CN113121718A - 一种迷果芹多糖psgp-2及其制备方法与应用 - Google Patents

一种迷果芹多糖psgp-2及其制备方法与应用 Download PDF

Info

Publication number
CN113121718A
CN113121718A CN202110525497.9A CN202110525497A CN113121718A CN 113121718 A CN113121718 A CN 113121718A CN 202110525497 A CN202110525497 A CN 202110525497A CN 113121718 A CN113121718 A CN 113121718A
Authority
CN
China
Prior art keywords
polysaccharide
psgp
water
preparation
solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202110525497.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113121718B (zh
Inventor
廖志新
李妍
孙波
刘玲菲
王嘉玮
吕伸明
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Southeast University
Original Assignee
Southeast University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Southeast University filed Critical Southeast University
Priority to CN202110525497.9A priority Critical patent/CN113121718B/zh
Publication of CN113121718A publication Critical patent/CN113121718A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113121718B publication Critical patent/CN113121718B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/23—Apiaceae or Umbelliferae (Carrot family), e.g. dill, chervil, coriander or cumin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了一种迷果芹多糖PSGP‑2及其制备方法与应用，该迷果芹多糖PSGP‑2由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成。通过乙醇对迷果芹进行提取，木瓜蛋白酶溶液脱除蛋白和杂质小分子，采用DEAE‑Cellulose 52和Sephadex G‑100柱层分析法进行洗脱，得到迷果芹多糖PSGP‑2。迷果芹多糖PSGP‑2可以抑制肿瘤细胞的增殖，发挥直接抗肿瘤作用，或者，与阿霉素联合用药具有协同抗肿瘤作用，且对正常细胞无杀伤作用，具有减少化疗药物的用量，降低化疗药物的不良反应的优点，可供癌症治疗的药物使用。迷果芹多糖PSGP‑2具有较好的降血脂活性。PSGP‑2可作为抗肿瘤剂和降血脂剂应用于功能食品药品中，为新型的天然药物产品研发提供理论支持，开发中药材的使用价值。

Description

一种迷果芹多糖PSGP-2及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及一种迷果芹多糖PSGP-2及其制备方法与应用，属于生物医药领域。
背景技术
迷果芹（Sphallerocarpusgracilics（Bess.）K.－Pol）是伞形科（Umbellferae）迷果芹属（SphallerocarpusBess.Ex DC.）单种野生植物。其肉质根性状呈长纺锤形或圆锥形，表面淡黄灰色，有明显的纵皱及横长突起的皮孔样疤痕；顶端圆钝且有残基，四周有黑褐色，似鳞片状的叶鞘基环绕，其下有致密的环状横纹。其根质硬，易折断，断面乳白色，具胡萝卜香气，味淡，微甜。迷果芹的肉质根比较发达，在秋季能够积累大量多糖，营养较为丰富。
多糖作为生命体必须的营养成分，不仅涉及人体内的各种生命活动，同时还能储存能量、支持结构并能防御外界对生命体的攻击。多糖不仅作为重要的生命体物质组成部分，而且它还具有着抗肿瘤，抗氧化等多种活性作用，且对正常细胞无杀伤作用。
目前，肿瘤已成为威胁人类健康的重要疾病。然而，使用化疗药物治疗肿瘤疾病虽然能杀死肿瘤细胞，抑制肿瘤细胞的增长，但对正常细胞的损害也大，易引发多种不良反应，且长时间服用容易产生耐药性。
联合用药已具有悠久的历史，在传统中医药方里，多味中药的共同使用就是联合用药的表现。在现代医学中，将天然产物与化疗药物联合使用治疗肿瘤疾病已具有较好的进展。例如：将紫杉醇与阿帕替尼联合治疗，可对晚期胃癌患者起到良好的治疗效果；长春碱和神经酰胺联合能够协同促进肝癌和结直肠癌的凋亡等。
多糖可以结合胆汁酸并且增加粪便排泄，从而降低人体胆固醇，排泄有毒代谢物和次级胆汁酸可以降低患癌症的风险。肝脏中的胆汁酸主要以胆汁盐的方式存在，主要为甘氨胆酸钠和牛磺胆酸钠，肠道内胆酸盐与多糖结合后可直接排泄出体外，并能够减少脂质的乳化吸收，由此体现其降血脂作用。
