,1H),5.07-5.02(m,2H),3.68(s,6H),2.94-2.86(m,1H),2.50-2.36(m,3H),2.17-2.10(m,1H),2.01-1.85(m,2H),1.80-1.67(m,2H).
化合物IN-6d-2
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.65-5.58(m,1H),4.98(d,J＝12.4Hz,2H),3.60(s,6H),2.82-2.74(m,1H),2.33-2.27(m,3H),2.20-2.13(m,1H),1.92-1.85(m,3H),1.57-1.49(m,1H).
第四步 1-(2-氧代乙基)环戊烷-1,3-二甲酸二甲酯IN-6e-1,2
化合物IN-6d-1(3.3g,14.6mmol)溶解在乙腈(30mL)和水(30mL)中，0℃下，加入三氯化钌(138mg,0.66mmol)和高碘酸钠(5.66g,26.5mmol)，搅拌30分钟，TLC显示反应完全。反应液过滤，滤液浓缩去除有机相，水相乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得无色液体标题化合物IN-6e-1(1.2g,收率36％)。
化合物IN-6d-2(15.0g,66.3mmol)溶解在乙腈(200mL)和水(200mL)中，0℃下，加入三氯化钌(690mg,3.3mmol)和高碘酸钠(28.3g,132.3mmol)，搅拌30分钟，TLC显示反应完全。反应液过滤，滤液浓缩去除有机相，水相乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得无色液体标题化合物IN-6e-2(7.5g,收率49％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.71(s,1H),3.69(d,J＝2.8Hz,6H),2.93-2.84(m,1H),2.77(s,2H),2.55-2.49(m,1H),2.37-2.30(m,1H),2.10-1.92(m,3H),1.65-1.59(m,1H).
第五步 2-苄基-1-氧代-2-氮杂螺[4.4]壬烷-7-甲酸甲酯IN-6f-1,2
化合物IN-6e-1(1.2g,5.26mmol)溶解在甲醇(15mL)中，加入苄胺(0.85g,7.88mmol)，室温搅拌30分钟，加入氰基硼氢化钠(1.0g,15.9mmol)，室温搅拌过夜，TLC显示反应完全。反应液加水淬灭，浓缩去除甲醇，乙酸乙酯稀释，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得无色液体标题化合物IN-6f-1(1.1g,收率73％)。
化合物IN-6e-2(7.5g,32.9mmol)溶解在甲醇(80mL)中，加入苄胺(5.3g,49.5mmol)，室温搅拌30分钟，加入氰基硼氢化钠(6.2g,98.7mmol)，室温搅拌过夜，TLC显示反应完全。反应液加水淬灭，浓缩去除甲醇，乙酸乙酯稀释，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得无色液体标题化合物IN-6f-2(7.0g,收率74％)。
LC-MS:m/z＝288.3[M+H]+
第六步 2-苄基-1-硫代-2-氮杂螺[4.4]壬烷-7-甲酸甲酯IN-6g-1,2
化合物IN-6f-1(1.2g,4.18mmol)溶于甲苯(6mL)中，室温下加入劳森试剂(2.53g,6.26mmol)，升温至100℃反应2小时，TLC显示原料消失。反应液冷却至室温，加水淬灭，乙酸乙酯萃取。饱和食盐水洗涤，浓缩硅胶柱层析得到无色油标题化合物IN-6g-1(932mg,收率73％)。
化合物IN-6f-2(2.0g,6.96mmol)溶于甲苯(6mL)中，室温下加入劳森试剂(4.22g,10.43mmol)，升温至100℃反应2小时，TLC显示原料消失。反应液冷却至室温，加水淬灭，乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤，浓缩硅胶柱层析得到无色油状物标题化合物IN-6g-2(1.6g,收率76％)。
LC-MS:m/z＝304.2[M+H]+
第七步 2-苄基-2-氮杂螺[4.4]壬烷-7-甲酸甲酯IN-6h-1,2
化合物IN-6g-1(932mg,3.07mmol)溶于四氢呋喃(6mL)中，室温下加入雷尼镍，升温至65℃反应2小时，TLC显示反应完全。反应液垫硅藻土过滤，滤液浓缩得到无色油标题化合物IN-6h-1(755mg,粗品)，直接用于下一步。
化合物IN-6g-2(1.6g,5.27mmol)溶于四氢呋喃(6mL)中，室温下加入雷尼镍，升温至65℃反应2小时，TLC显示反应完全。反应液垫硅藻土过滤，滤液浓缩得到无色油标题化合物IN-6h-2(1.2g,粗品)，直接用于下一步。
LC-MS:m/z＝274.2[M+H]+
第八步 7-甲基2-氮杂螺[4.4]壬烷-2,7-二甲酸叔丁酯IN-6i-1,2
化合物IN-6h-1(755mg,粗品)溶于甲醇(10mL)中，加入二碳酸二叔丁酯(0.71g,3.25mmol)和钯/碳(100mg,10％)，氢气氛围下室温反应过夜，TLC显示反应完全。反应液硅藻土过滤，滤液浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得到无色液体标题化合物IN-6i-1(747mg,两步收率86％)。
化合物IN-6h-2(1.2g,粗品)溶于甲醇(10mL)中，加入二碳酸二叔丁酯(1.15g,5.27mmol)和钯/碳(200mg,10％)，氢气氛围下室温反应过夜，TLC显示反应完全。反应液硅藻土过滤，滤液浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得到无色液体标题化合物IN-6i-2(1.1g,两步收率74％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.68(s,3H),3.44-3.34(m,2H),3.27-3.21(m,2H),2.93-2.86(m,1H),2.06-1.87(m,4H),1.77-1.71(m,3H),1.56-1.53(m,1H),1.46(s,9H).
第九步 2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-7-甲酸IN-6j-1,2
化合物IN-6i-1(747mg,2.64mmol)溶于甲醇/四氢呋喃/水(8mL/3mL/3mL)中，加入氢氧化钠(158mg,3.95mmol)，室温反应3小时，TLC显示反应完全。反应液加水，乙酸乙酯萃取，丢弃有机相，水相用稀盐酸(1N)调pH至4左右，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到无色油状液体标题化合物IN-6j-1(725mg,粗品)，直接用于下一步。
化合物IN-6i-2(1.1g,3.88mmol)溶于甲醇/四氢呋喃/水(12mL/6mL/6mL)中，加入氢氧化钠(233mg,5.83mmol)，室温反应3小时，TLC显示反应完全。反应液加水，乙酸乙酯萃取，丢弃有机相，水相用稀盐酸(1N)调pH至4左右，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到无色油状液体标题化合物IN-6j-2(830mg,粗品)，直接用于下一步。
第十步 7-氨基甲酰基-2-氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯IN-6-1,2
化合物IN-6j-1(300mg,粗品)溶于N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中，依次加入HATU(838mg,2.20mmol)，N,N-二异丙基乙胺(475mg,3.68mmol)和氯化铵(149mg,2.78mmol)，室温反应过夜。TLC显示反应完全。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得白色固体标题化合物IN-6-1(260mg,两步收率86％)。
化合物IN-6j-2(830mg,粗品)溶于N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中，依次加入HATU(1.4g,3.68mmol)，N,N-二异丙基乙胺(793mg,6.14mmol)和氯化铵(249mg,4.66mmol)，室温反应过夜。TLC显示反应完全。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得白色固体标题化合物IN-6-2(760mg,两步收率73％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ5.40(s,2H),3.44-3.23(m,4H),2.81-2.72(m,1H),2.06-1.87(m,4H),1.81-1.69(m,3H),1.61-1.53(m,1H),1.46(s,9H).
实施例1
(1S,3R)-3-乙酰氨基-N-(5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺1
Figure BDA0003049272910000291
第一步 (1S,3R)-3-叔丁氧羰基氨基环己烷甲酸1a
中间体IN-3-2(1.5g,4.5mmol)溶于甲醇(25mL)中，加入钯/碳(150mg,10％)，氢气氛围下室温搅拌过夜，TLC显示原料消失。反应液垫硅藻土过滤，滤液浓缩得到白色固体标题化合物1a(1.1g,粗品)，直接用于下一步。
第二步 (4-溴-5-氯吡啶-2-基)亚氨基二碳酸二叔丁酯1c
4-溴-5-氯吡啶-2-氨基1b(3.0g,14.5mmol)分散在叔丁醇/丙酮(1:1)的混合溶剂(100mL)中，加入三乙胺(6.2g,61.3mmol)，二碳酸二叔丁酯(12.7g,58.2mmol)和4-二甲氨基吡啶(催化量)，室温搅拌3小时，TLC显示原料反应完全。反应液浓缩除去有机溶剂，加水稀释，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得白色固体标题化合物1c(7.5g,粗品)，直接用于下一步。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.65(s,1H),8.03(s,1H),1.41(s,18H).
第三步 (2-((二叔丁氧基羰基)氨基)-5-氯吡啶-4-基)硼酸1d
化合物1c(1.0g,粗品)分散在1,4-二氧六环(20mL)中，依次加入联硼酸频那醇酯(950mg,3.7mmol)，乙酸钾(730mg,7.4mmol)和Pd(dppf)Cl2二氯甲烷络合物(催化量)，氮气保护下，升温至90℃搅拌1小时，TLC显示原料消失。反应液冷却至室温，过滤，滤饼乙酸乙酯洗涤，滤液加水稀释，乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得褐色油状物标题化合物1d(2.5g,粗品)直接用于下一步。
LC-MS:m/z＝373.1[M+H]+
第四步 (5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)亚氨基二碳酸二叔丁酯1e
化合物1d(250mg,粗品)和中间体IN-2(1.2g,1.6mmol)分散在1,4-二氧六环(5mL)和水(2mL)中，依次加入碳酸钠(220mg,2.1mmol)和Pd(dppf)Cl2(催化量)，氮气保护下升温至100℃搅拌1小时，TLC显示原料反应完全。反应液冷却至室温，过滤，滤饼乙酸乙酯洗涤，滤液加水稀释，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得白色固体标题化合物1e(300mg,三步收率26％)。
LC-MS:m/z＝387.2[M+H-Boc]+
第五步 7-(2-氨基-5-氯吡啶-4-基)-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲腈1f
化合物1e(300mg,0.62mmol)分散在二氯甲烷(6mL)中，加入三氟乙酸(3mL)，室温搅拌1小时，TLC显示原料反应完全。反应液浓缩除，饱和碳酸氢钠水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得黄色固体标题化合物1f(250mg,粗品)，直接用于下一步。
LC-MS:m/z＝287.1[M+H]+
第六步 ((1R,3S)-3-((5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)环己基氨基甲酸叔丁酯1g
化合物1f(250mg,粗品)和化合物1a(317mg,1.3mmol)分散在乙酸乙酯(10mL)中，室温下依次加入吡啶(413mg,5.2mmol)和1-丙基磷酸酐(2.2g,6.9mmol,50％乙酸乙酯溶液)，升温至85℃搅拌过夜，TLC显示原料反应完全。反应液加入饱和碳酸钠水溶液调节pH为碱性，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗Prep-TLC纯化得白色固体标题化合物1g(210mg,两步收率67％)。
LC-MS:m/z＝512.3[M+H]+
第七步 (1S,3R)-3-氨基-N-(5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺1h
化合物1g(210mg,0.41mmol)分散在二氯甲烷(4mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室温搅拌1小时，TLC显示原料反应完全。反应液浓缩，饱和碳酸氢钠水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得黄色固体标题化合物1h(220mg,粗品)，直接用于下一步。
第八步 (1S,3R)-3-乙酰氨基-N-(5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺1
化合物1h(220mg,粗品)分散在二氯甲烷(4mL)中，依次加入三乙胺(108mg,1.1mmol)和乙酸酐(82mg,0.8mmol)，室温搅拌15分钟，TLC显示原料反应完全。反应液加入饱和碳酸氢钠水溶液，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇50:1-30:1)得白色固体标题化合物1(160mg,两步收率86％)。
LC-MS:m/z＝454.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.58(s,1H),8.35(s,1H),8.19(s,1H),7.75(d,J＝7.6Hz,1H),7.39(s,1H),3.94(s,2H),3.61-3.50(m,1H),2.85(s,2H),2.65-2.56(m,1H),1.90-1.86(m,1H),1.81-1.70(m,6H),1.30-1.27(m,2H),1.23(s,7H),1.12-1.02(m,1H).(96.49％purity by HPLC)
实施例2
7-(2-((1S,3R)-3-乙酰氨基环己烷-1-甲酰胺基)-5-氯吡啶-4-基)-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲酰胺2
Figure BDA0003049272910000311
化合物1(50mg,0.11mmol)分散在二甲基亚砜(1mL)中，依次加入碳酸钾(30mg,0.22mmol)和双氧水(1mL,30％)，室温搅拌1小时，TLC显示原料反应完全。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-TLC纯化得白色固体标题化合物2(35.4mg,收率68％)。
LC-MS:m/z＝472.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.52(s,1H),8.31(s,1H),8.21(s,1H),7.77(d,J＝8.0Hz,1H),7.59(br,1H),7.34(s,1H),6.92(br,1H),4.03(s,2H),3.62-3.53(m,1H),2.78(s,2H),2.62-2.58(m,1H),1.90-1.87(m,1H),1.82-1.72(m,6H),1.28-1.23(m,3H),1.20(s,6H),1.10-1.05(m,1H).(99.33％purity by HPLC)
实施例3
(1S,3R)-3-乙酰氨基-N-(5-氯-4-(5-((S)-1-羟乙基)-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)3-1
(1S,3R)-3-乙酰氨基-N-(5-氯-4-(5-((R)-1-羟乙基)-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)3-2
Figure BDA0003049272910000312
第一步 (1S,3R)-3-乙酰氨基-N-(5-氯-4-(5-甲酰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺3a
化合物1(100mg,0.22mmol)溶于二氯甲烷(1mL)中，冷却至-60℃，滴加二异丁基氢化铝(0.35mL,0.52mmol,1.5M四氢呋喃溶液)，加完-60℃反应4小时，TLC显示反应完全。反应液倒入冰水中，加稀盐酸(1N)调节pH至酸性，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得标题化合物3a(76mg,收率76％)。
LC-MS:m/z＝457.2[M+H]+
第二步 (1S,3R)-3-乙酰氨基-N-(5-氯-4-(5-((S)-1-羟乙基)-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)3-1&(1S,3R)-3-乙酰氨基-N-(5-氯-4-(5-((R)-1-羟乙基)-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)3-2
化合物3a(75mg,0.16mmol)溶于无水四氢呋喃(1.5mL)中，室温下滴加甲基溴化镁(0.5mL,1.5mmol,3M四氢呋喃溶液)，加完室温反应1小时，TLC显示反应完全。反应液倒入饱和氯化铵溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品中性氧化铝柱层析分离纯化得淡黄色固体标题化合物3(46mg,收率61％)。手性拆分(纳微OD-5H,30*250mm,5um,30mL/min,EtOH:Hexane＝5:95)得淡黄色固体化合物3-1(1号峰,RT 10.3min)(19.3mg,收率42％)和淡黄色固体化合物3-2(2号峰,RT 20.4min)(12.9mg,收率28％)。
化合物3-1
LC-MS:m/z＝473.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.45(s,1H),8.25(s,1H),8.18(s,1H),7.80(d,J＝7.6Hz,1H),6.42(s,1H),5.06(d,J＝5.2Hz,1H),4.72-4.65(m,1H),3.79(q,J＝6.8Hz,2H),3.61-3.52(m,2H),2.81-2.73(m,2H),2.63-2.56(m,1H),1.92-1.84(m,1H),1.78(s,5H),1.40(d,J＝6.4Hz,3H),1.34-1.29(m,4H),1.23(d,J＝3.6Hz,6H).(97.79％purity byHPLC)
化合物3-2
LC-MS:m/z＝473.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.45(s,1H),8.25(s,1H),8.18(s,1H),7.79(d,J＝8.0Hz,1H),6.42(s,1H),5.04(d,J＝5.2Hz,1H),4.72-4.66(m,1H),3.80(q,J＝6.8Hz,2H),3.60-3.50(m,2H),2.82-2.73(m,2H),2.63-2.56(m,1H),1.92-1.84(m,1H),1.78(s,5H),1.40(d,J＝6.4Hz,3H),1.34-1.27(m,4H),1.24(d,J＝3.2Hz,6H).(98.33％purity byHPLC)
实施例4
(3aR,5s,6aS)-2-乙酰基-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-甲酰胺(假定)4-1
(3aR,5r,6aS)-2-乙酰基-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-甲酰胺(假定)4-2
Figure BDA0003049272910000321
第一步 (3aR,6aS)-5-氰基六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯4b
(3aR,6aS)-5-氧代六氢并环戊二烯[c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯4a(3.0g,13.32mmol)和对甲基苯磺酰甲基异腈(992mg,33.29mmol)溶于乙二醇二甲醚(20mL)中，氮气保护下，冷却至0℃，依次加入乙醇(1.53g,33.29mmol)和叔丁醇钾(4.88g,43.53mmol)，升温至60℃反应过夜。TLC检测反应完全。反应液冷却至室温，加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经硅胶柱层析纯化得到标题化合物4b(1.22g,收率39％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.54-3.50(m,2H),3.16-3.13(m,2H),3.00-2.93(m,1H),2.87(s,2H),2.20-2.14(m,2H),1.94-1.90(m,2H),1.44(s,9H).
