CN113136430B - 环状RNA CircSERPINE2的应用方法及检测、治疗制剂 - Google Patents

环状RNA CircSERPINE2的应用方法及检测、治疗制剂 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种环状RNA CircSERPINE2的应用方法及检测、治疗制剂。即用于检测卵巢癌铂化疗耐受性的检测试剂，特别是制备出实时荧光定量分析法检测卵巢癌是否对铂类药物耐受的试剂盒，以及人卵巢癌铂耐受治疗制剂。通过研究证实CircSERPINE2在铂耐药的卵巢癌组织中高表达，CircSERPINE2是卵巢癌铂耐药的标志物，因此，将CircSERPINE2的表达应用于卵巢癌的铂化疗耐药性的检测，以及通过抑制来增强人卵巢癌铂类药物化疗敏感性，具有深远的临床意义和推广性。

Description

环状RNA CircSERPINE2的应用方法及检测、治疗制剂
技术领域
本发明涉及肿瘤分子生物学领域，具体涉及环状RNA CircSERPINE2的应用方法及检测、治疗制剂。
背景技术
根据最新的卵巢癌数据统计，在2018年，美国诊断出约22,240例新的卵巢癌病例，其中有约14070例卵巢癌死亡病例。卵巢癌发病率仅占所有妇科恶性肿瘤的2.5％，但其死亡率却占到了所有妇科癌症死亡率的5％。卵巢癌的主要治疗方法是手术和化学疗法。常规化疗是铂和紫杉醇联合作为一线化疗，有15％-25％的患者具有主要治疗耐药性，其余70-85％的患者对首次化疗敏感。初始治疗后，肿瘤体积明显缩小，但大多数肿瘤在化疗后1至3年内复发。铂和紫杉醇对复发的卵巢肿瘤治疗效果变差，并且复发性肿瘤迅速扩散，导致没有机会进行手术，也没有适合患者的治疗选择。因此，化疗耐药是卵巢癌患者死亡的主要原因。
本发明发现CircSERPINE2(has_circ_0008365)在卵巢癌耐药细胞系中高表达，且敲减CircSERPINE2后卵巢癌细胞对于铂类药物的敏感性增强，为特异靶向卵巢癌细胞提供新的生物靶点。
发明内容
本发明的首要目的是提供一种人卵巢癌铂耐受检测分子标记物的应用方法，具体是在制备人卵巢癌铂耐受检测制剂中的应用。
环状RNA CircSERPINE2在制备人卵巢癌铂耐受检测制剂中的应用方法，该CircSERPINE2的序列见SEQ NO：1。
所述的人卵巢癌铂耐受检测制剂包括检测人卵巢癌组织中CircSERPINE2表达量的试剂。
所述的检测人卵巢癌组织中CircSERPINE2表达量的试剂包括实时荧光定量PCR检测试剂，优选所述的实时荧光定量PCR检测试剂包括包括实时荧光定量PCR的特异性引物，
CircSERPINE2正向引物：5'-GGGTCTGTGGAAATCACGGT-3'，见SEQ NO：2；
CircSERPINE2反向引物：5'-CAAGGACGACCACACCGGAA-3'，见SEQ NO：3。
所述的实时荧光定量PCR检测试剂包括：
内参β-actin的特异性引物：
5'-TCACCAACTGGGACGACATG-3'，见SEQ NO：4；
5'-GTCACCGGAGTCCATCCGAT-3'，见SEQ NO：5；
内参GAPDH的特异性引物：
5'-AACGGATTTGGTCGTATTGG-3'，见SEQ NO：6；
5'-TTGATTTTGGAGGGATCTCG-3'，见SEQ NO：7。
本发明的第二个目的是提供一种人卵巢癌铂耐受检测试剂盒，包括实时荧光定量PCR检测人卵巢癌组织中CircSERPINE2表达量试剂，优选所述的实时荧光定量PCR检测人卵巢癌组织中CircSERPINE2表达量试剂包括实时荧光定量PCR的特异性引物：
CircSERPINE2正向引物：5'-GGGTCTGTGGAAATCACGGT-3'
CircSERPINE2反向引物：5'-CAAGGACGACCACACCGGAA-3'。
该试剂盒还包括：(1)从卵巢癌细胞中抽提总RNA所用试剂，包括Trizol试剂，三氯甲烷，异丙醇，无酶水；(2)以总RNA为模板将CircSERPINE2逆转录为cDNA所用试剂，包括逆转录缓冲液，dNTP，RNA酶抑制剂，MMLV逆转录酶以及随机引物；(3)将cDNA实时定量PCR所用试剂，包括CircSERPINE2的特异性引物、实时荧光定量SYBR染料、无酶水：
荧光定量PCR的特异性引物：