CN93105147.9公开了迷果芹饮品，但该方法未对迷果芹多糖进行报道。目前也未见有关迷果芹纯化多糖PSGP-2在抗肿瘤药物中的应用及其制备方法研究报道。该发明首次研究了一种迷果芹纯化多糖PSGP-2在降血脂和抗肿瘤药物中的应用及其制备方法，可以为迷果芹多糖的进一步开发提供一定的理论依据。
发明内容
本发明的目的是提供一种水法提取的具有直接抗肿瘤活性，协同抗肿瘤活性以及降血脂活性的迷果芹多糖。以下为本发明具体技术方案：
本发明所述的一种迷果芹多糖PSGP-2，所述迷果芹多糖PSGP-2由鼠李糖2.463%、阿拉伯糖9.301%、甘露糖40.019%、葡萄糖19.435%、半乳糖28.782%组成。所述迷果芹多糖PSGP-2的平均相对分子量为31623Da。
本发明所述的迷果芹多糖PSGP-2的制备方法，包含以下步骤：
第一步，迷果芹粗多糖的提取：将迷果芹粉碎，粉碎后的迷果芹用乙醇萃取进行脱脂处理，过滤，晾干，得到固体药材，用水对固体药材进行多次萃取，过滤，将滤液合并，使用水提醇沉法获得迷果芹粗多糖；
第二步，迷果芹粗多糖脱蛋白和杂质小分子：将第一步中获得的迷果芹粗多糖用水溶解，加入木瓜蛋白酶溶液，水浴反应，离心，过滤，用Savege试剂法脱蛋白，取上层溶液减压旋蒸，透析，定期换水，冷冻干燥，得粗糖聚物SGP-W；
第三步，迷果芹多糖PSGP-2的分离纯化：将第二步得到的粗糖聚物SGP-W用水溶解，用DEAE-Cellulose 52 柱层分析法进行洗脱，洗脱液真空浓缩，透析，冷冻干燥，得到GP-2，将GP-2用水溶解，用Sephadex G-100柱层分析法进行洗脱，洗脱液真空浓缩，透析，冷冻干燥，得到迷果芹多糖PSGP-2。
进一步地，在所述的第一步中，将迷果芹粉碎成1-2cm，粉碎后的迷果芹与乙醇的固液比为1:4（重量：体积），水与固体药材的质量比1:10，萃取次数为2次，萃取时间为3 h。
进一步地，在所述的第二步中，果芹粗多糖与水的质量比为1:10，木瓜蛋白酶溶液的浓度为5%，木瓜蛋白酶溶液与溶解后果芹粗多糖水溶液的体积比为1:5，水浴反应的温度67℃，水浴反应的时间为3.5 h，
进一步地，在所述的第三步中，粗糖聚物SGP-W与水的质量比为1:15，在DEAE-Cellulose 52 柱层分析法中，采用水和NaCl溶液进行梯度洗脱；在Sephadex G-100柱层分析法中，采用水进行洗脱。
进一步地，所述NaCl溶液的浓度为0.1M、0.3M、0.5M。
本发明所述的迷果芹多糖PSGP-2在制备抗肿瘤药物中的应用。
进一步地，所述肿瘤为胃癌、卵巢癌、膀胱癌、鼻咽癌和乳腺癌。
进一步地，所述的迷果芹多糖PSGP-2单独用于制备抗肿瘤药物；或者，迷果芹多糖PSGP-2与阿霉素联合使用，用于制备抗肿瘤药物。所述的迷果芹多糖PSGP-2与抗肿瘤药物在肿瘤治疗中具有协同作用，迷果芹多糖PSGP-2与阿霉素联合制备抑制4T1肿瘤细胞增长的药物。
本发明中的迷果芹多糖PSGP-2在制备降血脂食品中的应用，迷果芹多糖PSGP-2具有良好的胆酸盐结合能力，具有较好的降血脂作用。
本发明的有益效果为：
本发明与现有技术相比，具有以下显著性优点：本发明的迷果芹多糖SGP-2具有良好的抗肿瘤活性，特别是协同抗肿瘤活性。迷果芹多糖PSGP-2为天然提取物，对正常细胞无毒，具有良好的安全性。本发明中的迷果芹多糖PSGP-2与Doxorubicin联用可抑制4T1肿瘤细胞的增长，提高肿瘤抑制率，抑制率大于单独Doxorubicin用药的抑制率，具有减少化疗药物的用量，降低化疗药物的不良反应的优点，可供癌症治疗的药物使用。本发明中的迷果芹多糖PSGP-2具有良好的胆酸盐结合能力，具有较好的降血脂作用。本发明所得迷果芹多糖PSGP-2为纯品。
附图说明
图1为迷果芹多糖GP-2的DEAE洗脱曲线图。
图2为迷果芹多糖PSGP-2的Sephadex-G100洗脱曲线图。
图3为迷果芹多糖PSGP-2在200-400 nm处扫描紫外光谱图。
图4为迷果芹多糖PSGP-2的HPGPC图。
图5为迷果芹多糖PSGP-2的红外谱图。
图6为迷果芹多糖PSGP-2的1H-NMR图。
图7a为混合单糖标准品的GC-MS谱图。
图7b为迷果芹多糖PSGP-2的单糖组成分析的GC-MS谱图。
图8为迷果芹多糖PSGP-2的扫描电镜图。
图9为迷果芹多糖PSGP-2联合Doxorubicin对4T1细胞体外增殖的抑制作用图。
图10为迷果芹多糖PSGP-2联合Doxorubicin对4T1细胞的AM/PI荧光染色图。
图11为迷果芹多糖PSGP-2联合Doxorubicin对4T1细胞的染色线粒体膜的结果图。
图12 为迷果芹多糖PSGP-2对正常细胞L-02的影响。
备注：Doxorubicin为阿霉素的英文名称，简称DOX，本发明中提到的DOX均指的是阿霉素，具体实施方式中的DOX也指的是阿霉素。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于本发明而不用于限制本发明的范围。对外应理解，在阅读了本发明的内容之后，本领域技术人员对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1 迷果芹多糖PSGP-2的制备
1）：迷果芹粗多糖的提取
将2.5 Kg迷果芹根切成1-2 cm的小段，用10 L 95%乙醇，在60℃的条件下萃取2h对其进行除脂预处理。萃取后过滤，分离出固体药材，晾干以备用。取预处理后的迷果芹固体药材0.625 Kg，使用6.25 L去离子水对其进行萃取，在90℃的条件下萃取2次，每次3 h。萃取结束后过滤，分离得滤液。将两次萃取得到的滤液合并，加入4倍体积的95%乙醇溶液，并及时搅拌，静置48h。取沉淀对其进行冷冻干燥，即得迷果芹粗多糖。