第二步 (3aR,6aS)-2-(叔丁氧羰基)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-甲酸4c
化合物4b(590mg,2.50mmol)溶于乙二醇(6mL)和水(1.2mL)中，室温下加入氢氧化钾(421mg,7.50mmol)，升温至115℃反应2小时。TLC检测反应完全。反应液冷却至室温，加水，乙酸乙酯萃取，丢弃有机相，水相用稀盐酸(1N)调pH＝3左右，乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得到黄色油状液体标题化合物4c(602mg,粗品)，直接用于下一步。
LC-MS:m/z＝256.2[M+H]+
第三步 (3aR,6aS)-5-((4-溴-5-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯4d-1,2
化合物4c(470mg,粗品)和4-溴-5氯-2氨基吡啶1b(318mg,1.53mmol)溶于乙酸乙酯(14mL)中，室温下加入吡啶(726mg,9.18mmol)，再滴加入1-丙基磷酸酐(3.9g,6.12mmol,50％乙酸乙酯溶液)，反应液室温搅拌反应过夜。TLC检测显示反应完全。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得到小极性标题化合物4d-1(454mg,收率66％)和大极性标题化合物4d-2(309mg,收率45％)。
LC-MS:m/z＝446.1[M+H]+
第四步 (3aR,6aS)-5-((5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯4e-1,2
化合物4d-1(200mg,0.45mmol)和中间体IN-1(171mg,0.68mmol)溶于1,4-二氧六环(6mL)和水(2mL)中，室温下依次加入碳酸钾(125mg,0.90mmol)和Pd(dppf)Cl2二氯甲烷络合物(催化量)，氮气保护下，升温至90℃反应过夜。TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得到白色固体标题化合物4e-1(109mg,收率48％)。
LC-MS:m/z＝500.3[M+H]+
化合物4d-2(309mg,0.70mmol)和中间体IN-1(276mg,1.05mmol)溶于1,4-二氧六环(6mL)和水(2mL)中，室温下依次加入碳酸钾(194mg,1.4mmol)和Pd(dppf)Cl2二氯甲烷络合物(催化量)，氮气保护下，升温至90℃反应过夜。TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得到白色固体标题化合物4e-2(72mg,收率32％)。
LC-MS:m/z＝500.3[M+H]+
第五步 (3aR,6aS)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-甲酰胺4f-1,2
化合物4e-1(109mg,0.22mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，滴加三氟乙酸(1mL)，室温搅拌1小时，TLC显示原料消失。反应液浓缩，残留物溶于乙酸乙酯，依次用饱和碳酸钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得淡黄色固体标题化合物4f-1(80mg,粗品)，直接用于下一步。
LC-MS:m/z＝400.2[M+H]+
化合物4e-2(72mg,0.14mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，滴加三氟乙酸(1mL)，室温搅拌1小时，TLC显示原料消失。反应液浓缩，残留物溶于乙酸乙酯，依次用饱和碳酸钠和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得淡黄色固体标题化合物4f-2(56mg,粗品)，直接用于下一步。
LC-MS:m/z＝400.2[M+H]+
第六步 (3aR,5s,6aS)-2-乙酰基-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-甲酰胺(假定)4-1&(3aR,5r,6aS)-2-乙酰基-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-甲酰胺(假定)4-2
化合物4f-1(30mg,粗品)和三乙胺(16mg,0.16mmol)溶于二氯甲烷(4mL)中，滴加乙酸酐(12mg,0.12mmol)，室温搅拌半小时，TLC显示原料消失。反应液加水淬灭，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Perp-TLC纯化得到白色固体标题化合物4-1(27mg,两步收率75％)。
LC-MS:m/z＝442.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.59(s,1H),8.35(s,1H),8.25(s,1H),7.99(s,1H),3.94(s,2H),3.66-3.62(m,1H),3.51-3.46(m,1H),3.24-3.12(m,3H),2.93(s,2H),2.86-2.80(m,1H),2.77-2.71(m,1H),2.00-1.92(m,5H),1.81-1.72(m,2H),1.26(s,6H).(97.34％purity by HPLC)
化合物4f-2(56mg,粗品)和三乙胺(28mg,0.27mmol)溶于二氯甲烷(4mL)中，滴加乙酸酐(21mg,0.21mmol)，室温搅拌半小时，TLC显示原料消失。反应液加水淬灭，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Perp-TLC纯化得到白色固体标题化合物4-2(40mg,两步收率63％)。
LC-MS:m/z＝442.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.60(s,1H),8.34(s,1H),8.25(s,1H),7.99(s,1H),3.93(s,2H),3.58-3.54(m,2H),3.33-3.30(m,1H),3.28-3.24(m,1H),3.10-3.06(m,1H),2.88(s,2H),2.70-2.60(m,2H),2.17-2.10(m,2H),1.93(s,3H),1.62-1.53(m,2H),1.26(s,6H).(96.95％purity by HPLC)
实施例5
(3aR,6aS)-2-(L-丙氨酰基)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-甲酰胺5
Figure BDA0003049272910000341
第一步 ((2S)-1-((3aR,6aS)-5-((5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯5b
化合物4f-2(70mg,0.18mmol)和Boc-L-丙氨酸5a(66mg,0.35mmol)溶于二氯甲烷(8mL)中，依次加入HATU(103mg,0.27mmol)和N,N-二异丙基乙胺(46mg,0.36mmol)，室温反应2小时。TLC显示反应完全。反应液加水淬灭，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-TLC纯化得白色固体标题化合物5b(100mg,收率100％)。
第二步 (3aR,6aS)-2-(L-丙氨酰基)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-甲酰胺5
化合物5b(100mg,0.18mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室温反应2小时。TLC显示反应完全。反应液加入饱和碳酸氢钠溶液，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-TLC纯化得白色固体标题化合物5(40mg,收率48％)。
LC-MS:m/z＝471.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.63(d,J＝3.2Hz,1H),8.36(s,1H),8.25(s,1H),7.99(s,1H),3.94(s,2H),3.70-3.39(m,7H),3.14-3.06(m,1H),2.88(s,2H),2.72-2.60(m,2H),2.20-2.11(m,2H),1.66-1.54(m,2H),1.26(s,6H),1.10(dd,J＝6.8,10.4Hz,3H).(98.97％purity by HPLC)
实施例6
(3aR,6aS)-2-(D-丙氨酰基)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-甲酰胺6
Figure BDA0003049272910000342
第一步 ((2R)-1-((3aR,6aS)-5-((5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯6b
化合物4f-2(70mg,0.18mmol)和Boc-D-丙氨酸6a(66mg,0.35mmol)溶于二氯甲烷(8mL)中，依次加入HATU(103mg,0.27mmol)和N,N-二异丙基乙胺(46mg,0.36mmol)，室温反应2小时。TLC显示反应完全。反应液加水淬灭，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-TLC纯化得白色固体标题化合物6b(90mg,收率90％)。
第二步 (3aR,6aS)-2-(D-丙氨酰基)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-甲酰胺6
化合物6b(90mg,0.16mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室温反应2小时。TLC显示反应完全。反应液加入饱和碳酸氢钠溶液，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-TLC纯化得白色固体标题化合物6(40mg,收率54％)。
LC-MS:m/z＝471.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6+D2O)δ8.35(s,1H),8.22(d,J＝3.6Hz,1H),7.99(d,J＝1.2Hz,1H),3.93(s,2H),3.86-3.82(m,0.5H),3.71-3.67(m,0.5H),3.51-3.29(m,4H),3.16-3.04(m,1H),2.87(s,2H),2.74-2.64(m,2H),2.19-2.14(m,2H),1.66-1.55(m,2H),1.25-1.22(m,9H).(97.18％purity by HPLC)
实施例7
(3aR,5s,6aS)-2-乙酰基-N-(5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-甲酰胺(假定)7-1
(3aR,5r,6aS)-2-乙酰基-N-(5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-甲酰胺(假定)7-2
Figure BDA0003049272910000351
第一步 (3aR,6aS)-5-((5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯7a-1,2
化合物4c(420mg,1.64mmol)和化合物1f(393mg,1.37mmol)溶于乙酸乙酯(20mL)中，加入吡啶(651mg,8.23mmol)和1-丙基磷酸酐(3.5g,5.50mmol,50％乙酸乙酯溶液)，室温搅拌过夜。TLC检测原料反应完全。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，有机层用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得到小极性白色固体化合物7a-1(110mg,收率15％)与大极性白色固体化合物7a-2(105mg,收率15％)。
第二步 (3aR,6aS)-N-(5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-甲酰胺7b-1,2
化合物7a-1(110mg,0.21mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室温搅拌1小时，TLC显示反应完全。反应液浓缩得标题化合物7b-1(粗品)，直接用于下一步。
化合物7a-2(105mg,0.20mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室温搅拌1小时，TLC显示反应完全。反应液浓缩得标题化合物7b-2(粗品)，直接用于下一步。
第三步 (3aR,5s,6aS)-2-乙酰基-N-(5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-甲酰胺(假定)7-1&(3aR,5r,6aS)-2-乙酰基-N-(5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-甲酰胺(假定)7-2
化合物7b-1(粗品)溶于二氯甲烷(5mL)中，依次加入三乙胺(2mL)和乙酸酐(28mg,0.27mmol)，室温搅拌1小时，TLC显示反应完全。反应液浓缩，乙酸乙酯溶解，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经Prep-TLC纯化得白色固体标题化合物7-1(75mg,两步收率77％)。
LC-MS:m/z＝466.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.64(s,1H),8.37(s,1H),8.22(s,1H),7.42(s,1H),3.95(s,2H),3.65(dd,J＝10.8,8.4Hz,1H),3.49(dd,J＝10.8,8.4Hz,1H),3.24-3.12(m,3H),2.87(s,2H),2.84-2.75(m,2H),2.02-1.94(m,5H),1.81-1.72(m,2H),1.24(s,6H).(98.73％purity by HPLC)
化合物7b-2(粗品)溶于二氯甲烷(5mL)中，依次加入三乙胺(2mL)和乙酸酐(26mg,0.25mmol)，室温搅拌1小时，TLC显示反应完全。反应液浓缩，乙酸乙酯溶解，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品经Prep-TLC纯化得白色固体标题化合物7-2(67mg,两步收率72％)。
LC-MS:m/z＝466.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.66(s,1H),8.37(s,1H),8.22(s,1H),7.41(s,1H),3.95(s,2H),3.56(dd,J＝10.4,7.6Hz,1H),3.42-3.35(m,2H),3.26(dd,J＝12.4,4.4Hz,1H),3.14-3.05(m,1H),2.86(s,2H),2.73-2.58(m,2H),2.18-2.11(m,2H),1.96(s,3H),1.66-1.53(m,2H),1.24(s,6H).(96.66％purity by HPLC)实施例8
(3aR,5s,6aS)-2-乙酰基-N-(4-(5-氨基甲酰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)-5-氯吡啶-2-基)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-甲酰胺(假定)8-1
(3aR,5r,6aS)-2-乙酰基-N-(4-(5-氨基甲酰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)-5-氯吡啶-2-基)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-甲酰胺(假定)8-2
Figure BDA0003049272910000361
化合物7-1(150mg,0.32mmol)溶于二甲基亚砜(2mL)中，加入碳酸钾(89mg,0.64mmol)和双氧水(2mL,30％)，室温搅拌1小时，TLC显示原料反应完全。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得白色固体标题化合物8-1(78mg,收率50％)。
LC-MS:m/z＝484.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.57(s,1H),8.32(s,1H),8.23(s,1H),7.63(br,1H),7.34(s,1H),6.96(br,1H),4.03(s,2H),3.67-3.62(m,1H),3.52-3.47(m,1H),3.24-3.12(m,3H),2.87-2.71(m,4H),2.02-1.92(m,5H),1.81-1.73(m,2H),1.20(s,6H).(97.16％purity by HPLC)
化合物7-2(230mg,0.49mmol)溶于二甲基亚砜(3mL)中，加入碳酸钾(150mg,1.08mmol)和双氧水(3mL,30％)，室温搅拌1小时，TLC显示原料反应完全。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得白色固体标题化合物8-2(132mg,收率56％)。
LC-MS:m/z＝484.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.59(s,1H),8.32(s,1H),8.23(s,1H),7.63(br,1H),7.34(s,1H),6.95(br,1H),4.03(s,2H),3.59-3.54(m,1H),3.42-3.32(m,2H),3.28-3.34(m,1H),3.11-3.07(m,1H),2.77(s,2H),2.72-2.58(m,2H),2.17-2.11(m,2H),1.93(s,3H),1.66-1.53(m,2H),1.20(s,6H).(97.88％purity by HPLC)
实施例9
7-(2-((1S,3R)-3-乙酰氨基环己烷-1-甲酰胺基)-5-氯吡啶-4-基)-N,N,2,2-四甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲酰胺9
Figure BDA0003049272910000371
第一步 7-溴-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲酰胺9a
中间体IN-2(1.50g,6.27mmol)溶于甲醇(10mL)和水(4mL)中，室温下加入氢氧化钠(0.50g,12.50mmol)，升温至80℃反应3小时，TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，浓缩，加水，析出固体，过滤，滤饼洗涤干燥得白色固体标题化合物9a(1.2g,收率74％)。
第二步 7-溴-N,N,2,2-四甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲酰胺9b
化合物9a(550mg,2.1mmol)溶于无水四氢呋喃(10mL)中，0℃下加入氢化钠(154mg,3.85mmol,60％)，搅拌10分钟，加入碘甲烷(1.2g,8.45mmol)，升至室温反应2小时。TLC显示反应完全。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析得黄色固体标题化合物9b(500mg,收率83％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ6.58(s,1H),3.92(s,2H),3.04(s,6H),2.54(s,2H),1.17(s,6H).