CircSERPINE2正向引物：5'-GGGTCTGTGGAAATCACGGT-3'
CircSERPINE2反向引物：5'-CAAGGACGACCACACCGGAA-3'
内参β-actin的特异性引物：
5'-TCACCAACTGGGACGACATG-3'
5'-GTCACCGGAGTCCATCCGAT-3'
内参GAPDH的特异性引物：
5'-AACGGATTTGGTCGTATTGG-3'
5'-TTGATTTTGGAGGGATCTCG-3'。
上述检测制剂的使用方法：(1)收集卵巢癌患者来源的肿瘤组织，抽提总RNA；(2)以总RNA为模板将CircSERPINE2逆转录为cDNA；(3)用CircSERPINE2特异性引物和内参引物进行实时荧光定量PCR扩增获得相对表达量，当倍数越高时，说明卵巢癌患者的铂疗效越耐受。
本发明的第三个目的是提供一种人卵巢癌铂耐受检测制剂，包括利用以下特异性引物进行实时荧光定量PCR扩增的产物。QPCR研究结果表明CircSERPINE2在卵巢癌耐药细胞和组织中的表达量明显高于敏感细胞和组织，故当CircSERPINE2在检测组中的表达量高于对照组2倍及以上时，可认为检测组对铂类耐药。
人卵巢癌铂耐受的制剂：
CircSERPINE2正向引物：5'-GGGTCTGTGGAAATCACGGT-3'
CircSERPINE2反向引物：5'-CAAGGACGACCACACCGGAA-3'
本发明的第四个目的是提供一种CircSERPINE2在制备人卵巢癌铂耐受治疗制剂中的应用方法，该CircSERPINE2的序列见SEQ NO：1。
所述的人卵巢癌铂耐受治疗制剂包括增强人卵巢癌铂类药物化疗敏感性的制剂。
所述的人卵巢癌铂耐受治疗制剂包括抑制CircSERPINE2表达的制剂；
优选：环状RNA CircSERPINE2抑制剂为siRNA：
si-CircSERPINE2-1：TGTGGTCGTCCTTGGTGGA，见SEQ NO：8；
或
si-CircSERPINE2-2：CGGTGTGGTCGTCCTTGGT，见SEQ NO：9。
本发明的第五个目的是提供一种人卵巢癌铂耐受治疗制剂，包括抑制CircSERPINE2表达的制剂；优选：环状RNA CircSERPINE2抑制剂为siRNA：
si-CircSERPINE2-1：TGTGGTCGTCCTTGGTGGA
或
si-CircSERPINE2-2：CGGTGTGGTCGTCCTTGGT。
本发明的第六个目的是提供一种环状RNA CircSERPINE2抑制剂包括：siRNA
si-CircSERPINE2-1：TGTGGTCGTCCTTGGTGGA
或
si-CircSERPINE2-2：CGGTGTGGTCGTCCTTGGT。
在前期研究工作中，申请人收集了卵巢癌细胞卵巢癌细胞A2780及其顺铂和卡铂耐药细胞以及OVCAR3及其顺铂和卡铂耐药细胞，提取细胞总RNA，逆转录后进行实时荧光定量PCR分析CircSERPINE2的表达，首次发现CircSERPINE2表达是在耐药细胞株中明显更高，且具有统计学差异。据此，申请人提出CircSERPINE2作为在人卵巢肿瘤铂治疗耐受的标志物检测试剂，更进一步能够提供一种性价比高，易于推广应用的卵巢癌药物抗性评价的试剂盒。
此外，CircSERPINE2作为在人卵巢肿瘤铂治疗耐受的标志物，CircSERPINE2抑制剂能够显著提高卵巢癌细胞对铂类药物的敏感性，联合铂类药物治疗能提高化疗效果。
附图说明
图1为测序聚类热图和CircSERPINE2特异性引物图示；
图2为实时荧光定量PCR分析CircSERPINE2在构建的稳定耐药的卵巢癌细胞中的表达；
图3为实时荧光定量PCR分析CircSERPINE2在卵巢癌不同细胞系以及耐药组织中的差异表达；
图4为实时荧光定量PCR分析CircSERPINE2在使用不同浓度顺铂诱导后的卵巢癌细胞中的表达；
图5为对CircSERPINE2剪接位点的测序以及放线菌素D处理细胞验证CircSERPINE2的稳定性；
图6为敲减CircSERPINE2的效果以及敲减后亲本基因的变化；
图7为敲减CircSERPINE2的功能实验结果；
图7A和B显示使用顺铂和卡铂处理敲减CircSERPINE2后的A2780和OVCAR3细胞的IC50值下降；图7C和D显示使用顺铂和卡铂诱导敲减CircSERPINE2后的A2780和OVCAR3的细胞凋亡明显增加。
具体实施方式