2）：迷果芹粗多糖脱蛋白和杂质小分子
配置5%木瓜蛋白酶水溶液，加入到用去离子水复溶的迷果芹粗多糖溶液 (迷果芹粗多糖与水的质量比按1:15进行溶解) 中，在67℃的条件下水浴反应3.5h。离心、过滤，用Savege试剂（氯仿和正丁醇以4∶1混合）法脱蛋白，重复操作5次。取上层溶液在37℃的条件下对其进行减压旋蒸操作。放入透析袋，在去离子水中透析48 h，每6h更换水一次。最后将透析过后的糖溶液冷冻干燥，得粗糖聚物SGP-W，保存。
3）：迷果芹多糖PSGP-2的分离纯化
取300 mg的粗糖聚物SGP-W，用20 mL去离子水溶解，上样至阴离子交换柱，填料为DEAE-Cellulose 52，依次用500 mL的去离子水、500 mL的0.1M NaCl溶液、500 mL的0.3MNaCl溶液、500 mL的0.5M NaCl溶液进行梯度洗脱，以每根试管10 mL进行进样。采用苯酚-硫酸法对其进行显色反应，对洗脱液隔管取样1 mL，加入1 mL新配制的6%苯酚溶液和3 mL浓硫酸。然后在490 nm紫外波长下测量吸光度值，绘制出DEAE-Cellulose 52洗脱曲线，如图1所示。图1为迷果芹多糖GP-2的DEAE洗脱曲线图，横坐标为试管数，纵坐标为吸光度值，根据吸光度值的变化，图1中共显示2个洗脱主峰GP-1和GP-2，分别对应为0.3M 和0.5MNaCl洗脱液分离的产物。根据GP-2洗脱主峰显示的位置，读出相应的横坐标确定试管数，并将这些试管内的溶液合并于旋蒸瓶中，用旋转蒸发仪在70℃下真空浓缩，透析48 h，冷冻干燥得GP-2样品。
取40 mg GP-2样品，用2 mL去离子水溶解，上样至凝胶柱，填料为SephadexG-100，用去离子水洗脱，以每根试管5 mL进行进样。采用苯酚-硫酸法进行显色反应，对洗脱液每管取样1 mL，加入1 mL新配制的6% 苯酚溶液和3 mL浓硫酸。然后在490 nm紫外波长下测量吸光度值，绘制Sephadex G-100洗脱曲线，如图2所示。图2为迷果芹多糖PSGP-2的Sephadex-G100洗脱曲线图，横坐标为试管数，纵坐标为吸光度值，根据吸光度值的变化，图2中共显示1个洗脱主峰。根据洗脱主峰显示的位置，读出相应的横坐标确定试管数，并将这些试管内的溶液合并于旋蒸瓶中，使用旋转蒸发仪在70℃下真空浓缩，用水透析48 h，冷冻干燥，得到迷果芹多糖PSGP-2。
实施例2 迷果芹多糖PSGP-2纯度和分子量的测定
配制1 mg/mL PSGP-2多糖水溶液，紫外光谱在200-400 nm处扫描，检测样品中游离的核酸和蛋白质的存在，结果如图3所示。图3为迷果芹多糖PSGP-2在200-400 nm处扫描紫外光谱图，由图3可知，迷果芹多糖PSGP-2在260 nm和280 nm两个波长处都没有吸收峰，说明不含有游离的核酸和蛋白质。
运用高效凝胶渗透色谱 (HPGPC) 法对多糖样品的纯度进行分析，并测定分子量。取5 mg迷果芹多糖PSGP-2，加入5 mL超纯水制成1 mg/mL的多糖溶液。使用高效凝胶色谱仪测定其保留时间，结果如图4所示。图4为迷果芹多糖PSGP-2的HPGPC图，由图4可知，迷果芹多糖PSGP-2为单一狭窄的对称峰，可以判断其为单一组分纯品，其平均相对分子量为31623Da。
实施例3 迷果芹多糖PSGP-2的红外分析
迷果芹PSGP-2多糖，经研细、压片机压片后在波长4000cm-1 - 400cm-1范围内进行红外光谱扫描分析，对其进行结构解析，结果如图5所示。图5为迷果芹多糖PSGP-2的红外谱图，由图5可知，可以确定PSGP-2相应的结构信息，具体为：波长3434.60 cm-1处的峰为-OH的伸缩振动，波长2927.41 cm-1处的峰为C-H键的伸缩振动，波长1612.20 cm-1处的峰表示有结合水的存在，波长1388.50 cm-1处的峰表示C-H的变角振动，波长1070.30 cm-1处的峰表示其存在吡喃糖环。由此可见，PSGP-2是。一种具有五元糖环结构的多糖
实施例4 迷果芹多糖PSGP-2的核磁分析
迷果芹多糖PSGP-2（约60 mg）溶解在D2O中。使用600 MHz的Bruker核磁共振光谱仪进行检测。结果如图6所示，图6为迷果芹多糖PSGP-2的1H-NMR图。异头氢信号在δ5.08 -5.06 ppm，这是PSGP-2中存在α构型糖残基的信号。由此可见，PSGP-2为α构型吡喃糖。
实施例5 迷果芹多糖PSGP-2的单糖分析
选用葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖为单糖标准品。将每种单糖标准品称取1mg放入反应瓶中，加入4mL 的3 M 的三氟乙酸溶液（TFA），在氮气保护下120℃下水解处理10 h。反应后，75℃下减压浓缩，以除去多余的TFA。再加入50mg盐酸羟胺和1mL吡啶，90℃下反应40min。待冷却后，加入1mL乙酸酐进行乙酰化反应。反应完全后的样品，采用3 mL三氯甲烷进行萃取，使用0.22 µm有机微孔滤膜进行过滤，滤液进行GC-MS分析。