第三步 (5-氯-4-(5-(二甲基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)亚氨基二碳酸二叔丁酯9c
化合物9b(300mg,1.05mmol)溶于二氧六环(10mL)和水(3mL)中，室温下依次加入化合物1d(525mg,1.41mmol)，碳酸钠(223mg,2.10mmol)和Pd(dppf)Cl2(39mg,0.05mmol)，氮气保护下，升温至100℃反应2小时。TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得白色固体标题化合物9c(300mg,收率54％)。
第四步 7-(2-氨基-5-氯吡啶-4-基)-N,N,2,2-四甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5甲酰胺9d
化合物9c(300mg,0.69mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室温反应3小时，TLC显示原料剩余。反应液加入饱和碳酸氢钠溶液调碱性，二氯甲烷萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得白色固体标题化合物9d(80mg,收率43％)。
第五步 ((1R,3S)-3-((5-氯-4-(5-(二甲基氨基甲酰基)-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)环己基)氨基甲酸叔丁酯9e
化合物9d(78mg,0.23mmol)和化合物1a(68mg,0.28mmol)溶于乙酸乙酯(10mL)中，室温下加入1-丙基磷酸酐(293mg,0.46mmol,50％乙酸乙酯溶液)和吡啶(73mg,0.92mmol)，升温至80℃反应3小时。TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物9e(177mg,粗品)，直接用于下一步。
第六步 7-(2-((1S,3R)-3-氨基环己烷-1-甲酰胺基)-5-氯吡啶-4-基)-N,N,2,2-四甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲酰胺9f
化合物9e(177mg,粗品)溶于二氯甲烷(6mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室温反应1小时。TLC显示反应完全。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物9f(130mg,粗品)，直接用于下一步。
第七步 7-(2-((1S,3R)-3-乙酰氨基环己烷-1-甲酰胺基)-5-氯吡啶-4-基)-N,N,2,2-四甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲酰胺9
化合物9f(130mg,粗品)溶于四氢呋喃(8mL)中，加入醋酸酐(34mg,0.33mmol)，三乙胺(42mg,0.42mmol)，室温反应1小时。TLC显示反应完全。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得白色固体标题化合物9(70mg,三步收率61％)。
LC-MS:m/z＝500.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.55(s,1H),8.33(s,1H),8.22(s,1H),7.79(d,J＝7.6Hz,1H),6.99(s,1H),3.96(s,2H),3.59-3.55(m,1H),3.11(s,6H),2.80(s,2H),2.64-2.58(m,1H),1.91-1.88(m,2H),1.78-1.76(m,6H),1.32-1.29(m,2H),1.21(s,6H),1.12-1.05(m,1H).(96.72％purity by HPLC)
实施例10
(1S,3R)-3-乙酰氨基-N-(4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)-5-氟吡啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺10
Figure BDA0003049272910000381
第一步 7-(2-氯-5-氟吡啶-4-基)-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲腈10b
中间体IN-2(500mg,2.09mmol)和2-氯-5-氟吡啶-4-硼酸10a(550mg,3.14mmol)溶于1,4-二氧六环(10mL)和水(2mL)的混合溶剂中，室温下加入碳酸钠(332mg,3.13mmol)和Pd(dppf)Cl2(153mg,0.21mmol)，氮气保护下，升温至90℃反应3小时，TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得标题化合物10b(120mg,收率20％)。
第二步 ((1R,3S)-3-氨基甲酰基环己基)氨基甲酸叔丁酯10c
化合物1a(400mg,1.6mmol)溶于干N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入HATU(950mg,2.5mmol)和N,N-二异丙基乙胺(413mg,3.2mmol)，搅拌15分钟，再加入氯化铵(101mg,1.9mmol)，室温搅拌过夜，TLC显示反应完成。反应液倒入水中，有固体析出，过滤，滤饼洗涤干燥得到类白色固体标题化合物10c(330mg,粗品)，直接用于下一步。
第三步 ((1R,3S)-3-((4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)-5-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)环己基)氨基甲酸叔丁酯10d
化合物10b(120mg,0.41mmol)和化合物10c(149mg,0.61mmol)溶于1,4-二氧六环(10mL)中，室温下加入Pd2(dba)3(38mg,0.04mmol)，XPhos(39mg,0.08mmol)和叔丁醇钾(92mg,0.82mmol)，氮气保护下，升温至100℃反应过夜。TLC显示反应完全。。反应液冷却至室温，加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得标题化合物10d(120mg,收率59％)。
第四步 (1S,3R)-3-氨基-N-(4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)-5-氟吡啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺10e
化合物10d(120mg,0.24mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室温反应1小时。TLC显示反应完全。反应液加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物10e(100mg,粗品)，直接用于下一步。
第五步 (1S,3R)-3-乙酰氨基-N-(4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)-5-氟吡啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺10
化合物10e(100mg,粗品)溶于四氢呋喃(8mL)中，加入醋酸酐(31mg，0.30mmol)和碳酸钾(52mg,0.38mmol)，室温反应1小时，TLC显示反应完全。反应液加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-TLC纯化得标题化合物10(58mg,两步收率55％)。
LC-MS:m/z＝438.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.51(s,1H),8.30-8.28(m,2H),7.78(d,J＝8.0Hz,1H),7.36(d,J＝2.0Hz,1H),3.95(s,2H),3.59-3.54(m,1H),2.94(s,2H),2.63-2.58(m,1H),1.90-1.85(m,1H),1.78(s,6H),1.36-1.25(m,9H),1.13-1.05(m,1H).(99.62％purityby HPLC)
实施例11
(1S,3R)-3-乙酰氨基-N-(4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺11
Figure BDA0003049272910000391
第一步 (4-溴吡啶-2-基)亚氨基二碳酸二叔丁酯11b
2-氨基-4-溴吡啶11a(2.0g,11.56mmol)和二碳酸二叔丁酯(6.5g,29.78mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，加入4-二甲氨基吡啶(122mg,0.1mmol)，室温反应过夜，TLC显示反应完全。反应液加水，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析得到白色固体标题化合物11b(3.5g,收率81％)。
第二步 (4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)吡啶-2-基)亚氨基二碳酸二叔丁酯11c
氮气保护下，化合物11b(3.5g,9.38mmol)和联硼酸频那醇酯(3.57g,14.06mmol)溶于1,4-二氧六环(50mL)中，室温下加入醋酸钾(2.30g,23.44mmol)和Pd(dppf)Cl2(343mg,0.47mmol)，升温至90℃搅拌过夜，TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得到白色固体标题化合物11c(2.7g,收率68％)。
第三步 (4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)亚氨基二碳酸二叔丁酯11d
氮气保护下，化合物11c(500mg,1.19mmol)和中间体IN-2(340mg,1.42mmol)溶于1,4-二氧六环(6mL)和水(2mL)中，室温下加入碳酸钠(254mg,2.40mmol)和Pd(dppf)Cl2(88mg,0.12mmol)，升温至90℃反应3小时，TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得到白色固体标题化合物11d(380mg,收率70％)。
第四步 7-(2-氨基吡啶-4-基)-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲腈11e
化合物11d(380mg,1.08mmol)溶于二氯甲烷(9mL)中，加入三氟乙酸(3mL)室温反应30分钟，TLC显示反应完全。反应液加饱和碳酸氢钠水溶液淬灭，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得到白色固体标题化合物11e(220mg,收率79％)。
第五步 ((1R,3S)-3-((4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)环己基)氨基甲酸叔丁酯11f
化合物11e(220mg,0.87mmol)，化合物1a(233mg,0.96mmol)和吡啶(206mg,2.60mmol)溶于乙酸乙酯(10mL)中，加入1-丙基磷酸酐(1.11g,1.74mmol,50％乙酸乙酯溶液)，升温至40℃反应过夜，TLC显示反应完全。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得到白色标题化合物11f(234mg,收率56％)。
第六步 (1S,3R)-3-氨基-N-(4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺11g
化合物11f(234mg,0.49mmol)溶于二氯甲烷(9mL)中，加入三氟乙酸(3mL)，室温反应30分钟，TLC显示反应完全。反应液加入饱和碳酸氢钠水溶液，二氯甲烷萃取合并有机相，饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得到白色固体化合物11g(121mg,收率65％)。
第七步 (1S,3R)-3-乙酰氨基-N-(4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺11
化合物11g(121mg,0.32mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三乙胺(66mg,0.65mmol)和乙酸酐(40mg,0.39mmol)，室温反应1小时，TLC显示反应完全。反应液加入饱和碳酸氢钠水溶液，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得到白色固体化合物11(75mg,收率56％)。
LC-MS:m/z＝420.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.42(s,1H),8.23-8.22(m,2H),7.80(d,J＝8.0Hz,1H),7.50(s,1H),7.22(dd,J＝4.2,1.2Hz,1H),3.91(s,2H),3.58-3.53(m,1H),2.97(s,2H),2.64-2.59(m,1H),1.90-1.87(m,1H),1.80-1.76(m,6H),1.32-1.23(m,9H),1.10-1.05(m,1H).(95.42％purity by HPLC)
实施例12
7-(2-((1S,3R)-3-乙酰氨基环己烷-1-甲酰胺基)吡啶-4-基)-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲酰胺12
Figure BDA0003049272910000401
化合物11(75mg,0.18mmol)和碳酸钾(49mg,0.35mmol)溶于二甲基亚砜(5mL)中，加入双氧水(60mg,30％)，室温反应2小时，TLC显示反应完全。反应液加入饱和碳酸氢钠水溶液，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得到白色固体标题化合物12(15mg,收率19％)。
LC-MS:m/z＝438.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.34(s,1H),8.23(s,1H),8.19(d,J＝5.2Hz,1H),7.79(d,J＝8.0Hz,1H),7.64-7.56(m,1H),7.33(s,1H),7.06(d,J＝4.8Hz,1H),7.00-6.91(m,1H),4.00(s,2H),3.62-3.53(m,1H),2.88(s,2H),2.66-2.62(m,1H),2.01-1.89(m,2H),1.78(s,6H),1.32-1.23(m,9H).(97.42％purity by HPLC)
实施例13
7-(2-((1S,3R)-3-氨基环己烷-1-甲酰胺基)-5-氯吡啶-4-基)-N,2,2-三甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲酰胺13
Figure BDA0003049272910000411
第一步 7-溴-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲酸13a
中间体IN-2(2.0g,8.36mmol)溶于乙醇(40mL)中，室温下加入氢氧化钠(3.34g,83.52mmol)，升温至80℃反应48小时，TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，加入稀盐酸(1N)调酸性，加水稀释，乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析得白色固体标题化合物13a(1.50g,收率70％)。
LC-MS:m/z＝258.0[M+H]+
第二步 7-溴-N,2,2-三甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲酰胺13b
化合物13a(1.0g,3.87mmol)和甲胺盐酸盐(392mg,5.80mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入HATU(2.21g,5.81mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.0g,7.74mmol)，室温反应2小时，TLC显示反应完全。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得白色固体标题化合物13b(1.1g,收率100％)。
LC-MS:m/z＝271.1[M+H]+
第三步 (5-氯-4-(2,2-二甲基-5-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)亚氨基二碳酸二叔丁酯13c
化合物13b(1.1g,4.06mmol)，化合物1d(2.22g,5.96mmol)和碳酸钠(860mg,8.11mmol)分散至1,2-二氯乙烷(20mL)和水(5mL)的混合溶剂中，室温下加入Pd(dppf)Cl2(170mg,0.23mmol)，氮气保护下，升温至85℃反应3小时，TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得白色固体标题化合物13c(250mg,收率15％)。
LC-MS:m/z＝419.2[M+H-Boc]+
第四步 7-(2-氨基-5-氯吡啶-4-基)-N,2,2-三甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲酰胺13d
化合物13c(250mg,0.48mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室温反应1小时，TLC显示反应完全。反应液加入饱和碳酸氢钠溶液调碱性，乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得白色固体标题化合物13d(170mg,收率89％)。
第五步 ((1R,3S)-3-((5-氯-4-(2,2-二甲基-5-(甲基氨基甲酰基)-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)环己基)氨基甲酸叔丁酯13e
化合物13d(100mg,0.31mmol)，化合物1a(90mg,0.37mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中，室温下加入1-丙基磷酸酐(394mg,0.62mmol,50％N,N-二甲基甲酰胺溶液)和吡啶(147mg,1.86mmol)，升温至80℃反应2小时。TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得白色固体标题化合物13e(60mg,收率36％)。
LC-MS:m/z＝544.3[M+H]+
第六步 7-(2-((1S,3R)-3-氨基环己烷-1-甲酰胺基)-5-氯吡啶-4-基)-N,2,2-三甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲酰胺13f
化合物13e(60mg,0.11mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室温反应1小时，TLC显示反应完全。加入饱和碳酸氢钠溶液调碱性，乙酸乙酯萃取，水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱层析纯化得白色固体标题化合物13f(47mg,收率96％)。
第七步 7-(2-((1S,3R)-3-氨基环己烷-1-甲酰胺基)-5-氯吡啶-4-基)-N,2,2-三甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲酰胺13
化合物13f(47mg,0.10mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，加入醋酸酐(14mg,0.14mmol)和三乙胺(25mg,0.25mmol)，室温反应1小时。TLC显示反应完全。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-TLC纯化得白色固体标题化合物13(35mg,收率65％)。
LC-MS:m/z＝486.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.55(s,1H),8.32(s,1H),8.23(s,1H),8.11-8.09(m,1H),7.79(d,J＝7.6Hz,1H),7.30(s,1H),4.04(s,2H),3.60-3.52(m,1H),2.79(s,2H),2.71(d,J＝4.4Hz,3H),2.63-2.59(m,1H),1.90-187(m,1H),1.82-1.73(m,6H),1.28-1.23(m,3H),1.20(s,6H),1.09-1.06(m,1H).(98.68％purity by HPLC)
实施例14
(2r,3aR,5s,6aS)-5-乙酰氨基-N-(5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)八氢并环戊二烯-2-甲酰胺(假定)14-1-1
(2r,3aR,5r,6aS)-5-乙酰氨基-N-(5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)八氢并环戊二烯-2-甲酰胺(假定)14-1-2
(2s,3aR,5s,6aS)-5-乙酰氨基-N-(5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)八氢并环戊二烯-2-甲酰胺(假定)14-2-1
(2s,3aR,5r,6aS)-5-乙酰氨基-N-(5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)八氢并环戊二烯-2-甲酰胺(假定)14-2-2
Figure BDA0003049272910000431
第一步 5-(苄氨基)八氢并环戊二烯-2-甲酸甲酯14a
中间体IN-4(500mg,2.74mmol)和苄胺(353mg,3.29mmol)分散在1,2-二氯乙烷(15mL)中，室温搅拌30分钟，加入三乙酰氧基硼氢化钠(875mg,4.13mmol)和乙酸(165mg,2.75mmol)，室温搅拌4小时，TLC显示反应完全。反应液加水淬灭，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得白色固体标题化合物14a(610mg,收率83％)。
LC-MS:m/z＝274.2[M+H]+
第二步 5-氨基八氢并环戊二烯-2-甲酸甲酯14b
化合物14a(610mg,2.23mmol)分散在甲醇(12mL)中，加入钯/碳(200mg,10％)，氢气氛围下室温搅拌过夜。TLC显示原料反应完全。反应液垫硅藻土过滤，滤液浓缩得油状液体标题化合物14b(390mg,粗品)，直接用于下一步。
LC-MS:m/z＝184.2[M+H]+
第三步 5-乙酰氨基八氢并环戊二烯-2-甲酸甲酯14c
化合物14b(390mg,粗品)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三乙胺(434mg,4.29mmol)和乙酸酐(326mg,3.19mmol)，室温搅拌1小时，TLC显示原料反应完全。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得黄色油状标题化合物14c(400mg,两步收率80％)。
第四步 5-乙酰氨基八氢并环戊二烯-2-甲酸14d
化合物14c(300mg,1.33mmol)溶于四氢呋喃(6mL)中，加入氢氧化钠(0.8mL,4.0mmol,5N)水溶液，室温搅拌过夜，TLC显示原料反应完全。反应液加水稀释，乙酸乙酯萃取，丢弃有机相，水相用稀盐酸(1N)调pH至2-3，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得白色固体标题化合物14d(220mg,粗品)，直接用于下一步。
第五步 (2r,3aR,5s,6aS)-5-乙酰氨基-N-(5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)八氢并环戊二烯-2-甲酰胺(假定)14-1-1&(2r,3aR,5r,6aS)-5-乙酰氨基-N-(5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)八氢并环戊二烯-2-甲酰胺(假定)14-1-2&(2s,3aR,5s,6aS)-5-乙酰氨基-N-(5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)八氢并环戊二烯-2-甲酰胺(假定)14-2-1&(2s,3aR,5r,6aS)-5-乙酰氨基-N-(5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)八氢并环戊二烯-2-甲酰胺(假定)14-2-2
化合物14d(220mg,粗品)和化合物1f(250mg,0.87mmol)分散在乙酸乙酯(10mL)中，室温下依次加入吡啶(0.4mL,4.97mmol)和1-丙基磷酸酐(2.22g,3.49mmol,50％乙酸乙酯溶液)，升温至85℃搅拌2小时，TLC显示原料反应完全。反应液冷却至室温，加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-TLC纯化得白色固体小极性化合物14-1(90mg,收率19％)和大极性化合物14-2(96mg,收率20％)。化合物14-1手性拆分(纳微OD-5H,30*250mm,5um,30mL/min,IPA:Hexane＝20:80)得化合物14-1-1(1号峰,RT 17.2min)(60mg,收率67％)，化合物14-1-2(2号峰,RT 24.1min)(15mg,收率16％)。化合物14-2手性拆分(纳微OD-5H,30*250mm,5um,30mL/min,IPA:Hexane＝20:80)得化合物14-2-1(1号峰,RT 30.0min)(15mg,收率17％)，化合物14-2-2(2号峰,RT 42.0min)(60mg,收率67％)。
化合物14-1-1
LC-MS:m/z＝480.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.62(s,1H),8.37(s,1H),8.23(s,1H),7.79(d,J＝7.6Hz,1H),7.42(s,1H),4.09-4.04(m,1H),3.95(s,2H),3.05-3.01(m,1H),2.87(s,2H),2.40-2.34(m,2H),2.14-2.03(m,4H),1.76(s,3H),1.54-1.47(m,2H),1.24(s,6H),1.18-1.13(m,2H).(98.65％purity by HPLC)
化合物14-2-2
LC-MS:m/z＝480.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.73(s,1H),8.37(s,1H),8.23(s,1H),7.87(d,J＝7.2Hz,1H),7.42(s,1H),3.95(s,2H),3.77-3.71(m,1H),3.12-3.06(m,1H),2.86(s,2H),2.46-2.42(m,2H),2.10-2.03(m,2H),1.80-1.75(m,5H),1.68-1.63(s,2H),1.23(s,6H),1.04-0.95(m,2H).(98.90％purity by HPLC)
化合物14-1-2和化合物14-2-1量少，未送1H NMR
实施例15
(2s,3aR,5r,6aS)-N-(4-(5-氨基甲酰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)-5-氯吡啶-2-基)八氢并环戊二烯-2,5-二甲酰胺(假定)15-1
(2r,3aR,5s,6aS)-N-(4-(5-氨基甲酰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)-5-氯吡啶-2-基)八氢并环戊二烯-2,5-二甲酰胺(假定)15-2
Figure BDA0003049272910000441
第一步 5-氰基-5-((三甲基甲硅烷基)氧基)八氢并环戊二烯-2-甲酸甲酯15a
中间体IN-4(600mg,3.29mmol)分散在氯仿(4mL)中，室温加入碘化锌(催化量)和三甲基氰硅烷(272mg,2.74mmol)，室温搅拌过夜，TLC显示原料被耗尽。反应液倒入饱和氯化铵水溶液中淬灭，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得无色油标题化合物15a(820mg,收率89％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.67-3.66(m,3H),2.91-2.63(m,3H),2.48-2.31(m,2H),2.23-2.16(m,1H),1.97-1.85(m,2H),1.79-1.72(m,2H),1.63-1.52(m,1H),0.24-0.22(m,9H).