以下结合实施例旨在进一步说明本发明，而非限制本发明。
实施例1卵巢癌细胞A2780和OVCAR3及其顺铂和卡铂耐药细胞中CircSERPINE2检测试剂盒
1.异丙醇100ml
2.Trizol试剂100ml
3.三氯甲烷50ml
4.1μM随机逆转录引物50μl
5.无酶水2ml
6.10mMdNTP100μl
7.200U/μlRNA逆转录酶50μl
8.5×逆转录缓冲液1ml
9.40U/μlRNA抑制剂500μl
10.PremixExTaq50μl
11.10μMlncRNAENST00000529841特异性引物50μl
荧光定量PCR的特异性引物：
CircSERPINE2正向引物：5'-GGGTCTGTGGAAATCACGGT-3'
CircSERPINE2反向引物：5'-CAAGGACGACCACACCGGAA-3'
12.10μM内参对照引物各50μl
内参β-actin的特异性引物：
5'-TCACCAACTGGGACGACATG-3'
5'-GTCACCGGAGTCCATCCGAT-3'；
内参GAPDH的特异性引物：
5'-AACGGATTTGGTCGTATTGG-3'
5'-TTGATTTTGGAGGGATCTCG-3'；
本发明CircSERPINE2经过特异性引物扩增后产物的Blast结果如下；
Figure BDA0003034553980000061
实施例2
卵巢癌细胞和卵巢癌耐药细胞中CircSERPINE2的检测
(1)收集了卵巢癌细胞A2780和OVCAR3及其诱导的顺铂和卡铂耐药细胞，抽提总RNA：去尽诱导后的培养板中培养基，加入1mlTrizol，在室温下水平放置5min，使裂解液均匀分布于细胞表面，然后用移液枪吹打细胞使细胞脱落；将细胞裂解液转移至离心管中，加入200μl三氯甲烷，盖紧离心管管盖，上下振荡15秒,室温静置3分钟,12,000g，4℃离心15分钟。取出离心管，样品分为三层：淡色的上清水相、中间的白色层及粉红色的下层有机相。小心吸取淡色上清水相移至另一离心管，加入等体积的异丙醇，轻轻混匀，室温静置10分钟,然后12,000g，4℃离心10分钟，在管底可见RNA沉淀。小心去除上清，缓慢沿管壁加入1mL75％乙醇，轻轻混匀。12,000g，4℃离心10分钟，小心吸尽上清。室温干燥沉淀2～5分钟，加入30～50μL的无RNase水溶解RNA沉淀，分光光度计检测RNA的浓度和质量，OD260/280比值在1.8-2.0之间，-70℃保存。
(2)以总RNA为模板将CircSERPINE2逆转录为cDNA；
Randomprimer(100μM)1μl
TotalRNA1μg
无酶水Total12μl
逆转录第一步条件:62℃5分钟
5×逆转录缓冲液4μl
dNTP(10mM)2μl
RNA酶抑制剂(40U/μl)1μl
MMLV逆转录酶(200U/μl)1μl
第一步产物12μl
Total20μl
逆转录第二步程序，42℃60分钟，72℃5分钟。
(3)用CircSERPINE2特异性引物和内参引物进行实时荧光定量PCR：
先将逆转录产物稀释5倍，混匀，20μl反应体系如下：
SYBRPremix2×10μl
CircSERPINE2或内参引物1μl
cDNA产物0.5μl
无酶水Total20μl
实时荧光定量PCR反应95℃30秒，40个循环的95℃5秒，65℃30秒，72℃30秒，65～95℃，每0.05秒增加0.5℃。
收集QPCR产物备用，送公司进行Sanger测序。
CircSERPINE2正向引物：5'-GGGTCTGTGGAAATCACGGT-3'
CircSERPINE2反向引物：5'-CAAGGACGACCACACCGGAA-3'；
内参β-actin的特异性引物：
5'-TCACCAACTGGGACGACATG-3'
5'-GTCACCGGAGTCCATCCGAT-3'；
内参GAPDH的特异性引物：
5'-AACGGATTTGGTCGTATTGG-3'
5'-TTGATTTTGGAGGGATCTCG-3'；
(4)CircSERPINE2表达量的测定：本实验数据采用相对定量的分析方法，β-actin和GAPDH作为内参基因，数据利用GraphPadPrism进行分析。发现CircSERPINE2在卵巢癌耐药细胞中显著上调，见图2，差异具有显著性(p<0.05)。