将5mg的迷果芹多糖PSGP-2置入反应瓶中，加入4mL的3M的TFA溶液，于120℃的油浴锅中反应10 h。使用旋转蒸发仪在75℃下旋干多余的TFA。加入50mg的盐酸羟胺和0.5 mL的吡啶，90℃反应40 min，冷却后加入0.5 mL的醋酸酐，90℃乙酰化反应40 min。减压浓缩蒸干，用1mL的氯仿萃取，过滤，滤液进行GC-MS分析。上述实验结果如图7a，图7b所示，图7b为迷果芹多糖PSGP-2的单糖组成分析的GC-MS谱图，图7a为混合单糖标准品的GC-MS分析图（1：鼠李糖；2：阿拉伯糖；3：岩藻糖；4：木糖；5：甘露糖；6：葡萄糖；7：半乳糖），图7b为PSGP-2的GC-MS图。由图7a中可知每种单糖的保留时间。由图7b可知，共显示5个峰，对照上图的保留时间，确定相应单糖种类，得到迷果芹PSGP-2多糖由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成，且其单糖组成比例分别为2.463%、9.301%、40.019%、19.435%、28.782%。
实施例6 迷果芹多糖PSGP-2的扫描电镜分析
将干燥迷果芹多糖PSGP-2样品均匀地平铺在胶带上，使用离子建设仪喷上一层导电金粉，制得的样品放置在样品台上，使用扫描电镜在不同放缩倍数下观察其形态。PSGP-2的扫描电镜图片如图8所示。图8为迷果芹多糖PSGP-2的扫描电镜图，其中，a为放缩250倍时扫描电镜图，b为放缩2000倍时扫描电镜图，c为放缩4000倍时扫描电镜图，d为放缩6000倍时扫描电镜图。由图8可知，在低倍数下（250倍），PSGP-2图像显示有不规则的卷曲薄片状结构。但是随着倍数的放大，可以看到平滑薄膜形状，说明PSGP-2不具有规整性。
实施例7 迷果芹多糖PSGP-2的直接抗肿瘤活性研究
将0.2 mg/mL的迷果芹多糖PSGP-2作用于人胃癌细胞MGC-803、人卵巢癌细胞A2780、人膀胱癌细胞T24、人鼻咽癌细胞CNE-2和小鼠乳腺癌细胞4T1共五种肿瘤细胞（此五种癌细胞均购自中国生命科学学院）中，以MTT法初步研究其直接抗肿瘤活性。
1、细胞培养：在培养瓶中分别接种上述各细胞使其贴壁生长，将培养瓶放入温度为37℃且CO2含量为5%的培养箱中培养。待细胞贴壁长满培养瓶后进行传代或冻存。
2、种板：分别取处于对数生长期的上述五种癌细胞，用PBS缓冲液（磷酸根浓度0.01M，PH为7.2-7.4）轻微洗涤3次。加入2mL的0.25% 的胰蛋白酶-EDTA消化液消化细胞，然后加入2mL含10%胎牛血清的RPMI.1640培养基终止胰蛋白酶消化，离心(1000 r/ min)5min，去上清液，加入2mL新鲜的含10%胎牛血清的RPMI.1640培养基，轻轻吹打，制成单个细胞悬浮液，通过细胞计数，以每孔150μL的容量接种于96孔板中，每孔细胞数范围为20000-30000，培养箱中培养48h。
3、加药：给药组：将迷果芹多糖PSGP-2溶解在水中，配置成10 mg/mL的迷果芹多糖SGP-2水溶液，把迷果芹多糖PSGP-2水溶液用不含胎牛血清的RPMI.1640不完全培养液稀释成0.2 mg/mL的溶液作用于上述五种癌细胞，对其的抗肿瘤活性进行探究，以及筛选出抗肿瘤效果最好的肿瘤细胞，以供后续研究。每孔加150 µL，每个浓度设6个复孔。同时设置空白对照组：每孔加150µL不含胎牛血清的RPMI.1640培养基，培养箱中培养24h后，弃掉培养基，每孔加入100 µL的1×MTT药物（1 mg/mL）和不含胎牛血清的RPMI.1640不完全培养液的混合溶液，继续培养4小时。使用酶标仪测定，进行初步筛选。在490 nm处测定每孔的OD值。各样品的抑制率按以下计算公式换算：
抑制率(%)=(1-OD样品/OD对照)×100
其中，OD样品是给药组的OD值，OD空白是空白组的OD值
在0.2 mg/mL迷果芹多糖 PSGP-2的较低浓度下，对人胃癌细胞MGC-803的抑制率为7.38%，对人卵巢癌细胞A2780的抑制率为1.87%，人膀胱癌细胞T24的抑制率为1.42%，对人鼻咽癌细胞CNE-2的抑制率为2.36%，对小鼠乳腺癌细胞4T1的抑制率为18.58%。将迷果芹多糖PSGP-2的浓度变为0.8 mg/mL时，对人胃癌细胞MGC-803的抑制率为23.14%，对人卵巢癌细胞A2780的抑制率为25.78%，人膀胱癌细胞T24的抑制率为26.44%，对人鼻咽癌细胞CNE-2的抑制率为29.76%，对小鼠乳腺癌细胞4T1的抑制率为32.66%。表明PSGP-2具有一定的直接抗肿瘤作用。说明迷果芹多糖PSGP-2可以抑制人胃癌细胞MGC-803、人卵巢癌细胞A2780、人膀胱癌细胞T24、人鼻咽癌细胞CNE-2和小鼠乳腺癌细胞4T1共五种肿瘤细胞的增殖，具有一定的直接抗肿瘤的作用。
实施例8 迷果芹多糖SGP-2的协同抗肿瘤活性研究
选用迷果芹多糖PSGP-2与Doxorubicin，考察两种药物的协同作用，以小鼠乳腺癌细胞4T1为模型，利用MTT 法、Calcein-AM/PI 染色共聚焦成像法和JC-1 染色检测线粒体膜电位变化实验法初步研究协同抗肿瘤活性。
1、细胞培养：在培养瓶上接种小鼠乳腺癌细胞4T1细胞，将含10%胎牛血清的RPMI.1640培养基放入温度为37℃且CO2含量为5%的培养箱中培养。待细胞贴壁长满培养瓶后进行传代或冻存。
2、种板：取处于对数生长期的细胞，用PBS缓冲液（磷酸根浓度0.01M，PH为7.2-7.4）轻微洗涤3次。加入浓度为2mL的0.25%的胰蛋白酶-EDTA消化液消化细胞，然后加入含2mL的10%胎牛血清的RPMI.1640培养液，终止胰蛋白酶消化，离心(1000 r/ min) 5min，去上清液，加入2mL新鲜的含10%胎牛血清的RPMI.1640培养液，轻轻吹打，制成单个细胞悬浮液，通过细胞计数，以每孔150μL的容量接种于96孔板中，每孔细胞数范围为20000-30000，培养箱中培养48h。