第二步 5-氰基1,2,3,3a,4,6a-六氢并环戊二烯-2-甲酸甲酯15b
化合物15a(820mg,2.91mmol)分散在吡啶(4mL)中，室温下加入三氯氧磷(0.6mL,6.44mmol)，升温至110℃回流3小时，TLC显示原料被耗尽。反应液冷却至室温，缓慢加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得透明油状液体标题化合物15b(400mg,收率72％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.50-6.40(m,1H),3.67-3.66(m,3H),3.48-3.32(m,1H),3.00-2.66(m,3H),2.42-1.98(m,3H),1.87-1.54(m,2H).
第三步 5-氰基八氢并环戊二烯-2-甲酸甲酯15c
化合物15b(100mg,0.52mmol)分散在甲醇(2mL)中，加入钯/碳(40mg,10％)，室温搅拌2小时，TLC显示反应完全。反应液垫硅藻土过滤，滤液浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得透明油状液体标题化合物15c(30mg,收率30％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.67-3.66(m,3H),2.87-2.72(m,2H),2.61-2.50(m,2H),2.39-2.16(m,4H),1.79-1.61(m,4H).
第四步 5-氨基甲酰基八氢并环戊二烯-2-甲酸甲酯15d
化合物15c(100mg,0.52mmol)分散在二甲基亚砜(0.5mL)中，依次加入碳酸钾(145mg,1.05mmol)和双氧水(1mL,30％)，室温搅拌30分钟。TLC显示原料被耗尽。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物15d(95mg,粗品)，直接用于下一步。
LC-MS:m/z＝212.2[M+H]+
第五步 5-氨基甲酰基八氢并环戊二烯-2-甲酸15e
化合物15d(150mg,粗品)分散在四氢呋喃(3mL)中，加入氢氧化钠(57mg,1.42mmol)，室温搅拌过夜，TLC显示反应完全。反应液加水，乙酸乙酯萃取，丢弃有机相，水相用稀盐酸(1N)调节pH＝3，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物15e(120mg,粗品)，直接用于下一步。
LC-MS:m/z＝198.2[M+H]+
第六步 N-(5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)-5-氰基八氢并环戊二烯-2-甲酰胺15f-1,2
化合物15e(120mg,粗品)和化合物1f(89mg,0.31mmol)分散在乙酸乙酯(10mL)中，室温下依次加入吡啶(0.4mL,4.97mmol)和1-丙基磷酸酐(2.22g,3.49mmol,50％乙酸乙酯溶液)，升温至85℃搅拌2小时，TLC显示原料反应完全。反应液加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-TLC(石油醚/乙酸乙酯＝2:1)纯化得白色固体小极性标题化合物15f-1(30mg,收率21％)和大极性标题化合物15f-2(60mg,收率42％)。
化合物15f-1
LC-MS:m/z＝448.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.60(s,1H),8.38(s,1H),8.22(s,1H),7.42(s,1H),3.95(s,2H),3.13-3.06(m,1H),2.86(s,2H),2.74-2.67(m,1H),2.57-2.53(m,2H),2.35-2.29(m,2H),1.71-1.69(m,3H),140-1.32(m,3H),1.26(s,6H).(92.51％purity by HPLC)
化合物15f-2
LC-MS:m/z＝448.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.59(s,1H),8.36(s,1H),8.22(s,1H),7.41(s,1H),3.94(s,2H),3.03-3.00(m,2H),2.86(s,2H),2.49-2.48(m,2H),2.21-2.18(m,2H),2.10-2.09(m,2H),1.65-1.60(m,4H),1.26(s,6H).(92.98％purity by HPLC)
第七步 (2s,3aR,5r,6aS)-N-(4-(5-氨基甲酰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)-5-氯吡啶-2-基)八氢并环戊二烯-2,5-二甲酰胺(假定)15-1&(2r,3aR,5s,6aS)-N-(4-(5-氨基甲酰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)-5-氯吡啶-2-基)八氢并环戊二烯-2,5-二甲酰胺(假定)15-2
化合物15f-1(20mg,0.045mmol)分散在二甲基亚砜(0.5mL)中，加入碳酸钾(25mg,0.18mmol)和双氧水(0.75mL,30％)，室温搅拌两天，TLC显示反应完全。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-TLC纯化得白色固体标题化合物15-1(3.5mg,收率16％)。
LC-MS:m/z＝484.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.61(s,1H),8.31(s,1H),8.24(s,1H),7.62(s,1H),7.34(s,1H),7.23(s,1H),6.96(s,1H),6.72(s,1H),4.03(s,2H),3.14-3.05(m,1H),2.77(s,2H),2.39-2.33(m,1H),2.01-1.97(m,3H),1.74-1.65(m,4H),1.35-1.30(m,3H),1.20(s,6H).(94.53％purity by HPLC)
化合物15f-2(40mg,0.09mmol)分散在二甲基亚砜(1mL)中，加入碳酸钾(50mg,0.36mmol)和双氧水(1.5mL,30％)，室温搅拌两天，TLC显示反应完全。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-TLC纯化得白色固体标题化合物15-2(15mg,收率34％)。
LC-MS:m/z＝484.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.50(s,1H),8.31(s,1H),8.25(s,1H),7.64(s,1H),7.35(s,1H),7.21(s,1H),6.96(s,1H),6.72(s,1H),4.03(s,2H),3.07-3.02(m,1H),2.79(s,2H),2.69-2.64(m,1H),2.45-2.42(m,2H),2.09-2.02(m,2H),1.99-1.93(m,2H),1.56-1.43(m,4H),1.20(s,6H).(98.19％purity by HPLC)
实施例16
(1S,3R)-3-乙酰氨基-N-(5-氯-4-(7-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-基)吡啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺16
Figure BDA0003049272910000461
第一步 ((1R,3S)-3-((4-溴-5-氯吡啶-2-基)氨基甲酰基)环己基)氨基甲酸叔丁酯16a
4-溴-5-氯吡啶-2-氨基1b(200mg,0.96mmol)，化合物1a(246mg,粗品)和吡啶(304mg,3.84mmol)溶于乙酸乙酯(8mL)中，加入1-丙基磷酸酐(1.2g,1.88mmol,50％乙酸乙酯溶液)，室温反应4小时，TLC显示原料大部分剩余，升温至60℃反应过夜，TLC显示原料依旧剩余大部分。反应液冷却至室温，加水，加饱和碳酸钠溶液调节pH到9，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析得到白色固体标题化合物16a(114mg,收率26％)。
LC-MS:m/z＝431.9[M+H]+
第二步 2,2-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-甲腈16b
化合物IN-5(112mg,0.47mmol)溶于1,4-二氧六环(10mL)中，室温下依次加入联硼酸频哪醇酯(238mg,0.94mmol)，Pd(dppf)Cl2的二氯甲烷络合物(19mg,0.02mmol)和醋酸钾(138mg,1.41mmol)，氮气保护下，加热至100℃反应过夜，TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，过滤，滤液浓缩，粗品Prep-TLC纯化得无色液体标题化合物16b(118mg,收率88％)。
LC-MS:m/z＝287.2[M+H]+
第三步 ((1R,3S)-3-((5-氯-4-(7-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)环己烷基)氨基甲酸叔丁酯16c
化合物16a(59mg,0.21mmol)溶于1,4-二氧六环(3mL)中，室温下依次加入化合物16b(89mg,0.20mmol)，四-三苯基膦钯(12mg,0.01mmol)，磷酸钾(87mg,0.41mmol)和水(0.5mL)，氮气保护下，加热至95℃反应过夜，LC-MS显示少量原料剩余。反应液冷却至室温，过滤，滤液浓缩，粗品Prep-TLC纯化得白色固体标题化合物16c(24mg,收率23.4％)。
LC-MS:m/z＝512.3[M+H]+
第四步 (1S,3R)-3-氨基-N-(5-氯-4-(7-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-基)吡啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺16d
化合物17c(24mg,0.05mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室温反应1小时，TLC显示反应完全。反应液浓缩得标题化合物16d(19mg,粗品)，直接用于下一步。
第五步 (1S,3R)-3-乙酰氨基-N-(5-氯-4-(7-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-基)吡啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺16
化合物16d(19mg,粗品)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三乙胺(14mg,0.14mmol)和乙酸酐(7mg,0.07mmol)，室温反应过夜，TLC显示反应完全。反应液浓缩，粗品Prep-TLC纯化得淡黄色固体标题化合物16(16mg,两步收率75％)。
LC-MS:m/z＝454.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.25(s,1H),8.13(s,1H),6.80(s,1H),3.83(s,2H),3.63-3.62(m,1H),2.78(s,2H),2.50-2.47(m,1H),1.96-1.80(m,7H),1.37-1.30(m,4H),1.07(s,6H).(99.15％purity by HPLC)
实施例17
5-(2-((1S,3R)-3-乙酰氨基环己烷-1-甲酰胺基)-5-氯吡啶-4-基)-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-甲酰胺17
Figure BDA0003049272910000471
化合物16(70mg,0.15mmol)分散在二甲基亚砜(1mL)中，依次加入双氧水(1mL,30％)和碳酸钾(47mg,0.34mmol)，室温搅拌1小时，TLC显示原料反应完全。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-TLC(二氯甲烷/甲醇10:1)纯化，二氯甲烷打浆得白色固体标题化合物17(55mg,收率78％)。
LC-MS:m/z＝472.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.63(s,1H),8.39(s,1H),8.21(s,1H),7.77(d,J＝8.0Hz,1H),7.25(br,1H),7.08(s,1H),6.75(br,1H),3.81(s,2H),3.61-3.52(m,1H),2.88(s,2H),2.65-2.56(m,1H),1.90-1.87(m,1H),1.82-1.70(m,6H),1.29-1.27(m,2H),1.19(s,7H),1.12-1.03(m,1H).(98.91％purity by HPLC)
实施例18
(5S,7S)-2-乙酰基-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-7-甲酰胺(假定)18-1
(5R,7R)-2-乙酰基-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-7-甲酰胺(假定)18-2
Figure BDA0003049272910000481
第一步 3-(2,5-二氯吡啶-4-基)-5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑18b
中间体IN-1(230mg,0.88mmol)和2,5-二氯-4-碘吡啶18a(200mg,0.73mmol)溶于1,4-二氧六环(6mL)和水(2mL)中，加入碳酸钾(202mg,1.46mmol)，Pd(dppf)Cl2二氯甲烷络合物(50mg,0.06mmol)，氮气置换3次，升温至85℃搅拌3小时。TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得淡黄色固体标题化合物18b(108mg,收率52％)。
第二步 7-((5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯18c-1,2
中间体IN-6-1(133mg,0.50mmol)和化合物18b(158mg,0.56mmol)溶于1,4-二氧六环(5mL)中，加入碳酸铯(498mg,1.53mmol)，四-三苯基膦钯(118mg,0.10mmol)和Xantphos(31mg,0.05mmol)，氮气置换3次，升温至110℃搅拌1小时。TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得淡黄色固体化合物18c(176mg,收率68％)。手性拆分(DAICEL AD-H,30*250mm,5um,30mL/min,IPA:Hexane＝30:70)得标题化合物18c-1(1号峰,RT 16.0min)(46mg,收率26％)和标题化合物18c-2(2号峰,RT 22.3min)(54mg,收率31％)。
第三步 N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-7-甲酰胺18d-1,2
化合物18c-1(46mg,0.09mmol)溶于二氯甲烷(1mL)中，加入三氟乙酸(0.5mL)，室温搅拌30分钟，TLC显示反应完全。反应液浓缩，饱和碳酸氢钠水溶液调节pH为碱性，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物18d-1(粗品)，直接用于下一步。
化合物18c-2(54mg,0.10mmol)溶于二氯甲烷(1mL)中，加入三氟乙酸(0.5mL)，室温搅拌30分钟，TLC显示反应完全。反应液浓缩，饱和碳酸氢钠水溶液调节pH为碱性，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物18d-2(粗品)，直接用于下一步。
第四步 (5S,7S)-2-乙酰基-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-7-甲酰胺(假定)18-1&(5R,7R)-2-乙酰基-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-7-甲酰胺(假定)18-2
化合物18d-1(37mg,粗品)溶于二氯甲烷(1mL)中，加入三乙胺(22mg,0.22mmol)和乙酸酐(17mg,0.17mmol)，室温搅拌30分钟，TLC显示反应完全。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-TLC纯化得白色固体标题化合物18-1(33mg,两步收率80％)
LC-MS:m/z＝456.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.29(br,0.5H),8.68(br,0.5H),8.36-8.31(m,1H),8.21-8.20(m,1H),8.16-8.11(m,1H),3.96(d,J＝3.2Hz,2H),3.52(q,J＝7.2Hz,2H),3.35-3.30(m,2H),3.00-2.97(m,3H),2.11-1.70(m,11H),1.35(d,J＝4.0Hz,6H).(98.58％purity by HPLC)
化合物18d-2(43mg,粗品)溶于二氯甲烷(1mL)中，加入三乙胺(30mg,0.30mmol)和乙酸酐(25mg,0.24mmol)，室温搅拌30分钟，TLC显示反应完全。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-TLC纯化得白色固体标题化合物18-2(36mg,两步收率72％)。
LC-MS:m/z＝456.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.86(br,0.5H),8.55(br,0.5H),8.32-8.28(m,1H),8.21-8.20(m,1H),8.13-8.09(m,1H),3.96(d,J＝2.0Hz,2H),3.51(q,J＝7.2Hz,2H),3.34-3.29(m,2H),3.00-2.96(m,3H),2.10-1.71(m,11H),1.34(d,J＝3.2Hz,6H).(99.24％purity by HPLC)
实施例19
(5S,7R)-2-乙酰基-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-7-甲酰胺(假定)19-1
(5R,7S)-2-乙酰基-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-7-甲酰胺(假定)19-2
Figure BDA0003049272910000491
第一步 7-((5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁酯19a-1,2
化合物18b(70mg,0.26mmol)和中间体IN-6-2(83mg,0.29mmol)溶于1,4-二氧六环(2mL)中，加入碳酸铯(262mg,0.80mmol)，四-三苯基膦钯(62mg,0.05mmol)和Xantphos(16mg,0.03mmol)，氮气置换3次，升温至110℃搅拌1小时。TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得淡黄色固体化合物19a(100mg,收率78％)。手性拆分(DAICEL AD-H,30*250mm,5um,30mL/min,IPA:Hexane＝30:70)得标题化合物19a-1(1号峰,RT26.0min)(22mg,收率22％)和标题化合物19a-2(2号峰,RT32.0min)(30mg,收率30％)。
LC-MS:m/z＝514.3[M+H]+
第二步 N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-7-甲酰胺19b-1,2
化合物19a-1(22mg,0.04mmol)溶于二氯甲烷(1mL)中，加入三氟乙酸(0.5mL)，室温搅拌30分钟，TLC显示反应完全。反应液浓缩，饱和碳酸氢钠水溶液调节pH为碱性，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物19b-1(粗品)，直接用于下一步。
化合物19a-2(32mg,0.06mmol)溶于二氯甲烷(1mL)中，加入三氟乙酸(0.5mL)，室温搅拌30分钟，TLC显示反应完全。反应液浓缩，饱和碳酸氢钠水溶液调节pH为碱性，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物19b-2(粗品)，直接用于下一步。
LC-MS:m/z＝414.2[M+H]+
第三步 (5S,7R)-2-乙酰基-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-7-甲酰胺(假定)19-1&(5R,7S)-2-乙酰基-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-2-氮杂螺[4.4]壬烷-7-甲酰胺(假定)19-2