QPCR研究结果表明CircSERPINE2在卵巢癌耐药细胞和组织中的表达量明显高于敏感细胞和组织，故当CircSERPINE2在检测组中的表达量高于对照组2倍及以上时，可认为检测组对铂类耐药。
实施例3实时荧光定量PCR分析CircSERPINE2在卵巢癌不同细胞系以及耐药组织中的差异表达
所用IOSE80、A2780、OVCAR3、SKOV3和HO8910均购买自中国医学科学院基础医学研究所。培养以上几种细胞至细胞密度80％，随后抽提RNA、逆转录以及QPCR检测CircSERPINE2表达量方法同实施例1和2。检测结果显示CircSERPINE2在耐药细胞系OVCAR3和SKOV3中显著高表达，在人正常卵巢上皮细胞IOSE80和敏感细胞系A2780中低表达，其中HO8910是与肿瘤侵袭转移有关的细胞系，结果见图3。
本发明根据临床上对于铂类耐药和铂类敏感的标准收集了4例铂类耐药(R-1,2,3,4)和3例铂类敏感组织(S-1,2,3)样本。随后抽提RNA，逆转录和QPCR检测CircSERPINE2的表达量方法同上。结果显示CircSERPINE2在耐药组织中明显高表达，结果见图3。
实施例4使用不同浓度顺铂处理细胞，检测CircSERPINE2表达量变化
将顺铂(2.5mM)用培养基稀释到2.5μM、5μM和10μM备用，对照组为0μM。提前一天种好卵巢癌细胞，保证加药时细胞密度约为50-60％。用D-hanks清洗两遍，然后加入以上不同浓度的含顺铂的培养基，37℃培养24h。之后抽提RNA，逆转录和QPCR的步骤同实施例1和2。图4结果显示使用不同浓度顺铂处理卵巢癌细胞后，CircSERPINE2的表达量明显上升。
实施例5使用放线菌素D处理卵巢癌细胞，验证CircSERPINE2稳定性
将放线菌素D(2mg/ml)添加到培养基中以阻断RNA转录，并将溶剂二甲基亚砜(DMSO)用作阴性对照。收集用放线菌素D或DMSO处理0、8、16和24h的卵巢癌细胞，提取其RNA并进行逆转录以进行QPCR检测CircSERPINE2和SERPINE2的表达量，提取RNA，逆转录和QPCR方法同实施例1和2。图5结果显示，放线菌素D处理细胞后，线性SERPINE2的表达量明显下降，环状CircSERPINE2表达量变化很小，由此证明了CircSERPINE2的稳定性。
CircSERPINE2正向引物：5'-GGGTCTGTGGAAATCACGGT-3'
CircSERPINE2反向引物：5'-CAAGGACGACCACACCGGAA-3'
SERPINE2正向引物：5'-GGCTGCGTCCTCCGACTC-3'，见SEQ NO：10；
SERPINE2反向引物：5'-GGGGAGAGATCACGATGTTGT-3'，见SEQ NO：11。
实施例6使用siRNA敲减CircSERPINE2，进行功能实验
1.6孔板
2.96孔板
3.血细胞计数板
4.不含EDTA的胰酶
5.顺铂(2.5mM)、卡铂(2.5mM)
6.CCK8
7.酶标仪
8.AnnexinV-FITC PI试剂盒：Binding buffer、FITC、PI
9.流式细胞仪
10.CircSERPINE2的siRNA序列：
si-CircSERPINE2-1：TGTGGTCGTCCTTGGTGGA
或
si-CircSERPINE2-2：CGGTGTGGTCGTCCTTGGT
卵巢癌细胞的转染：在六孔板中种入200000-300000A2780和OVCAR3细胞；第二天，将3μl的siRNA(si-NC、si-CircSERPINE2-1、si-CircSERPINE2-2)和6μl转染试剂分别与500μl不含血清的培养基混合，静置5分钟后将siRNA和转染试剂混合，静置10分钟后加入已使用D-Hanks清洗的六孔板中；转染6-8h后更换成含血清培养基继续培养24h。
(1)检测敲减CircSERPINE2后其亲本基因SERPINE2的变化
转染完成48h后，抽提RNA、逆转录和QPCR检测CircSERPINE2和SERPINE2的方法同实施例1和2，图6结果显示使用siRNA转染卵巢癌细胞后，CircSERPINE2的表达量明显下降，而敲减CircSERPINE2后其亲本基因SERPINE2表达量变化不明显。
CircSERPINE2正向引物：5'-GGGTCTGTGGAAATCACGGT-3'
CircSERPINE2反向引物：5'-CAAGGACGACCACACCGGAA-3'