3、MTT细胞实验加药：给药组：将迷果芹多糖PSGP-2和Doxorubicin分别溶解在水中，配置成10 mg/mL的迷果芹多糖溶液和1mM的DOX溶液，把上述的两种溶液用不含胎牛血清的RPMI.1640不完全培养液分别稀释成相应浓度（20μM DOX，20μM DOX+0.25 mg/mLPSGP-2，20μM DOX+0.5 mg/mL PSGP-2，20μM DOX+1.0 mg/mL PSGP-2）的溶液。每孔加150 µL，每个浓度设6个复孔。空白照组：每孔加150µL不含胎牛血清的RPMI.1640培养基，培养箱中培养24h后，弃掉培养基，每孔加入100 µL的1×MTT药物（1 mg/mL）和不含胎牛血清的RPMI.1640培养基的混合溶液，继续培养4小时，使用酶标仪测定，进行初步筛选。在490 nm处测定每孔的OD值。各样品的抑制率按以下计算公式换算：
抑制率(%)=(1-OD样品/OD对照)×100
其中，OD样品是给药组的OD值，OD空白是空白组的OD值
4、Calcein-AM/PI 染色共聚焦成像实验和JC-1 染色检测线粒体膜电位变化实验加药：将小鼠乳腺癌细胞4T1接种于共聚焦培养皿中，孵育24h后，每孔加入150 µL相应浓度的Doxorubicin和PSGP-2（具体浓度为20μM DOX，20μM DOX+0.25 mg/mL PSGP-2，20μM DOX+0.5 mg/mL PSGP-2，20μM DOX+1.0 mg/mL PSGP-2）的混合溶液，孵育12h。激光照射5min后，后用Calcine AM和PI以及JC-1染液进行染色（30 min），并利用共聚焦激光扫描显微镜（Olympus FV1000-IX81）进行观察。
采用 MTT 法检测迷果芹多糖PSGP-2与Doxorubicin联合用药作用，结果如图9所示。图8为迷果芹多糖PSGP-2联合DOX对4T1细胞体外增殖的抑制作用图，由图9可知，20 μMDoxorubicin 在反应24h后，对小鼠乳腺癌细胞4T1的抑制率为45.22%；0.25 mg/mL 迷果芹多糖PSGP-2 在反应24h后，对小鼠乳腺癌细胞4T1的抑制率为19.35%；然而，将20 μMDoxorubicin和0.25 mg/mL 迷果芹多糖PSGP-2联合使用后，对小鼠乳腺癌细胞4T1的抑制率达60.20%，与单独使用20 μM Doxorubicin用药比较，对小鼠乳腺癌细胞4T1抑制率提高近15%。将0.5 mg/mL 迷果芹多糖PSGP-2在反应24h后，对小鼠乳腺癌细胞4T1的抑制率为46.58%；然而，将20 μM Doxorubicin和0.5 mg/mL 迷果芹多糖PSGP-2联合使用后，对小鼠乳腺癌细胞4T1的抑制率为71.42%，与单独使用20 μM Doxorubicin用药比较，对小鼠乳腺癌细胞4T1抑制率提高25%以上。MTT实验数据表明，与Doxorubicin单独用药相比，迷果芹多糖PSGP-2与Doxorubicin联用可以提高肿瘤抑制率，由此可见PSGP-2和Doxorubicin具有协同增效抗肿瘤作用。
迷果芹多糖PSGP-2联合Doxorubicin对小鼠乳腺癌细胞4T1的AM/PI染色成像如图10所示。图9为迷果芹多糖PSGP-2联合Doxorubicin对4T1细胞的AM/PI荧光染色图，绿色为活细胞，红色为死细胞。由图10可知，随着迷果芹多糖PSGP-2浓度的增加，荧光呈红色的面积在增加，表示细胞在孵卵12h后小鼠乳腺癌细胞4T1死亡数目增加。可见迷果芹多糖PSGP-2和Doxorubicin在细胞水平上促进肿瘤细胞凋亡，具有协同增效抗肿瘤作用。
使用JC-1 染色检测线粒体膜电位变化实验研究迷果芹多糖PSGP-2联合Doxorubicin对4T1细胞肿瘤抑制作用的实验结果如图11所示。图11为迷果芹多糖PSGP-2联合Doxorubicin对4T1细胞的染色线粒体膜的结果图，由图11可知，与单独的20 μMDoxorubicin用药相比，随着迷果芹多糖PSGP-2样品浓度的增加，红色荧光强度显著下降，绿色荧光显著增强，由此可见显示细胞线粒体膜电位下降，迷果芹多糖PSGP-2与Doxorubicin联合使用具有促进肿瘤细胞凋亡的作用。
由此可见，将迷果芹多糖PSGP-2与Doxorubicin联合用药，具有抗肿瘤协同增效作用，有望进一步开发。
实施例9
将0，0.0625 mg/mL，0.125 mg/mL，0.25 mg/mL，0.5 mg/mL，1.0 mg/mL的迷果芹多糖PSGP-2溶液作用于人正常肝细胞L-02中，以MTT法初步研究其直接抗肿瘤活性。
1、细胞培养：在培养瓶中接种L-02细胞使其贴壁生长，将培养瓶放入温度为37℃且CO2含量为5%的培养箱中培养。待细胞贴壁长满培养瓶后进行传代或冻存。
2、种板：分别取处于对数生长期的细胞，用PBS缓冲液（磷酸根浓度0.01M，PH为7.2-7.4）轻微洗涤3次。加入2mL的0.25% 的胰蛋白酶-EDTA消化液消化细胞，然后加入2mL含10%胎牛血清的RPMI.1640培养基终止胰蛋白酶消化，离心(1000 r/ min) 5min，去上清液，加入2mL新鲜的含10%胎牛血清的RPMI.1640培养基，轻轻吹打，制成单个细胞悬浮液，通过细胞计数，以每孔150μL的容量接种于96孔板中，每孔细胞数范围为20000-30000，培养箱中培养48h。
3、加药：给药组：将迷果芹多糖PSGP-2溶解在水中，配置成10 mg/mL的迷果芹多糖PSGP-2水溶液，把迷果芹多糖PSGP-2水溶液用不含胎牛血清的RPMI.1640不完全培养液稀释成相应浓度（0，0.0625 mg/mL，0,125 mg/mL，0.25 mg/mL，0.5 mg/mL，1.0 mg/mL）的溶液作用于上述的L-02细胞，对其细胞毒性进行测定。每孔加150 µL，每个浓度设6个复孔。同时设置空白对照组：每孔加150µL不含胎牛血清的RPMI.1640培养基，培养箱中培养24h后，弃掉培养基，每孔加入100 µL的1×MTT药物（1 mg/mL）和不含胎牛血清的RPMI.1640不完全培养液的混合溶液，继续培养4小时。使用酶标仪测定，进行初步筛选。在490 nm处测定每孔的OD值。各样品的抑制率按以下计算公式换算：