化合物19b-1(18mg,粗品)溶于二氯甲烷(1mL)中，加入三乙胺(11mg，0.11mmol)和乙酸酐(9mg,0.09mmol)，室温搅拌30分钟，TLC显示反应完全。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-TLC纯化得白色固体标题化合物19-1(11mg,两步收率60％)。
LC-MS:m/z＝456.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.05(br,0.5H),8.61(br,0.5H),8.34-8.31(m,1H),8.21-8.20(m,1H),8.18-8.12(m,1H),3.96(s,2H),3.54-3.32(m,4H),3.01-2.97(m,3H),2.16-1.63(m,11H),1.35(d,J＝6.8Hz,6H).(99.44％purity by HPLC)
化合物19b-2(26mg,粗品)溶于二氯甲烷(1mL)中，加入三乙胺(15mg,0.15mmol)和乙酸酐(12mg,0.12mmol)，室温搅拌30分钟，TLC显示反应完全。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-TLC纯化得白色固体标题化合物19-2(16mg,两步收率58％)。
LC-MS:m/z＝456.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.22(br,0.5H),8.71(br,0.5H),8.38-8.33(m,1H),8.21-8.13(m,2H),3.96(s,2H),3.55-3.32(m,4H),3.03-2.98(m,3H),2.05-1.63(m,11H),1.35(d,J＝7.6Hz,6H).(98.19％purity by HPLC)(99.74％purity by HPLC)
实施例20
(1S,3S)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(吡啶-3-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)20-1
(1R,3S)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(吡啶-3-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)20-2
(1S,3R)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(吡啶-3-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)20-3
(1R,3R)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(吡啶-3-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)20-4
Figure BDA0003049272910000511
第一步 (5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)亚氨基二碳酸二叔丁酯20a
化合物IN-1i(215mg,1.0mmol)和化合物1d(746mg,2.0mmol)分散在1,4-二氧六环(15mL)和水(5mL)中，室温下依次加入碳酸钠(212mg,2.0mmol)和Pd(dppf)Cl2(催化量)，加毕，氮气保护下升温至100℃搅拌1小时，TLC显示原料反应完全。反应液冷却至室温，过滤，滤饼乙酸乙酯洗涤多次，滤液加水稀释，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得白色固体标题化合物20a(398mg,收率86％)。
第二步 5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-胺20b
化合物20a(398mg,0.86mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室温搅拌1小时，TLC显示原料反应完全。反应液浓缩，加入饱和碳酸氢钠水溶液，乙酸乙酯萃取，饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得黄色固体标题化合物20b(215mg,粗品)，直接用于下一步。
第三步 3-氧代环己烷-1-甲腈20d
2-环己烯-1-酮20c(80.0g,365mmol)溶于甲醇(800mL)中，室温下加入三甲基氰硅烷(99.2g,1.0mol)和四丁基氟化铵(261g,1.0mol)，升温至60℃反应16小时。TLC显示原料反应完全。反应液冷却至室温，加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得无色液体标题化合物20d(19.0g,收率42％)。
LC-MS:m/z＝124.2[M+H]+
第四步 3-氧代环己烷-1-甲酸20e
化合物20d(14.0g,113.7mmol)溶于1,-4-二氧六环(140mL)中，室温下加入浓盐酸(70mL)，升温至80℃反应16小时。TLC显示原料反应完全。反应液冷却至室温，加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物20e(15.0g,粗品)，直接用于下一步。
LC-MS:m/z＝141.2[M-H]-
第五步 3-氧代环己烷-1-甲酸苄酯20f
化合物20e(15.0g,粗品)和溴化苄(19.8g,115.8mmol)溶于乙腈(300mL)中，加入1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯(16.8g,110.4mmol)，室温反应16小时。TLC显示原料反应完全。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-HPLC分离纯化得到标题化合物20f(8.0g,两步收率33％)。
LC-MS:m/z＝233.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.39-7.31(m,5H),5.14(s,2H),2.89-2.81(m,1H),2.57(d,J＝8.0Hz,2H),2.41-2.27(m,2H),2.17-2.02(m,2H),1.90-1.81(m,1H),1.77-1.66(m,1H).
第六步 3-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)苄基环己-3-烯-1-甲酸苄酯和3-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)苄基环己-2-烯-1-甲酸苄酯混合物20g
化合物20f(2.66g,5.73mmol)溶于无水四氢呋喃(80mL)中，降温至-70℃，缓慢加入六甲基二硅基胺基锂(6.9mL,6.9mmol,1M四氢呋喃溶液)，加完-70℃反应一个小时，缓慢滴加N-苯基双(三氟甲磺酰)亚胺(5.74g,16.06mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液，加完缓慢升至室温过夜。反应液加入饱和氯化铵溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析提纯得到标题化合物20g(3.9g,收率94％)。
第七步 3-(吡啶-3-基)环己-3-烯-1-甲酸苄酯和3-(吡啶-3-基)环己-2-烯-1-甲酸苄酯混合物20i
化合物20g(1.9g,5.21mmol)和3-吡啶硼酸20h(645mg,5.25mmol)溶于1,4-二氧六环(30mL)和水(10mL)中，室温下加入Pd(dppf)Cl2(383mg,0.52mmol)和碳酸钠(976mg,9.21mmol)，氮气置换三次，氮气保护下，升温至100℃反应2小时。TLC显示原料反应完全。反应液冷却至室温，加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析提纯得到标题化合物20i(560mg,收率37％)。
LC-MS:m/z＝294.2[M+H]+
第八步 3-(吡啶-3-基)环己烷-1-甲酸20j
化合物20i(560mg,1.91mmol)溶于乙酸乙酯(30mL)中，加入钯/碳(150mg,10％)，氢气氛围下室温反应4小时。TLC显示原料反应完全。反应液硅藻土过滤，滤液浓缩得白色固体标题化合物20j(320mg,粗品)，直接用于下一步。
第九步 (1S,3S)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(吡啶-3-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)20-1&(1R,3S)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(吡啶-3-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)20-2&(1S,3R)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(吡啶-3-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)20-3&(1R,3R)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(吡啶-3-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)20-4
化合物20j(320mg,粗品)和化合物20b(412mg,粗品)溶于乙酸乙酯(20mL)中，室温下加入1-丙基磷酸酐(2.3g,3.61mmol,50％乙酸乙酯溶液)和吡啶(457mg,5.78mmol)，升温至40℃反应2小时。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得白色固体化合物20(400mg,两步收率74％)。手性拆分(DAICEL AD-H,30*250mm,5um,30mL/min,IPA:Hexane＝40:60)得标题化合物20-1(1号峰,RT34min)(12.9mg,收率3％)，标题化合物20-2(2号峰,RT48min)(7.9mg,收率2％)，标题化合物20-3(3号峰,RT94min)(63.2mg,收率16％)，标题化合物20-4(4号峰,RT130min)(58.1mg,收率14％)。
化合物20-1
LC-MS:m/z＝450.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.55(s,1H),8.51-8.26(m,4H),7.91(s,1H),7.70(s,1H),7.34(s,1H),3.96(s,2H),3.00(s,1H),2.95-2.90(m,3H),2.08-1.59(m,8H),1.28(s,6H).(98.87％purity by HPLC)
化合物20-2
LC-MS:m/z＝450.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.55(s,1H),8.51-8.27(m,4H),7.97(s,1H),7.71(d,J＝7.2Hz,1H),7.35-7.32(m,1H),3.96(s,2H),3.10(s,1H),2.96-2.90(m,3H),2.06-1.59(m,8H),1.28(s,6H).(99.34％purity by HPLC)
化合物20-3
LC-MS:m/z＝450.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.60(s,1H),8.49(d,J＝1.6Hz,1H),8.41(dd,J＝1.6,4.8Hz,1H),8.35(s,1H),8.27(s,1H),8.01(s,1H),7.71-7.68(m,1H),7.32(dd,J＝4.8,7.6Hz,1H),3.94(s,2H),2.89(s,2H),2.76-2.64(m,2H),1.95-1.90(m,3H),1.80-1.77(m,1H),1.71-1.62(m,1H),1.47-1.45(m,3H),1.27(s,6H).(99.96％purity by HPLC)
化合物20-4
LC-MS:m/z＝450.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.60(s,1H),8.49(s,1H),8.41(d,J＝3.6Hz,1H),8.35(s,1H),8.27(s,1H),8.01(s,1H),7.70(d,J＝6.8Hz,1H),7.33-7.31(m,1H),3.94(s,2H),2.89(s,2H),2.73-2.63(m,2H),1.95-1.90(m,3H),1.82-1.77(m,1H),1.71-1.62(m,1H),1.52-1.42(m,3H),1.27(s,6H).(97.79％purity by HPLC)
实施例21
(1S,3S)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(吡啶-4-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)21-1
(1S,3R)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(吡啶-4-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)21-2
(1R,3S)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(吡啶-4-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)21-3
(1R,3R)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(吡啶-4-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)21-4
Figure BDA0003049272910000531
第一步 3-(吡啶-4-基)环己-2-烯-1-甲酸苄酯和3-(吡啶-4-基)环己-3-烯-1-甲酸苄酯混合物21b
混合化合物20g(2.1g,5.76mmol)和3-吡啶硼酸21a(710mg,5.78mmol)溶于1,4-二氧六环(30mL)和水(10mL)中，室温下加入Pd(dppf)Cl2(400mg,0.54mmol)和碳酸钠(1.22g,11.51mmol)，氮气保护下，升温至100℃反应2小时。TLC显示原料反应完全。反应液冷却至室温，加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析提纯得到标题化合物21b(690mg,收率41％)。
第二步 3-(吡啶-4-基)环己烷-1-甲酸21c
混合化合物21b(690mg,2.35mmol)溶于乙酸乙酯(20mL)中，加入钯/碳(200mg,10％)，氢气氛围下室温反应过夜。反应液垫硅藻土过滤，滤液浓缩得标题化合物21c(360mg,粗品)，直接用于下一步。
第三步 (1S,3S)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(吡啶-4-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)21-1&(1S,3R)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(吡啶-4-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)21-2&(1R,3S)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(吡啶-4-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)21-3&(1R,3R)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(吡啶-4-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)21-4
化合物21c(360mg,粗品)和化合物20b(466mg,1.77mmol)溶于乙酸乙酯(20mL)中，室温下加入1-丙基磷酸酐(4.45g,6.99mmol,50％乙酸乙酯溶液)和吡啶(829mg,10.48mmol)，升温至40℃反应2小时。反应液加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶柱层析纯化得白色固体化合物21(360mg,收率45％)。手性拆分(DAICEL AD-H,30*250mm,5um,30mL/min,IPA:Hexane＝40:60)得标题化合物21-1(1号峰,RT 19.5min)(10.1mg,收率3％)，标题化合物21-2(2号峰,RT35.0min)(5.8mg,收率2％)，标题化合物21-3(3号峰,RT 44.0min)(51.1mg,收率14％)，标题化合物21-4(4号峰,RT 56.5min)(62.1mg,收率17％)。
化合物21-1
LC-MS:m/z＝450.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.55(s,1H),8.47(d,J＝5.6Hz,2H),8.36(s,1H),8.26(s,1H),7.97(s,1H),7.31(d,J＝5.6Hz,2H),3.96(s,2H),3.10-3.04(m,1H),2.92-2.90(m,3H),2.07-2.04(m,1H),1.90-1.77(m,3H),1.66-1.53(m,4H),1.27(s,6H).(97.91％purityby HPLC)
化合物21-2
LC-MS:m/z＝450.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.56(s,1H),8.47(d,J＝5.6Hz,2H),8.36(s,1H),8.26(s,1H),7.97(s,1H),7.31(d,J＝5.6Hz,2H),3.95(s,2H),3.11-3.02(m,1H),2.95-2.90(m,3H),2.08-2.04(m,1H),1.91-1.87(m,2H),1.79-1.53(m,5H),1.27(s,6H).(98.25％purityby HPLC)
化合物21-3
LC-MS:m/z＝450.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.60(s,1H),8.47(d,J＝5.6Hz,2H),8.35(s,1H),8.27(s,1H),8.01(s,1H),7.29(d,J＝5.6Hz,2H),3.94(s,2H),2.89(s,2H),2.74-2.58(m,2H),1.95-1.91(m,3H),1.80-1.78(m,1H),1.70-1.60(m,1H),1.48-1.2(m,3H),1.27(s,6H).(99.12％purity by HPLC)
化合物21-4
LC-MS:m/z＝450.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.61(s,1H),8.47(d,J＝5.6Hz,2H),8.35(s,1H),8.27(s,1H),8.01(s,1H),7.29(d,J＝5.6Hz,2H),3.94(s,2H),2.89(s,2H),2.72-2.61(m,2H),1.95-1.89(m,3H),1.81-1.79(m,1H),1.70-1.60(m,1H),1.48-1.42(m,3H),1.27(s,6H).(98.81％purity by HPLC)
实施例22
(1S,3R)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)22-1-1
(1R,3S)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)22-1-2
(1S,3R)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)22-2-1
(1R,3S)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)22-2-2
Figure BDA0003049272910000551
第一步 3-(1H-吡唑-3-基)环己-2-烯-1-甲酸苄酯和3-(1H-吡唑-3-基)环己-3-烯-1-甲酸苄酯混合物22b
混合化合物20g(2.6g,7.14mmol)和1H-吡唑-3-硼酸22a(800mg,7.15mmol)溶于1,4-二氧六环(15mL)和水(5mL)中，室温下加入Pd(dppf)Cl2(150mg,0.20mmol)和碳酸钠(1.5g,14.15mmol)，氮气保护下，升温至100℃反应2小时，TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得到白色固体标题化合物22b(1.6g,收率80％)。