SERPINE2正向引物：5'-GGCTGCGTCCTCCGACTC-3'
SERPINE2反向引物：5'-GGGGAGAGATCACGATGTTGT-3'
(2)卵巢癌细胞中敲减CircSERPINE2后的IC50值检测：
转染24h后使用D-Hanks清洗细胞两次，然后加入500μl胰酶，置于37℃细胞培养箱消化5分钟；消化完成后加入1ml含血清的培养基终止消化并将细胞转移至离心管中，1000r/min离心5分钟；离心完成弃去上清然后加入1ml培养基重悬，吸取10μl至血细胞计数板，计数；96孔板每孔4000个细胞种板，37℃培养箱贴壁；细胞贴壁后将培养基换成含0μM、1μM、2μM、4μM、6μM、8μM、10μM顺铂或0μM、5μM、10μM、20μM、40μM、60μM、80μM卡铂的培养基，将96孔板置于37℃培养箱培养72h；72h后往每孔中加入10μlCCK8，37℃孵育2h后使用酶标仪在450nm波长测量吸光值。
数据处理：将药物各浓度处理后的吸光值与0μM取比值得到抑制率，随后绘制出抑制曲线，并计算IC50值。
如图7A所示，使用顺铂处理两条siRNA敲减的A2780细胞后，IC50值分别由13.39μM下降到9.770μM和9.126μM，使用卡铂处理细胞，IC50值分别由131.3μM下降到94.81μM和85.97μM；
如图7B所示，使用顺铂处理两条siRNA敲减OVCAR3细胞后，IC50值分别由8.809μM下降到6.888μM和5.832μM，使用卡铂处理细胞，IC50值分别由114.2μM下降到88.06μM和74.76μM。
(3)卵巢癌细胞中敲减CircSERPINE2后流式细胞仪检测细胞凋亡：
转染24h后使用D-Hanks清洗细胞两次，然后加入500μl胰酶，置于37℃细胞培养箱消化5分钟；消化完成后加入1ml含血清的培养基终止消化并将细胞转移至离心管中，1000r/min离心5分钟；离心完成弃去上清然后加入1ml培养基重悬；吸取10μl至血细胞计数板，计数；6孔板每孔100000个细胞种板，37℃培养箱等待细胞稳固贴壁后分别加入10μM顺铂或100μM卡铂诱导凋亡；同时消化一批未做转染的卵巢癌细胞并计数，同样以每孔100000个细胞种3个孔，并同样使用10μM顺铂或100μM卡铂诱导凋亡，以作为补偿；药物诱导凋亡72h后，吸取培养基到EP管并做好标记，用PBS清洗六孔板两次，然后加入500μl不含EDTA的胰酶，37℃培养箱消化10分钟；消化完成后加入对应的培养基终止消化，再全部吸到对应的EP管中，离心机瞬时离心，弃上清，加入PBS重悬，瞬时离心，再使用PBS清洗一次；根据细胞数加入100-200μl binding buffer，使用震荡仪轻微震荡重悬，然后分别加入5μl FITC和5μlPI，补偿组分别为只加binding buffer、加FITC和加PI三管，避光静置10分钟后流式细胞仪检测细胞凋亡。
数据处理：使用Flowjo v10软件分析流式细胞仪检测细胞凋亡的结果。
如图7C所示，使用10μM顺铂诱导A2780细胞凋亡，结果显示两条siRNA敲减CircSERPINE2后凋亡率分别由15.39％上升到20.45％和27.01％，用100μM卡铂诱导A2780细胞凋亡，凋亡率分别由9.87％上升到15.19％和19.44％；
如图7D所示使用10μM顺铂诱导OVCAR3细胞凋亡，结果显示两条siRNA敲减CircSERPINE2后凋亡率分别由10.72％上升到19.72％和18.31％，用100μM卡铂诱导OVCAR3细胞凋亡，凋亡率分别由4.78％上升到18.26％和18.66％。
以上研究表明，CircSERPINE2可作为人卵巢肿瘤标志物，且敲减CircSERPINE2可提高卵巢癌细胞对铂类药物的敏感性。
序列表
<110> 中南大学
<120> 环状RNA CircSERPINE2的应用方法及检测、治疗制剂
<160> 11
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 707
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
ctaacgccgt gtttgttaag aatgcctctg aaattgaagt gccttttgtt acaaggaaca 60