细胞活力(%)=(OD样品/OD对照)×100
其中，OD样品是给药组的OD值，OD空白是空白组的OD值
如图12所示，细胞活力值不低于100%，说明迷果芹纯化多糖PSGP-2对正常细胞并无杀伤作用，其不具有毒副作用，具有较好的安全性。
实施例10
通过体外胆酸盐结合实验评价了PSGP-2的降血脂活性。选择牛磺胆酸钠和甘氨胆酸钠作为结合剂。计算不同浓度的多糖溶液与其的结合率。使用磷酸盐缓冲液（0.1mol /L，PH = 6.3）配置10 mg / mL的胃蛋白酶溶液和10 mg / mL的胰蛋白酶溶液。在具塞试管中加入5mg的多糖样品和3mL的胃蛋白酶溶液，然后加入1 mL 加入0.01mol / L HCl溶液，在37℃下摇动1小时。反应结束后，使用0.1 mol / L 的NaOH溶液将pH值调节到6.3，然后加入4 mL胰蛋白酶溶液，在37℃下摇动1小时。向每个具塞试管中分别加入4 mL甘氨胆酸钠溶液（0.4 mmol / L，由pH 6.3的0.1 mol / L磷酸缓冲液制备）和4 mL牛磺胆酸钠溶液（pH6.3的0.1 mol / L磷酸盐缓冲液制备）。在37℃摇动1小时后，将混合物转移到离心管中。通过以4000 rpm离心10分钟来收集上清液。用于紫外光度计下387nm处测定甘氨酸钠胆酸钠和牛磺胆酸钠的含量。
结合率(%) = (加入量一剩余量) / 加入量
实验结果表明。PSGP-2的牛磺胆酸钠结合率为28.58%，甘氨胆酸钠的结合率为48.01%，结合率较高，体现良好的降血脂价值。
实施例仅用来进一步解释本发明，并非对本发明作任何形式上的限制，在不脱离本发明技术特征的情况下，利用本发明所揭示技术内容所作出局部更动或修饰的等效变换，均仍属于本发明保护范围内。

Claims (10)

1.一种迷果芹多糖PSGP-2，其特征在于，所述迷果芹多糖PSGP-2由鼠李糖2.463%、阿拉伯糖9.301%、甘露糖40.019%、葡萄糖19.435%、半乳糖28.782%组成，所述迷果芹多糖PSGP-2的平均相对分子量为31623Da。
2.一种如权利要求1所述的迷果芹多糖PSGP-2的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：
第一步，迷果芹粗多糖的提取：将迷果芹粉碎，粉碎后的迷果芹用乙醇萃取进行脱脂处理，过滤，晾干，得到固体药材，用水对固体药材进行多次萃取，过滤，将滤液合并，使用水提醇沉法获得迷果芹粗多糖；
第二步，迷果芹粗多糖脱蛋白和杂质小分子：将第一步中获得的迷果芹粗多糖用水溶解，加入木瓜蛋白酶溶液，水浴反应，离心，过滤，用Savege试剂法脱蛋白，取上层溶液减压旋蒸，透析，定期换水，冷冻干燥，得粗糖聚物SGP-W；
第三步，迷果芹多糖PSGP-2的分离纯化：将第二步得到的粗糖聚物SGP-W用水溶解，用DEAE-Cellulose 52 柱层分析法进行洗脱，洗脱液真空浓缩，透析，冷冻干燥，得到GP-2，将GP-2用水溶解，用Sephadex G-100柱层分析法进行洗脱，洗脱液真空浓缩，透析，冷冻干燥，得到迷果芹多糖PSGP-2。
3.根据权利要求2所述的迷果芹多糖PSGP-2的制备方法，其特征在于，在所述的第一步中，将迷果芹粉碎成1-2cm，粉碎后的迷果芹与乙醇的固液比为1:4（重量：体积），水与固体药材的质量比1:10，萃取次数为2次，萃取时间为3 h。
4.根据权利要求2所述的迷果芹多糖PSGP-2的制备方法，其特征在于，在所述的第二步中，果芹粗多糖与水的质量比为1:10，木瓜蛋白酶溶液的浓度为5%，木瓜蛋白酶溶液与溶解后果芹粗多糖水溶液的体积比为1:5，水浴反应的温度67℃，水浴反应的时间为3.5 h。
5.根据权利要求2所述的迷果芹多糖PSGP-2的制备方法，其特征在于，在所述的第三步中，粗糖聚物SGP-W与水的质量比为1:15，在DEAE-Cellulose 52 柱层分析法中，采用水和NaCl溶液进行梯度洗脱；在Sephadex G-100柱层分析法中，采用水进行洗脱。
6.根据权利要求5所述的迷果芹多糖PSGP-2的制备方法，其特征在于，所述NaCl溶液的浓度为0.1M、0.3M、0.5M。
7.权利要求1-6任一项所述的迷果芹多糖PSGP-2在制备抗肿瘤药物中的应用。
8.权利要求7所述的迷果芹多糖PSGP-2在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，迷果芹多糖PSGP-2单独用于制备抗肿瘤药物；或者，迷果芹多糖PSGP-2与阿霉素联合使用，用于制备抗肿瘤药物。
9.根据权利要求8所述的迷果芹多糖PSGP-2在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述肿瘤为胃癌、卵巢癌、膀胱癌、鼻咽癌和乳腺癌。
10.权利要求1-6所述的迷果芹多糖PSGP-2在制备降血脂功能食品中的应用，其特征在于，具有较好的胆酸盐结合能力，具有降血脂功能。