第二步 3-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)环己-2-烯-1-甲酸苄酯、3-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)环己-3-烯-1-甲酸苄酯、3-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)环己-2-烯-1-甲酸苄酯和3-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)环己-3-烯-1-甲酸苄酯混合物22c
混合化合物22b(1.6g,5.67mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入碳酸铯(2.76g,8.50mmol)，室温下滴加碘甲烷(0.81g,5.71mmol)，加完室温搅拌三个小时，TLC显示反应完全。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得到白色固体标题化合物22c(900mg,收率54％)。
第三步 3-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)环己烷-1-甲酸和3-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)环己烷-1-甲酸混合物22d
混合化合物22c(900mg,3.04mmol)溶于甲醇(20mL)中，室温下加入钯/碳(200mg,10％)，氢气氛围下，40℃反应过夜，TLC显示反应完全。反应液垫硅藻土过滤，滤液浓缩得到白色固体混合物标题化合物22d(510mg,粗品)，直接用于下一步。
第四步 (1S,3R)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)22-1-1&(1R,3S)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)22-1-2&(1S,3R)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)22-2-1&(1R,3S)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)22-2-2
混合化合物22d(510mg,2.45mmol)和化合物20b(642mg,2.44mmol)溶于乙酸乙酯(10mL)中，加入1-丙基磷酸酐(6.2g,9.74mmol,50％乙酸乙酯溶液)和吡啶(1.16g,14.66mmol)，室温反应过夜，TLC显示反应完全。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-TLC纯化得小极性化合物22-1(140mg,收率13％)和大极性化合物22-2(58mg,收率4.2％)。化合物22-1手性拆分(纳微OD-5H,30*250mm,5um,30mL/min,IPA:Hexane＝40:60)得标题化合物22-1-1(1号峰,RT 30.6min)(32mg,收率23％)和标题化合物22-1-2(2号峰,RT 92.1min)(30mg,收率21％)。化合物22-2手性拆分(纳微OD-5H,30*250mm,5um,30mL/min,IPA:Hexane＝40:60)得标题化合物22-2-1(1号峰,RT 30.0min)(7mg,收率12％)和标题化合物22-2-2(2号峰,RT 38.0min)(9mg,收率16％)。
化合物22-1-1
LC-MS:m/z＝453.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.57(s,1H),8.35(s,1H),8.27(s,1H),8.01(s,1H),7.52(s,1H),6.04(s,1H),3.94(s,2H),3.75(s,3H),2.90(s,2H),2.67-2.51(m,2H),2.05-2.02(m,1H),1.92-1.84(m,3H),1.58-1.48(m,1H),1.43-1.39(m,2H),1.27(s,7H).(97.25％purity by HPLC)
化合物22-1-2
LC-MS:m/z＝453.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.57(s,1H),8.35(s,1H),8.27(s,1H),8.01(s,1H),7.52(s,1H),6.04(s,1H),3.94(s,2H),3.75(s,3H),2.90(s,2H),2.67-2.51(m,2H),2.06-1.85(m,4H),1.58-1.40(m,3H),1.27(s,7H).(99.78％purity by HPLC)
化合物22-2-1
LC-MS:m/z＝453.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.62(s,1H),8.35(s,1H),8.27(s,1H),8.01(s,1H),7.27(s,1H),6.05(s,1H),3.94(s,2H),3.78(m,3H),2.89(s,2H),2.77-2.68(m,2H),2.03-1.86(m,4H),1.55-1.44(m,3H),1.27(s,7H).(96.27％purity by HPLC)
化合物22-1-2
LC-MS:m/z＝453.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.62(s,1H),8.35(s,1H),8.27(s,1H),8.01(s,1H),7.2(s,1H),6.05(s,1H),3.94(s,2H),3.78(m,3H),2.89(s,2H),2.77-2.68(m,2H),2.03-1.86(m,4H),1.53-1.42(m,3H),1.27(s,7H).(99.53％purity by HPLC)
实施例23
(1S,3R)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)23-1
(1R,3S)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)23-2
Figure BDA0003049272910000571
第一步 3-(1H-吡唑-4-基)环己-2-烯-1-甲酸苄酯和3-(1H-吡唑-4-基)环己-3-烯-1-甲酸苄酯混合物23b
混合化合物20g(2.6g,7.14mmol)和1H-吡唑-4-硼酸23a(800mg,7.15mmol)溶于1,4-二氧六环(15mL)和水(5mL)中，加入Pd(dppf)Cl2(150mg,0.20mmol)和碳酸钠(1.5g,14.15mmol)，氮气保护下，升温至100℃反应两个小时，TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得到白色固体标题化合物23b(590mg,收率29.5％)。
第二步 3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环己-2-烯-1-甲酸苄酯和3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环己-3-烯-1-甲酸苄酯混合物23c
混合化合物23b(590mg,2.09mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入碳酸铯(1.02g,3.13mmol)，室温下滴加碘甲烷(297mg,2.09mmol)，加完室温搅拌3小时，TLC显示反应完全。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得到白色固体标题化合物23c(380mg,收率61.3％)。
第三步 3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环己烷-1-甲酸23d
混合化合物23c(320mg,1.08mmol)溶于乙醇(15mL)中，加入钯/碳(100mg,10％)，氢气氛围下，室温反应过夜。LC-MS显示反应完全。反应液垫硅藻土过滤，滤液浓缩得到白色固体标题化合物23d(290mg,粗品)，直接用于下一步。
LC-MS:m/z＝209.2[M+H]+
第四步 (1S,3R)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)23-1&(1R,3S)-N-(5-氯-4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)吡啶-2-基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)环己烷-1-甲酰胺(假定)23-2
化合物23d(200mg,粗品)和化合物20b(252mg,0.96mmol)溶于乙酸乙酯(10mL)中，加入1-丙基磷酸酐(2.4g,3.77mmol,50％乙酸乙酯溶液)和吡啶(455mg,5.75mmol)，室温反应过夜。反应液加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析提纯得到化合物23(170mg,两步收率35％)，手性拆分(纳微OD-5H,30*250mm,5um,30mL/min,IPA:Hexane＝40:60)得标题化合物23-1(1号峰,RT 42.5min)(32mg,收率19％)和标题化合物23-2(2号峰,RT 50.0min)(30mg,收率18％)。
化合物23-1
LC-MS:m/z＝453.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.56(s,1H),8.35(s,1H),8.28(s,1H),8.01(s,1H),7.48(s,1H),7.28(s,1H),3.94(s,2H),3.76(s,3H),2.89(s,2H),2.71-2.64(m,1H),2.49-2.46(m,1H),2.04-1.83(m,4H),1.49-1.37(m,3H),1.27(s,7H).(99.51％purity by HPLC)
化合物23-2
LC-MS:m/z＝453.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.56(s,1H),8.35(s,1H),8.27(s,1H),8.01(s,1H),7.48(s,1H),7.28(s,1H)，3.94(s,2H),3.76(s,3H),2.89(s,2H),2.69-2.64(m,1H),2.49-2.46(m,1H),2.04-1.85(m,4H),1.49-1.37(m,3H),1.27(s,7H).(98.22％purity by HPLC)
实施例24
7-(2-((2r,3aR,5s,6aS)-5-乙酰氨基八氢并环戊二烯-2-甲酰胺基)-5-氯吡啶-4-基)-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲酰胺(假定)24-1
7-(2-((2s,3aR,5r,6aS)-5-乙酰氨基八氢并环戊二烯-2-甲酰胺基)-5-氯吡啶-4-基)-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲酰胺(假定)24-2
Figure BDA0003049272910000581
第一步 5-乙酰氨基-N-(5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)八氢并环戊二烯-2-甲酰胺24a
化合物14d(272mg,0.95mmol)和化合物1f(241mg,1.15mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中，室温下加入1-丙基磷酸酐(1.2g,1.88mmol,50％N,N-二甲基甲酰胺溶液)和吡啶(300mg,3.79mmol)，升温至40℃反应3小时，TLC反应完全。反应液加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得白色固体标题化合物24a(220mg,收率48％)。
第二步 7-(2-((2r,3aR,5s,6aS)-5-乙酰氨基八氢并环戊二烯-2-甲酰胺基)-5-氯吡啶-4-基)-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲酰胺(假定)24-1&7-(2-((2s,3aR,5r,6aS)-5-乙酰氨基八氢并环戊二烯-2-甲酰胺基)-5-氯吡啶-4-基)-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲酰胺(假定)24-2
化合物24a(220mg,0.46mmol)溶于二甲基亚砜(6mL)中，加入碳酸钾(127mg,0.92mmol)和双氧水(2mL,30％)，室温反应1小时，TLC显示反应完全。反应液加水淬灭，有白色固体析出，过滤，滤饼洗涤干燥得白色固体化合物24粗品，手性拆分(纳微OD-5H,30*250mm,5um,30mL/min,IPA:Hexane＝30:70)得白色固体标题化合物24-1(3号峰,RT53.0min)(55mg,收率31％)和标题化合物24-2(4号峰,RT 60.0min)(33mg,收率18.7％)。
化合物24-1
LC-MS:m/z＝498.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.52(s,1H),8.32(s,1H),8.25(s,1H),7.87(d,J＝7.6Hz,1H),7.62(br,1H),7.35(s,1H),6.95(br 1H),4.04(s,3H),3.06-3.02(m,1H),2.79(s,2H),2.43-2.31(m,2H),2.15-2.03(m,4H),1.76(s,3H),1.55-1.48(m,2H),1.24-1.17(m,8H).(98.86％purity by HPLC)
化合物24-2
LC-MS:m/z＝498.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.63(s,1H),8.32(s,1H),8.24(s,1H),7.86(d,J＝7.6Hz,1H),7.63(br,1H),7.34(s,1H),6.94(br,1H),4.04(s,2H),3.77-3.70(m,1H),3.08-3.04(m,1H),2.78(s,2H),2.49-2.45(m,2H),2.10-2.04(m,2H),1.81-1.78(m,5H),1.73-1.63(m,2H),1.24-1.20(m,8H).(90.76％purity by HPLC)
实施例25
(2s,3aR,5r,6aS)-N2-(5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)-N5-甲基八氢并环戊二烯-2,5-二甲酰胺(假定)25-1
(2r,3aR,5s,6aS)-N2-(5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)-N5-甲基八氢并环戊二烯-2,5-二甲酰胺(假定)25-2
Figure BDA0003049272910000591
第一步 7-(2-溴-5-氯吡啶-4-基)-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲腈25a
化合物1f(1.0g,3.49mmol)溶解在二溴甲烷(20mL)中，室温下加入溴化铜(800mg,3.58mmol)和亚硝酸异戊酯(820mg,7.00mmol)，氮气保护下，升温至60℃搅拌3小时，TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，加水稀释，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得黄色固体标题化合物25a(700mg,收率59％)。
第二步 5-((5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)八氢并环戊二烯-2-甲酸甲酯25b
化合物25a(85mg,0.24mmol)和化合物15d(61mg,0.29mmol)溶于1,4-二氧六环(1mL)中，室温下加入碳酸铯(240mg,0.74mmol)，Xantphos(28mg,0.05mmol)和四-三苯基膦钯(28mg,0.02mmol)，氮气保护下，升温至120℃反应2小时，TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，加水稀释，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-TLC纯化得黄色固体标题化合物25b(30mg,收率26％)。
第三步 5-((5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)八氢并环戊二烯-2-甲酸25c
化合物25b(400mg,0.83mmol)溶于四氢呋喃(8mL)和水(3mL)中，加入氢氧化钠(140mg,3.50mmol)，室温反应72小时，TLC显示反应完全。反应液浓缩除去四氢呋喃，稀盐酸(1N)调节溶液至酸性，二氯甲烷萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得白色固体标题化合物25c(350mg,粗品)，直接用于下一步。
第四步 (2s,3aR,5r,6aS)-N2-(5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)-N5-甲基八氢并环戊二烯-2,5-二甲酰胺(假定)25-1&(2r,3aR,5s,6aS)-N2-(5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)-N5-甲基八氢并环戊二烯-2,5-二甲酰胺(假定)25-2
化合物25c(400mg,粗品)和甲胺盐酸盐(147mg,2.18mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入HATU(830mg,2.18mmol)和N,N-二异丙基乙胺(188mg,1.45mmol)，室温反应过夜，TLC显示反应完全。反应液加水淬灭，二氯甲烷萃取，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得白色固体化合物25(400mg,两步收率88％)，手性拆分(纳微OD-5H,30*250mm,5um,30mL/min,EtOH:Hexane＝20:80)得标题化合物25-1(1号峰,RT36.0min)(76mg,收率19％)和标题化合物25-2(2号峰,RT 43.0min)(200mg,收率50％)。
化合物25-1
LC-MS:m/z＝480.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.57(s,1H),8.36(s,1H),8.24(s,1H),7.68-7.67(m,1H),7.42(s,1H),3.95(s,2H),3.07-3.02(m,1H),2.87(s,2H),2.67-2.61(m,1H),2.55(d,J＝4.4Hz,3H),2.43-2.40(m,2H),2.09-2.02(m,2H),1.97-1.90(m,2H),1.57-1.45(m,4H)1.24(s,6H).(95.38％purity by HPLC)
化合物25-2
LC-MS:m/z＝480.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.57(s,1H),8.36(s,1H),8.24(s,1H),7.68-7.67(m,1H),7.42(s,1H),3.95(s,2H),3.09-3.00(m,1H),2.87(s,2H),2.67-2.61(m,1H),2.55(d,J＝4.4Hz,3H),2.45-2.40(m,2H),2.09-2.02(m,2H),1.97-1.91(m,2H),1.56-1.45(m,4H)1.24(s,6H).(94.41％purity by HPLC)
实施例26
(2s,3aR,5r,6aS)-N2-(4-(5-氨基甲酰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)-5-氯吡啶-2-基)-N5-甲基八氢并环戊二烯-2,5-二甲酰胺(假定)26-1
(2r,3aR,5s,6aS)-N2-(4-(5-氨基甲酰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)-5-氯吡啶-2-基)-N5-甲基八氢并环戊二烯-2,5-二甲酰胺(假定)26-2
Figure BDA0003049272910000601
化合物25-1(50mg,0.10mmol)溶于二甲基亚砜(6mL)中，加入双氧水(1.1g,30％)和碳酸钾(27mg,0.20mmol)，室温反应1小时，TLC显示反应完全。反应液加水，析出固体，过滤，滤饼洗涤干燥得白色固体标题化合物26-1(35mg,收率67％)。
化合物25-2(100mg,0.21mmol)溶于二甲基亚砜(6mL)中，加入双氧水(2.2g,30％)和碳酸钾(58mg,0.42mmol)，室温反应1小时，TLC显示反应完全。反应液加水，析出固体，过滤，滤饼洗涤干燥得白色固体标题化合物26-2(35mg,收率34％)。
化合物26-1