aagatgtgtt ccagtgtgag gtccggaatg tgaactttga ggatccagcc tctgcctgtg 120
attccatcaa tgcatgggtt aaaaatgaaa ccagggatat gattgacaat ctgctgtccc 180
cagatcttat tgatggtgtg ctcaccagac tggtcctcgt caacgcagtg tatttcaagg 240
gtctgtggaa atcacggttc caacccgaga acacaaagaa acgcactttc gtggcagccg 300
acgggaaatc ctatcaagtg ccaatgctgg cccagctctc cgtgttccgg tgtggtcgtc 360
cttggtggaa ggaaccatga actggcatct ccccctcttc ctcttggcct ctgtgacgct 420
gccttccatc tgctcccact tcaatcctct gtctctcgag gaactaggct ccaacacggg 480
gatccaggtt ttcaatcaga ttgtgaagtc gaggcctcat gacaacatcg tgatctctcc 540
ccatgggatt gcgtcggtcc tggggatgct tcagctgggg gcggacggca ggaccaagaa 600
gcagctcgcc atggtgatga gatacggcgt aaatggagtt ggtaaaatat taaagaagat 660
caacaaggcc atcgtctcca agaagaataa agacattgtg acagtgg 707
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
gggtctgtgg aaatcacggt 20
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
caaggacgac cacaccggaa 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
tcaccaactg ggacgacatg 20
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
gtcaccggag tccatccgat 20
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
aacggatttg gtcgtattgg 20
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
ttgattttgg agggatctcg 20
<210> 8
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
tgtggtcgtc cttggtgga 19
<210> 9
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
cggtgtggtc gtccttggt 19
<210> 10
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
ggctgcgtcc tccgactc 18
<210> 11
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
ggggagagat cacgatgttg t 21

Claims (2)

1.抑制CircSERPINE2表达的制剂在制备人卵巢癌铂耐受治疗制剂中的应用，所述的抑制CircSERPINE2表达的制剂为siRNA；该CircSERPINE2的序列见SEQ NO：1；所述的人卵巢癌铂耐受治疗制剂包括增强人卵巢癌铂类药物化疗敏感性的制剂。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，
所述的siRNA序列如下：
si-CircSERPINE2-1：TGTGGTCGTCCTTGGTGGA
或
si-CircSERPINE2-2：CGGTGTGGTCGTCCTTGGT。
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