CN202110525497.9A 2021-05-13 2021-05-13 一种迷果芹多糖psgp-2及其制备方法与应用 Active CN113121718B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110525497.9A CN113121718B (zh) 2021-05-13 2021-05-13 一种迷果芹多糖psgp-2及其制备方法与应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110525497.9A CN113121718B (zh) 2021-05-13 2021-05-13 一种迷果芹多糖psgp-2及其制备方法与应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113121718A true CN113121718A (zh) 2021-07-16
CN113121718B CN113121718B (zh) 2022-09-23

Family

ID=76781843

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110525497.9A Active CN113121718B (zh) 2021-05-13 2021-05-13 一种迷果芹多糖psgp-2及其制备方法与应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113121718B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114409824A (zh) * 2022-02-23 2022-04-29 皖南医学院 毛霉胞外多糖及其制备方法和应用
WO2023217179A1 (zh) * 2022-05-11 2023-11-16 厦门大学 甘露糖抑制细胞焦亡或减轻化疗药物毒副作用的应用

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060205039A1 (en) * 2003-02-04 2006-09-14 Kazuhiro Fukae Process for producing sugar chain asparagine derivative
CN101461524A (zh) * 2007-12-18 2009-06-24 中国科学院兰州化学物理研究所 一种黄参多糖含片及其生产工艺
CN101463094A (zh) * 2007-12-18 2009-06-24 中国科学院兰州化学物理研究所 一种黄参多糖制备方法
CN104231101A (zh) * 2014-09-09 2014-12-24 中国烟草总公司郑州烟草研究院 一种臭椿多糖制备方法及其在防治烟草病毒上的应用
WO2015090180A1 (zh) * 2013-12-16 2015-06-25 中国科学院上海药物研究所 一种三七花阿拉伯半乳聚糖及其制备方法和用途
US20150306235A1 (en) * 2012-11-30 2015-10-29 Glytech Inc. Sugar chain-attached linker, compound containing sugar chain-attached linker and physiologically active substance or salt thereof, and method for producing same
CN109721665A (zh) * 2019-03-15 2019-05-07 西北农林科技大学 一种具有高抗氧化能力的黄参多糖的热水浸提方法
CN109721666A (zh) * 2019-03-15 2019-05-07 西北农林科技大学 一种黄参多糖的超声波辅助提取方法
CN109929045A (zh) * 2017-12-15 2019-06-25 卓爱普科技（北京）有限公司 一种黄参粗多糖的脱蛋白方法

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060205039A1 (en) * 2003-02-04 2006-09-14 Kazuhiro Fukae Process for producing sugar chain asparagine derivative
CN101461524A (zh) * 2007-12-18 2009-06-24 中国科学院兰州化学物理研究所 一种黄参多糖含片及其生产工艺
CN101463094A (zh) * 2007-12-18 2009-06-24 中国科学院兰州化学物理研究所 一种黄参多糖制备方法
US20150306235A1 (en) * 2012-11-30 2015-10-29 Glytech Inc. Sugar chain-attached linker, compound containing sugar chain-attached linker and physiologically active substance or salt thereof, and method for producing same
WO2015090180A1 (zh) * 2013-12-16 2015-06-25 中国科学院上海药物研究所 一种三七花阿拉伯半乳聚糖及其制备方法和用途
CN104231101A (zh) * 2014-09-09 2014-12-24 中国烟草总公司郑州烟草研究院 一种臭椿多糖制备方法及其在防治烟草病毒上的应用
CN109929045A (zh) * 2017-12-15 2019-06-25 卓爱普科技（北京）有限公司 一种黄参粗多糖的脱蛋白方法
CN109721665A (zh) * 2019-03-15 2019-05-07 西北农林科技大学 一种具有高抗氧化能力的黄参多糖的热水浸提方法