LC-MS:m/z＝498.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.53(s,1H),8.32(s,1H),8.24(s,1H),7.81-7.80(m,1H),7.62(br,1H),7.37(s,1H),6.96(br,1H),4.04(s,2H),2.79-2.63(m,4H),2.57-2.51(m,5H),2.13-2.06(m,2H),1.72-1.64(m,2H),1.56-1.52(m,2H),1.37-1.29(m,2H),1.21(s,6H).(98.24％purity by HPLC)
化合物26-2
LC-MS:m/z＝498.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.49(s,1H),8.32(s,1H),8.25(s,1H),7.67-7.61(m,2H),7.35(s,1H),6.96(br,1H),4.04(s,2H),3.11-3.00(m,1H),2.79(s,2H),2.70-2.61(m,1H),2.56-2.55(m,3H),2.45-2.43(m,2H),2.09-2.03(m,2H),1.97-1.91(m,2H),158-1.44(m,4H)1.21(s,6H).(98.31％purity by HPLC)
实施例27
(1S,3R)-3-乙酰氨基-N-(4-(7-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-基)-5-氟吡啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺27
Figure BDA0003049272910000611
第一步 5-(2-氯-5-氟吡啶-4-基)-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-甲腈27a
中间体IN-5(500mg,2.09mmol)和2-氯-5-氟吡啶-4-硼酸10a(550mg,3.14mmol)溶于1,4-二氧六环(10mL)和水(2mL)的混合溶剂中，室温下加入碳酸钠(332mg,3.13mmol)和Pd(dppf)Cl2(145mg,0.20mmol)，氮气保护下，升温至90℃反应3小时，TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得白色固体标题化合物27a(250mg,收率41％)。
LC-MS:m/z＝290.1[M+H]+
第二步 ((1R,3S)-3-((4-(7-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-基)-5-氟吡啶-2-基)氨基甲酰基)环己基)氨基甲酸叔丁酯27b
化合物27a(250mg,0.86mmol)溶于1,4-二氧六环(3ml)中，室温下加入化合物10c(313mg,1.29mmol)，Pd2(dba)3(79mg,0.09mmol)，Xphos(82mg,0.17mmol)和叔丁醇钾(193mg,1.72mmol)，氮气保护下，升温至100℃反应过夜，TLC显示原料反应完全。反应液冷却至室温，加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得白色固体标题化合物27b(87mg,收率20％)。
LC-MS:m/z＝496.3[M+H]+
第三步 (1S,3R)-3-氨基-N-(4-(7-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-基)-5-氟吡啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺27c
化合物27b(87mg,0.18mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，室温下加入三氟乙酸(3mL)，室温反应1小时，TLC显示反应完全。反应液加水，乙酸乙酯萃取，丢弃有机相，水相用饱和碳酸钠水溶液调节pH＝9，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到白色固体标题化合物27c(43mg,粗品)，直接用于下一步。
第四步 (1S,3R)-3-乙酰氨基-N-(4-(7-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-基)-5-氟吡啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺27
化合物27c(43mg,粗品)溶于四氢呋喃(2mL)中，室温下加入三乙胺(22mg,0.22mmol)和无水醋酸酐(11mg,0.11mmol)，升温至50℃反应1小时，TLC显示原料反应完全。反应液冷却至室温，加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-TLC分离纯化得白色固体标题化合物27(25mg,两步收率32％)。
LC-MS:m/z＝438.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.62(s,1H),8.37(d,J＝2.4Hz,1H),8.31(d,J＝6.0Hz,1H),7.77(d,J＝7.6Hz,1H),6.96(d,J＝2.0Hz,1H),3.99(s,2H),3.61-3.54(m,1H),2.86(s,2H),2.64-2.58(m,1H),1.90-1.77(m,7H),1.36-1.27(m,3H),1.22(s,7H).(99.53％purity by HPLC)
实施例28
5-(2-((1S,3R)-3-乙酰氨基环己烷-1-甲酰胺基)吡啶-4-基)-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-甲酰胺28
Figure BDA0003049272910000621
化合物17(62mg,0.13mmol)溶于无水甲醇(10mL)中，室温下加入钯/碳(5mg,10％)，氢气氛围下，升温至50℃反应1小时，LC-MS显示原料反应完全。反应液自然冷却至室温，垫硅藻土过滤，滤饼无水乙醇洗涤，滤液浓缩，粗品Prep-TLC分离纯化得白色固体标题化合物28(35mg,收率62％)。
LC-MS:m/z＝438.2[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.44(s,1H),8.28(s,1H),8.23(d,J＝5.6Hz,1H),7.81(d,J＝8.0Hz,1H),7.29(br,1H),7.15(dd,J＝1.6Hz,5.2Hz,1H),7.12(s,1H),6.77(br,1H),3.99(s,2H),3.62-3.53(m,1H),2.84(s,2H),2.67-2.59(m,1H),1.91-1.87(m,1H),1.78(s,6H),1.35-1.29(m,3H),1.21(s,6H),1.11-1.05(m,1H).(98.90％purity by HPLC)
实施例29
(1S,3R)-3-乙酰氨基-N-(4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)-5-甲氧基吡啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺29
Figure BDA0003049272910000622
第一步 2-溴-5-氟-4-碘吡啶29b
2-溴-5-氟吡啶29a(5.0g,28.4mmol)溶于干燥的四氢呋喃(50mL)中，氮气保护下，降温至-65℃，搅拌5分钟后，加入二异丙基氨基锂(18.5mL,36.9mmol,2M四氢呋喃溶液)，-65℃搅拌1小时，再加入单质碘(7.9g,31.2mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液，-65℃搅拌15分钟，缓慢升至室温搅拌1小时，TLC显示反应完全。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得到黄色固体标题化合物29b(6.5g,收率76％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.37(s,1H),8.25(d,J＝4.5Hz,1H).
第二步 2-溴-4-碘-5-甲氧基吡啶29c
化合物29b(1.0g,3.3mmol)溶于甲醇(10mL)中，室温下加入叔丁醇钾(740mg,6.6mmol)，加热回流反应2小时，TLC显示反应完成。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得到黄色固体标题化合物29c(1.1g,收率106％)。
第三步 3-(2-溴-5-甲氧基吡啶-4-基)-5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑29d
化合物29c(200mg,0.64mol)溶于1,4-二氧六环(6mL)和水(2mL)的混合溶剂中，室温下加入碳酸钠(201mg,1.90mmol)，中间体IN-1(200mg,0.77mmol)和四-三苯基膦钯(70mg,0.06mmol)，氮气保护下，升温至90℃反应2小时，TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，倒入水中，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得到淡黄色固体标题化合物29d(110mg,收率54％)。
LC-MS:m/z＝324.1[M+H]+
第四步 ((1R,3S)-3-((4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)-5-甲氧基吡啶-2-基)氨基甲酰基)环己基)氨基甲酸叔丁酯29e
化合物29d(110mg,0.34mol)溶于1,4-二氧六环(5mL)中，室温下加入碳酸铯(332mg,1.02mmol)，化合物10c(99mg,0.41mmol)，四-三苯基膦钯(35mg,0.03mmol)和Xphos(17mg,0.03mmol)，氮气保护下，升温至90℃反应2小时，TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，倒入水中，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得到淡黄色固体标题化合物29e(105mg,收率64％)。
LC-MS:m/z＝484.4[M+H]+
第五步 (1S,3R)-3-氨基-N-(4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)-5-甲氧基吡啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺29f
化合物29e(65mg,0.13mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，室温反应1小时。反应液浓缩，饱和碳酸氢钠调节pH至弱碱，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得黄色固体标题化合物29f(55mg,粗品)，直接用于下一步。
第六步 (1S,3R)-3-乙酰氨基-N-(4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)-5-甲氧基吡啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺29
化合物29f(55mg,粗品)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三乙胺(24mg,0.24mmol)和乙酸酐(18mg,0.18mmol)，室温反应1小时。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得到黄色固体标题化合物29(21mg,两步收率37％)
LC-MS:m/z＝426.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.25(s,1H),8.18(s,1H),8.05(s,1H),7.93(s,1H),7.77(d,J＝8.0Hz,1H),3.91(s,3H),3.90(s,2H),3.64-3.45(m,1H),2.89(s,2H),2.62-2.54(m,1H),1.89-1.87(m,1H),1.78-1.72(m,6H),1.32-1.23(m,9H),1.09-1.06(m,1H).(97.28％purity by HPLC)
实施例30
(1S,3R)-3-乙酰氨基-N-(4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺30
Figure BDA0003049272910000631
第一步 2-氯-4-碘-5-(三氟甲基)吡啶30b
2-氯-5-(三氟甲基)吡啶30a(10.0g,55.1mmol)溶于干燥的四氢呋喃(100mL)中，氮气保护下，降温至-65℃，搅拌5分钟后，加入二异丙基氨基锂(36mL,72mmol,2M四氢呋喃溶液)，-65℃搅拌2小时，再加入单质碘(15.4g,60.6mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液，-65℃搅拌15分钟，缓慢升至室温搅拌1小时，TLC显示反应完全。反应液倒入水中，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得到黄色固体标题化合物30b(4.0g,收率24％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.55(m,1H),8.03(s,1H).
第二步 3-(2-氯-5-(三氟甲基)吡啶-4-基)-5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑30c
化合物30b(300mg,0.98mmol)溶于1,4-二氧六环(5mL)和水(2.5mL)中，室温下加入碳酸钠(318mg,3.00mmol)，中间体IN-1(288mg,1.1mmol)和四-三苯基磷钯(116mg,0.1mmol)，氮气保护下，升温至100℃反应1小时，TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，倒入水中，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得到白色固体标题化合物30c(171mg,收率56％)。
LC-MS:m/z＝316.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.68(s,1H),7.70(s,1H),7.27(s,1H),3.97(s,2H),2.80(s,2H),1.34(s,6H).
第三步 ((1R,3S)-3-((4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)环己基)氨基甲酸叔丁酯30d
化合物30c(130mg,0.41mmol)溶于1,4-二氧六环(5mL)中，室温下加入碳酸铯(406mg,1.25mmol)，化合物10c(83mg,0.34mmol)，四-三苯基膦钯(24mg,0.02mmol)和Xphos(12mg,0.02mmol)，氮气保护下，升温至90℃反应2小时，TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，倒入水中，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析分离纯化得到淡黄色固体标题化合物30d(110mg,收率62％)。
第四步 (1S,3R)-3-氨基-N-(4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺30e
化合物30d(110mg,0.21mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(1mL)，室温反应1小时，TLC显示反应完全。反应液浓缩，饱和碳酸氢钠水溶液调节pH＝8-9，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物30e(105mg,粗品)，直接用于下一步。
第五步 (1S,3R)-3-乙酰氨基-N-(4-(5,5-二甲基-5,6-二氢-4H-吡咯并[1,2-b]吡唑-3-基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-基)环己烷-1-甲酰胺30
化合物30e(50mg,粗品)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三乙胺(24mg,0.24mmol)和乙酸酐(18mg,0.18mmol)，室温反应1小时。反应倒入水中，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-TLC纯化得到黄色固体标题化合物30(21.5mg,两步收率46％)。
LC-MS:m/z＝464.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.87(s,1H),8.65(s,1H),8.22(s,1H),7.76(d,J＝7.6Hz,1H),7.61(s,1H),3.94(s,2H),3.61-3.51(m,1H),2.82(s,2H),2.67-2.63(m,1H),1.92-1.89(m,1H),1.83-1.71(m,6H),1.31-1.23(m,9H),1.12-1.07(m,1H).(98.59％purity by HPLC)
实施例31
5-(2-((1S,3R)-3-乙酰氨基环己烷-1-甲酰胺基)-5-氟吡啶-4-基)-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-甲酰胺31
Figure BDA0003049272910000641
化合物27(50mg,0.11mmol)溶于二甲基亚砜(5mL)中，室温下加入无水碳酸钾(31mg,0.22mmol)和过氧化氢水溶液(2mL,30％)，室温反应30分钟，TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-TLC分离纯化得白色固体标题化合物31(26mg,收率50％)。
LC-MS:m/z＝456.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.55(s,1H),8.34-8.31(m,2H),7.80(d,J＝7.6Hz,1H),7.33(s,1H),7.12(d,J＝2.4Hz,1H),6.79(s,1H),3.93(s,2H),3.61-3.53(m,1H),2.88(s,2H),2.65-2.59(m,1H),1.90-1.78(m,7H),1.37-1.28(m,3H),1.20(s,6H),1.13-1.05(m,1H).(94.83％purity by HPLC)
实施例32
(3aR,5s,6aS)-2-乙酰基-N-(4-(5-氨基甲酰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-甲酰胺(假定)32-1
(3aR,5r,6aS)-2-乙酰基-N-(4-(5-氨基甲酰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-甲酰胺(假定)32-2
Figure BDA0003049272910000651
第一步 (3aR,6aS)-5-((5-氯-4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)氨基甲酰基)六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯32a-1,2
化合物11e(900mg,3.52mmol)和化合物4c(1.01g,3.52mmol)溶于乙酸乙酯(20mL)中，室温下加入1-丙基磷酸酐(9.0g,14.14mmol,50％乙酸乙酯溶液)和吡啶(1.67g,21.11mmol)，升温至80℃反应过夜，TLC监控原料少量剩余。反应液加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析得小极性标题化合物32a-1(470mg,收率27％)，大极性化合物标题化合物32a-2(500mg,收率29％)。
第二步 (3aR,6aS)-N-(4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-甲酰胺32b-1,2
化合物32a-1(120mg,0.25mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室温反应1小时，TLC监控反应完全。反应液加入饱和碳酸氢钠溶液调碱性，二氯甲烷萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物32b-1(90mg,粗品)，直接用于下一步。
化合物32a-2(150mg,0.31mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，加入三氟乙酸(2mL)，室温反应1小时，TLC监控反应完全。反应液加入饱和碳酸氢钠溶液调碱性，二氯甲烷萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物32b-2(120mg,粗品)，直接用于下一步。
第三步 (3aR,6aS)-2-乙酰基-N-(4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-甲酰胺32c-1,2
化合物32b-1(90mg,粗品)溶于四氢呋喃(8mL)中，加入乙酸酐(31mg,0.30mmol)和三乙胺(35mg,0.35mmol)，室温反应2小时，TLC监控反应完全。反应液加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-TLC纯化得标题化合物32c-1(50mg,两步收率50％)。
化合物32b-2(120mg,粗品)溶于四氢呋喃(8mL)中，加入乙酸酐(41mg,0.40mmol)和三乙胺(47mg,0.46mmol)，室温反应2小时，TLC监控反应完全。反应液加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物32c-2(100mg,粗品)，直接用于下一步。
第四步 (3aR,5s,6aS)-2-乙酰基-N-(4-(5-氨基甲酰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-甲酰胺(假定)32-1&(3aR,5r,6aS)-2-乙酰基-N-(4-(5-氨基甲酰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)吡啶-2-基)八氢环戊二烯并[c]吡咯-5-甲酰胺(假定)32-2
化合物32c-1(50mg,0.12mmol)溶于二甲基亚砜(6mL)中，加如双氧水(1mL,30％)和碳酸钾(33mg,0.24mmol)，室温反应1小时，TLC监控反应完全。反应液加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-TLC纯化得标题化合物32-1(25mg,收率48％)。
LC-MS:m/z＝450.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.34(s,1H),8.24(s,1H),8.19(d,J＝4.0Hz,1H),7.6(s,1H),7.33(s,1H),7.06(d,J＝4.0Hz,1H),6.95(s,1H),4.00(s,2H),3.67-3.63(m,1H),3.53-3.48(m,1H),3.25-3.14(m,3H),2.88(s,2H),2.85-2.72(m,2H),2.03-1.94(m,5H),1.82-1.72(m,2H),1.23(s,6H).(92.06％purity by HPLC)
化合物32c-2(100mg,粗品)溶于二甲基亚砜(8mL)中，加入双氧水(1mL,30％)和碳酸钾(64mg,0.46mmol)，室温反应1小时，TLC监控反应完全。反应液加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-TLC纯化得标题化合物32-2(55mg,三步收率40％)。
LC-MS:m/z＝450.1[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.36(s,1H),8.26(s,1H),8.19(d,J＝4.0Hz,1H),7.6(s,1H),7.33(s,1H),7.06(dd,J＝2.0,5.2Hz,1H),6.92(s,1H),3.99(s,2H),3.59-3.55(m,1H),3.43-3.34(m,2H),3.30-3.26(m,1H),3.13-3.09(m,1H),2.88(s,2H),2.73-2.59(m,2H),2.18-2.10(m,2H),1.94(s,3H),1.79-1.68(m,2H),1.23(s,6H).(91.29％purity byHPLC)
实施例33
7-(2-((1S,3R)-3-乙酰氨基环己烷-1-甲酰胺基)-5-氟吡啶-4-基)-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲酰胺33
Figure BDA0003049272910000661
化合物10(58mg,0.13mmol)溶于二甲基亚砜(1mL)中，加入双氧水(0.5mL,30％)和碳酸钾(36mg,0.26mmol)，室温反应1小时。TLC显示反应完全。反应液加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-TLC纯化得标题化合物33(26mg,收率44％)。
LC-MS:m/z＝456.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.46(s,1H),8.30(d,J＝6.4Hz,1H),8.24(d,J＝2.8Hz,1H),7.80(d,J＝7.6Hz,1H),7.69(br,1H),7.33(d,J＝2.0Hz,1H),6.99(br,1H),4.03(s,2H),3.60-3.56(m,1H),2.84(s,2H),2.64-2.57(m,1H),1.90-1.87(m,1H),1.78(s,6H),1.30-1.22(m,9H),1.10-1.07(m,1H).(95.94％purity by HPLC)
实施例34
7-(2-((2r,3aR,5s,6aS)-5-乙酰氨基八氢并环戊二烯-2-羧酰胺基)-5-氟吡啶-4-基)-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪5-甲酰胺(假定)34-1
7-(2-((2s,3aR,5r,6aS)-5-乙酰氨基八氢并环戊二烯-2-羧酰胺基)-5-氟吡啶-4-基)-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪5-甲酰胺(假定)34-2
Figure BDA0003049272910000671
第一步 (4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)-5-氟吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯34a
氮气保护下，将化合物10b(1.12g,3.87mmol)溶于1,4-二氧六环(20mL)中，室温下加入氨基甲酸叔丁酯(1.13g,9.68mmol)，碳酸铯(2.51g,7.74mmol)，Pd2(dba)3(284mg,0.31mmol)和XantPhos(365mg,0.63mmol)，升温至100℃反应4小时，TLC显示反应完全。反应液冷却至室温，加水稀释，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品硅胶柱层析纯化得标题化合物34a(1.02g,收率71％)。
第二步 7-(2-氨基-5-氟吡啶-4-基)-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲腈34b
化合物34a(1.02g,2.74mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(10mL)，室温反应1小时，TLC显示反应完全。反应液浓缩除去三氟乙酸，加饱和碳酸氢钠调节pH为碱性，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得标题化合物34b(756mg,粗品)，直接用于下一步。
第三步 (2r,3aR,5s,6aS)-5-乙酰氨基-N-(4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)-5-氟吡啶-2-基)八氢并环戊二烯-2-甲酰胺34c-1&(2s,3aR,5r,6aS)-5-乙酰氨基-N-(4-(5-氰基-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-7-基)-5-氟吡啶-2-基)八氢并环戊二烯-2-甲酰胺34c-2
化合物14d(160mg,0.75mmol)和化合物34b(200mg,粗品)溶于乙酸乙酯(10mL)中，室温下依次加入三乙胺(300mg,2.96mmol)和1-丙基磷酸酐(2.8g,4.10mmol,50％乙酸乙酯溶液)，升温至60℃搅拌2小时，TLC显示原料消失。反应液冷却至室温，加水淬灭，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到标题化合物34c(180mg,粗品)。手性拆分(大赛璐AD-H,20*250mm,5um,30mL/min,IPA:Hexane＝20:80)得化合物34c-1(RT 26.83min)(75mg,收率42％)，化合物34c-2(RT 32.47min)(30mg,收率17％)。
第四步 7-(2-((2r,3aR,5s,6aS)-5-乙酰氨基八氢并环戊二烯-2-羧酰胺基)-5-氟吡啶-4-基)-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲酰胺(假定)34-1&7-(2-((2s,3aR,5r,6aS)-5-乙酰氨基八氢并环戊二烯-2-羧酰胺基)-5-氟吡啶-4-基)-2,2-二甲基-2,3-二氢-1H-吡咯嗪-5-甲酰胺(假定)34-2
化合物34c-1(75mg,0.16mmol)溶于二甲基亚砜(6mL)中，加入双氧水(1mL,30％)和碳酸钾(45mg,0.32mmol)，室温反应1小时，TLC显示反应完全。反应液加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-TLC纯化得标题化合物34-1(8.0mg,收率10.3％)。
LC-MS:m/z＝482.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.44(s,1H),8.33(d,J＝6.0Hz,1H),8.24(d,J＝2.8Hz,1H),7.90(d,J＝7.6Hz,1H),7.68(s,1H),7.33(d,J＝2.4Hz,1H),6.99(s,1H),4.03(s,3H),3.06-2.94(m,1H),2.85(s,2H),2.43-2.90(m,2H),2.22-1.99(m,4H),1.91(s,2H),1.76(s,3H),1.58-1.45(m,2H),1.34-1.08(m,6H).(98.98％purity by HPLC)
化合物34c-2(30mg,0.074mmol)溶于二甲基亚砜(6mL)中，加入双氧水(1mL,30％)和碳酸钾(21mg,0.15mmol)，室温反应1小时，TLC显示反应完全。反应液加水，乙酸乙酯萃取，合并有机相，水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩，粗品Prep-TLC纯化得纯化得标题化合物34-2(4.0mg,收率12.8％)。
LC-MS:m/z＝482.3[M+H]+
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.55(s,1H),8.32(d,J＝6.0Hz,1H),8.24(d,J＝2.8Hz,1H),7.88(d,J＝7.2Hz,1H),7.69(s,1H),7.32(d,J＝2.0Hz,1H),6.98(s,1H),4.03(s,2H),3.77-3.68(m,1H),3.10-2.99(m,1H),2.84(s,2H),2.62-2.38(m,2H),2.12-2.02(m,2H),1.85-1.72(m,5H),1.70-1.61(m,2H),1.21(s,6H),1.07-0.94(m,2H).(98.87％purity by HPLC)
测试例1化合物对CDK9体外酶活性抑制作用的测试
本发明的化合物对体外CDK9激酶活性抑制作用的检测通过以下方法进行测定：
化合物准备：精确称取化合物，用DMSO(Sigma,D2650)溶解至浓度为100uM备用。稀释化合物至所需的最高浓度的5倍，4倍稀释成6个浓度梯度，使反应体系中化合物终浓度为100、25、6.25、1.56、0.39、0.098nM。取5ul转至384孔板(Corning,4512)中。
激酶反应：在含有化合物的384孔板(Corning,4512)中加入10uL CDK9激酶(Millipore,14-685M)溶液，室温静置10min；加入10uL ATP(Sigma,A7699)和0.2ug/uLCTD3底物多肽(GL Biochem,SY356885)的混合溶液，28℃短暂静置；再每孔再加入25uL终止液终止反应。
检测：使用Caliper收集数据。
计算：用Graphpad prism 5.0软件根据化合物浓度与对应的信号值计算IC50值。试验结果：见表1。
结论：本发明实施例化合物对CDK9激酶活性有明显抑制作用。
测试例2化合物对Mv4-11细胞增殖抑制的影响
本发明的化合物对体外Mv4-11细胞(ATCC:CRL-9591TM)增值抑制的作用通过以下方法进行测定：
细胞接种：取对数期生长状态良好的Mv4-11细胞以20000个/孔、50uL接种到96孔板中，在37℃、5％CO2条件下培养2-4h。
给药：用含有10％FBS、1％PS的1640培养基稀释化合物：取初始浓度为1mM的化合物0.4uL置于稀释板中，各加入199.6uL上述培养基，四倍梯度稀释，使加入细胞中的终浓度为1000、250、62.5、15.625、3.91、0.98、0.24、0.06nM。依次加入50uL含有化合物的培养基，置于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养48小时。
检测：每孔加10uL CCK8(日本同仁，CK04)溶液，37℃、5％CO2细胞培养箱孵育2小时后，Synergy H1(BioTek)多功能酶标仪读取OD450值。
计算：用Graphpad prism 5.0软件根据化合物浓度与对应的信号值计算IC50值。试验结果：见表1
同时，为了更好的体现本发明实施例提供的化合物对CDK9酶的抑制活性，本发明还采用测试例1和2的方法对CDK9抑制剂AZD4573的IC50进行测试，结果见表1。
表1本发明中化合物对CDK9酶活性抑制IC50(nM)
Figure BDA0003049272910000681
Figure BDA0003049272910000691
结论：本发明化合物对CDK9具有明显的抑制作用，部分化合物的抑制活性明显优于AZD4573。测试例3化合物对Mv4-11细胞中RNA pol II Ser2的磷酸化抑制活性的测定
本发明的化合物对体外Mv4-11细胞RNA pol II Ser2的抑制的作用通过以下方法进行测定：
细胞接种：取对数期生长状态良好的Mv4-11细胞以2*105个/孔接种到六孔板中，在37℃、5％CO2条件下培养过夜。
给药：用含有10％FBS、1％PS 2mL 1640的培养基稀释化合物。向过夜培养的细胞中加入2uL含有化合物的培养基，置于37℃、5％CO2细胞培养箱中培养6小时。
蛋白提取、定量：收集细胞悬液、1000g离心5min，弃细胞培养基，加入PBS重悬、离心；反复3次，吸干残留液体，每孔加80uL细胞裂解液置于冰上，摇床晃动10分钟，12000g离心5min，收集上清，即为总蛋白溶液；BCA法测蛋白浓度。
12％SDS-PAGE电泳检测，后100V电压转膜3h，封闭液(Beyotime:P0235)封闭15min，TBST(Sangon Biotech：C520002)洗膜三次，一抗(目的蛋白CST:13499,内参Beyotime:AF1186)4℃孵育过夜；TBST洗膜，三次；二抗(Beyotime:A0208)室温孵育1小时；TBST洗膜，三次；ECL(Tanon：180-501)曝光、显色，不同浓度下化合物7-1、12、22-1-1和AZD4573对Mv4-11细胞中RNA pol II Ser2的磷酸化抑制作用结果见图1。
从图1可以看出：本发明化合物如7-1、12和22-1-1对Mv4-11细胞中RNA pol IISer2的磷酸化有明显的抑制作用，而且部分化合物的抑制活性明显优于AZD4573。
以上仅为本发明的实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些均属于本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种多环酰胺类衍生物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其特征在于，所述多环酰胺类衍生物的结构如式（I）所示：
Figure 287997DEST_PATH_IMAGE001
R3选自
Figure 444172DEST_PATH_IMAGE002
或
Figure 382172DEST_PATH_IMAGE003
；
Rc独立地选自H、CN、C(O)NH2、C(O)NHRb、C(O)N(Rb)2、取代或未取代的C1-C3的烷基，此处“取代”是指任选地被1个羟基所取代；
R2选自5-7元环烷基、7-10元的稠环烷基、7-10元的稠杂环基，其中5-7元环烷基、7-10元的稠环烷基、7-10元的稠杂环基任选地被1-3个Ra所取代；
Ra选自C(O)Rb、NHC(O)Rb、C(O)NH2、C(O)NHRb；
Rb选自C1-C3的烷基；
R1选自氢或卤素。
2.如权利要求1所述的多环酰胺类衍生物、其药学上可接受的盐或其立体异构体，其特征在于，所述多环酰胺类衍生物选自如下结构的任意一种：
Figure 256587DEST_PATH_IMAGE004
,
Figure 695659DEST_PATH_IMAGE005
,
Figure 971919DEST_PATH_IMAGE006
,
Figure 80821DEST_PATH_IMAGE007
,
Figure 442532DEST_PATH_IMAGE008
,
Figure 419715DEST_PATH_IMAGE009
,
Figure 550482DEST_PATH_IMAGE010
,
Figure 830285DEST_PATH_IMAGE011
,
Figure 679292DEST_PATH_IMAGE012
,
Figure 194587DEST_PATH_IMAGE013
,
Figure 445440DEST_PATH_IMAGE014
,
Figure 896144DEST_PATH_IMAGE015
,
Figure 232447DEST_PATH_IMAGE016
,
Figure 551433DEST_PATH_IMAGE017
,
Figure 656793DEST_PATH_IMAGE018
,
Figure 269609DEST_PATH_IMAGE019
,
Figure 93208DEST_PATH_IMAGE020
,
Figure 215885DEST_PATH_IMAGE021
,
Figure 51117DEST_PATH_IMAGE022
,
Figure 968258DEST_PATH_IMAGE023
,
Figure 279153DEST_PATH_IMAGE024
,
Figure 674362DEST_PATH_IMAGE025
,
Figure 488735DEST_PATH_IMAGE026
,
Figure 717722DEST_PATH_IMAGE027
,
Figure 250334DEST_PATH_IMAGE028
,
Figure 714814DEST_PATH_IMAGE029
,
Figure 383692DEST_PATH_IMAGE030
,
Figure 783581DEST_PATH_IMAGE031
,
Figure 803490DEST_PATH_IMAGE032
,
Figure 806081DEST_PATH_IMAGE033
,
Figure 595045DEST_PATH_IMAGE034
,
Figure 165835DEST_PATH_IMAGE035
,
Figure 407460DEST_PATH_IMAGE036
,
Figure 213742DEST_PATH_IMAGE037
,
Figure 122792DEST_PATH_IMAGE038
。
3.一种如权利要求1或2所述的多环酰胺类衍生物、其药学上可接受的盐或其立体异构体的制备方法，其选自如下三种方法中的一种：
方法一、
Figure 598904DEST_PATH_IMAGE039
方法二、
Figure 593405DEST_PATH_IMAGE040
方法三、
Figure 937799DEST_PATH_IMAGE041
其中，W为
Figure 701355DEST_PATH_IMAGE042
或
Figure 348369DEST_PATH_IMAGE043
；X为卤素。
4.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括如权利要求1或2所述的多环酰胺类衍生物、其药学上可接受的盐或其立体异构体。
5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包括可药用载体和/或赋形剂。
6.如权利要求1或2中任一项所述的多环酰胺类衍生物、其药学上可接受的盐或其立体异构体、或如权利要求4-5所述的药物组合物在制备用于治疗癌症药物中的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述癌症为血液癌。
8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述血液癌为急性髓细胞白血病、多发性骨髓瘤或慢性淋巴细胞性白血病。
9.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述癌症为滤泡性淋巴瘤、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、肝细胞癌、胰腺癌、肾癌、胃癌、结直肠癌或肺癌。
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