CN109721666A (zh) * 2019-03-15 2019-05-07 西北农林科技大学 一种黄参多糖的超声波辅助提取方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JIE GUO ET AL.: "A polysaccharide isolated from Sphallerocarpus gracilis protects PC12 cells against hydrogen peroxide-induced injury", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF BIOLOGICAL MACROMOLECULES》 *
于瑞涛: "迷果芹多糖提取分离纯化及其初步药理学活性研究", 《中国科学院西北高原生物研究所硕士论文》 *
宋珅: "黄参多糖的提取、分离纯化、单糖组成、硫酸化修饰和降血糖作用研究", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(硕士)医药卫生科技辑》 *
徐文彦等: "黄参多糖的提取及其对雏鸡细胞免疫应答的影响", 《中国兽医科学》 *
贾磊等: "黄参多糖对癌细胞HepG2和P_(388)增殖抑制与细胞凋亡的影响", 《食品科学》 *
赵有淑等: "黄参多糖提取及其对雏鸡外周血T淋巴细胞增殖的影响", 《山西农业大学学报(自然科学版)》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114409824A (zh) * 2022-02-23 2022-04-29 皖南医学院 毛霉胞外多糖及其制备方法和应用
WO2023217179A1 (zh) * 2022-05-11 2023-11-16 厦门大学 甘露糖抑制细胞焦亡或减轻化疗药物毒副作用的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN113121718B (zh) 2022-09-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Nie et al. A review on the isolation and structure of tea polysaccharides and their bioactivities
CN113121718B (zh) 一种迷果芹多糖psgp-2及其制备方法与应用
CN113004432B (zh) 一种铁皮石斛寡糖、铁皮石斛寡糖衍生物及其制备方法和应用
Ma et al. Structural characterization and anti-aging activity of a novel extracellular polysaccharide from fungus Phellinus sp. in a mammalian system
Zhu et al. Structure elucidation and bioactivities of a new polysaccharide from Xiaojin Boletus speciosus Frost
CN114874344A (zh) 青稞嫩叶碱提多糖的制备方法及其应用
CN106084087A (zh) 一种瓜蒌多糖的制备方法
Zhang et al. Preparation and structural characterization of acid-extracted polysaccharide from Grifola frondosa and antitumor activity on S180 tumor-bearing mice
CN117414319A (zh) 一种经过植物乳杆菌发酵后的黑果腺肋花楸提取物纳米眼霜及制备方法
CN106177187B (zh) 具有增效减毒抗肝癌作用的茶多酚茶多糖组合物
CN116284479A (zh) 一种绣球菌多糖及其制备方法和应用
WO2023036203A1 (zh) Cs-4发酵菌丝体杂聚多糖及其制备方法与用途
CN112794928B (zh) 一种黑枣多糖及其应用
CN115028753A (zh) 具有抗肿瘤功效的沙棘均一多糖及其分离纯化方法及应用
CN115490778B (zh) 一种凤尾菇多糖提取物及其制备方法和应用
Mo et al. Preparation, characterization, and bioactivities of polysaccharides fractions from sugarcane leaves
CN114409824B (zh) 毛霉胞外多糖及其制备方法和应用
CN110894244B (zh) 一种土鳖虫多糖的结构及其用途
CN115746157B (zh) 一种美味扇菇多糖及其制备方法和用途
CN116617247B (zh) 一种有机超滤膜纯化分离制备的岗梅根多糖及其应用
CN109400731A (zh) 一种冷水溶性黄芪多糖及其制备方法及其体外抗肿瘤应用
CN115043956B (zh) 一种接骨木多糖及其多糖组合物与应用
CN114805626B (zh) 一种抗癌活性多糖及其制备和在制备抗癌药物中的应用
CN115448989B (zh) 一种老鹰茶多糖及其提取纯化方法和抗新冠肺炎病毒应用
CN117659219A (zh) 一种河南石斛多糖及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant